Tìm hiểu mối liên quan giữa sự có mặt của gen core/precore với một số dấu ấn của HBV trong huyết thanh

Tìm hiểu mối liên quan giữa sự có mặt của gen core/precore với một số dấu ấn của HBV trong huyết thanh

1 Tìm hiểu mối liên quan có mặt gen core/precore với số dấu ấn HBV huyết MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đại cương bệnh viêm gan B 1.1.1 Dịch tễ học bệnh viêm gan B 1.1.1.1 Dịch tễ học bệnh viêm gan B giới 1.1.1.2 Dịch tễ học bệnh viêm gan B Việt nam 1.1.2 Lâm sàng mức độ nguy hiểm bệnh viêm gan B 1.1.2.1 Viêm gan B cấp 1.1.2.2 Viêm gan B mạn 1.2 Đặc điểm sinh học vi rút viêm gan B 1.2.1 Cấu trúc vi rút viêm gan B 1.2.2 Sự nhân lên HBV 1.2.3 Các phương thức lây truyền HBV 1.2.3.1 Lây truyền HBV từ mẹ sang 1.2.3.2 Lây HBV qua đường tiêm truyền 1.2.3.3 Lây HBV qua đường tình dục 1.3 Vai trò đoạn gen gen HBV 1.4 Các dấu ấn huyết HBV 1.4.1 Kháng nguyên bề mặt HBV (HBsAg) anti-HBs 1.4.2 Kháng nguyên lõi HBV (HBcAg) anti-HBc 1.4.3 Kháng nguyên e HBV (HBeAg) anti-HBe 1.5 Các kỹ thuật sử dụng nghiên cứu 1.5.1 Kỹ thuật PCR 1.5.2 Kỹ thuật ELISA CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3 3 8 10 11 11 13 14 15 15 15 16 17 17 18 19 20 20 23 242.1 Đối tượng nghiên cứu 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.3 Các bước tiến hành nghiên cứu 2.4 Các kỹ thuật sử dụng nghiên cứu 2.4.1 ELISA xác định dấu ấn HBsAg, anti-HBs, HBeAg, antiHBe, anti-HBc 2.4.1.1 Kỹ thuật ELISA phát HBsAg huyết 2.4.1.2 Kỹ thuật ELISA phát Anti-HBs huyết 2.4.1.3 Kỹ thuật ELISA phát HbeAg huyết 2.4.1.4 Kỹ thuật ELISA phát anti-HBe huyết 2.4.1.5 Kỹ thuật ELISA phát Anti-HBc huyết 2.4.2 Kỹ thuật PCR xác định gen Core/Pre-Core 2.5 Thu thập xử lý số liệu 2.6 Thời gian tiến hành nghiên cứu CHƯƠNG KẾT QUẢ 3.1 Tỷ lệ phát gen core/precore 3.2 Đánh giá tỷ lệ phát dấu ấn HBeAg, anti-HBe, anti- 24 24 24 25 25 25 25 26 27 28 29 31 31 32 32 34 HBc, anti-HBs 3.3 Mối liên quan gen Core/Pre-Core với bốn dấu ấn huyết CHƯƠNG BÀN LUẬN 4.1 Tỷ lệ phát gen Core gen PreCore phụ nữ độ tuổi sinh đẻ có HBsAg(+) 4.2 Tỷ lệ phát HBeAg, anti-HBe, anti-HBc, anti-HBs 4.3 Mối liên quan diện gen Core, gen PreCore với bốn dấu ấn huyết KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ TÀI LIỆU THAM KHẢO 35 38 40 42 47 53 54 ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm gan B bệnh gan truyền nhiễm gây vi rút viêm gan B (Hepatitis B Virus) Trong sáu loại vi rút gây viêm gan ( A, B, C, D, E, G ), vi rút viêm gan B đặc biệt quan tâm tính chất lây truyền mức độ nguy hiểm Theo thống kê tổ chức y tế giới (World Health Organization) đến cuối năm 2000, giới có tỷ người nhiễm HBV Khoảng 400 triệu người mang HBV mạn tính Hàng năm có 500 000 người mang HBV mạn tính chết xơ gan ung thư gan [44] Người ta thấy 90% người mang HBV mạn tính nước Đông Nam Á bị lây nhiễm thời kỳ chu sinh, đặc biệt đẻ [23] Như vậy, nhiễm HBV thời kỳ sơ sinh nguy hiểm, đại đa số trẻ người mang HBV mạn tính với nguy tiến triển thành bệnh gan mạn tính lớn Lây nhiễm cho trẻ nhỏ thời kỳ sơ sinh chủ yếu từ mẹ có mang HBV, đặc biệt mẹ mang HBV mạn tính Việt Nam nước thuộc khu vực có tỷ lệ HBV lưu hành cao Người mang HBsAg(+) cộng đồng Việt Nam chiếm tỷ lệ 11,1% đến 16,8% [1,4,5,12,15,16,18] Tỷ lệ phụ nữ mang HBV mạn tính cao Đặc biệt phụ nữ độ tuổi sinh đẻ mang hai kháng nguyên bề mặt HBsAg HBeAg khả lây truyền HBV cho họ tăng lên rõ rệt Phát HBV Việt Nam phổ biến sử dụng kỹ thuật ELISA (Enzyme Linked Immunosorbernt Assay) Đây kỹ thuật phát kháng nguyên bề mặt (HBsAg) hay kháng nguyên hoà tan (HBeAg) HBV kháng thể (Anti-HBs, Anti-HBc, Anti-HBe) Những kỹ thuật cho phép phát dấu ấn hòa tan HBV mà không trực tiếp phát cấu trúc genom HBV, kỹ thuật không cho thấy khả nhân lên HBV Kỹ thuật PCR phát cấu trúc genom HBV Gen Core/Precore chứa thông tin liên quan đến nhân lên HBV Vì vậy, việc phát gen Core gen PreCore huyết kỹ thuật PCR cho phép xác định xác có mặt HBV khả nhân lên HBV giai đoạn sớm nhiễm HBV Đặc biệt việc phát gen PreCore liên quan đến xuất hay không HBeAg, kháng nguyên cho có vai trò quan trọng lây nhiễm HBV từ mẹ sang Thế giới có nhiều công trình nghiên cứu vấn đề Nhiều công trình tiến hành giải trình tự gen Core, gen PreCore xác định vị trí hay xảy đột biến vùng gen Core vùng gen PreCore Tuy nhiên, chưa có công trình khảo sát mối liên quan có mặt hai gen Core/PreCore với có mặt dấu ấn huyết Ở Việt Nam nhiều công trình nghiên cứu HBV công bố Các nghiên cứu chủ yếu khía cạnh lâm sang, diện thay đổi dấu ấn huyết bệnh nhân viêm gan mạn, viêm gan cấp, bệnh nhân xơ gan, ung thư gan… Về sinh học phân tử, có số công trình nghiên cứu kết hợp với nước để xác định thể đột biến HBV bệnh nhân có bệnh gan mạn tính Có công trình tiến hành xác định HBV-DNA phụ nữ có thai có HBsAg(+) số trẻ nhỏ sản phụ Nhưng chưa thấy có công trình công bố tỷ lệ phát gen Core gen PreCore mối liên quan hai gen với số dấu ấn huyết phụ nữ độ tuổi sinh đẻ Vì tiến hành đề tài nghiên cứu với hai mục tiêu : Phát gen Core / PreCore phụ nữ độ tuổi sinh đẻ mang HBsAg Tìm hiểu mối liên quan có mặt gen Core/PreCore với số dấu ấn HBV huyết TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y HÀ NỘI ĐÀM THỊ TÚ ANH TÌM HIỂU MỐI LIÊN QUAN GIỮA SỰ CÓ MẶT CỦA GEN CORE/PRECORE VỚI MỘT SỐ DẤU ẤN CỦA HBV TRONG HUYẾT THANH LUẬN VĂN THẠC SỸ Y HỌC CHUYÊN NGÀNH: MIỄN DỊCH HỌC Mã số: 60.72.04 Người hướng dẫn khoa học: TS phạm đăng khoa Hà nội - 2008 MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đại cương bệnh viêm gan B 1.1.1 Dịch tễ học bệnh viêm gan B 1.1.1.1 Dịch tễ học bệnh viêm gan B giới 1.1.1.2 Dịch tễ học bệnh viêm gan B Việt nam 1.1.2 Lâm sàng mức độ nguy hiểm bệnh viêm gan B 1.1.2.1 Viêm gan B cấp 1.1.2.2 Viêm gan B mạn 10 1.2 Đặc điểm sinh học vi rút viêm gan B 11 1.2.1 Cấu trúc vi rút viêm gan B 11 1.2.2 Sự nhân lên HBV 13 1.2.3 Các phương thức lây truyền HBV 14 1.2.3.1 Lây truyền HBV từ mẹ sang 15 1.2.3.2 Lây HBV qua đường tiêm truyền 15 1.2.3.3 Lây HBV qua đường tình dục 15 1.3 Vai trò đoạn gen gen HBV 16 1.4 Các dấu ấn huyết HBV 17 1.4.1 Kháng nguyên bề mặt HBV (HBsAg) anti-HBs 17 1.4.2 Kháng nguyên lõi HBV (HBcAg) anti-HBc 18 1.4.3 Kháng nguyên e HBV (HBeAg) anti-HBe 19 1.5 Các kỹ thuật sử dụng nghiên cứu 20 1.5.1 Kỹ thuật PCR 20 1.5.2 Kỹ thuật ELISA 23 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 2.1 Đối tượng nghiên cứu 24 2.2 Phương pháp nghiên cứu 24 2.3 Các bước tiến hành nghiên cứu 24 2.4 Các kỹ thuật sử dụng nghiên cứu 25 2.4.1 ELISA xác định dấu ấn HBsAg, anti-HBs, HBeAg, antiHBe, anti-HBc 25 2.4.1.1 Kỹ thuật ELISA phát HBsAg huyết 25 2.4.1.2 Kỹ thuật ELISA phát Anti-HBs huyết 25 2.4.1.3 Kỹ thuật ELISA phát HbeAg huyết 26 2.4.1.4 Kỹ thuật ELISA phát anti-HBe huyết 27 2.4.1.5 Kỹ thuật ELISA phát Anti-HBc huyết 28 2.4.2 Kỹ thuật PCR xác định gen Core/Pre-Core 29 2.5 Thu thập xử lý số liệu 31 2.6 Thời gian tiến hành nghiên cứu 31 CHƯƠNG KẾT QUẢ 32 3.1 Tỷ lệ phát gen core/precore 32 3.2 Đánh giá tỷ lệ phát dấu ấn HBeAg, anti-HBe, antiHBc, anti-HBs 34 3.3 Mối liên quan gen Core/Pre-Core với bốn dấu ấn huyết 35 CHƯƠNG BÀN LUẬN 38 4.1 Tỷ lệ phát gen Core gen PreCore phụ nữ độ tuổi sinh đẻ có HBsAg(+) 40 4.2 Tỷ lệ phát HBeAg, anti-HBe, anti-HBc, anti-HBs 42 4.3 Mối liên quan diện gen Core, gen PreCore với bốn dấu ấn huyết 47 KẾT LUẬN 53 KIẾN NGHỊ 54 TÀI LIỆU THAM KHẢO CHỮ VIẾT TẮT Anti- HBs : Antibody against Hepatitis B surface antigen ( Kháng thể kháng kháng nguyên bề mặt vi rút viêm gan B) Anti- HBc : Antibody against Hepatitis B core antigen ( Kháng thể kháng kháng nguyên lõi vi rút viêm gan B) Anti- HBe : Antibody against Hepatitis B e antigen ( Kháng thể kháng kháng nguyên e vi rút viêm gan B) Au : Australia antigen ( Kháng nguyên Australia) cccDNA : DNA vòng đóng tương đương ( Covalently closed circle DNA) DNA : Deoxyribonucleic Acid ( Axít deoxyribonucleic) ELISA : Enzyme Linked Immunosorbent Assay ( Kỹ thuật miễn dịch hấp phụ gắn men) HBV : Hepatitis B virus ( Vi rút viêm gan B) HBsAg : Hepatitis B surface antigen ( Kháng nguyên bề mặt vi rút viêm gan B) HBcAg : Hepatitis B core antigen ( Kháng nguyên lõi vi rút viêm gan B) HBeAg : Hepatitis B e antigen ( Kháng nguyên e vi rút viêm gan B) PCR : Polymerase Chain Reaction ( Phản ứng khuếch đại chuỗi) ĐẶT VẤN ĐỀ Viêm gan B bệnh gan truyền nhiễm gây vi rút viêm gan B (Hepatitis B Virus) Trong sáu loại vi rút gây viêm gan ( A, B, C, D, E, G ), vi rút viêm gan B đặc biệt quan tâm tính chất lây truyền mức độ nguy hiểm Theo thống kê tổ chức y tế giới (World Health Organization) đến cuối năm 2000, giới có tỷ người nhiễm HBV Khoảng 400 triệu người mang HBV mạn tính Hàng năm có 500 000 người mang HBV mạn tính chết xơ gan ung thư gan [44] Người ta thấy 90% người mang HBV mạn tính nước Đông Nam Á bị lây nhiễm thời kỳ chu sinh, đặc biệt đẻ [23] Như vậy, nhiễm HBV thời kỳ sơ sinh nguy hiểm, đại đa số trẻ người mang HBV mạn tính với nguy tiến triển thành bệnh gan mạn tính lớn Lây nhiễm cho trẻ nhỏ thời kỳ sơ sinh chủ yếu từ mẹ có mang HBV, đặc biệt mẹ mang HBV mạn tính Việt Nam nước thuộc khu vực có tỷ lệ HBV lưu hành cao Người mang HBsAg(+) cộng đồng Việt Nam chiếm tỷ lệ 11,1% đến 16,8% [1,4,5,12,15,16,18] Tỷ lệ phụ nữ mang HBV mạn tính cao Đặc biệt phụ nữ độ tuổi sinh đẻ mang hai kháng nguyên bề mặt HBsAg HBeAg khả lây truyền HBV cho họ tăng lên rõ rệt Phát HBV Việt Nam phổ biến sử dụng kỹ thuật ELISA (Enzyme Linked Immunosorbernt Assay) Đây kỹ thuật phát kháng nguyên bề mặt (HBsAg) hay kháng nguyên hoà tan (HBeAg) HBV kháng thể (Anti-HBs, Anti-HBc, Anti-HBe) Những kỹ thuật cho phép phát dấu ấn hòa tan HBV mà không trực tiếp phát cấu trúc genom HBV, kỹ thuật không cho thấy khả nhân lên HBV Kỹ thuật PCR phát cấu trúc genom HBV Gen Core/Precore chứa thông tin liên quan đến nhân lên HBV Vì vậy, việc phát gen Core gen PreCore huyết kỹ thuật PCR cho phép xác định xác có mặt HBV khả nhân lên HBV giai đoạn sớm nhiễm HBV Đặc biệt việc phát gen PreCore liên quan đến xuất hay không HBeAg, kháng nguyên cho có vai trò quan trọng lây nhiễm HBV từ mẹ sang Thế giới có nhiều công trình nghiên cứu vấn đề Nhiều công trình tiến hành giải trình tự gen Core, gen PreCore xác định vị trí hay xảy đột biến vùng gen Core vùng gen PreCore Tuy nhiên, chưa có công trình khảo sát mối liên quan có mặt hai gen Core/PreCore với có mặt dấu ấn huyết Ở Việt Nam nhiều công trình nghiên cứu HBV công bố Các nghiên cứu chủ yếu khía cạnh lâm sang, diện thay đổi dấu ấn huyết bệnh nhân viêm gan mạn, viêm gan cấp, bệnh nhân xơ gan, ung thư gan… Về sinh học phân tử, có số công trình nghiên cứu kết hợp với nước để xác định thể đột biến HBV bệnh nhân có bệnh gan mạn tính Có công trình tiến hành xác định HBV-DNA phụ nữ có thai có HBsAg(+) số trẻ nhỏ sản phụ Nhưng chưa thấy có công trình công bố tỷ lệ phát gen Core gen PreCore mối liên quan hai gen với số dấu ấn huyết phụ nữ độ tuổi sinh đẻ Vì tiến hành đề tài nghiên cứu với hai mục tiêu : Phát gen Core / PreCore phụ nữ độ tuổi sinh đẻ mang HBsAg Tìm hiểu mối liên quan có mặt gen Core/PreCore với số dấu ấn HBV huyết CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đại cương bệnh viêm gan B 1.1.1 Dịch tễ học bệnh viêm gan B 1.1.1.1 Dịch tễ học bệnh viêm gan B giới Vi rút viêm gan B (HBV - Hepatitis B Virus) tác nhân gây viêm gan đa dạng phương diện dịch tễ Tỷ lệ mang HBV khác biệt vùng địa lý khác liên quan đến độ tuổi bị nhiễm HBV [64] Theo ước tính Tổ chức y tế giới đến cuối năm 2000, giới có khoảng 400 triệu người mang HBV, 500 000 số chết bệnh gan hàng năm [44] Ở Mỹ tỷ lệ mang HBV mạn tính 1,25 triệu người [22,53] Tỷ lệ người mang HBV toàn giới dao động từ 0,1% đến 20%, khác châu lục Căn vào tỷ lệ mang HBV cộng đồng người ta chia giới thành ba khu vực với ba mức độ lưu hành dịch khác Khu vực dịch lưu hành thấp: có tỷ lệ mang HBV từ 0,1% đến 2%, vùng Tây Âu, Úc, Niu-di-lân Mỹ Khu vực dịch lưu hành trung bình nước Trung Đông, Nhật Bản, Ấn Độ Singapo, tỷ lệ mang HBV khoảng 3% đến 5% Khu vực lưu hành dịch cao Đông Nam Á khu vực Tiểu Sahara thuộc Châu Phi có tỷ lệ người mang HBV cộng đồng từ 10% đến 20% [49] Ở Mỹ số người nhiễm HBV bao gồm nhiễm số cũ khoảng 5%, đáng lưu ý gần 100% người lớn số người Đông Nam Á người Phi Nhìn chung nhiễm HBV tăng lên theo tuổi tỷ lệ nhiễm HBV cao cộng đồng người Mỹ gốc Phi, người Mỹ gốc Tây Ban Nha, Bồ Đào Nha gốc Á [53] Một vài nghiên cứu cho thấy số cộng đồng có tỷ lệ người mang HBV cao cộng đồng lân cận người Eskimo Alaska, người sống đảo thuộc Châu Á - Thái Bình Dương thổ dân Australia Ở hầu thuộc khu vực có dịch lưu hành cao Hồng Kông Trung Quốc, lây truyền chu sinh ( lây truyền dọc) phương thức lây truyền chủ yếu Những người nhiễm HBV mạn tính chủ yếu bị lây nhiễm giai đoạn chu sinh Nhưng số vùng khác Châu Phi Trung Đông, lây truyền ngang hai năm đầu đời chủ yếu, Nam, không phù hợp với kết tác giả nước, mà phù hợp với nhận định chung giới Đó phụ nữ châu Á, có Việt Nam, nơi tỷ lệ phụ nữ độ tuổi sinh đẻ mang hai kháng nguyên HBsAg HBeAg cao giới Chính điều nguyên nhân quan trọng dẫn đến tỷ lệ lây nhiễm HBV cao giai đoạn chu sinh cho họ [25] * Anti-HBe kháng thể chống kháng nguyên e HBV, thường xuất cuối giai đoạn nhiễm HBV cấp tính Khi anti-HBe xuất dấu hiệu lui bệnh [23b] Tỷ lệ có anti-HBe(+) phụ nữ có HBsAg(+) nghiên cứu 68,6% (bảng 3.5), cao so với Vũ Thị Tường Vân [21] có 29,1% Nguyên nhân cỡ mẫu hai nghiên cứu khác xét nghiệm sử dụng để xác định hai dấu ấn huyết khác Chúng nhận thấy đa số mẫu nghiên cứu (29 tổng số 51 người, chiếm tỷ lệ 56,9%), có anti-HBe(+) HBeAg(-) Điều chứng tỏ 56,9% phụ nữ nghiên cứu qua giai đoạn nhiễm HBV cấp tính bắt đầu giai đoạn lui bệnh Những phụ nữ khả truyền HBV cho họ thấp Có 13 tổng số 51 người có anti-HBe(-) HBeAg(+), chiếm tỷ lệ 25,5% Để giải thích cho phụ nữ có hai khả Khả thứ họ giai đoạn nhiễm HBV cấp tính chuẩn bị chuyển sang giai đoạn bình phục [23b] Sau giai đoạn xét nghiệm HBeAg cho kết âm tính xuất anti-HBe có nghĩa phụ nữ chuyển sang giai đoạn bình phục 56,9% phụ nữ nguy lây nhiễm cho họ không lớn Khả thứ hai phụ nữ chuyển thành người mang HBV mạn tính Các xét nghiệm sau cho kết HBsAg(+), HBeAg(+) kéo dài không thấy xuất anti-HBe [23b] Khả thứ hai xảy cao tới 93,8% đề cập Xét mối liên quan HBsAg(+) với HBeAg(+) anti-HBe(-), kết cho thấy phụ nữ tuổi sinh đẻ Hà Nội mang hai kháng nguyên HBsAg HBeAg với tỷ lệ cao Chính phụ nữ nguồn lây chủ yếu cộng đồng làm tăng tỷ lệ gây nhiễm HBV chu sinh cho trẻ em Việt Nam Đặc biệt nghiên cứu mình, quan sát số 51 người (17,6%) có anti-HBe(+) HBeAg(+) Đây giai đoạn chuyển đổi huyết người nhiễm HBV cấp tính sang giai đoạn bình phục khỏi So sánh với nghiên cứu Hàn Quốc người có HBsAg không triệu chứng, tỷ lệ có chuyển đổi huyết với kháng nguyên e tương tự với kết (18,3% so với 17,6%) [61] * Anti-HBc kháng thể kháng kháng nguyên lõi HBV AntiHBc sinh kích thích HBcAg Anti-HBc có vai trò điểm chứng tỏ có mặt HBcAg Anti-HBc vai trò bảo vệ thể với nhiễm HBV Anti-HBc gồm có hai loại IgM anti-HBc IgG antiHBc [30] IgM anti-HBc kháng thể xuất sớm giai đoạn viêm gan cấp tính, trước anti-HBs xuất Sau IgM anti-HBc giảm dần biến Một số viêm gan mạn IgM anti-HBc huyết với nồng độ thấp mức xác định IgG anti-HBc kháng thể chống kháng nguyên lõi (HBcAg) IgG antiHBc xuất sau IgM anti-HBc, thường tồn kéo dài suốt đời, đặc biệt người mang HBV mạn [63] Tỷ lệ phụ nữ độ tuổi sinh đẻ sống Hà Nội có HBsAg(+) IgG anti-HBc(+) nghiên cứu 66,7% (bảng 3.6) So sánh với kết Đỗ Tuấn Đạt [7] 69,2%, kết thấp chút Nguyên nhân theo chúng tôi, Đỗ Tuấn Đạt xác định antiHBc toàn phần huyết thanh, tức xác định hai loại kháng thể IgM anti-HBc IgG anti-HBc Trong đó, xác định IgG antiHBc nên kết thấp so với Đỗ Tuấn Đạt Nhiều số liệu chứng minh truyền thụ động IgG anti-HBc từ người mẹ mang HBV mạn tính sang cho yếu tố khởi động phát triển nhiễm HBV tồn trẻ sơ sinh [6,45] Vì nghiên cứu xác định IgG anti-HBc So sánh với kết Vũ Thị Tường Vân [21], kết cao (66,7% so với 54,6%) Sự khác xét nghiệm dùng khác nhau, nghiên cứu Vũ Thị Tường Vân kết thu 10 năm trước cỡ mẫu Vũ Thị Tường Vân lớn Kết hợp kết phát dấu ấn huyết làm nghiên cứu này, thấy: - Tỷ lệ HBeAg(+) cao 39,2% - Tỷ lệ anti-HBe(+) 68,6% - Anti-HBs thấp 3,9% - Tỷ lệ IgG anti-HBc cao 66,7% Qua đánh giá tỷ lệ phát dấu ấn HBeAg, anti-HBe, anti-HBc, anti-HBs, thấy phụ nữ tuổi sinh đẻ Hà Nội nhiễm HBV mạn tính mang hai kháng nguyên HBsAg HBeAg cao 39,2% Số phụ nữ sau nhiễm HBV có dấu hiệu hồi phục 68,6% Tỷ lệ có kháng thể chống kháng nguyên lõi cao 66,7% Điều chứng tỏ phụ nữ độ tuổi sinh đẻ Hà Nội có tỷ lệ cao nhiễm HBV trước cho thấy nửa số phụ nữ độ tuổi sinh đẻ Hà Nội có diện nhân lên HBV máu Như yếu tố giúp tăng lan truyền vi rút HBeAg(+) yếu tố nói lên nhân lên mạnh mẽ vi rút IgG anti-HBc(+) cao nhóm phụ nữ tuổi sinh đẻ Hà nội Đây nguyên nhân làm tăng tỷ lệ mang HBV mạn nhóm phụ nữ tuổi sinh đẻ, tăng tỷ lệ truyền HBV từ phụ nữ cho họ 4.3 Mối liên quan diện gen Core, gen PreCore với bốn dấu ấn huyết Vùng gen Core gen PreCore có nguồn gốc từ khung đọc mở gen C HBV Tuy có tỷ lệ xuất tương đương huyết thanh, hai vùng gen chứa thông tin di truyền tổng hợp hai loại sản phẩm protein khác HBV [54] Vì có liên quan khác hai gen với dấu ấn huyết * HBeAg sản phẩm vùng PreCore thuộc gen C Tỷ lệ phát gen PreCore huyết nghiên cứu 62,7% so với tỷ lệ 39,2% phát HBeAg người HBsAg(+) Điều cho thấy tỷ lệ phát gen PreCore HBeAg có khác biệt ý nghĩa thống kê (với p0,05) (bảng 3.9) Điều cho thấy có mối tương quan đáp ứng sinh kháng thể (anti-HBe) thể với có mặt gen PreCore huyết Xét có mặt đồng thời HBsAg(+), anti-HBe(+), gen PreCore huyết thanh, nghiên cứu thấy có 41,2% phụ nữ (bảng 3.10) Trong mối liên quan có mặt HBsAg, HBeAg, anti-HBe gen PreCore huyết thanh, thấy có người chiếm tỷ lệ 3,9% (bảng 3.8), có HBsAg(+), HBeAg(+), anti-HBe(-) không phát gen PreCore huyết Ngoài kháng thể anti-HBs, anti-HBe, IgG anti-HBc hai phụ nữ âm tính Điều chứng tỏ họ giai đoạn nhiễm HBV cấp, giai đoạn cửa sổ nên có HBsAg(+), HBeAg(+), kháng thể chưa thấy tải lượng vi rút máu hai phụ nữ thấp chưa đủ để phát gen PreCore huyết [17] * IgG anti-HBc kháng thể sinh kích thích HBcAg HBcAg sản phẩm protein sau dịch mã vùng gen Core [54] So sánh tỷ lệ xuất gen Core huyết 33/51 người chiếm 64,7% tỷ lệ xuất IgG anti-HBc huyết 34/51 người chiếm 66,7% (bảng 3.11) Kết cho thấy diện gen Core IgG anti-HBc huyết khác biệt ý nghĩa thống kê (p>0,05) Đây biểu cho thấy có mối liên quan chặt chẽ có mặt gen Core huyết với đáp ứng tạo IgG anti-HBc thể Xét đồng thời có HBsAg(+), IgG anti-HBc(+) gen Core huyết thanh, nghiên cứu có 24 người chiếm 47,1% (bảng 3.12) Như vậy, có mối tương quan diện IgG anti-HBc gen Core, có 47,1% số phụ nữ nghiên cứu có đồng thời anti-HBc(+) gen Core huyết Bởi IgG anti-HBc kháng thể thể đáp ứng với sản phẩm HBcAg gen Core Nên thể sản xuất kháng thể bị chi phối nhiều yếu tố khác quan trọng tình trạng hệ thống miễn dịch thể mang HBV hay giai đoạn nhiễm HBV… Vì có 19,6% số phụ nữ nghiên cứu có anti-HBc không tìm thấy gen Core huyết Điều thấy giai đoạn thể bị nhiễm HBV hệ thống miễn dịch thể đủ sức tiêu diệt đào thải hết vi rút khỏi thể, mức thấp mà kỹ thuật không phát (dưới 10 DNA/ml) [17] Ngoài có người, chiếm 17,6%, có diện gen Core HBsAg anti-HBc âm tính Đây phụ nữ giai đoạn nhiễm HBV cấp Chúng ta xác định kháng nguyên bề mặt HBsAg có mặt gen Core HBV, tức phụ nữ thực có nhiễm HBV có nhân lên HBV Nhưng giai đoạn đầu nên thể chưa sinh kháng thể chống kháng nguyên lõi HBV nên không tìm thấy anti-HBc huyết thanh, thông thường sau tuần có phơi nhiễm với HBV có anti-HBc huyết [42] HBcAg kháng nguyên lõi HBV Bình thường HBcAg tồn nhân tế bào gan, có huyết thanh, mức phát được, muốn xác định có mặt HBcAg bắt buộc phải sinh thiết tế bào gan [30] Tuy số n hạn chế kết nghiên cứu cho thấy tỷ lệ xuất gen Core tương đương với tỷ lệ xuất IgG anti-HBc huyết Điều gián tiếp dựa vào có mặt IgG anti-HBc huyết mà suy diện HBcAg tế bào gan, tình trạng nhân lên vi rút thể có mặt gen Core huyết Điều khẳng định thêm người có anti-HBc huyết dấu hiệu nhiễm HBV tự nhiên trước [30] * Xét có mặt đồng thời gen Core PreCore thấy có 28/51 người chiếm tỷ lệ 54,9%, số người có anti-HBs(+) người HBsAg(+) có 2/51 người chiếm tỷ lệ 3,9% (bảng 3.13) Chúng nhận thấy có khác biệt có ý nghĩa diện hai gen lõi HBV với xuất kháng thể bảo vệ chống kháng nguyên bề mặt HBsAg HBV (p[...]... 1.4 Các dấu ấn huyết thanh của HBV 1.4.1 Kháng nguyên bề mặt của HBV (HBsAg) và anti-HBs Kháng nguyên bề mặt của HBV (HBsAg) được sản xuất trong bào tương của tế bào gan và xuất hiện chủ yếu trong huyết thanh cũng như trên màng tế bào gan với nồng độ đôi khi rất lớn [4,19], nhưng không có trong nhân tế bào gan [10,20] HBsAg là dấu ấn huyết thanh cho thấy tình trạng nhiễm HBV của cơ thể HBsAg có thể... (HBeAg) chính là một sản phẩm chuyển hoá của lớp vỏ trong (của polypeptid tiền lõi) [58] + Chứa trong vỏ của hạt vi rút là bộ gen của HBV (genome) Bộ gen của HBV là một DNA phụ thuộc DNA polymeraza, có 3200 đôi bazơ (hình 1.2).[6*] Ba dạng hình thể lưu hành trong huyết thanh của người nhiễm HBV có thể đứng riêng lẻ hoặc dính lại với nhau, điều này tạo ra những bao ngoài rỗng của vi rút do sự sản xuất dư... điểm chứng tỏ sự có mặt của HBcAg[46,60] Vai trò bảo vệ của anti-HBc chống lại sự xâm nhập của vi rút đến nay vẫn chưa rõ ràng [19] Tuy nhiên anti-HBc là một dấu ấn khá quan trọng trong chuẩn đoán hồi cứu và điều tra dịch tễ học về tình trạng nhiễm HBV Xét nghiệm xác định IgM anti-HBc được dùng trong chuẩn đoán bệnh cấp tính Sự hiện diện của IgM anti-HBc trong huyết thanh pha loãng 1/5000 có thể giúp... mầu thành có mầu Phản ứng lên mầu này được xác định bằng mắt thường và được đọc chính xác bằng quang kế (hình 1.8) Kỹ thuật ELISA phát hiện HBsAg trong huyết thanh, phát hiện Anti-HBs trong huyết thanh, phát hiện HBeAg trong huyết thanh, phát hiện anti-HBe trong huyết thanh, và phát hiện Anti-HBc trong huyết thanh Nguyên lý kỹ thuật ELISA được tóm tắt như sau: Cơ chất E KN HP KT trong huyết thanh KT... hiệu quả của đáp ứng với interferon [47] 1.4.3 Kháng nguyên e của HBV (HBeAg) và anti-HBe Năm 1972 Maginus và Espmark đã phát hiện ra một kháng nguyên không thuộc hệ HBsAg, KN này có mối liên quan với tình trạng nhiễm HBV mạn tính, đó là kháng nguyên e HBeAg là một kháng nguyên hoà tan, có mặt trong huyết tương HBeAg xuất hiện sớm ngay từ thời kỳ ủ bệnh gần như cùng lúc với HBsAg, trước khi có dấu hiệu... được xem như là dấu ấn biểu thị sự nhân lên của HBV liên quan đến tình trạng nhiễm và mức độ nặng của bệnh HBeAg còn đóng vai trò quan trọng trong khả năng lây bệnh của các mẫu máu có HBsAg(+) Người ta thấy HBeAg (+) ở 50% các trường hợp viêm gan mạn tính có HBsAg Ngược lại ở những người lành mang HBsAg thì HBeAg ít dương tính hơn[46] Trong nhiễm vi rút cấp tính, HBeAg tồn tại trong huyết thanh từ vài... vắc xin Khi có antiHBs thường đã hết HBsAg trong huyết tương Anti-HBs giảm dần theo thời gian, có vai trò bảo vệ cơ thể, chống tái nhiễm HBV [27] 1.4.2 Kháng nguyên lõi của HBV (HBcAg) và anti-HBc HBcAg hiếm khi xuất hiện trong huyết tương mà chủ yếu xuất hiện trong nhân của tế bào gan, vì vậy chỉ phát hiện được khi sinh thiết tế bào gan Sự có mặt của HBcAg với hàm lượng cao chứng tỏ đang có hoạt động... cứu của Việt Nam cũng như thế giới đều đã cho thấy HBeAg có vai trò rất quan trọng trong lây truyền HBV, đặc biệt trong lây truyền từ mẹ sang con Chu Thị Thu Hà nghiên cứu trên 1.300 sản phụ tới sinh con tại bệnh viện Phụ sản trung ương Hà nội, số sản phụ có HBsAg(+) chiếm 12,5%, số sản phụ có cả HBsAg(+) và HBeAg(+) là 40,5% Máu cuống rốn con của các mẹ có HBsAg(+) có kháng nguyên bề mặt của HBV tới... protein bề mặt trong quá 6 trình nhân lên của vi rút Các hạt này có rất nhiều trong huyết thanh ( 10 9 10 hạt / ml) và với tỷ lệ số hạt Dane / HBsAg là khoảng 1/10.000 [51] 1.2.2 Sự nhân lên của HBV Sự nhân lên của HBV, cũng giống như nhiều vi rút khác, phải trải qua nhiều bước: (1) Vi rút gắn vào tế bào chủ; (2) Vi rút xâm nhập vào tế bào chủ; (3) Vi rút di chuyển vào nhân; (4) Vi rút phóng thích bộ gen; ... w, r (trong đó a đặc hiệu chung cho nhóm) ƒ Protein bề mặt trung bình: TLPT 29 kilo Dalton, có cấu trúc gồm protein bề mặt nhỏ (HBsAg) và thêm một đoạn có 55 acid amin ( là sản phẩm của Pre-S2) ƒ Protein bề mặt lớn: TLPT 33 kilo Dalton, có cấu trúc gồm toàn bộ chuỗi trung bình và thêm một đoạn có 108 acid amin ( là sản phẩm của Pre-S1) Đây là thành phần quan trọng của hạt vi rút hoàn chỉnh và có tính