Đơn bào ki sinh trung

HÌNH THỂ ĐƠN BÀO – XÉT NGHIỆM ĐƠN BÀO MỤC TIÊU Sau học xong, học viên có khả năng: Nhận dạng hình thể số loại đơn bào đường tiêu hóa Trình bày quy trình xét nghiệm đơn bào Thực kỹ thuật: - Soi tươi - Nhuộm soi (Zeihl – Neelsen cải tiến) NỘI DUNG Hình thể số loại đơn bào đường tiêu hóa Trình bày quy trình xét nghiệm đơn bào Xét nghiệm trực tiếp (bệnh phẩm phân) Nhuộm soi (Zeihl – Neelsen cải tiến) Đại cương số đơn bào – Phân loại • Giardia • Trichomonas (vaginalis, intestinalis) • Entamoeba histolytica • Entamoeba coli • Balantidium Lớp Trùng roi Lớp trùng lông Lớp Chân giả Lớp bào tử trùng • Plasmodium Đơn bào đường tiêu hóa - Entamoeba histolytica Entamoeba coli Giardia lamblia Trichomonas vaginalis Entamoeba histolytica (amip) Thể hoạt động ăn hồng cầu (Entamoeba histolytica histolytica) Có thể: Thể hoạt động không ăn hồng cầu (Entamoeba histolytica minuta) Thể bào nang (Thể cystica) Entamoeba histolytica – thể hoạt động ăn hồng cầu • Kích thước 20 – 40µm • Nội tế bào chất chứa hồng cầu • Nhân: Nằm nội nguyên sinh chất, xung quanh nhân có hạt nhiễm sắc ngoại vi (chromatin), tâm nhân có hạt trung thể • Chuyển động nhanh, Hình dạng dài thay đổi di chuyển Di chuyển cách tạo chân giả Soi tươi Nhuộm Trichrome Thể hoạt động không ăn hồng cầu • Hình dạng tròn bầu dục, di chuyển • Kích thước 12- 20 μm • Trong nguyên sinh chất hồng cầu Thể bào nang (Thể cystica) - Hình tròn, đường kính 12- 15 μm Màu - Có từ 1- nhân Bào nang già thường có nhân - Nguyên sinh chất có không bào, glycogen thể nhiễm sắc hình que, hình chuỳ Quy trình Đậy Lamen Soi KHV Ghi kết Xử lý tiêu bệnh phẩm Cho kính tư nghỉ Lưu ý – Soi KHV -Khảo sát tiêu phân vật kính x10, muốn nhìn rõ chi tiết chuyển sang vật kính x40 - Khảo sát mẫu phân theo hình chữ chi (zic zac) để không bỏ sót vi trường TIÊU CHUẨN CỦA MỘT TIÊU BẢN TỐT – Không dày: phân nhiều làm tiêu đục tối, che lấp KST, khó phát – Không mỏng: phân không tìm thấy KST, trừ chúng nhiều – Tiêu có độ dày vừa phải thấy chữ in tờ báo đặt tiêu – Tiêu bọt khí, dung dịch phân không tràn quanh kính Trả lời kết - Tìm không thấy trứng bào nang KST đường ruột -Dương tính, viết chi tiết sau: * Tên tiếng Việt tên khoa học KST * Trứng, thể hoạt động, bào nang, ấu trùng Ví dụ: Tìm thấy bào nang Entamoeba histolytica Các kỹ thuật phân phổ biến Trichrome (Wheatley – Gomori) Nhuộm Haematoxylin sắt Nhuộm Zeihl – Neelsen cải tiến Các bạn tìm hiểu phương pháp theo nội dung sau: Mục đích/ phạm vi áp dụng phương pháp Chuẩn bị Quy trình Ưu- nhược điểm Kỹ thuật xét nghiệm phân Zeihl – Neelsen cải tiến Mục đích/ Phạm vi áp dụng – Các trùng bào tử đường ruột (Cryptosporidium, Cyclospora…) khó xác định cách soi phân trực tiếp Vì vậy, người ta dùng phương pháp nhuộm để tạo tương phản màu KST cặn bã phân – Kỹ thuật nhuộm Ziehl–Neelsen cải tiến dùng dựa đặc điểm kháng acid KST – Kỹ thuật nhuộm Ziehl–Neelsen cải tiến áp dụng cho phân tươi, phân cố định formol, loại bệnh phẩm khác dịch hút tá tràng, mật, đờm Chuẩn bị - dụng cụ – Lam kính – Giá đựng lam kính – Que tăm – Găng tay - Bút ghi kính Chuẩn bị - hóa chất – Methanol / cồn tuyệt đối – Carbon–fuchsin – Cồn acid ( 3ml HCL + 97 ml cồn ethylic 95) – Xanh Malachit 1% Xanh Methylen 1% Quy trình Bệnh phẩm dàn đều, mỏng Để khô Cố định methanol Nhuộm với carbon–Fuchsin phút Rửa nước Tẩy cồn cồn acid màu không trôi Rửa nước Nhuộm với xanh Malachit 1% methylene 1% 30 giây Rửa nước Để khô tự nhiên Quy trình Soi KHV x40 Đọc kết quả: bào nang Cryptosporidium có màu hồng nhạt đến hồng đỏ, kích thước -6 mm(trên vật kính x40), có thoa trùng Dọn dẹp Cho kính tư nghỉ Các vấn đề thường gặp – Nếu làm phết phân dày, thuốc nhuộm không ngấm vào tất KST, làm sai lệch kết – Khi tẩy màu, tẩy kỹ (thời gian tẩy kéo dài nồng độ acid đậm) làm cho KST không bắt màu sau nhuộm – Nếu nhiễm nhẹ, không tìm thấy KST Nên xét nghiệm lần, lần cách vài ngày để không bỏ sót ca bệnh Trả lời kết - Tìm không thấy trứng bào nang KST đường ruột - Dương tính, viết chi tiết sau: • Tên tiếng Việt tên khoa học KST Ví dụ: Tìm thấy bào nang Cryptosporidium Xin trân trọng cảm ơn! [...]... Giardia lamblia Bào nang - Hình bầu dục - Kích thước dài 8- 10 μm - Vỏ mỏng có 2 lớp - Có 2- 4 nhân, trong nguyên sinh chất có vết roi cuộn lại Giardia lamblia Thể bào nang Quy trình xét nghiệm đơn bào Lấy bệnh phẩm Xét nghiệm trực tiếp Nhuộm soi Hematoxylin Zeihl – Neelsen cải tiến Trichrome Giemsa Gram Kỹ thuật xét nghiệm phân trực tiếp Mục đích • Phát hiện sự di động của thể hoạt động bào, • Trứng... Có 2 thể Thể bào nang Entamoeba coli – thể hoạt động - Hình bầu dục, kéo dài khi di chuyển, di chuyển chậm - Kích thước lớn hơn amip gây bệnh, 12-50μm - Nhân: Hạt nhiễm sắc ngoại vi không đều, thô, trung thể nằm lệch nhân tâm - Trong nguyên sinh chất không có hồng cầu, có những mảnh thức ăn, vi khuẩn, tạp khuẩn Entamoeba coli – bào nang Hình tròn, đường kính 15- 25 μm - Có từ 1- 8 nhân, bào nang già... Vỏ dày - Trong nguyên sinh chất có không bào Glycogen - So sánh E histolytica – E Coli Trichomonas vaginalis - Hình quả lê không cân đối - Kích thước 7- 15 x 15- 18 μm - Có một sống thân từ gốc roi đến cuối thân - Đầu có 3- 5 roi xuất phát từ hạt gốc roi - Một roi quặt ngược lại dính vào màng tạo thành màng vây - Không có thể bào nang Giardia lamblia Thể hoạt động Có 2 thể Thể bào nang Giardia lamblia... ● Nước muối sinh lý NaCl 0,9% ● Dung dịch lugol -Iod 1g -Kali Iodid 2g Nước cất vừa đủ 100mL (dung dịch lugol đựng trong lọ màu, hạn sử dụng 1 tháng) ● Dung dịch bảo quản phân (trong trường hợp cần thiết) 3 Bệnh phẩm (đúng – đủ) ● Khối lượng: 5-7 g ● Vị trí: đầu khuôn phân hoặc vị trí bất thường (nếu có) ● Sau khi lấy, làm xét nghiệm càng sớm càng tốt - Giun sán: trong 12 -24h đầu - Đơn bào: trong 30ph... bản – Tiêu bản không có bọt khí, dung dịch phân không tràn ra quanh lá kính Trả lời kết quả - Tìm không thấy trứng và bào nang của KST đường ruột -Dương tính, viết ra các chi tiết sau: * Tên tiếng Việt và tên khoa học của KST * Trứng, thể hoạt động, bào nang, ấu trùng Ví dụ: Tìm thấy bào nang Entamoeba histolytica Các kỹ thuật phân phổ biến Trichrome (Wheatley – Gomori) Nhuộm Haematoxylin sắt Nhuộm... đầu - Đơn bào: trong 30ph – 2h đầu ● Bảo quản Quy trình 1 Đánh dấu tiêu bản 2 Nhỏ 1 giọt nước NaCl 0,9% ở bên trái và một giọt lugol bên phải lam 3 Lấy 1 lượng phân = đầu que diêm để vào giọt nước muối sinh lý, hòa đều 4 Lấy thêm 1 lượng phân = đầu que diêm để vào giọt nước Lugol , hòa đều Quy trình 5 Đậy Lamen 6 Soi KHV 7 Ghi kết quả 8 Xử lý tiêu bản bệnh phẩm 9 Cho kính về tư thế nghỉ Lưu ý – Soi KHV