Đánh giá khả năng kháng khuẩn của cecropin b đối với một số chủng vi khuẩn gây bệnh trên động vật (2)

Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc Lời Cảm ơn Lời xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS Nguyễn Lai Thành, chủ nhiệm môn Tế bào - Mô Phôi - Lý sinh, đồng thời trởng phòng Công nghệ Tế bào Động vật - Trung tâm Nghiên cứu Khoa học Sự sống Thầy trực tiếp hớng dẫn suốt thời gian nghiên cứu thực luận văn Thầy tận tình bảo giúp đỡ công việc, nh trình thực thí nghiệm phòng Công nghệ Tế bào Động vật Tôi xin gửi lời cảm ơn tới toàn thể cán sinh viên Phòng Công nghệ Tế bào Động vật - Trung tâm Nghiên cứu Khoa học Sự sống, ngời bên công việc, nhiệt tính giúp đỡ trình làm việc nghiên cứu phòng Tôi xin gửi lời cảm ơn tới TS Bùi Thị Việt Hà , chủ nhiệm môn Vi sinh vật tập thể anh chị em phòng thí nghiệm Vi sinh - Khoa Sinh học - Trờng Đại học Khoa học Tự nhiên, ngời nhiệt tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi để hoàn thành luận văn Tôi xin giửi lời cảm ơn tới tập thể thầy cô giáo Khoa Sinh học - Trờng Đại học Khoa học Tự nhiên, đặc biệt thầy cô giáo Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc môn Vi sinh vật học truyền đạt cho kiến thức sinh học suốt thời gian học tập nghiên cứu vừa qua Tôi xin gửi cảm ơn chân thành đến gia đình toàn thể bạn bè, ngời động viên, ủng hộ chỗ dựa tinh thần cho suốt thời gian học tập thực luận văn Cuối cùng, xin cảm ơn đề tài QG09.18 hỗ trợ nguồn kinh phí cho thực luận văn Hà Nội, tháng năm 2011 Học viên Trịnh Thu Hằng Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc BNG Kí HIU V CH VIT TT T vit tt Vit y CKS Cht khỏng sinh DNA Deoxyribonucleic acid G(-) Gram õm G(+) Gram dng RNA Ribonucleic acid mRNA Messenger Ribonucleic acid tRNA Transfer ribonucleic acid VSV Vi sinh vt i Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc MC LC T vit tt i Vit y i CKS i Cht khỏng sinh .i DNA i Deoxyribonucleic acid .i G(-) i Gram õm i G(+) i Gram dng .i RNA i Ribonucleic acid .i mRNA .i Messenger Ribonucleic acid i tRNA i Transfer ribonucleic acid i VSV i Vi sinh vt i M U ii Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc Chng I: TNG QUAN TI LIU 1.1 GII THIU V CHT KHNG SINH 1.1.1 Cht khỏng sinh 1.1.2 S lc lch s nghiờn cu CKS 1.1.3 Phõn loi CKS 1.1.4 C ch tỏc dng ca CKS 1.1.4.1 c ch tng hp thnh t bo 1.1.4.2 Phỏ hy mng sinh cht 1.1.4.3 c ch tng hp protein 10 1.1.4.4 c ch cỏc ng trao i cht .11 1.1.4.5 c ch s tng hp acid nucleic 12 1.1.5 Thc trng khỏng khỏng sinh ca cỏc chng VSV gõy bnh 14 1.2 PEPTIDE KHNG KHUN CECROPIN .15 1.2.1 Ngun gc ca peptide khỏng khun .15 1.2.2 Phõn b t nhiờn ca peptide khỏng khun .16 1.2.3 Cu to ca peptide khỏng khun 18 1.2.4 Tỏc ng ca peptide khỏng khun 19 1.2.4.1 C ch tỏc ng 19 1.2.4.2 S tỏc ng chn lc ca peptide khỏng khun .24 1.2.5 ng dng ca peptide khỏng khun 26 1.2.6 Peptide khỏng khun cecropin B 26 1.3 CHUYN GEN CECROPIN B VO T BO V C TH NG VT 28 1.4 GII THIU V NGUYấN BO SI CHUT C DNG CHUYN GEN CECROPIN B 30 iii Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc 1.4.1 Ngun gc v c im nguyờn bo si 30 1.4.2 ng dng ca nguyờn bo si nuụi cy 32 1.5 C IM SINH HC MT S CHNG VI SINH VT GY BNH 33 Chng II: NGUYấN LIU V PHNG PHP NGHIấN CU 35 2.1 NGUYấN LIU 35 2.1.1 Chng ging .35 2.1.2 Húa cht v dng c 36 2.1.2.1 Húa cht 36 Cỏc húa cht s dng ti c lit kờ Cỏc húa cht s dng ti c lit kờ Cỏc húa cht s dng ti c lit kờ Cỏc húa cht s dng ti c lit kờ Cỏc húa cht s dng ti c lit kờ 36 Bng 1: Cỏc húa cht c s dng ti 36 2.1.2.2 Mụi trng v dung dch 36 2.1.2.3 Dng c v vt t 37 2.1.2.4 Thit b 38 2.2 PHNG PHP NGHIấN CU .39 2.2.1 Phng phỏp nuụi cy v cy chuyn nguyờn bo si chut 39 Quy trỡnh thớ nghim c túm tt s sau: .39 2.2.2 Phng phỏp thu mụi trng nuụi nguyờn bo si chut ó c chuyn gen cecropin B: 40 2.2.3 Phng phỏp cụ c mụi trng nuụi nguyờn bo si chut ó c chuyn gen cecropin B 41 iv Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc 2.2.4 Phng phỏp nhõn nuụi v ct gi vi khun 41 2.2.5 Phng phỏp c l 42 2.2.6 Phng phỏp xỏc nh hot tớnh khỏng khun 44 Quy trỡnh thớ nghim c túm tt s sau: 44 2.2.6.1 Phng phỏp xỏc nh hot tớnh khỏng khun ca cht khỏng sinh .44 2.2.6.2 Phng phỏp xỏc nh hot tớnh khỏng khun ca peptide cecropin B: 45 2.2.6.3 Phng phỏp xỏc nh hot tớnh khỏng khun ca CKS kt hp vi peptide cecropin B: 46 2.2.6.4 Phng phỏp xỏc nh hot tớnh khỏng khun ca mụi trng nuụi cy nguyờn bo si chut chuyn gen cecropin B: 47 Chng III: KT QU V THO LUN 49 3.1 NH GI TNH KHNG KHNG SINH CA MT S CHNG VI KHUN GY BNH TRấN NGI V NG VT .49 3.2 KT QU TH NGHIM HOT TNH KHNG KHUN CA PEPTIDE CECROPIN B 51 3.3 KT QU TH NGHIM HOT TNH KHNG KHUN CA CECROPIN B KT HP VI KHNG SINH 54 3.3.1 Cecropin B gõy nhy cm vi khỏng sinh chng vi khun khỏng thuc 55 3.3.2 Cecropin B lm tng mc nhy cm khỏng sinh chng vi khun khụng khỏng thuc 57 v Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc 3.4 KT QU TH NGHIM HOT TNH KHNG KHUN CA MễI TRNG NUễI CY NGUYấN BO SI CHUT NHT TRNG CHUYN GEN CECROPIN B 59 KT LUN V KIN NGH 62 KT LUN 62 KIN NGH .63 TI LIU THAM KHO 64 vi Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc DANH MC HèNH NH MINH HA Hỡnh Cu trỳc peptide khỏng khun 19 Hỡnh Mụ hỡnh hot ng khỏng khun ca cỏc peptide khỏng khun 20 Hỡnh C ch hot ng ca peptide khỏng khun 22 Hỡnh C s ca chn lc phõn t t bo ca peptide khỏng khun [54] 25 Hỡnh Cu trỳc ca nguyờn bo si hot ng [57] 31 Hỡnh Kt qu ỏnh giỏ tỏc ng ca ampicillin v puromycin i vi hai chng vi khun Shigella flexneri (A) v Vibrio cholerae (B) 50 Hỡnh Kt qu thm dũ hot tớnh khỏng khun ca peptitde cecropin B vi vi khun Escherichia coli .52 Hỡnh Kt qu th nghim hot tớnh khỏng khun ca cht khỏng sinh ampicillin v peptitde cecropin B vi vi khun Vibrio cholerae .53 Hỡnh Kt qu th nghim hot tớnh khỏng khun ca peptitde cecropin B kt hp vi cht khỏng sinh ampicillin vi hai chng VSV Vibrio cholerae v Moraxella catarrhalis 55 Hỡnh 10 Th nghim hot tớnh khỏng khun ca peptitde cecropin B kt hp vi cht khỏng sinh ampicillin vi chng vi khun Vibrio cholerae .56 vii Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc Hỡnh 11 Kt qu kim tra tớnh khỏng khun ca hn hp peptitde cecropin B v cht khỏng sinh trờn hai chng vi khun Salmonella typhi v Escherichia coli 58 Hỡnh 12 Kt qu kim tra kh nng khỏng khun ca mụi trng ó nuụi cy nguyờn bo si thai chut sau chuyn gen .61 viii Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc Escherichia coli Salmonella typhi (4) (3) (4) (5) (1) (5) (1) (2) (2) (3) Hỡnh 11 Kt qu kim tra tớnh khỏng khun ca hn hp peptitde cecropin B v cht khỏng sinh trờn hai chng vi khun Salmonella typhi v Escherichia coli (1): i chng, (2): Cecropin B 40 àM/ml, (3): Ampicillin 0,1 mg/ml, (4): Puromycine 0,1 mg/ml, (5): Cecropin B 40 àM/ml + Ampicillin 0,1 mg/ml + Puromycine 0,1 mg/ml Bng ng kớnh vũng khỏng khun ca thớ nghim (n v o: mm; ng kớnh l c: mm) Dch th nghim i CB 40 Ampi 0,1 Puro 0,1 CB 40 chng àM/ml mg/ml mg/ml àM/ml + Ampi 0,1 mg/ml + Puro 0,1 mg/ml Chng vi khun Escherichia coli 11 14 58 Lun thc s - Khoa Sinh hc 15 18 Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc Shigella flexneri 13 17 19 24 Salmonella typhi 11 14 16 19 Klebsiella sp 11 14 15 18 Bacillus subtilis 11 14 16 19 (CB: Cecropin B, Ampi: Ampicillin, Puro: Puromycine) 3.4 KT QU TH NGHIM HOT TNH KHNG KHUN CA MễI TRNG NUễI CY NGUYấN BO SI CHUT NHT TRNG CHUYN GEN CECROPIN B Hin nay, vi tim nng ca cỏc peptide khỏng khun, nhiu nh khoa hc ó tỡm cỏch to cỏc sinh vt cú kh nng to cỏc peptide khỏng khun tỏi t hp vi mc ớch a vo ng dng thc t i sng Tuy nhiờn, nhng peptide tỏi t hp ny u cn phi kim tra hot tớnh Ti mt s phũng thớ nghim ca khoa Sinh hc, trng i hc Khoa hc T nhiờn ó thnh cụng vic a gen cecropin B vo vi khun v t bo ng vt Vic kim tra hot tớnh ca loi cecropin ny ó v ang c thc hin Trong gii hn ti ny, chỳng tụi ó th nghim ỏnh giỏ kh nng khỏng khun ca nhng t bo chut nuụi cy ó c chuyn gen cecropin B cú kh nng biu hin v xut tit mụi trng Qun th t bo sau chuyn gen ó c xỏc nh cú mang gen chuyn bng k thut PCR v to c sn phm cú hot ng chc nng thụng qua gen bỏo cỏo GFP kim tra di kớnh hin vi hunh quang Nhng qun th t bo c nuụi cy mụi trng khụng cú khỏng sinh v mụi trng c thu ngy th 5, 13 v 21 sau chuyn gen c ký hiu tng ng l F1, F2 v F3 Mụi trng c cụ c 10 ln tng nng cecropin 59 Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc Chỳng tụi ó th nghim vi ba chng vi khun th nghim hot khỏng khun ú l chng Bacillus subtilis khụng khỏng khỏng sinh v hai chng Vibrio cholerae, Moraxella catarrhalis cú khỏng khỏng sinh u cú nhy cm tt vi cecropin Vi mụi trng ký hiu F1, c ba chng vi khun th nghim u cho vũng khỏng khun, vi c ba ln thớ nghim lp li Tuy nhiờn vũng khỏng khun c ba chng vi khun u cú ng kớnh tng i nh (khong 10 mm) Vi mụi trng ký hiu F2 v F3, cỏc ln th nghim u khụng cho vũng khỏng khun c ba chng vi khun (Hỡnh 12) Bacillus subtilis Vibrio cholerae (4 ) (1) (3 ) (2) (1 ) (4) (3) (2) 60 Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc Moraxella catarrhalis Hỡnh 12 Kt qu kim tra kh nng khỏng khun ca mụi trng ó nuụi cy nguyờn bo si thai chut sau chuyn gen (1): Mụi trng F1, (2): Mụi trng F2, (3): Mụi trng F3, (4): i chng Kt qu trờn ó chng minh rng gen cecropin B khụng nhng ó hi nhp c vo h gen ca nguyờn bo si chut nuụi cy m cũn c biu hin thnh peptide khỏng khun cecropin Qua quỏ trỡnh thớ nghim, s lng mu cho biu hin gen cũn khỏ hn ch iu ny cú th kh nng hot ng ca vector vic chốn gen vo h gen cha cao hoc hot ng ú nh hng n s phỏt trin ca phụi cỏ Ngoi ra, kh nng khỏng khun thp cũn cú th lng cecporin c tit hn ch, ú nng peptide ny mụi trng mc rt thp 61 Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc KT LUN V KIN NGH KT LUN T quỏ trỡnh nghiờn cu vi cỏc kt qu trờn chỳng tụi rỳt mt s kt lun nh sau: Trong by chng vi khun gõy bnh ó xỏc nh c cú chng khỏng vi khỏng sinh ampicillin v puromycin l Vibrio cholerae v Moraxella catarrhalis Nng khỏng khun ti thiu (MIC) ca cecropin i vi E.coli l 30 àM/ml v chng cũn li l 40 àM/ml Cecropin B lm tng mc nhy cm ca vi khun vi khỏng sinh ampicilin v puromicin v to s nhy cm chng khỏng thuc ó phỏt hin kh nng khỏng khun mc thp ca mụi trng nuụi cy nguyờn bo si chut ó chuyn gen cecropin B 62 Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc KIN NGH Vi nhng kt qu thu c chỳng tụi xin a mt s hng nghiờn cu tip theo nh sau: Tip tc nghiờn cu ỏnh giỏ kh nng khỏng khun ca cecropin B i vi cỏc chng vi khun gõy bnh khỏc, c bit l cỏc chng vi khun khỏng khỏng sinh Tip tc nghiờn cu ỏnh giỏ kh nng khỏng khun ca mụi trng nuụi cy nguyờn bo si chut chuyn gen cecropin B Th nghim hot tớnh khỏng khun ca mụi trng ny vi cỏc chng vi khun gõy bnh khỏc ng thi th nghim nhiu mụi trng nuụi cy ca nhiu th h nguyờn bo si chuyn gen ỏnh giỏ s biu hin thnh peptide khỏng khun ca gen cecropin B c chuyn vo t bo 63 Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc TI LIU THAM KHO Ting vit Kiu Hu nh (1999), Giỏo trỡnh Vi sinh hc cụng nghip, Nxb khoa hc v k thut H Ni Nguyn Th Bớch o (2011), Th nghim phng phỏp chuyn gen qua tinh trựng chuyn gen Cecropin vo cỏ nga vn, Khúa lun tt nghip, Trng i hc Khoa hc T Nhiờn, i hc Quc gia H Ni Lý Th Thanh H (2008), Nghiờn cu c im sinh hc, kh nng sinh cht khỏng sinh ca mt s chng x khun him phõn lp ti Trựng Khỏnh Cao Bng, Lun Thc s Khoa hc, Trng i hc Khoa hc T Nhiờn, i hc Quc gia H Ni Bựi Th Vit H (2006), Nghiờn cu x khun sinh cht khỏng sinh chng nm gõy bnh thc vt Vit Nam, Lun ỏn Tin s Sinh hc Nguyn Mng Hựng, Quyn ỡnh Thi, Lờ Thng, Nguyn Hunh Minh Quyờn, Nguyn Chớ Thnh (2007), Cụng ngh sinh hc phõn t Nguyờn lý v ng dng ca DNA tỏi t hp (Dch t nguyờn bn ting Anh- Molecular Biotechnology Principles and applications of recombinant DNA), NXB Khoa hc v K thut, H Ni Phan Kim Ngc, Phm Vn Phỳc (2007), Cụng ngh sinh hc trờn ngi v ng vt, NXB Giỏo dc, Tp H Chớ Minh Hong Th Thanh Phng (2011), Th nghim phng phỏp vi tiờm chuyn gen Cecropin vo hp t cỏ nga vn, Khúa lun tt nghip, Trng i hc Khoa hc T Nhiờn, i hc Quc gia H Ni 64 Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc V Vn V, Nguyn Mng Hựng, Lờ Hng ip (2006), Cụng ngh sinh hc, Tp 2, NXB Giỏo dc, H Ni Ting Anh Andersson, E., V Rydengard, A Sonesson, M Morgelin, L Bjorck, and A Schmidtchen, (2004), "Antimicrobial activities of heparinbinding peptides" European journal of biochemistry / FEBS 271(6): p 1219-26 10 Andra, J., O Berninghausen, and M Leippe, (2001), "Cecropins, antibacterial peptides from insects and mammals, are potently fungicidal against Candida albicans" Medical Microbiology Immunology 189(3): p 169-173 11 Andreu, D., R.B Merrifield, H Steiner, and H.G Boman, (1983), "Solid-phase synthesis of cecropin A and related peptides" Proceedings of the National Academy of Sciences 80(21): p 64756479 12 Beisswenger, C and R Bals, (2005), "Antimicrobial Peptides in Lung Inflammation" Chem Immunol Allergy 86: p 55-71 13 Benincasa, M., M Mattiuzzo, Y Herasimenka, P Cescutti, R Rizzo, and R Gennaro, (2009), "Activity of antimicrobial peptides in the presence of polysaccharides produced by pulmonary pathogens" Journal of Peptide Science 15(9): p 595-600 14 Bowdish, D.M.E., D.J Davidson, and R.E.W Hancock, (2005), "A reevaluation of the role of host defence peptides in mammalian immunity" Current Protein & Peptide Science 6(1): p 35-51 15 Brumfitt, W., M.R.J Salton, and J.M.T Hamilton-Miller, (2002), "Nisin, alone and combined with peptidoglycan-modulating antibiotics: 65 Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc activity against methicillin-resistant Staphylococcus aureus and vancomycin-resistant enterococci" Journal of Antimicrobial Chemotherapy 50(5): p 731-734 16 Bulet, P., R Stửcklin, and L Menin, (2004), "Anti-microbial peptides: from invertebrates to vertebrates" Immunological Reviews 198(1): p 169-184 17 Christopher, W., Antibiotic: Action, origin, resistance, American Society for microbiology 2003, Washington, D.C 18 Giuliani, A., G Pirri, and S.F Nicoletto, (2007), "Antimicrobial peptides: an overview of a promising class of therapeutics" Central European Journal of Biology 2(1): p 1-33 19 Gordon, J.W and F.H Ruddle, (1981), "Integration and stable germ line transmission of genes injected into mouse pronuclei" Science 214(4526): p 1244-1246 20 Gossler, A., R.K T Doetschman, and R.K E Serfling, (1986), "Transgenesis by means of blastocyst-derived embryonic stem cell lines" Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America 83(23): p 9065-9069 21 Hancock, R.E.W and H.-G Sahl, (2006), "Antimicrobial and hostdefense peptides as new anti-infective therapeutic strategies" Nat Biotech 24(12): p 1551-1557 22 Henrik Suttmann, C.A., M Retz, F Paulsen, J Harder, U Zwergel, J Kamradt, B Wullich, G Unteregger, M Stửckle, and J Lehmann, (2008), "Antimicrobial peptides of the Cecropin-family show potent antitumor activity against bladder cancer cells" BioMed Central Ltd 66 Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng 23 Cao hc K17 Sinh hc Hertzog, P.J., Isolation of Embryonic Fibroblasts and Their Use in the In vitro Characterization of Gene Function, in Gene Knockout Protocols 2001 205-215 24 Imler, J.-L and P Bulet, (2005), "Antimicrobial peptides in Drosophila: structures, activities and gene regulation" Chemical Immunology and Allergy 86(1): p 1-21 25 Izadpanah, A and R.L Gallo, (2005), "Antimicrobial peptides" Journal of the American Academy of Dermatology 52(3): p 381-390 26 Jenssen, H., P Hamill, and R.E.W Hancock, (2006), "Peptide Antimicrobial Agents" Clin Microbiol Rev 19(3): p 491511 27 Kirschstein, R and L.R Skirboll, Stem cells: Scientific progress and future research directions 2001, US Department of Health and Human Services: The National Institutes of Health 28 Kong, B.W., D.F Carlson, S.C Fahrenkrug, and D.N Foster, (2008), "Application of the Sleeping Beauty transposon system to avian cells" Animal Genetic 39(2): p 180186 29 Kragol, G., S Lovas, G Varadi, B.A Condie, R Hoffmann, and L Otvos, (2001), "The Antibacterial Peptide Pyrrhocoricin Inhibits the ATPase Actions of DnaK and Prevents Chaperone-Assisted Protein Foldingõ " Biochemistry 40(10): p 3016-3026 30 Kroppenstedt, R.M., S Mayilraj, J.M Wink, W Kallow, P Schumann, C Secondini, and E Stackebrandt, (2005), "Eight new species of the genus Micromonospora, Micromonospora Micromonospora echinaurantiaca echinofusca nov sp sp Micromonospora nov., citrea sp nov., Micromonospora fulviviridis sp nov., Micromonospora inyonensis sp nov., Micromonospora peucetia sp 67 Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc nov., Micromonospora sagamiensis sp nov., and Micromonospora viridifaciens sp nov" Systematic and Applied Microbiology 28(4): p 328-339 31 Kruszewska, D., H.-G Sahl, G Bierbaum, U Pag, S.O Hynes, and .S Ljungh, (2004), "Mersacidin eradicates methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA) in a mouse rhinitis model" Journal of Antimicrobial Chemotherapy 54(3): p 648-653 32 Kulagina, N.V., K.M Shaffer, F.S Ligler, and C.R Taitt, (2007), "Antimicrobial peptides as new recognition molecules for screening challenging species" Sensors and Actuators B: Chemical 121(1): p 150-157 33 Lavitrano, M., (2006), "Sperm-mediated gene transfer" Fertility and Development 18: p 19-23 34 Levy, S.B., (1998), "The challenge of antibiotic resistance" Sci Am 278: p 46-53 35 Luo, G., Z Ivics, Z Izsvak, and A Bradley, (1998), "Chromosomal transposition of a Tc1/mariner-like element in mouse embryonic stem cells" Proc Natl Acad Sci U S A 95(18): p 10769-73 36 Masuda, M., H Nakashima, T Ueda, H Naba, R Ikoma, A Otaka, Y Terakawa, H Tamamura, T Ibuka, T Murakami, Y Koyanagi, M Waki, A Matsumoto, N Yamamoto, S Funakoshi, and N Fujii, (1992), "A novel anti-HIV synthetic peptide, T-22 ([Tyr5,12,Lys7]polyphemusin II)" Biochemical Communications 189(2): p 845-850 68 Lun thc s - Khoa Sinh hc and Biophysical Research Trnh Thu Hng 37 Cao hc K17 Sinh hc Mattick, A and A Hirsch, (1947), "Further observations on an inhibitory substance (nisin) from lactic streptococci" Lancet ii 2(6462): p 5-8 38 Moore, A., D Devine, and M Bibby, (1994), "Preliminary experimental anticancer activity of cecropins" Pept Res 7(5): p 265269 39 Moore, A.J., W.D Beazley, M.C Bibby, and D.A Devine, (1996), "Antimicrobial activity of cecropins" Journal of Antimicrobial Chemotherapy 37: p 1077-1089 40 Mourgues, F., M.-N.L Brisset, and E Chevreau, (1998), "Activity of different antibacterial peptides on Erwinia amylovora growth, and evaluation of the phytotoxicity and stability of cecropins" Plant Science 139: p 83-91 41 Omura and Satoshi, The Search for Bioactive Compounds from Microorganisms, ed p.b.S Verlag 1992, New York 42 Otvos, L., I O, M.E Rogers, P.J Consolvo, B.A Condie, S Lovas, P Bulet, and M Blaszczyk-Thurin, (2000), "Interaction between Heat Shock Proteins and Antimicrobial Peptidesõ " Biochemistry 39(46): p 14150-14159 43 Pouny, Y., D Rapaport, A Mor, P Nicolas, and Y Shai, (1992), "Interaction of antimicrobial dermaseptin and its fluorescently labeled analogues with phospholipid membranes" Biochemistry 31(49): p 12416-12423 44 Qu, Y., T.S Istivan, A.J Daley, D.A Rouch, and M.A Deighton, (2009), "Comparison of various antimicrobial agents as catheter lock solutions: preference for ethanol in eradication of coagulase-negative 69 Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc staphylococcal biofilms" Journal of Medical Microbiology 58(4): p 442-450 45 Robert, W.B., International Edition Microbiology 2004, San Francisco: Person Benjanmin 46 Sallum, U.W and T.T Chen, (2008), "Inducible Resistance of Fish Bacterial Pathogens to the Antimicrobial Peptide Cecropin B" ANTIMICROBIAL AGENTS AND CHEMOTHERAPY: p 30063012 47 Sidộn, I and H.G Boman, (1983), "Escherichia coli mutants with an altered sensitivity to cecropin D" J Bacteriol 154(1): p 170176 48 Silvestro, L., K Gupta, J.N Weiser, and P.H Axelsen, (1997), "The concentration-dependent membrane activity of cecropin A" Biochemistry 36(38): p 11452-60 49 Silvestro, L.S., (2000), "Function and structure of cecropin A" ProQuest 50 Staneck, J.L and G.D Robert, (1974), "Simplified approach to identification of coryneform bacteria with LL-diaminopimelic acid in the cell wall" J Gen Microbiol 29: p 59 71 51 Stutzman Engwall, K.J., S.L Otten, and C.R Hutchison, (1992), "Regulation of secondary metabolism in Streptomyces spp and overproduction of daunorubicin in Streptomyces peucetius" Biological control 174(1): p 144 145 52 Subbalakshmi, C and N Sitaram, (1998), "Mechanism of antimicrobial action of indolicidin" FEMS Microbiol Lett 160: p 9196 53 Szabo, E., R.M.R S Rampalli, R.M A Schnerch, A Fiebig-Comyn, M Levadoux-Martin, and M Bhatia, (2001), "Direct conversion of 70 Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc human fibroblasts to multilineage blood progenitors" Nature 468(7323): p 521-526 54 Tennessen, J.A., (2005), "Molecular evolution of animal antimicrobial peptides: widespread moderate positive selection" Journal of Evolutionary Biology 18(6): p 1387-1394 55 Tong Chai, K., L Phuripun, and C Chn, Antibiotic Production of actinomycetes in Forest Termite Soil 1995 20 40 56 Vaara, M and T Vaara, (1994), "Ability of cecropin B to penetrate the enterobacterial outer membrane" Antimicrob Agents Chemother 38(10): p 24982501 57 Weissman-Shomer, P and M Fry, (1975), "Chick embryo fibroblasts senescence in vitro: Pattern of cell division and life span as a function of cell density" Mechanisms of Ageing and Development 4: p 159166 58 Yeaman, M.R and N.Y Yount, (2003), "Mechanisms of Antimicrobial Peptide Action and Resistance" Pharmacological Reviews 55(1): p 27-55 59 Zasloff, M., (2002), "Antimicrobial peptides of multicellular organisms" Nature 415(6870): p 389-395 Trang web tham kho 60 http://people.ucalgary.ca/~browder/transgenic.html 61 http://www.stada.com.vn/index.php? option=com_content&view=article&id=418:khang-khang-sinh-cn-bnhkhong-co-thuc-cha-trong-tng-lai&catid=59:thuc-va-sckhe&Itemid=193 71 Lun thc s - Khoa Sinh hc Trnh Thu Hng Cao hc K17 Sinh hc 72 Lun thc s - Khoa Sinh hc [...]... là thử nghiệm hoạt tính kháng < /b> khuẩn,< /b> cũng như các nồng độ kháng < /b> khuẩn < /b> tối ưu của < /b> cecropin < /b> lên một số chủng vi sinh vật gây b nh trên động vật để làm cơ sở đánh < /b> giá < /b> cecropin < /b> tái tổ hợp được sản xuất trong tế b o nuôi cấy Vì thế chúng tôi đã tiến hành Đánh giá < /b> khả < /b> năng < /b> kháng < /b> khuẩn < /b> của < /b> cecropin < /b> B đối với một số chủng vi khuẩn < /b> gây b nh trên động vật 2 Luận văn thạc sỹ - Khoa Sinh học Trịnh Thu Hằng Cao... peptide kháng < /b> khuẩn < /b> [54] Ngoài ra, cholesterol thường phân b rộng ở màng tế b o động vật giúp màng ổn định, nhưng không có ở màng vi khuẩn < /b> Sự có mặt của < /b> cholesterol cũng làm giảm hoạt động của < /b> các peptide kháng < /b> khuẩn < /b> [59] B n cạnh đó, khả < /b> năng < /b> b các nhân tố lạ xuyên màng của < /b> tế b o vi khuẩn < /b> là dễ dàng hơn nhiều so với tế b o động vật b nh thường, nên màng vi khuẩn < /b> dễ b tấn công b i các peptide kháng < /b> khuẩn.< /b> .. amphotericin B Tuy nhiên polyen vẫn có khả < /b> năng < /b> kháng < /b> vi khuẩn < /b> theo các cơ chế khác Polymycin là một ví dụ, CKS này được tạo ra b i vi khuẩn < /b> Bacillus polymyxa có khả < /b> năng < /b> kháng < /b> đặc hiệu với vi khuẩn < /b> G(-) Polymycin phá vỡ màng sinh chất của < /b> vi khuẩn < /b> b ng cách gắn vào phospholipid của < /b> màng, làm méo mó b mặt tế b o và thay đổi cấu trúc của < /b> màng dẫn đến sự rò rỉ ra b n ngoài các nội quan của < /b> tế b o, gây chết tế b o... quả chống b nh ở động vật và thực vật do vi khuẩn < /b> gây nên Gen cecropin < /b> đã được sử dụng để tạo ra thực vật biến đổi gen (như khoai tây, thuốc lá) biểu hiện sự tăng cường tính kháng < /b> khuẩn < /b> hoặc nấm Họ cecropin < /b> gồm có ba nhóm chính là cecropin < /b> A, B và D [11] Trong đó cecropin < /b> B được biết đến với hoạt tính kháng < /b> khuẩn < /b> mạnh Với tính hiệu quả trong vi c kiểm soát mầm b nh sinh ra do tác nhân vi khuẩn < /b> và côn... polymerase của < /b> prokaryote nhưng ít ảnh hưởng đến RNA polymerase của < /b> eukaryote Kết quả là rifampin độc với vi khuẩn < /b> gây b nh hơn so với con người Rifampin được sử dụng chủ yếu để điều trị b nh lao do vi khuẩn < /b> Mycobacterium tuberculosis gây ra Clofazimin gắn với DNA của < /b> vi khuẩn < /b> Mycobacterium leprae gây b nh phong và làm cản trở quá trình sao chép cũng như phiên mã b nh thường của < /b> tế b o vi khuẩn < /b> Nó cũng... dạng sống, từ vi khuẩn < /b> tới thực vật, từ động vật không xương sống đến động vật có xương sống, kể cả động vật có vú Các Peptide kháng < /b> khuẩn < /b> có thể tiêu diệt vi khuẩn < /b> G(+) và G(-) (bao gồm cả các chủng kháng < /b> được thuốc kháng < /b> sinh thông thường), mycobacteria (cả Mycobacterium gây b nh lao), virus, nấm và thậm chí đôi khi cả các tế b o ung thư [58] Hầu hết các cơ quan trong cơ thể đều sản xuất ra peptide kháng.< /b> .. Peptide kháng < /b> khuẩn < /b> được tìm thấy ở các tế b o máu dòng lympho, trong tế b o thực b o, và trong một số tế b o biểu mô động vật Một số peptide kháng < /b> khuẩn < /b> ở động vật không xương sống: cecropin < /b> và melittin có cấu trúc xoắn α, các peptide dạng kẹp tóc β như tachyplesin và polyphemusin [36] Nhóm peptide phổ biến nhất ở động vật không xương sống là các defesins, có cấu trúc vòng mở rộng với ba hoặc b n cầu... [35] Tương tự như vậy, tế b o động vật có khả < /b> năng < /b> điều hòa nồng độ ion làm giảm hoạt động của < /b> hầu hết các peptide kháng < /b> khuẩn < /b> trong khi vi khuẩn < /b> không có khả < /b> năng < /b> đó [59] 25 Luận văn thạc sỹ - Khoa Sinh học Trịnh Thu Hằng Cao học K17 Sinh học 1.2.5 Ứng dụng của < /b> peptide kháng < /b> khuẩn < /b> Các peptide kháng < /b> khuẩn < /b> có khả < /b> năng < /b> tiêu diệt vi khuẩn,< /b> nhưng hầu như không độc với tế b o động vật, nhờ đó có thể sử dụng... Peptide kháng < /b> khuẩn < /b> cecropin < /b> B Cecropin < /b> là một họ của < /b> peptide kháng < /b> khuẩn,< /b> được phân lập từ giai đoạn nhộng của < /b> loài sâu b ớm khổng lồ Hylaphora cecropia trong nghiên cứu của < /b> Boman và cộng sự năm 1981 [13] Cecropin < /b> dạng trưởng thành gồm 35-37 axit amin, tích điện dương và tác động lên cả vi khuẩn < /b> G(-) và G(+) [9] Họ cecropin < /b> bao gồm ba nhóm chính là cecropin < /b> A, B, D [11] Cecropin < /b> A là một peptide kháng < /b> khuẩn.< /b> .. được của < /b> tế b o Do đó, vi c cung cấp protein một cách liên tục là vấn đề quan trọng mang tính sống còn của < /b> tế b o Tất cả các sinh vật trong sinh giới đều có cùng một kiểu tổng hợp protein từ ribosome dựa trên các thông tin mã hóa từ mRNA Các CKS ức chế sự tổng hợp protein có thể tiêu diệt được cả vi khuẩn < /b> G(-) và vi khuẩn < /b> G(+) Ribosome của < /b> vi khuẩn < /b> có sự khác biệt lớn đối với ribosome của < /b> sinh vật nhân