Mật số vi khuẩn vibrio sp , bacillus sp và ký sinh trùng hiện diện trong ương ấu trùng tôm càng xanh quy trình nước trong kín và nước xanh cải tiến

TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐÔ KHOA SINH HỌC ỨNG DỤNG oooo o o KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN MÃ SỐ: D620301 MẬT SỐ VI KHUẨN VIBRIO sp., BACILLUS sp VÀ KÝ SINH TRÙNG HIỆN DIỆN TRONG ƯƠNG ẤU TRÙNG TÔM CÀNG XANH THEO QUY TRÌNH NƯỚC TRONG KÍN VÀ NƯỚC XANH CẢI TIẾN Sinh viên thực hiện: Phạm Thị Huỳnh Như MSSV: 1153040052 Lớp: NTTS K6 Cần Thơ, 2015 TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÂY ĐÔ KHOA SINH HỌC ỨNG DỤNG oooo o o KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN MÃ SỐ: D620301 MẬT SỐ VI KHUẨN VIBRIO sp., BACILLUS sp VÀ KÝ SINH TRÙNG HIỆN DIỆN TRONG ƯƠNG ẤU TRÙNG TÔM CÀNG XANH THEO QUY TRÌNH NƯỚC TRONG KÍN VÀ NƯỚC XANH CẢI TIẾN Cán hướng dẫn Ths Nguyễn Lê Hoàng Yến Sinh viên thực hiện: Phạm Thị Huỳnh Như MSSV: 1153040052 Lớp: NTTS K6 Cần Thơ, 2015 ii LỜI CAM KẾT Tôi xin cam kết khóa luận hoàn thành dựa kết nghiên cứu kết chưa công bố dùng khóa luận cấp Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2015 Sinh viên thực (Chữ ký) Phạm Thị Huỳnh Như iii XÁC NHẬN CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN Đề tài nghiên cứu: “Mật số vi khuẩn Vibrio sp., Bacillus sp ký sinh trùng diện ương ấu trùng tôm xanh quy trình nước kín nước xanh cải tiến” Sinh viên thực hiện: Phạm Thị Huỳnh Như Lớp: Nuôi trồng thủy sản, khóa Đề tài hoàn thành theo yêu cầu cán hướng dẫn chỉnh sửa theo góp ý Hội đồng bảo vệ khóa luận khoa Sinh học ứng dụng – Trường đại học Tây Đô ngày 14/09/2015 Cán hướng dẫn (Chữ ký) Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2015 Sinh viên thực (Chữ ký) Ths Nguyễn Lê Hoàng Yến Phạm Thị Huỳnh Như iv LỜI CẢM ƠN Đầu tiên, xin bày tỏ lòng biết ơn thành kính cha mẹ tạo điều kiện tốt cho học tập, dạy dỗ, lo lắng chỗ dựa tinh thần vững cho vượt qua khó khăn để ngày hôm Em xin bày tỏ lòng bết ơn sâu sắc đến cô - Ths Nguyễn Lê Hoàng Yến tận tình hướng dẫn truyền đạt cho em kiến thức, kinh nghiệm quý báu suốt trình thực đề tài tốt nghiệp Cảm ơn thầy Tạ Văn Phương nhiệt tình hỗ trợ, theo dõi lớp suốt thời gian qua Với vai trò cố vấn học tập, thầy tạo điều kiện tốt cho em bạn hoàn thành khóa luận tốt nghiệp Tiếp đến, em xin chân thành cảm ơn Ban giám hiệu trường Đại học Tây Đô tạo điều kiện thuận lợi cho em suốt trình học tập Em xin cám ơn quý thầy cô Khoa Sinh học ứng dụng tận tình giảng dạy, truyền đạt cho em kiến thức quý tạo điều kiện thuận lợi cho em trình học tập hoàn thành khóa luận Sau cùng, xin gửi lời cảm ơn đến tất bạn tập thể lớp Nuôi trồng thủy sản K6 động viên hỗ trợ để có thành công ngày hôm Xin chân thành cảm ơn với lòng trân trọng! Phạm Thị Huỳnh Như v TÓM TẮT Chuyên đề thực nhằm xác định biến động mật số vi khuẩn Vibrio, Bacillus ký sinh trùng hai nghiệm thức ương tôm xanh theo quy trình nước kín (NT1) quy trình nước xanh cải tiến (NT2) Thí nghiệm tiến hành bể nhựa tích 60 lít/bể, ấu trùng bố trí vào bể với mật độ 60 con/L Các giá trị thủy lý, thủy hóa hai nghiệm thức thực phù hợp cho sinh trưởng phát triển ấu trùng tôm xanh Trong mẫu nước ương, mật độ vi khuẩn tổng trung bình nghiệm thức NT1 cao so với nghiệm thức NT2 Nhưng ngược lại với mật độ vi khuẩn tổng, mật độ vi khuẩn Vibrio sp Bacillus sp nghiệm thức NT2 cao so với nghiệm thức NT1 Mật độ vi khuẩn tổng mẫu ấu trùng thấp chiếm 23% so mẫu nước ương Mật độ vi khuẩn Bacillus sp., Vibrio sp mẫu ấu trùng chiếm 27%, 12% so với mật độ mẫu nước ương Mật độ vi khuẩn mẫu vỏ Artemia cao so với mật độ vi khuẩn mẫu nước ương Mật độ vi khuẩn tổng mẫu vỏ Artemia cao 6,4 lần so với mật độ vi khuẩn tổng mẫu nước ương Mật độ vi khuẩn Vibrio sp., Bacillus sp cao 2,2 lần 4,9 lần so với mật độ vi khuẩn mẫu nước ương Trong trình ương, hai nghiệm thức nhiễm KST, tỷ lệ nhiễm vỏ Artemia cao so với ấu trùng tỷ lệ nhiễm KST ấu trùng nghiệm thức nước kín cao so với nghiệm thức nước xanh cải tiến Tỷ lệ sống ấu trùng nghiệm thức ương TCX theo quy trình nước xanh cải tiến đạt 35,5% cao có ý nghĩa thống kê (α=0,5) so với tỷ lệ sống ấu trùng nghiệm thức ương TCX theo quy trình nước kín 18,5% Cặn đáy bắt đầu thu từ ngày ương thứ 10 sau cho ăn bổ sung thức ăn chế biến Mật độ vi sinh mẫu cặn đáy biến động lớn, mật độ vi khuẩn mẫu cặn đáy NT2 biến động ổn định thấp so với NT1 Từ khóa: Bacillus sp., ký sinh trùng, nước kín, nước xanh cải tiến, tôm xanh, vi khuẩn tổng, Vibrio sp., vi MỤC LỤC LỜI CAM KẾT iii XÁC NHẬN CỦA CÁN BỘ HƯỚNG DẪN iv TÓM TẮT vi MỤC LỤC iii DANH SÁCH BẢNG vii DANH SÁCH HÌNH viii DANH SÁCH TỪ VIẾT TẮT ix CHƯƠNG 1: ĐẶT VẤN ĐỀ 1.1 Giới thiệu 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Nội dung nghiên cứu CHƯƠNG 2: LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Đặc điểm sinh học tôm xanh 2.1.1 Phân loại phân bố 2.1.2 Vòng đời tôm xanh 2.1.3 Đặc điểm dinh dưỡng 2.1.4 Đặc điểm sinh trưởng 2.2 Các quy trình sản xuất giống tôm xanh 2.2.1 Quy trình nước hở (Open – clear water systems) 2.2.2 Quy trình nước kín (Closed – clear water systems) 2.2.3 Quy trình nước xanh (Green water systems) 2.2.4 Quy trình nước xanh cải tiến (Modified static green water systems) 2.3 Tình hình sản xuất giống tôm xanh nước 2.3.1 Trên giới 2.3.2 Trong nước 2.4 Sơ lược vi khuẩn hệ thống ương 2.4.1 Vi khuẩn Bacillus sp 2.4.2 Vi khuẩn Vibrio sp 2.5 Sơ lược ký sinh trùng (KST) hệ thống ương CHƯƠNG 3: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 10 iii 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 10 3.2 Vật liệu nghiên cứu 10 3.3 Phương pháp nghiên cứu 10 3.3.1 Chuẩn bị thí nghiệm 10 3.3.2 Bố trí thí nghiệm 11 3.3.3 Chăm sóc quản lý thí nghiệm 11 3.3.4 Phương pháp thu mẫu 11 3.3.5 Phương pháp phân tích mẫu 12 3.3.6 Xác định tiêu sinh lý, sinh hoá vi khuẩn Bacillus sp 14 3.4 Phương pháp phân tích số liệu 14 CHƯƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 15 4.1 Sự biến động yếu tố môi trường 15 4.1.1 Sự biến động yếu tố thủy lý 15 4.1.2 Sự biến động yếu tố thủy hóa 16 4.2 Sự biến động mật độ vi sinh mẫu nước ương 18 4.2.2 Mật độ vi khuẩn Bacillus sp 21 4.2.3 Mật độ vi khuẩn tổng 22 4.3 Sự biến động mật độ vi sinh mẫu ấu trùng 23 4.3.1 Vi khuẩn Vibrio sp 24 4.4.2 Mẫu cặn đáy 28 4.5 Ký sinh trùng 29 4.6 Tỷ lệ sống ấu trùng 31 5.1 Kết luận 32 5.2 Đề xuất 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO 34 Phụ lục 1: Sự biến động yếu tố thủy lý A Phụ lục 1.1: Biến động nhiệt độ sáng thí nghiệm A Phụ lục 1.2: Biến động nhiệt độ chiều thí nghiệm B Phụ lục 1.3: Biến động pH sáng thí nghiệm C Phụ lục 1.4: Biến động pH chiều thí nghiệm C Phụ lục 2: Sự biến động yếu tố thủy hóa D Phụ lục 2.1: Hàm lượng TAN thí nghiệm D iv Phụ lục 2.2: Hàm lượng N–NO2– thí nghiệm D Phụ lục 3: Tỷ lệ biến thái tỷ lệ sống ấu trùng TCX F Phụ lục 3.1: Tỷ lệ biến thái ấu trùng F Phụ lục 3.2: Tỷ lệ sống ấu trùng TCX G Phụ lục 3.3 Kiểm định thống kê tỷ lệ sống với mức ý nghĩa 5% G Phụ lục 4: Kết kiểm tra đặc điểm sinh hóa vi khuẩn H Phụ lục 5: Sự biến động mật độ vi sinh mẫu nước ương J Phụ lục 5.1 Sự biến động mật độ vi khuẩn Vibrio sp J Phụ lục 5.2 Tỷ lệ khuẩn lạc (xanh, vàng) vi khuẩn Vibrio sp J Phụ lục 5.3: Sự biến động mật độ vi khuẩn Bacillus sp K Phụ lục 5.4: Sự biến động mật độ vi khuẩn tổng L Phụ lục 6: Sự biến động mật độ vi khuẩn mẫu ấu trùng TCX M Phụ lục 6.1 Sự biến động mật độ vi khuẩn Vibrio sp M Phụ lục 6.2 Tỷ lệ khuẩn lạc (xanh, vàng) vi khuẩn Vibrio sp M Phụ lục 6.3: Sự biến động mật độ vi khuẩn Bacillus sp N Phụ lục 6.4: Sự biến động mật độ vi khuẩn tổng O Phụ lục 7: Sự biến động mật độ vi khuẩn mẫu Artemia P Phụ lục 7.1 Sự biến động mật độ vi khuẩn Vibrio sp P Phụ lục 7.2 Tỷ lệ khuẩn lạc (xanh, vàng) vi khuẩn Vibrio sp P Phụ lục 7.3: Sự biến động mật độ vi khuẩn Bacillus sp Q Phụ lục 7.4: Sự biến động mật độ vi khuẩn tổng R Phụ lục 8: Vi sinh mẫu cặn đáy S Phụ lục 8.1: Sự biến động mật độ vi khuẩn Vibrio sp S Phụ lục 8.2 Tỷ lệ khuẩn lạc (xanh, vàng) vi khuẩn Vibrio sp S Phụ lục 8.3 Sự biến động mật độ vi khuẩn Bacillus sp T Phụ lục 8.4: Sự biến động mật độ vi khuẩn tổng U Phụ lục 9: Tỷ lệ nhiễm, cường độ nhiễm ký sinh trùng V Phụ lục 9.1: Tỷ lệ nhiễm ký sinh trùng ấu trùng tôm V Phụ lục 9.2: Tỷ lệ nhiễm ký sinh trùng ấu trùng tôm W Phụ lục 9.3: Cường độ nhiễm ký sinh trùng ấu trùng tôm X v Phụ lục 9.4: Cường độ nhiễm ký sinh trùng vỏ Artemia Y Phu lục 10: Thành phần thức ăn chế biến Z Phụ lục 11: Chế độ cho ăn ấu trùng tôm xanh AA Phụ lục 12: Thành phần số loại môi trường nuôi cấy vi khuẩn BB vi Phụ lục 7.4: Sự biến động mật độ vi khuẩn tổng Nước (NT1) Nước Xanh (NT2) Ngày D– D– D– D– 10 D– 13 D– 16 D– 19 D– 22 D– 25 D– 28 D– 31 D– 34 ĐPL 0 0 –1 –1 –2 –1 –2 –1 –2 –2 –3 –2 –3 –2 –3 –2 –3 –2 –3 –2 –3 KL 316 225 478 501 1031 157 59 63 109 128 128 197 145 38 137 64 231 36 18 46 67 29 22 33 CFU/mL TB KL CFU/mL TB 3160 267 2670 0,03 0,04 2250 489 4890 4780 466 4660 0,05 0,04 5010 387 3870 10310 675 6750 0,06 0,06 1570 488 4880 46 5900 4600 0,34 0,58 112 63000 112000 267 10900 26700 0,69 0,60 93 128000 93000 259 12800 25900 1,05 1,57 288 197000 288000 121 145000 121000 2,63 1,81 24 380000 240000 210 137000 210000 3,89 3,60 51 640000 510000 143 231000 143000 2,96 2,82 42 360000 420000 18000 56 56000 2,39 1,98 460000 34 340000 67000 22 22000 1,79 1,36 290000 25 250000 22000 42 42000 1,76 1,26 330000 21 210000 Giá trị trung bình tính với đơn vị 105 CFU/mL R Phụ lục 8: Vi sinh mẫu cặn đáy Phụ lục 8.1: Sự biến động mật độ vi khuẩn Vibrio sp Nước (NT1) Nước Xanh (NT2) V X Tổng V X Tổng Ngày thu 0,09 0,12 0,21 0,12 0,08 0,20 D– 10 0,18 0,20 0,37 0,20 0,08 0,28 D– 13 0,23 0,31 0,54 0,31 0,23 0,54 D– 16 0,62 0,94 1,56 0,94 0,36 1,29 D– 19 0,73 1,00 1,73 1,00 0,35 1,34 D– 22 1,92 1,37 3,29 1,37 1,12 2,49 D– 25 1,30 1,60 2,90 1,60 0,97 2,57 D– 28 0,11 0,10 0,22 0,10 0,04 0,14 D– 31 0,08 0,08 0,16 0,08 0,06 0,15 D– 34 Giá trị trung bình tính với đơn vị 104 CFU/mL Phụ lục 8.2 Tỷ lệ khuẩn lạc (xanh, vàng) vi khuẩn Vibrio sp Ngày thu D– 10 D– 13 D– 16 D– 19 D– 22 D– 25 D– 28 D– 31 D– 34 Nước kín (NT1) KL vàng KL xanh V:X 91,5 92:1 17,5 9:1 23 3,5 7:1 62 16:1 73 18:1 191,5 11,5 17:1 129,5 14,5 13:1 64 21 3:1 77,5 10 8:1 Nước xanh cải tiến (NT2) KL vàng KL xanh V:X 119,5 30:1 19,5 25 2:1 31 5,5 6:1 93,5 12:1 99,5 100:1 37 7:1 10 5:1 101 3,5 29:1 81,5 17,5 5:1 S Phụ lục 8.3 Sự biến động mật độ vi khuẩn Bacillus sp Nước (NT1) Nước Xanh (NT2) Ngày ĐPL KL CFU/mL TB KL CFU/mL TB 1210 1010 121 101 D– 10 0,02 0,03 –1 2900 5200 29 52 940 1560 94 156 D– 13 0,04 0,04 –1 6100 6600 61 66 –1 18600 4800 186 48 D– 16 0,20 0,28 –2 22000 51000 22 51 –1 15200 17700 152 177 D– 19 1,10 1,35 –2 204000 253000 204 253 –2 117000 316000 117 316 D– 22 3,94 4,43 –3 670000 570000 67 57 –2 136000 158000 136 158 D– 25 6,03 4,09 –3 1070000 660000 107 66 –2 47000 47 101 101000 D– 28 2,59 3,91 –3 470000 47 68 680000 –2 132000 132 122 122000 D– 31 3,61 3,36 –3 590000 59 55 550000 –2 118000 118 123 123000 D– 34 2,19 2,02 –3 32 320000 28 280000 Giá trị trung bình tính với đơn vị 105 CFU/mL T Phụ lục 8.4: Sự biến động mật độ vi khuẩn tổng Nước (NT1) Nước Xanh (NT2) Ngày ĐPL KL CFU/mL TB KL CFU/mL TB –1 179 17900 215 21500 D– 10 0,25 0,22 –2 33 33000 23 23000 –1 145 14500 136 13600 D– 13 0,98 1,34 –2 182 182000 255 255000 –2 215 215000 187 187000 D– 16 3,63 3,34 –3 51 510000 48 480000 –2 259 259000 198 198000 D– 19 7,90 6,79 –3 132 1320000 116 1160000 –2 177 177000 227 227000 D– 22 5,24 5,69 –3 87 870000 91 910000 –2 312 312000 188 188000 D– 25 7,61 6,54 –3 121 1210000 112 1120000 –2 188 188000 217 217000 D– 28 4,14 5,04 –3 64 640000 79 790000 –2 53 53000 126 126000 D– 31 4,07 3,53 –3 76 760000 58 580000 –2 28 28000 112 112000 D– 34 3,09 2,16 –3 59 590000 32 320000 Giá trị trung bình tính với đơn vị 105 CFU/mL U Phụ lục 9: Tỷ lệ nhiễm, cường độ nhiễm ký sinh trùng Phụ lục 9.1: Tỷ lệ nhiễm ký sinh trùng ấu trùng tôm Tỷ lệ nhiễm vỏ Artemia Lần thu Nước (NT1) Nước Xanh (NT2) Số nhiễm KST Tỷ lệ (%) Số nhiễm KST Tỷ lệ (%) D– 0,00 0,00 D– 0,00 0,00 D– 16,67 13,33 D– 10 16,67 26,67 D– 13 13 43,33 14 46,67 D– 16 17 56,67 23 76,67 D– 19 30 100,00 30 100,00 D– 22 23 76,67 28 93,33 D– 25 16 53,33 19 63,33 D– 28 12 40,00 14 46,67 D– 31 11 36,67 17 56,67 D– 34 20,00 11 36,67 V Phụ lục 9.2: Tỷ lệ nhiễm ký sinh trùng ấu trùng tôm Tỷ lệ nhiễm ấu trùng Lần thu Nước (NT1) Nước xanh (NT2) Số nhiễm KST Tỷ lệ (%) Số nhiễm KST Tỷ lệ (%) D– 0,00 0,00 D– 0,00 0,00 D– 0,00 0,00 D– 10 10,00 10,00 D– 13 26,67 16,67 D– 16 12 40,00 20,00 D– 19 30,00 12 40,00 D– 22 11 36,67 26,67 D– 25 15 50,00 13 43,33 D– 28 16,67 10,00 D– 31 10,00 6,67 D– 34 3,33 3,33 W Phụ lục 9.3: Cường độ nhiễm ký sinh trùng ấu trùng tôm Ngày thu D-1 D-4 D-7 D-10 D-13 D-16 D-19 D-22 D-25 D-28 D-31 D-34 Nước kín (NT1) Vorticella Zoothammium Epistylis 0 0 0 + + + 1 0 - Nước xanh cải tiến (NT2) Vorticella Zoothammium Epistylis 0 0 0 + + 10 + 3 1 0 - KST bám vỏ Artemia bể ương X Phụ lục 9.4: Cường độ nhiễm ký sinh trùng vỏ Artemia Ngày thu D-1 D-4 D-7 D-10 D-13 D-16 D-19 D-22 D-25 D-28 D-31 D-34 Nước kín (NT1) Vorticella Zoothammium Epistylis 0 0 + 7 10 + + 15 16 + 11 + - Nước xanh cải tiến (NT2) Vorticella Zoothammium Epistylis 0 0 + 10 + 14 + 18 + 12 1 - KST bám đuôi (ảnh trái) vỏ (ảnh phải) ấu trùng tôm Y Phụ lục 10: Chăm sóc ấu trùng tôm xanh Thành phần thức ăn chế biến Thành phần Hàm lượng Lòng đỏ trứng gà trứng Sữa bột giàu calci 10g Dầu mực 3% (trọng lương thức ăn) Lecithin 1,5% (trọng lượng thức ăn) Vitamin C 200 – 300 mg/kg thức ăn Nguồn: Nguyễn Thanh Phương ctv,,(2003) (a): Lòng đỏ trứng gà (b): Sữa bột Enlene gold Z (c): Dầu gan mực Lecithin (d): Hỗn hợp phối trộn (e): Hỗn hợp hấp chín (f): Hỗn hợn hấp chín rây theo mắc lới phơi râm (g): Thức ăn chế biến cho ấu trùng sau chế biến xong Phụ lục 11: Chế độ cho ăn ấu trùng tôm xanh Giai đoạn ấu trùng Loại thức ăn Lượng thức ăn Số lần cho ăn Giai đoạn 2– Ấu trùng Artemia – ấu trùng Artemia/ml nước ương lần /ngày (6h, 17h) Giai đoạn 4– Thức ăn chế biến kích cỡ 300 – 400 µm Ấu trùng Artemia Theo nhu cầu ấu trùng lần/ngày (8h, – ấu trùng Artemia/ml 12h, 15h) nước ương lần/ngày (17h) Giai đoạn 6– Thức ăn chế biến kích cỡ 500 – 600 µm Ấu trùng Artemia Theo nhu cầu ấu trùng lần/ngày (8h, – ấu trùng Artemia/ml 12h, 15h) nước ương lần/ngày (17h) Giai đoạn – 11 Thức ăn chế biến kích cỡ 700 – 800 µm Ấu trùng Artemia Theo nhu cầu ấu trùng lần/ngày (8h, – ấu trùng Artemia/ml 12h, 15h) nước ương lần/ngày (17h) (Nguồn: Nguyễn Thanh Phương ctv,,2003) AA Phụ lục 12: Thành phần hình ảnh số loại môi trường nuôi cấy vi khuẩn Thành phần môi trường Tryptone Soya Agar Ingredients Casein peptone (pancreatic) Soya peptone (papainic) Sodium chloride Agar Final pH (at 25°C) Grams/Litre 15,0 5,0 5,0 15,0 7,3±0,2 Thành phần môi trường Nutrient Agar Ingredients Peptic digest of animal tissue Sodium chloride Beef extract Yeast extract Agar Final pH (at 25°C) Gms / Litre 5,000 5,000 1,500 1,500 15,000 7,4±0,2 Thành phần môi trường TCBS Agar Ingredients Proteose peptone Yeast extract Sodium thiosulphate Sodium citrate Oxgall Sucrose Sodium chloride Ferric citrate Bromo thymol blue Thymol blue Agar Final pH (at 25°C) Gms / Litre 10,000 5,000 10,000 10,000 8,000 20,000 10,000 1,000 0,040 0,040 15,000 8,6±0,2 BB Một số loại môi trường nuôi cấy vi khuẩn (Agar, TCBS, TSA, NA) CC Phụ lục 13: Phương pháp pha chế môi trường kỹ thuật vô trùng 13.1 Pha môi trường Nutrient Agar: tính lượng môi trường cần sử dụng, pha với tỷ lệ 23g NA với 1L nước cất (1-1,5%) NaCl theo thể tích, cho vào bình chuyên dụng nấu môi trường → nấu môi trường nồi khử trùng áp suất → để nguội >60oC Tryptic Soy Agar: tính lượng môi trường cần sử dụng, pha với tỷ lệ 20g TSA với 1L nước cất (1-1,5%) NaCl theo thể tích, cho vào bình chuyên dụng nấu môi trường → nấu môi trường nồi khử trùng áp suất → để nguội >60oC TCBS Agar: tính lượng môi trường cần sử dụng, pha với tỷ lệ 89g TSA với 1L nước cất, cho vào bình chuyên dụng nấu môi trường → nấu môi trường nồi khử trùng áp suất → để nguội >60oC 13.2 Chuẩn bị đĩa petri Hấp tiệt trùng dụng cụ chứa môi trường đĩa petri 121oC 20 phút Lau cồn quanh mặt tủ cấy vô trùng Thắp đèn cồn để tránh nhiễm khuẩn vào đĩa môi trường Đợi nhiệt độ bình môi trường nguội đến 60oC cho vào tủ cấy vô trùng với đĩa petri để chuẩn bị đổ đĩa Không đỗ đĩa môi trường nóng 60oC để tránh nước đọng nắp đĩa mặt thạch Sát trùng tay cồn 70% trước đỗ đĩa Quay tròn bình để trộn môi trường, tránh lắc mạnh sinh bọt khí Đổ khoảng 20mL môi trường vào đĩa petri Nếu thấy có bọt khí mặt thạch dùng que cấy nung đỏ lửa đèn cồn châm vỡ bọt khí Thao tác cần thực thạch nóng, chưa đông Để yên cho thạch đông, tránh làm rung đĩa petri để bề mặt thạch phẳng, đồng nguội đến nhiệt độ phòng Gói giấy báo, ghi tên môi trường ngày đổ đĩa bên cho vào tủ lạnh dùng để cấy vi khuẩn DD 13.3 Phương pháp tráng đĩa (cấy trang hay tán vi sinh đĩa thạch) Chuẩn bị Đĩa petri, que cấy thủy tinh đầu tam giác Pipet 20-200 l, hộp đầu tip Cồn 70%, đèn cồn Thao tác Lấy ống nghiệm chứa nước mẫu với độ pha loãng khác để tiến hành tráng đĩa Vệ sinh cồn khắp mặt tủ cấy Cho dụng cụ vào tủ cấy (trừ máy khuấy ống nghiệm) Sát trùng tay cồn 70% Lắc kỹ ống nghiệm máy khuấy ống nghiệm phút Mở nút bình chứa mẫu, hơ nhanh miệng bình pha loãng đèn cồn Dùng Micropipet hút 100L dung dịch mẫu Hơ nhanh miệng ống đèn cồn, đậy nút lại Tay trái mở nắp đĩa thạch, tay phải cầm Micropipet cho vào 100L mẫu Dùng que cấy nhúng vào cồn, hơ nhanh lửa đèn cồn, làm nguội không khí 15s, tiếp tục làm nguội que gạt phần thạch dung dịch vi khuẩn, que cấy nguội gạt giọt dung dịch trải khắp mặt thạch: tay trái mở nắp hộp, ngón út xoay nhẹ cho đĩa chuyển động tròn, tay phải liên tục gạt mặt thạch khô Thay đầu típ tiếp tục với ống lại Chú ý: Để tế bào vi sinh tách rời phân bố mặt thạch, sau nhỏ giọt dịch pha loãng cần tiến hành gạt Nếu để lâu giọt dịch bị khô, tế bào gắn chặt vào mặt thạch, việc gạt dàn chúng khó khăn, dẫn đến kết sai lệch Các đĩa thạch cho vào tủ ấm 32oC 24h 13.4 Phương pháp nhuộm Gram vi khuẩn Các bước nhuộm Gram thực theo Sharmin and Rahman (2007) Cho giọt nước muối sinh lý lên kính mang vật EE Dùng que cấy tiệt trùng lấy khuẩn lạc trãi lên kính mang vật, để kính mang vật khô tự nhiên Hơ lướt kính mang vật lửa đèn cồn, cố định vi khuẩn sau để nguội Nhuộm crytal violet (dung dịch 1) khoảng phút, rửa kính mang vật nước Nhuộm iodine (dung dịch 2) phút, rửa kính mang vật nước Rửa kính mang vật dung dịch alcohol/acetone (dung dịch 3) từ 2- giây Rửa kính mang vật lại nước Nhuộm safranin (dung dịch 4) khoảng phút, rửa lại nước để khô Quan sát kính mang vật kính hiển vi quang học (40X 100X) Vi khuẩn gram (+): xanh tím Vi khuẩn gram (-): màu hồng Bộ nhuộm Gram FF [...]... và theo dõi Xuất phát từ vấn đề trên, đề tài: Mật số vi khuẩn Vibrio sp. , Bacillus sp và ký sinh trùng hiện diện trong ương ấu trùng tôm càng xanh quy trình nước trong kín và nước xanh cải tiến được thực hiện 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Cung cấp thêm những thông tin về mật số vi khuẩn Vibrio, vi khuẩn Bacillus và ký sinh trùng hiện diện trong hệ thống ương ấu trùng tôm càng xanh theo quy trình nước trong. .. kín và nước xanh cải tiến 1.3 Nội dung nghiên cứu Xác định sự biến động về mật độ của: vi khuẩn tổng cộng, vi khuẩn Vibrio, vi khuẩn Bacillus trong môi trường nước ương ấu trùng, ấu trùng tôm, vỏ trứng Artemia và cặn đáy Xác định thành phần và hệ số nhiễm ký sinh trùng trên ấu trùng tôm càng xanh và trên vỏ Artemia trong bể ương So sánh mật độ vi sinh vật, ký sinh trùng đã được xác định của 2 quy trình. .. đề trên Hiện nay sản xuất giống tôm càng xanh có 4 quy trình được áp dụng trên thế giới là quy trình nước trong h , quy trình nước trong kín, quy trình nước xanh và quy trình nước xanh cải tiến (Nguyễn Thanh Phương và ctv ., 2003) Trong đ , quy trình nước trong kín và quy trình nước xanh cải tiến được ứng dụng nhiều nhất Điểm chung của 2 quy trình trên là linh động trên quy mô sản xuất, dễ thực hiện tại... 4.5: Mật độ vi khuẩn Vibrio sp trong mẫu nước ương 20 Hình 4.6: Mật độ vi khuẩn Bacillus sp trong mẫu nước ương 21 Hình 4.7: Mật độ vi khuẩn tổng cộng trong mẫu nước ương 22 Hình 4.9: Mật độ vi khuẩn Vibrio sp trong mẫu ấu trùng 24 Hình 4.10: Mật độ vi khuẩn Bacillus sp trong mẫu ấu trùng 25 Hình 4.11: Mật độ vi khuẩn tổng cộng trong mẫu ấu trùng 26 viii DANH SÁCH TỪ VI T TẮT... 4.2.1 Mật độ của vi khuẩn Vibrio sp Trong suốt quá trình thí nghiệm, mật độ vi khuẩn Vibrio sp biến động khá lớn (0 – 3 9,8 x10 CFU/mL) Vào những ngày đầu, vi khuẩn Vibrio sp gần như không xuất hiện, đến ngày ương thứ 7 vi khuẩn Vibrio sp bất đầu xuất hiện với mật độ khá thấp (140 CFU/mL ở quy trình nước trong kín và 220 CFU/mL ở quy trình nước xanh cải tiến) sau đó tăng dần đến giữa chu kỳ ương Do... Vibrio sp và Bacillus sp ở nghiệm thức nước xanh cải tiến cao hơn so với nghiệm thức nước trong kín Cụ th , mật độ vi khuẩn Vibrio sp ở nghiệm thức nước xanh cải tiến là 3,5 1 x103 CFU/mL cao hơn 1,7 3 lần so với nghiệm thức nước trong ( 2,0 3 x103 CFU/mL ), mật độ vi khuẩn Bacillus sp ở nghiệm thức nước xanh cải tiến là 4,4 5 x103 CFU/mL cao hơn 1,7 7 lần so với nghiệm thức nước trong kín với mật độ là 2,5 2... giống nước xanh với mật độ 40 – 50 ấu trùng/ L đạt tỷ lệ sống 4 0,2 %, quy trình nước trong hở với mật độ 60 – 100 ấu trùng/ L đạt tỷ lệ sống 3 5,4 %, quy trình nước trong kín với mật độ 70 ấu trùng/ L tỷ lệ sống 2 4,9 % Nguyễn Lê Hoàng Yến (1999) đã ương TCX theo quy trình nước xanh cải tiến với mật độ ương lần lượt 5 0, 100 và 150 ấu trùng/ L và thức ăn duy nhất là Artemia Kết quả ương cho thấy mật độ ương 50... CFU/mL Mật độ trung bình của vi khuẩn tổng trong mẫu ấu trùng ở hai nghiệm thức đạt 2,9 6 x103 CFU/mL khá thấp chiếm 23% so với vi khuẩn tổng trong mẫu nước ương với mật độ là 1,3 x104 CFU/mL Mật độ vi khuẩn Bacillus sp trong mẫu ấu trùng đạt 9,4 3 x102 CFU/mL chiếm 27% so với mật độ vi khuẩn Bacillus sp trong mẫu nước ương là 3,4 8 x103 CFU/mL Mật độ vi khuẩn Vibrio sp trung bình trong mẫu ấu trùng đạt 3,4 2... của vi khuẩn Bacillus sp trong mẫu nước là 4,1 2 x103 CFU/mL cao hơn 1,6 lần với mật độ của vi khuẩn Vibrio sp 2,5 8 x103 CFU/mL Điều đó chứng tỏ khi mật độ của vi khuẩn Bacillus sp trong môi trường nước ương cao sẽ gây ức chế sự phát triển của nhóm vi khuẩn Vibrio sp. , góp phần ức chế các tác nhân gây bệnh 21 do nhóm Vibrio sp gây ra, giảm ô nhiễm nước ương (vào ngày ương thứ 25 mật độ vi khuẩn Bacillus. .. thuộc rất nhiều vào nguồn tôm bố mẹ Trong quá trình phát triển thì ấu trùng TCX có sự phân đàn và sự phân đàn lớn hay nhỏ tùy thuộc vào các điều kiện như: mật độ ương, nhiệt đ , dinh dưỡng, 2.2 Các quy trình sản xuất giống tôm càng xanh hiện nay Hiện nay, sản xuất giống TCX được áp dụng theo 4 quy trình: nước trong h , nước trong kín, nước xanh và nước xanh cải tiến Mỗi quy trình ương đều có đặc điểm