Nghiên cứu nhằm lựa chọn một số loại thảo dược phổ biến có tính kháng với các vi khuẩn gây bệnh tiêu chảy trên lợn gồm E. coli, Sallmonela, Staphylococus. Hoạt tính kháng khuẩn của thảo dược được kiểm tra bằng kỹ thuật khoanh giấy kháng sinh trên môi trường đặc với mẫu thử là dịch chiết cồn ethanol 700 của các loại thảo dược ở dạng tươi và dạng bột khô.
KHOA HỌC CÔNG NGHỆ - ĐẠI HỌC HÙNG VƯƠNG ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG KHÁNG KHUẨN GÂY BỆNH TIÊU CHẢY Ở LỢN CỦA MỘT SỐ LOẠI THẢO DƯỢC Đặng Hoàng Lâm, Nguyễn Tài Năng Trường Đại học Hùng Vương TÓM TẮT Nghiên cứu nhằm lựa chọn số loại thảo dược phổ biến có tính kháng với vi khuẩn gây bệnh tiêu chảy lợn gồm E coli, Sallmonela, Staphylococus Hoạt tính kháng khuẩn thảo dược kiểm tra kỹ thuật khoanh giấy kháng sinh môi trường đặc với mẫu thử dịch chiết cồn ethanol 700 loại thảo dược dạng tươi dạng bột khô Kết cho thấy, khả kháng khuẩn loại thảo dược khác khác Sức kháng loại thảo dược phụ thuộc vào chủng vi khuẩn thử nhiệm Dịch chiết tươi cỏ sữa, rẻ quạt, tỏi riềng cho thấy sức kháng tốt với loại vi khuẩn thử nhiệm Sấy khô làm ảnh hưởng tới khả kháng khuẩn thảo dược Hành, nghệ hoạt tính kháng khuẩn sau sấy khô Các loại thảo dược khác cho thấy sức kháng khuẩn yếu so với dịch chiết tươi Dịch chiết bột khô cỏ sữa, rẻ quạt riềng cho thấy sức kháng tốt với vi khuẩn thử nhiệm Từ khóa: Thảo dược, kháng khuẩn MỞ ĐẦU Do tác động tiêu cực việc sử dụng kháng sinh nhằm phòng bệnh kích thích tăng trọng chăn nuôi, Việt Nam nhiều nước giới cấm sử dụng sản phẩm chăn ni Vì vậy, lựa chọn sản phẩm thay nhằm đảm bảo suất vật nuôi vô cần thiết thu hút quan tâm, nghiên cứu nhiều nhà khoa học Thảo dược có tính kháng khuẩn nhiều chế phẩm sinh học thay nghiên cứu, lựa chọn sử dụng thức ăn chăn nuôi Việc sử dụng thảo dược thay kháng sinh chăn nuôi mang lại hiệu cao Các loại kháng sinh thảo dược chứng minh có khả làm giảm bệnh tiêu chảy lợn, tăng khả tăng trọng, tăng hiệu sử dụng thức ăn đặc biệt tạo sản phẩm thịt an toàn với người tiêu dùng, nâng cao giá trị sản phẩm chăn nuôi Các sản phẩm thịt “thảo mộc” ưa chuộng trở thành xu chăn ni, đem lại lợi ích cho người chăn nuôi cho sản phẩm thịt đảm bảo an toàn vệ sinh thực phẩm Xuất phát từ luận điểm trên, tiến hành nghiên cứu khả kháng khuẩn in vitro dịch chiết cồn số loại thảo dược phổ biến địa bàn tỉnh Phú Thọ số vi khuẩn gây bệnh tiêu chảy lợn VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu - Thảo dược: Cỏ sữa (Euphorbia thymifolia Burm), cỏ xước (Achyranthes aspera L.), rẻ quạt (Belamcanda chinensis), rau sam (Portulacea oleracea), hành (Allium fistulosum), tỏi (Allium KHCN (30) - 2014 85 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ - ĐẠI HỌC HÙNG VƯƠNG sativum), gừng (Zingiber offcinale Rosc), riềng (Apinia officinarum Hance), nghệ (Curcuma longa Lour) dạng tươi bột khô - Vi khuẩn: E coli, Sallmonela, Staphylococus từ Phòng thí nghiệm Vi sinh vật thú y, Khoa Thú y, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Thu mẫu, sơ chế, sấy khô Thảo dược sau thu hái, đem chọn lọc lấy phần tươi không bị thối hỏng, đem cắt nhỏ, đem sấy khô tủ sấy nhiệt độ 50oC ngày Mẫu khơ nghiền nhỏ, kích thước hạt 0,5mm 2.2.2 Phương pháp thử hoạt tính kháng khuẩn - Dịch chiết cồn ethanol 700 loại thảo dược chuẩn bị theo hướng dẫn Đỗ Trung Đàm (2006) phương pháp chuẩn bị mẫu thử mẫu thử dược liệu nghiên cứu khả kháng khuẩn in vitro thảo dược (2006) - Thử hoạt tính kháng khuẩn loại thảo dược sử dụng kỹ thuật khoanh giấy kháng sinh môi trường đặc theo hướng dẫn Đỗ Trung Đàm (2006) 2.2.3 Phương pháp xử lý số liệu Xử lý số liệu phương pháp so sánh phương sai nhân tố (ANOVA One Way) phần mềm Minitab 16 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Khả kháng khuẩn số loại thảo dược dạng tươi Kết khảo sát khả kháng khuẩn số loại thảo dược dạng tươi trình bày bảng Bảng Khả kháng khuẩn số loại thảo dược dạng tươi STT 86 X ± SD ( mm ) Vi khuẩn Thảo dược E coli Salmonella Staphylococus Cỏ sữa 17,5c ± 1,4 19,5b ± 0,9 21,3b ± 1,5 Cỏ xước 10,5e ± 1,1 14,1cd ± 0,9 Rẻ quạt 26,2b ± 1,5 23,4a ± 1,0 20,0b ± 1,2 Rau sam 0 12,2e ± 1,1 Hành 13,8d ± 1,3 13,2de ± 0,9 Tỏi 19,8c ± 1,2 20,2ab ± 0,7 23,4a ± 1,3 Gừng 13,3d ± 0,7 12,4d ± 0,9 14,5d ± 0,9 Riềng 18,2c ± 1,0 12,7d ± 1,2 22,7ab ± 1,5 Nghệ 8,7e ± 1,0 9,3f ± 0,8 10 Gentamycin 30a ± 0,9 16,5c ± 1,3 17,1c ± 0,8 KHCN (30) - 2014 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ - ĐẠI HỌC HÙNG VƯƠNG Kết bảng cho thấy, khả kháng khuẩn loại thảo dược khác khác Tỏi, rẻ quạt, cỏ sữa riềng có sức kháng mạnh với chủng vi khuẩn thử nhiệm Rau sam không cho thấy sức kháng với vi khuẩn gram (-) (E coli Salmonella) Nghệ cho thấy khả kháng với vi khuẩn thử nhiệm đường kính vòng vơ khuẩn nhỏ loại thảo dược thử nhiệm Kết nghiên cứu cho thấy, khả kháng khuẩn cỏ xước tương đương báo cáo Kaur cs (2005) khả kháng khuẩn chất chiết từ thân rễ cỏ xước vi khuẩn E coli Klebsila Pandey cs (2014) ghi nhận kết vi khuẩn E coli Staphylococus thử khả kháng khuẩn chất chiết từ cỏ xước Đối với rau sam, Chowdhary cs (2013) tổng hợp nghiên cứu trước rau sam cho biết, có khả kháng mạnh với vi khuẩn Staphylococus aureus, Bacillus cereus Klebsilla pneumonia Tác giả cho biết, rau sam có khả ức chế khả phát triển vi khuẩn gây bệnh nhiễm trùng thể Kết kích thước vòng vơ khuẩn cỏ sữa nghiên cứu cao báo cáo Jayaveera cs (2010) khả kháng khuẩn dịch chiết dung môi cồn ethanol cỏ sữa Staphylococus E coli tương đương với báo cáo Tullanithi cs (2010) chất chiết ethanol cỏ xước với E coli Khả kháng khuẩn tỏi, nghệ nghiên cứu phù hợp với công bố trước Chu Mạnh Thắng cs (2010), Nguyễn Thị Thanh Loan (2012) Mahmood (2012) cho biết kết tương tự khả kháng khuẩn dịch chiết tỏi, gừng hành tây có khả kháng khác với vi khuẩn khác Báo cáo Anbu Jeba Sunilson cs (2009) khả kháng khuẩn gừng, nghệ riềng cho kết tương tự nghiên cứu 3.2 Khả kháng khuẩn số loại thảo dược dạng khô Bảng Khả kháng khuẩn số loại thảo dược khô X ± SD ( mm ) Vi khuẩn Thảo dược E coli Salmonella Staphylococus 13,5c ± 0,6 14,2bc ± 0,5 17,0ab ± 0,7 Cỏ xước 11,8cd ± 1,4 9,8d ± 0,8 Rẻ quạt 20,2b ± 1,5 19,9a ± 1,0 18,2a ± 0,9 Rau sam 0 10,2c ± 1,1 Hành 0 Tỏi 19,3a ± 1,4 14,4b ± 1,3 Gừng 13,2c ± 1,5 14,5b ± 0,9 Riềng 10,3d ± 1,1 11,8cd ± 1,5 13,1b ± 1,5 Nghệ 0 30a ± 0,9 16,0b ± 1,3 17,1ab ± 0,8 Cỏ sữa Gentamycin KHCN (30) - 2014 87 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ - ĐẠI HỌC HÙNG VƯƠNG Sấy khô biện pháp phổ biến để bảo quản thảo dược sau thu hoạch biện pháp đơn giản cho phép nhanh chóng bảo vệ hoạt chất có thảo dược Sấy khơ biện pháp bảo quản thảo dược kinh tế đầu tư thấp, giá thành lượng rẻ sản xuất số lượng lớn (Muller and Heindl, 2006) Nghiên cứu tác giả cho biết, nhiệt độ thích hợp để sấy khơ thảo dược 50oC chất lượng thảo dược suy giảm sấy nhiệt độ cao Sấy khô thuận tiện cho trình sử dụng sản phẩm thảo dược sản xuất thức ăn chăn nuôi Xuất phát từ luận điểm trên, lựa chọn phương pháp sấy khô thảo dược sử dụng thí nghiệm theo bước: Thu hái, rửa sạch, cắt ngắn sấy khô nhiệt độ 50oC, kết trình bày bảng Kết bảng cho thấy, q trình sấy khơ làm giảm khả kháng khuẩn hầu hết loại thảo dược Hành, nghệ không cho thấy khả kháng với vi khuẩn thử nhiệm Tỏi gừng hoạt tính kháng với vi khuẩn E coli Kích thước đường vô khuẩn loại thảo dược dạng khô nhỏ so với dịch chiết dạng tươi Cỏ sữa, rẻ quạt riềng cho thấy tính kháng khuẩn tốt so với loại khác thí nghiệm Kết thí nghiệm cho thấy, sức kháng khuẩn thảo dược khác loại vi khuẩn khác Điều lý giải nguyên nhân sau: (1) Do chế khả kháng khuẩn loại vi khuẩn khác hợp chất tự nhiên khác E coli Salmonella hai vi khuẩn gram (-), Staphylococus vi khuẩn gram (+) nên cấu tạo bề mặt tế bào chúng khác dẫn tới khả mẫn cảm khác với dịch chiết thảo dược (2) Phương pháp sấy khô nghiền thảo dược làm hoạt tính kháng khuẩn hợp chất có thảo dược Nồng độ thành phần hóa học thảo dược chế biến phương pháp khác khác Khi thử nhiệm khả kháng khuẩn tỏi sau chế biến phương pháp khác cho thấy, dịch ép tỏi tươi có khả kháng mạnh với S.aureus, bột tỏi có sức kháng yếu đặc biệt với vi khuẩn E coli Kết ghi nhận trình chế biến hành tây, thành phần hóa học hành khả kháng khuẩn hành giảm đáng kể sau chế biến dạng bột hành khô (Chu Mạnh Thắng cs., 2010) Sấy khô thảo dược ảnh hưởng tới phổ kháng khuẩn chúng Nguyễn Thị Kim Loan (2012) thử nhiệm hoạt tính kháng khuẩn cao chiết từ bột tỏi gia nhiệt 80oC cho thấy, khả kháng khuẩn tỏi giảm từ -3 lần khả kháng khuẩn nghệ giảm không đáng kể Như vậy, nhiệt độ làm biến tính allicin tỏi (thành phần chủ yếu tạo nên khả kháng khuẩn tỏi) làm giảm hiệu kháng khuẩn tỏi Sasidharan Menon (2010) thử nhiệm khả kháng khuẩn dịch chiết gừng từ hai dạng tươi khô Kết cho thấy, thành phần hóa học gừng bị thay đổi sau làm khô Các hợp chất oxygenated gừng giảm từ 29% dạng tươi xuống 14% dạng khô Hydrocarbon gừng khô cao gừng tươi Gừng khơ có chứa nhiều hợp chất sesquiterpene hydrocarbon dùng tươi Gừng tươi chứa nhiều hợp chất oxygenate gừng khô Các báo cáo trước cho thấy hợp chất monoterpen có khả kháng khuẩn tốt hợp chất sesquiterpene Các hợp chất hydrocarbon có khả kháng khuẩn yếu 88 KHCN (30) - 2014 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ - ĐẠI HỌC HÙNG VƯƠNG hợp chất oxygenated Thử nhiệm khả kháng khuẩn dịch chiết gừng từ nguyên liệu tươi khô cho thấy, khả kháng khuẩn dịch chiết gừng tươi giảm dần từ Aspergillus niger, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus subtilis Dịch chiết gừng khơ có sức kháng giảm dần với Pseudomonas aeruginosa, Aspergillus niger, Bacillus subtilis Sấy khô ảnh hưởng tới khả kháng khuẩn tinh dầu thảo dược trình ảnh hưởng tới thành phần hóa học thảo dược Nhiều nghiên cứu cho thấy, sấy khô làm giảm nồng độ monoterpence nồng độ sesquiterpenes không đổi Sự suy giảm nồng độ monoterpence chúng có khối lượng phân tử nhẹ dễ bay Hoạt tính kháng khuẩn tinh dầu có mối tương quan cao với thành phầm monoterpences so với hợp chất hóa học phổ biến khác phân tử oxy hóa kháng hydrocacbon Vì vậy, tỷ lệ monoterpence/sesquiterpene định chất lượng tinh dầu thảo dược (Bendelaid cs., 2006) KẾT LUẬN Khả kháng khuẩn loại thảo dược khác khác Ở dạng tươi, chất chiết tỏi, rẻ quạt, cỏ sữa riềng có tính kháng mạnh với vi khuẩn thử nghiệm Sấy khơ, nghiền nhỏ làm giảm hoạt tính kháng khuẩn loại thảo dược Hành, nghệ hoạt tính kháng khuẩn sau sấy khơ Cỏ sữa, rẻ quạt riềng cho thấy sức kháng tốt với vi khuẩn thử nhiệm sau sấy khô Tài liệu tham khảo Tài liệu tiếng Việt Đỗ Trung Đàm (2006), Phương pháp nghiên cứu tác dụng dược lý thuốc từ thảo dược Nhà xuất Khoa học kỹ thuật, tr 231-260 Nguyễn Thị Kim Loan (2012) Ảnh hưởng tỏi, nghệ lên khả kháng bệnh tăng trưởng heo 30 -90 ngày tuổi heo thịt Luận án tiến sỹ nông nghiệp, Đại học Nơng lâm TP Hồ Chí Minh Chu Mạnh Thắng, Lê Thị Hồng Thảo, Đỗ Viết Minh, Nguyễn Thành Long, (2010) Nghiên cứu ảnh hưởng phương pháp chế biến bảo quản (dịch chiết, bột khô, dung dịch) đến khả kháng khuẩn tỏi hành tây Báo cáo khoa học thường niên Viện Chăn nuôi Tài liệu nước Anbu Jeba Sunilson J., Suraj R., Rejitha G., Anandarajagopal K., Anita Gnana Kumari A.V and Prowichit P (2009) In vitro antimicrobial evaluation of Zingiber officinale, Curcuma longa and Alpinia galangal extract as natural food preservatives American Journal of Food Technology (5): 192-200 Benbelaid F., Abdoune M.A., Khadir A., Bendhou M (2013) Drying effect on yield and antimicrobial activity of essential oils International Journal Aromal plants, vol 3, No 1, pp 93-101 KHCN (30) - 2014 89 KHOA HỌC CÔNG NGHỆ - ĐẠI HỌC HÙNG VƯƠNG Chowdhary C.V., Meruva A., Naresh K., Elumalai R.K.A., (2013) A review on phytochemical and pharmacological profile of Portulaca oleracea Linn (Purslane) IJRAP (1), Jan-Feb, pages 34-37 Jayaveera K.N., Yoganandham E.K., Yadav G., Kumanan R (2010) Phytochemical screenings, antibacterial activity and physic chemical constants of ethanolic extract of Euphobial thymifolia Linn International Journal of Pharmacy and Pharmacultical Sciences Vol 2, Issue Kaur M., Thakur Y and Rana R.C (2005) Antiomicrobial properties of Achyranthes aspera Ancient science of life VolL XXIV (4) April, May, June, pages 168 - 173 Mahmood Khan Yousufi, 2012 To Study Antibacterial Activity of Allium Sativum, Zingiber Officinale and Allium Cepa by Kirby-Bauer Method IOSR Journal of Pharmacy and Biological Sciences (IOSR-JPBS) Volume 4, Issue (Nov - Dec 2012), PP 06-08 Online: www.iosrjournals.org Muller J and Heindl A., 2006 Drying of medicinal plants Medicinal and aromatic plants, 237:252 Pandey G., Rao Ch.V., Gupta S.S., Verman K.K and Singh M (2014) Antioxidant and antibacterial activities of leaf extract of Achyranthes aspera Linn (Prickly chaff flower) European Journal of Medicinal Plants (6): 695-708 SUMMARY EVALUATION OF ANTIMICROBIAL OF MEDICAL PLANT WITH PIG DIARRHOEA BACTERIAS Dang Hoang Lam, Nguyen Tai Nang Hung Vuong University The research aims to look for the medical plants which have antimicrobial ability with pig diarrhea bacterias such as E coli, Sallmonela, Staphylococus The antimicrobial activity was evaluated by antibiotic paper pies technic on the MRS agar with the herbs ethanol 700 extract in both fresh and dry material According to the result, the antimicrobial activity of herbs are very diffirent among the diffical medical plant species and depend on the bacterial species test The extract from fresh material of Euphorbia thymifolia, Belamcanda chinensis, Allium sativum, Apinia officinarum show the best resistant with bacterias test Drying effect to the antimicrobial activity of medical plant The extract from Allium fistulosum, Curcuma longa dry material does not show the antimicrobial activity The other herb were reduced the antimicrobial activity after dry The extract from Euphorbia thymifolia, Belamcanda chinensis, Apinia officinarum dry material are the best activity Keywords: Medical plant, antimicrobial activity, 90 KHCN (30) - 2014 ... 16 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Khả kháng khuẩn số loại thảo dược dạng tươi Kết khảo sát khả kháng khuẩn số loại thảo dược dạng tươi trình bày bảng Bảng Khả kháng khuẩn số loại thảo dược dạng tươi... có khả kháng khác với vi khuẩn khác Báo cáo Anbu Jeba Sunilson cs (2009) khả kháng khuẩn gừng, nghệ riềng cho kết tương tự nghiên cứu 3.2 Khả kháng khuẩn số loại thảo dược dạng khô Bảng Khả kháng. .. tính kháng khuẩn tốt so với loại khác thí nghiệm Kết thí nghiệm cho thấy, sức kháng khuẩn thảo dược khác loại vi khuẩn khác Điều lý giải nguyên nhân sau: (1) Do chế khả kháng khuẩn loại vi khuẩn