Xác Định Một Số Đặc Tính Sinh Học Của Vi Khuẩn Pasteurella Multocida Gây Bệnh Tụ Huyết Trùng Trâu, Bò Tại Cao Bằng Và Lựa Chọn Vắc Xin Phòng Bệnh

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN - ĐẶNG NGỌC LƯƠNG XÁC ĐỊNH MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA VI KHUẨN PASTEURELLA MULTOCIDA GÂY BỆNH TỤ HUYẾT TRÙNG TRÂU, BÒ TẠI CAO BẰNG VÀ LỰA CHỌN VẮC XIN PHÒNG BỆNH LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành: Mã số: Hướng dẫn khoa học: Thú y 60.64.01.01 PGS.TS Đặng Xuân Bình THÁI NGUYÊN - 2012 80 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan rằng: - Các kết nghiên cứu luận văn trực tiếp nghiên cứu hướng dẫn PGS.TS Đặng Xuân Bình, giúp đỡ cán Trung tâm chẩn đoán thú y - Cục Thú y - Các số liệu kết trình bày luận văn hoàn toàn trung thực, khách quan, rút từ tình hình thực tế Cao Bằng năm qua chưa sử dụng để bảo vệ học vị - Mọi giúp đỡ cho việc thực luận văn cảm ơn thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Thái Nguyên, tháng 10 năm 2012 Tác giả Đặng Ngọc Lương ii81 LỜI CẢM ƠN Trong suốt năm học tập, với nỗ lực thân, giúp đỡ, hướng dẫn tận tình nhiều cá nhân tập thể, đến luận văn hoàn thành Nhân dịp này, cho phép tỏ lòng biết ơn cảm ơn chân thành tới: - PGS.TS Đặng Xuân Bình - Giám đốc trung tâm liên kết đào tạo quốc tế - Đại học Nông Lâm Thái Nguyên - Người thầy uyên bác, mẫu mực, tận tình chu đáo cổ vũ tinh thần, động viên, hướng dẫn bảo cho suốt trình nghiên cứu hoàn thành luận văn - Ban Giám hiệu Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên, khoa Sau Đại học, khoa Chăn nuôi - Thú y, thầy cô giáo giúp đỡ, tạo điều kiện để học tập, tiếp thu kiến thức chương trình học - Các cán chi cục thú y tỉnh Cao Bằng, cán thú y trạm thú y huyện tỉnh Cao Bằng, đặc biệt cán thú y - trạm thú y huyện Hòa An - Cán trung tâm chẩn đoán thú y - Cục thú y Việt Nam Nhân dịp hoàn thành luận văn, cho phép gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè động viên giúp đỡ vượt qua khó khăn suốt trình học tập, nghiên cứu, thực đề tài Một lần xin bày tỏ lòng biết ơn, cảm ơn chân thành tới tập thể, cá nhân tạo điều kiện giúp đỡ hoàn thành chương trình học tập Thái Nguyên, tháng 10 năm 2011 Tác giả Đặng Ngọc Lương 82 iii MỤC LỤC Trang Lời cam đoan i Lời cảm ơn .ii Mục lục iii Danh mục từ viết tắt .vii Danh mục bảng viii Danh mục hình MỞ ĐẦU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài Đối tượng địa điểm nghiên cứu Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU VÀ CƠ SỞ KHOA HỌC CỦA ĐỀ TÀI 1.1 Tình hình bệnh tụ huyết trùng gia súc 1.1.1 Trên giới 1.1.2 Ở Việt Nam 1.2 Dịch tễ học bệnh tụ huyết trùng 1.2.1 Nguồn bệnh phương thức lây lan 1.2.2 Loài mắc bệnh 1.2.3 Tuổi mắc bệnh 1.2.4 Mùa vụ phát bệnh 1.2.5 Vùng phát bệnh 10 1.3 Đặc tính sinh học mầm bệnh 11 1.3.1 Phân loại 11 iv 83 1.3.2 Hình thái đặc tính nuôi cấy 11 1.3.3 Đặc tính sinh hóa 15 1.3.4 Kháng nguyên vi khuẩn 16 1.3.5 Độc lực vi khuẩn P multocida 19 1.3.6 Sức đề kháng 20 1.4 Đặc điểm bệnh tụ huyết trùng trâu, bò 21 1.4.1 Cơ chế sinh bệnh 22 1.4.2 Biểu đặc trưng trâu bò mắc bệnh tụ huyết trùng 22 1.5 Những hiểu biết vắc xin phòng bệnh 24 Chương NỘI DUNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 26 2.1 Nội dung nghiên cứu 26 2.1.1 Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trâu bò Cao Bằng 26 2.1.2 Phân lập xác định đặc tính sinh vật hóa học vi khuẩn Pasteurella multocida bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Cao Bằng 26 2.1.3 Đánh giá hiệu lực bảo hộ số loại vắc xin phòng bệnh tụ huyết trung trâu, bò thực địa 27 2.1.4 Lựa chọn vắc xin đề xuất biện pháp khống chế bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Cao Bằng 27 2.2 Vật liệu dùng cho nghiên cứu 27 2.2.1 Mẫu bệnh phẩm dùng phân lập vi khuẩn 27 2.2.2 Động vật thí nghiệm 27 2.2.3 Hóa chất dụng cụ nghiên cứu 27 2.2.3.1 Hóa chất thí nghiệm 27 2.2.3.2 Dụng cụ thí nghiệm 28 2.3 Phương pháp nghiên cứu 29 v 84 2.3.1 Phương pháp nghiên cứu dịch tễ học 29 2.3.2 Phương pháp nuôi cấy, phân lập xác định vi khuẩn P multocida 30 2.3.2.1 Phương pháp nuôi cấy, phân lập 30 2.3.2.2 Phương pháp xác định tính chất sinh vật, hóa học P multocida 30 2.3.2.3 Phương pháp xác định serotype kháng nguyên vi khuẩn P multocida 32 2.3.3 Kiểm tra độc lực vi khuẩn P.multocida phân lập 32 2.3.3.1 Kiểm tra độc lực vi khuẩn chuột bạch 32 2.3.3.2 Phương pháp kháng sinh đồ 34 2.3.3.3 Xác định tình trạng miễn dịch trâu, bò khỏe ổ dịch cũ phương pháp ELISA (Enzym Linked Immunosorbent Assay) 34 2.3.4 Phương pháp xử lý số liệu 35 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 36 3.1 Đặc điểm dịch tễ học bệnh tụ huyết trùng trâu bò Cao Bằng 36 3.1.1 Tình hình bệnh tụ huyết trùng trâu, bò, lợn địa bàn tỉnh Cao Bằng từ năm 2008 - 2011 36 3.1.2 Tình hình mắc bệnh tụ huyết trùng đàn trâu bò Cao Bằng từ năm 2008 đến năm 2011 38 3.1.3 Tần suất dịch bệnh tụ huyết trùng trâu, bò huyện từ năm 2008 - 2011 39 3.1.4 Kết điều tra trâu, bò ốm chết bệnh tụ huyết trùng theo mùa vụ Cao Bằng 41 3.2 Triệu chứng, bệnh tích bệnh tụ huyết trùng trâu, bò địa bàn tỉnh Cao Bằng 44 3.2.1 Kết phân lập vi khuẩn Pasteurella từ dịch ngoáy mũi gia súc khoẻ Cao Bằng 46 85 vi 3.2.2 Tỷ lệ mang trùng Pasteurella trâu, bò khỏe theo tính biệt địa bàn tỉnh Cao Bằng 48 3.2.3 Tỷ lệ mang trùng Pasteurella trâu, bò khỏe theo theo lứa tuổi địa bàn tỉnh Cao Bằng 49 3.2.4 Kết phân lập vi khuẩn Pasteurella từ bệnh phẩm gia súc nghi mắc bệnh tụ huyết trùng Cao Bằng 50 3.2.5 Kết giám định số đặc tính sinh vật - hoá học chủng vi khuẩn Pasteurella phân lập 51 3.2.6 Xác định serotype kháng nguyên chủng P multcida phân lập 52 3.2.7 Xác định độc lực chủng P multocida phân lập 53 3.2.8 Kết kiểm tra tính mẫn cảm vi khuẩn P multocida phân lập với số loại kháng sinh hóa dược 55 3.3 Kiểm tra an toàn hai loại vắc xin chuột thí nghiệm 57 3.4 Xác định tình trạng miễn dịch chủ động tự nhiên bệnh tụ huyết trùng trâu, bò ổ dịch cũ 58 3.5 Đánh giá đáp ứng miễn dịch trâu, bò sau tiêm vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng tháng; tháng; tháng tháng 60 3.6 Lựa chọn vắc xin đề xuất biện pháp khống chế bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Cao Bằng 66 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 67 Kết luận 67 Đề nghị 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO 70 I Tài Liệu tham khảo nước 70 II Tài liệu tham khảo nước 74 86 vii DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Kết điều tra tình hình bệnh tụ huyết trùng gia súc Cao Bằng từ năm 2008 - 2011 36 Bảng 3.2 Tình hình mắc bệnh tụ huyết trùng đàn trâu bò Cao Bằng từ năm 2008 đến năm 2011 38 Bảng 3.3 Tần xuất xuất dịch tụ huyết trùng trâu bò Cao Bằng 40 Bảng 3.4 Kết xác định tỷ lệ trâu bò mắc bệnh, chết bệnh tụ huyết trùng theo mùa vụ Cao Bằng 41 Bảng 3.5 Kết theo dõi triệu chứng lâm sàng trâu, bò mắc bệnh 45 Bảng 3.6 Kết phân lập vi khuẩn Pasteurella multocida từ dịch ngoáy mũi trâu bò khoẻ 46 Bảng 3.7 Tỷ lệ mang trùng Pasteurella trâu, bò khỏe theo tính biệt địa bàn tỉnh Cao Bằng 48 Bảng 3.8 Tỷ lệ mang trùng Pasteurella trâu, bò khỏe theo tuổi địa bàn tỉnh Cao Bằng 49 Bảng 3.9 Kết phân lập Pasteurella từ bệnh phẩm gia súc nghi mắc bệnh tụ huyết trùng 50 Bảng 3.10 Kết giám định số đặc tính sinh vật, hoá học vi khuẩn Pasteurella phân lập từ dịch ngoáy mũi 51 Bảng 3.11 Kết giám định số đặc tính sinh vật, hoá học vi khuẩn Pasteurella phân lập từ bệnh phẩm 51 Bảng 3.12 Kết xác định serotype kháng nguyên chủng P multocida phân lập 52 Bảng 3.13 Kết thử độc lực chủng P multocida phân lập từ dịch ngoáy mũi 53 87 viii Bảng 3.14 Kết thử độc lực chủng P multocida phân lập từ bệnh phẩm 53 Bảng 3.15 Kết thử tính mẫn cảm với kháng sinh chủng P multocida phân lập từ dịch ngoáy mũi 55 Bảng 3.16 Kết thử tính mẫn cảm với kháng sinh chủng P multocida phân lập từ bệnh phẩm 56 Bảng 3.17 Kết kiểm tra an toàn hiệu lực loại vắc xin sử dụng 57 Bảng 3.18 Kết xác định hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò tiêm vắc xin tụ huyết trùng sau tháng 59 Bảng 3.19 Kết xác định hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò tiêm vắc xin tụ huyết trùng sau tháng 61 Bảng 3.20 Kết xác định hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò tiêm vắc xin tụ huyết trùng sau tháng 62 Bảng 3.21 Kết xác định hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò tiêm vắc xin tụ huyết trùng sau tháng 63 Bảng 3.22 Kết xác định hiệu giá kháng thể huyết trâu, bò tiêm vắc xin tụ huyết trùng sau tháng 64 ix 88 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 2.1 Sơ đồ phân lập vi khuẩn Pasteurella multocida 33 Hình 3.1 Hiệu giá kháng thể trâu bò sau 1; 2; tháng tiêm vắc xin tụ huyết trùng 65 65 Qua ba bảng 3.20; 3.21 3.22 thấy hiệu giá kháng thể tất trâu bò xác định qua khoảng thời gian đạt mức >1/32, với tỷ lệ 100% Như kết luận hai loại vắc xin sử dụng có khả bảo hộ tốt đến tháng thứ Hiệu giá kháng thể huyết trâu bò sau tháng, tháng, tháng tháng tiêm vắc xin nhũ dầu keo phèn biểu diễn hình Hình 3.1 Hiệu giá kháng thể trâu bò sau 1; 2; tháng tiêm vắc xin tụ huyết trùng Trên hình cho thấy vắc xin nhũ dầu có đáp ứng miễn dịch mạnh vắc xin keo phèn tháng thứ nhất, sau đáp ứng miễn dịch giảm dần Đối với vắc xin keo phèn, đáp ứng miễn dịch từ tháng đến tháng 4, sau giảm mạnh đến tháng 66 3.6 Lựa chọn vắc xin đề xuất biện pháp khống chế bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Cao Bằng Qua thí nghiệm thực hiện, với kết thu nhận thấy : Cả hai loại vắc xin nhũ dầu keo phèn có khả bảo hộ bệnh tụ huyết trùng cho trâu bò nuôi Cao Bằng Tỷ lệ bảo hộ đến tháng thứ hai loại vắc xin đạt 100% Mức độ bảo hộ đồng qua tháng hai loại vắc xin có khác nhau, vắc xin nhũ dầu có khả bảo hộ bền vắc xin keo phèn Để khống chế bệnh tụ huyết trùng địa bàn tỉnh Cao Bằng cần phải thực đồng nhiều biện pháp : - Nâng cao ý thức người dân vấn đề phòng chống dịch bệnh cho gia súc gia cầm, đặc biệt công tác phòng chống dịch tụ huyết trùng - Tiến hành tiêm đồng loạt vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng cho toàn đàn trâu, bò lợn địa bàn tỉnh - Có thể dùng hai loại vắc xin nhũ hóa dầu keo phèn tiêm cho đàn trâu bò để phòng bệnh tụ huyết trùng 67 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận - Ở Cao Bằng, hàng năm có 0,34% trâu, bò bị mắc bệnh tụ huyết trùng 39,39% số trâu, bò chết so với số ốm Ở lợn có tới 0,65% bị mắc bệnh 24,02% số lợn chết so với số ốm - Trong năm điều tra tình hình dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tỉnh Cao Bằng cho thấy dịch bệnh tụ huyết trùng xảy hầu hết năm, huyện, thị tỉnh Cao Bằng song mức độ bùng phát dịch bệnh theo năm khác nhau, trung bình năm có 11/13 huyện, thị có dịch tụ huyết trùng - Vụ Hè - Thu trâu, bò mắc bệnh chết nhiều vụ Đông - Xuân Ở vụ Hè - Thu trâu, bò mắc bệnh chiếm tỷ lệ 0,26%, tỷ lệ chết 37,85%; Vụ Đông - Xuân tỷ lệ mắc bệnh 0,08%, tỷ lệ chết 46,60% - Trâu, bò khoẻ mạnh có mang vi khuẩn Pasteurella multocida đường hô hấp, tỷ lệ phân lập vi khuẩn Pasteurella gia súc khoẻ mạnh trung bình 3,70% - Tỷ lệ mang trùng Pasteurella gia súc đực 6,67% gia súc 8,33% - Vi khuẩn P multocida gây bệnh tụ huyết trùng phân lập Cao Bằng thuộc type B - Vi khuẩn P multocida phân lập có độc lực mạnh với chuột thí nghiệm, gây chết từ 62,50% đến 87,50% (tính chung 75,0%) chuột thí nghiệm vòng 48h sau công cường độc - Vi khuẩn Pasteurella multocida mẫn cảm mạnh với kháng sinh Amoxicillin/clavulanic acid, Ceftiofur, Enrofloxacin, Norfloxacin Tỷ lệ mẫn cảm mạnh với loại kháng sinh đạt 100% 68 - Thử nghiệm vắc xin chuột thí nghiệm cho thấy hai loại vắc xin keo phèn nhũ dầu an toàn sử dụng có đáp ứng miễn dịch tốt - Trâu bò vùng xảy dịch kiểm tra phát có 7,40% số mẫu huyết có hiệu giá 1/4, 100% có hiệu giá 1/2 - Trâu bò tiêm hai loại vắc xin keo phèn nhũ dầu có khả bảo hộ tốt bệnh tụ huyết trùng Hiệu giá cao tiêm hai loại vắc xin mức 1/128 - Kháng thể tồn trâu bò tiêm hai loại vắc xin đến tháng thứ khả miễn dịch bệnh tụ huyết trùng, nhiên từ tháng thứ tư, trâu bò tiêm vắc xin nhũ dầu có hàm lượng kháng thể cao trâu bò tiêm vắc xin keo phèn Đề nghị Để hạn chế tiến tới khống chế bệnh tụ huyết trùng cho đàn trâu, bò có đề nghị sau: - Áp dụng kết nghiên cứu đề tài tỉnh Cao Bằng để phòng điều trị bệnh tụ huyết trùng đạt hiệu cao, tăng thu nhập cho người chăn nuôi - Định kỳ tiêm hai loại vắc xin keo phèn nhũ dầu để tiêm phòng cho toàn đàn trâu, bò lợn địa tỉnh Cao Bằng lần/ năm với liều 2ml/con - Cần tiếp tục nghiên cứu bệnh tụ huyết trùng tỉnh miền núi phía Bắc tượng mang trùng gia súc khoẻ để có đủ sở xây dựng chương trình phòng chống bệnh thích hợp - Thường xuyên mở lớp tập huấn nâng cao trình độ chuyên môn cho đội ngũ cán chăn nuôi thú y thôn 69 KÝ HIỆU CHỮ VIẾT TẮT TRONG LUẬN VĂN BHI: Brain Heart Infusion ĐC: Đối chứng TN: Thí nghiệm LD50: Lethal Dose 50 - Liều gây chết 50% P multocida: Pasteurella multocida PCR: Polymerase Chain Reaction Cs: Cộng B-HA: Bò Hòa An T-QU: Trâu Quảng Uyên T-G : Chủng vi khuẩn phân lập từ gan trâu T-T : Chủng vi khuẩn phân lập từ tủy xương trâu T-P : Chủng vi khuẩn phân lập từ phổi trâu B-T : Chủng vi khuẩn phân lập từ tủy xương bò 70 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài Liệu tham khảo nước Nguyễn Xuân Bình (1996), Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng gia cầm biện pháp phòng trị thích hợp, Luận án Phó tiến sỹ nông nghiệp, Viện Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp Việt Nam Đặng Xuân Bình, Nguyễn Thị Kim Dung, Nguyễn Thị Hà, Lê Bá Hiệp (2010), Khảo sát lưu hành vi khuẩn Pasteurella multocida gia súc số tỉnh miền núi phía bắc, tạp chí khoa học kỹ thuật thú y - tập XVII số 2-2010 - Tr 53-57 Bùi Văn Dũng (2000), Nghiên cứu tình hình bệnh tụ huyết trùng vi khuẩn Pasteurella phân lập từ dịch ngoáy mũi trâu, bò khoẻ mạnh tỉnh Lai Châu, Luận văn thạc sỹ Nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội Phan Đình Đỗ Trịnh Văn Thịnh (1958), Bệnh truyền nhiễm gia súc, bệnh thường có Việt Nam, Nxb Nông thôn, Hà Nội Bùi Xuân Đồng (2000), “Công tác phòng chống bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Hải Phòng”, KHKT Thú y, (1), Hà Nội, tr 91-94 Đỗ Văn Được (2003), “Nghiên cứu số nguyên nhân, đặc điểm bệnh lý, triệu chứng bệnh viêm phổi trâu Lạng Sơn biện pháp phòng chống”, Luận án Tiến sỹ Nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội Phùng Duy Hồng Hà (1990), “Nghiên cứu sản xuất vắc xin tụ huyết trùng gia cầm dạng nhũ dầu”, Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Nông nghiệp, 4, tr 168-172 Trần Xuân Hạnh Tô Thị Phấn (2007), “Một số đặc tính vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập từ trâu, bò, lợn”, Khoa học Kỹ thuật Thú y, 14 (4), tr 30-41 71 Cao Văn Hồng (2002), Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trâu, bò, lợn Đắc Lắc số biện pháp phòng trị, Luận án Tiến sỹ Nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội 10 Trần Ngọc Hùng (2001), Tình hình bệnh tụ huyết trùng chim họ trĩ (Phasianidae) - nuôi vườn thú Hà Nội Xác định biện pháp phòng trị tại, Luận án thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp, Hà Nội 11 Bùi Quý Huy (1998), “Một số đặc điểm bệnh tụ huyết trùng Việt Nam năm vừa qua”, KHKT Thú y, 5(1), Hà Nội, tr 9-94 12 Hoàng Đăng Huyến (2004), Nghiên cứu đặc điểm dịch tễ, yếu tố ảnh hưởng đến bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Bắc Giang đề xuất số biện pháp phòng chống, Luận án tiến sỹ Nông nghiệp, Viện Thú y, Hà Nội 13 Đặng Thế Huynh (1978), Truyền nhiễm học đại cương, Giáo trình bệnh truyền nhiễm gia súc, Nxb Nông nghiệp, tr 5-60 14 Đinh Duy Kháng, Lê Văn Phan, Phan Thanh Phượng, Trương Văn Dung, Hoàng Xuân Nghinh (2000), “Ứng dụng kỹ thuật PCR để định type vi khuẩn Pasteurella multocida miền Trung Việt Nam”, Tạp chí KHKT Thú y, số 15 Phạm Sỹ Lăng Phan Địch Lân (2002), Bệnh thường gặp bò sữa Việt Nam kỹ thuật phòng trị( tập 1), NXB Nông nghiệp Hà Nội, tr 18-27 16 Phạm Sỹ Lăng, Hoàng Văn Năm, Nguyễn Hữu Nam (2008), Một số bệnh quan trọng gây hại cho trâu bò, NXB Nông nghiệp Hà Nội, tr 80-92 17 Phạm Sỹ Lăng, Lê Thị Tài (1994), Thuốc điều trị vắc xin sử dụng thú y, Nxb Hà Nội, tr 181 - 203 18 Dương Thế Long (1995), Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ vi khuẩn học bệnh tụ huyết trùng trâu, bò Sơn La để xác định biện pháp phòng 72 trị thích hợp, Luận án Phó tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp, Viện Khoa học Nông nghiệp Việt Nam, Hà Nội 19 Chu Văn Mẫn (2001), Ứng dụng tin học sinh học (Sử dụng Microsoft Excel nghiên cứu sinh học), Nxb Đại học Quốc gia Hà Nội 20 Nguyễn Văn Minh (2005), Nghiên cứu số đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng xác định tỷ lệ mang trùng Pasteurella đàn trâu, bò tỉnh Hà Tây, Luận văn thạc sỹ Nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội 21 Nguyễn Ngã (1996), Đặc tính sinh học tương đồng kháng nguyên vi khuẩn Pasteurella multocida gây bệnh trâu, bò miền trung với chủng Iran chế tạo vắc xin, Luận án Phó tiến sỹ Khoa học Nông nghiệp, Hà Nội 22 Nguyễn Xuân Nghinh, Trương Văn Dung, Hoàng Đăng Huyến, Tô Long Thành (2004), “Khả đáp ứng miễn dịch số vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng trâu, bò lưu hành nước ta”, Tạp chí Khoa học Kỹ thuật Thú y, số 23 Đỗ Trung Phấn (1979), Miễn dịch trung gian tế bào, Nxb y học Hà Nội 24 Hoàng Đạo Phấn (1996), “Nghiên cứu tác động thực khuẩn thể đặc hiệu Pasteurella multocida phân lập từ gia súc, gia cầm”, Khoa học Kỹ thuật Thú y, (1), Hà Nội, tr 37-40 25 Nguyễn Vĩnh Phước, Hà Đình Chú, Đinh Thế Hanh (1978), Bệnh truyền nhiễm gia súc, Nxb Nông thôn, Hà Nội, tr 223-231 26 Nguyễn Vĩnh Phước, Lê Thanh Tòng, Lê Anh Phụng, Nguyễn Văn Vĩnh, Mai Hồng Phước (1986a), “Phân lập định type huyết học vi khuẩn tụ huyết trùng trâu, bò tỉnh phía Nam”, Kết hoạt động Khoa học Kỹ thuật thú y 1975 - 1985, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, tr 105-125 73 27 Nguyễn Vĩnh Phước, Lê Thanh Tòng, Lê Anh Phụng, Nguyễn Văn Vĩnh, Mai Hồng Phước (1986b), “Phân lập định type huyết học vi khuẩn tụ huyết trùng lợn tỉnh phía Nam”, Kết hoạt động Khoa học Kỹ thuật Thú y 1975 - 1985, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, tr 126-128 28 Phan Thanh Phượng (1986 - 1990), Vắc xin nhũ hoá tụ huyết trùng trâu, bò sản xuất công nghệ, Báo cáo tổng kết công trình 02B giai đoạn 1986 - 1990, tr 126-128 29 Phan Thanh Phượng (1994), Ba bệnh đỏ lợn, Nxb Nông nghiệp, Hà Nội, tr 59-91 30 Quy trình kỹ thuật kiểm nghiệm vắc xin dùng thú y (1994) NXB Nông nghiệp Hà Nội 31 Đoàn Thị Băng Tâm (1987), Bệnh động vật nuôi, Nxb Khoa học Kỹ thuật, Hà Nội, 1, tr 51 - 79 32 Lê Văn Tạo cs (1998), Khả gây bệnh thực nghiệm chủng Pasteurella sp phân lập từ dê nuôi tỉnh miền núi phía bắc, tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, số - 1998 33 Nguyễn Như Thanh (2001), Dịch tễ học thú y, NXB Nông nghiệp, Hà Nội 34 Nguyễn Thiên Thu (1996), Nghiên cứu số đặc tính vi sinh vật kháng nguyên vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập từ trâu, bò mang trùng khu vực miền Trung Việt Nam, Luận án Phó tiến sỹ khoa học Nông nghiệp, Viện Thú y Quốc gia, Hà Nội 35 Đỗ Ngọc Thúy, Âu Xuân Tuấn, Cù Hữu Phú, Lê Xuân Tạo (2007), “Ứng dụng kỹ thuật PCR để định Type giáp mô chủng vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập từ vật nuôi”, Tạp chí KHKT thú y, tập XIV, số 74 36 Nguyễn Đình Trọng (2002), Phân lập, xác định đặc tinh sinh học vi khuẩn Pasteurella sp trâu, bò nuôi tỉnh Bắc Kạn, lựa chọn vắc xin phòng bệnh thích hợp, Luận án Tiến sỹ khoa học Nông Nghiệp, Hà nội 37 Đỗ Quốc Tuấn (2008), Nghiên cứu bệnh tụ huyết trùng lợn số tỉnh miền núi phía Bắc Việt Nam, Luận án Tiến sỹ Nông nghiệp, Viện Thú y, Hà Nội II Tài liệu tham khảo nước 38 Bain R V S., De Awis M C L., Carter G R and Guppa B K (1982), “Haemorrhagic septicaemia”, Animal Production and Health, Paper No 33, FAO, Rome 39 Bahnemann H G (1990), Vắc xin, No 8, pp 299-303 40 Bauer A W., Kirby W M M., Sherris J C., Turck M (1966), Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disk method Am J Clin Pathol; Vol45, pp 493-496 41 Bergey’s (1994), Manual of determinative Bacteriology, 9th Edition, by the Williams and Wilkings company 42 Carter G R (1952), “Type specific capsular antigens of Pasteurella multocida”, Canadian Journal of Medican Science, 30, pp 48-53 43 Carter G R (1955), “Studies on Pasteurella multocida I A Haemagglutination test for idetification of Serological types”, Americal Journal Veterinary Research, 16 44 Carter G R (1959), “Studies on Pasteurella multocida VI, a serological types from species other cattle and swine”, American Journal of Veterinary, Reseach 21, pp 173-175 45 Carter G R (1961), “A new serological type of Pasteurella multocida from central Africa”, Veterinary Record, 73, pp 1052 75 46 Carter G R (1967), “Pasteurellosis: Pasteurella multocida and Pasteurella haemolytica”, In Advences in Veterinary Science, 11, 331 Academic press New York 47 Carter G R (1984), Pasteurella, Yersinia and Francisella page: 111 - 121, in Diagnostic procedures in Veterinary Bacteriology and Mycology 4th ed (Carter G R ed) Charles C Thomas Publisher Springfield 48 De Alwis M C L (1982), “Pasteurella multocida serotype 6:B infection from an elephant”, Sri Lanka Veterinary Journal, 18, pp 28 49 De Alwis M C L (1984), Haemorrhagic septicaemia in cattle and buffaloes, Rev sci tech Off int Epiz., 3, pp 707-730 50 De Alwis M C L (1992a), “A review, Pasteurellosis in production Animal”, ACIAR proceedings, No 43, pp 11-20 51 De Alwis M C L and Sumanadasa MA (1982), “Naturally acquired immunity to haemorrhagic septicaemia among cattle and buffaloes in Sri Lanka”, Tropical Animal Health and Production, 14, pp 27-28 52 Donachie W (2000), Pasteurellosis Diseases of the respiratory sytem Diseases of sheep, Third Edition by W.B Martin and I.D Aitken Blackwell Science Ltd, pp 191-198 53 Egerton J R (2005), Gene-based vắc xin development for improving animal production in developing country, Application of gene-based technologies for improving animal production and health in developing countries, Edited by Harinder P S: makkar and Gerrit J Viljoen, pp 199210 54 FAO (1991), Proceeding of the FAO/APHHCA workshop on haemorrhagic septicaemia, February, Kandy, Sry LanKa 55 Gupta B K (1980) Int sym On dis Of Liv., 13, pp 45-53 76 56 Heddleston K L (1966), “Immunologic and serologic comparison in the poultry with analysis of biochemical activity in Pasteurella multocida strains during three years”, Cornell Veterinary, V52, No2, pp 235-241 57 Heddleston K L., Roberts P A and Ritchie A E (1966), “Immunizing and toxin properties of particulate antigens from two immunogenic types of Pasteurella multocida of A vian origin”, Journal of Immulogy, 96, pp 124-133 58 Heddleston K L., Gallagher J E and Roberts P A (1972), “Fowl cholera: Gel diffusion precision test for serotyping Pasteurella multocida avian species”, Avian disease, 16, pp 925-936 59 Horadagoda N U., Hodgson J C., Monon G M., Eckersall P D (2001), “Role of endotoxin in the pathogenesis of heamorrhagic septicaemia in the buffalo”, Micro Pathog 33 (3), pp 171-179 60 Hunt M L., Adler B., Townsend K M (2000), “The molecular biology of Pasteurella multocida”, Vet Microbiology, 72(1), pp 3-25 61 Lane E P, Kock N D, Hill F W G and K Mohan (1992), “An outbreak of haemorrhagic septicaemia (septicaemic pasteurellosis) in cattle in Zimbabwe”, Tropical Animal Health and Production, Volume 24, Number / June, 1992, pp 97-102 62 Lignères J M (1900), Contribution L’étude et la classification des septicaemia haemorrhagique des Pasteurella Ann Inst Pasteur (Paris), 15:734 63 Mohammad R H H., Masood J., Masood R.S.A, Arya R and Hamid J (2006), Occurrence of Pasteurella multocia in the nasopharynx of healthy buffaloses and their immunity statutus, Bull Vet Inst Pulawy, vol 50, p.435438 77 64 Mustafa A A., Ghalib H W and Shigidi M T (1978), “Carrier rate of Pasteurella multocida in cattle associated with an outbreak of haemorrhagic septicaemia in Suda”, British Veterinary Journal, 134, p 375-378 65 Nakai T and Kume K (1987), “Purification of three fragments of the dermonecrotic toxin from Pasteurella multocida”, Research in Veterinary, Science 42, pp 232-237 66 Namioka S (1978), “Pasteurella multocida: Biochemical characteristic and serotype”, In: Methods in microbiology, vol.10, Academic Press New York, 11, pp 274 - 292 67 Namioka S and Murata M (1961a), “Serological studies on Pasteurella multocida I A simplified method for capsule typing of the organism”, Cornell Veterinarian, Vol 51, pp 498-507 68 Namioka S and Murata M (1961b), “Serological studies on Pasteurella multocida II Charaeteristic of somatic “O” antigen of the organism”, Cornell Veterinarian, Vol 51, pp 507-512 69 Namioka S and Murata M (1961c), “Serological studies on Pasteurella multocida III: '0' antigen analysis of cultures isolated from various animals”, Cornell Veterinarian, Vol 51, pp 522-528 70 Namioka S and Murata M (1964), “Serological studies on Pasteurella multocida V: Some epizootiological findings resulting from '0' antigen analysis”, Cornell Veterinarian, Vol 54, pp 520-534 71 Natalia L., Patten B and Syansudin A (1992), “Evaluation of bovine antibody responses to haemorrhagic septicaemia vắc xin using ELISA and PMPT Pasteurellosis in production animal international workshop”, Sponsores by ACIAR proceeding, No 43, Indonesia, 10 - 13 August, pp 219-223 78 72 OIE Manual (2008), Principles of Veterinary Vắc xin Production, Chapter 1.1.8 73 Price G H and Smith J E (1966), “Antigenic studies on Pasteurella multocida using immunodiffusion techniques I Identification and nomenclature of the soluble antigens of a bovine Haemorrhagic septicaemia strain”, Journal of comparative Pathology, 76, pp 303-314 74 Quinn P J., Carter M E., Markey B K., Carter G R (1994), Pasteurella species In: Quinn, P.J; Carter, M.E; Markey, B.K; Carter, G.R (Eds.), Clinical Veterinary Microbiology Mosby, Edinburgh, pp.254-259 75 Ramdani, Dawkins H J., Johnson R B., Spencer T L., Adler B (1990), “Pasteurella multocida infections in mice with refence to haemorrhagic septicaemia in cattle and buffalo”, Immunol Cell Biol 68(1), pp 57-61 76 Reed L.J., Muench H (1938) "A simple method of estimating fifty percent endpoints", The American Journal of Hygiene 27: 493-497 77 Rimier R B and Rhoades I R (1987), “Serogroup F, a new capsule serogroup of Pasteurella multocida”, Journal of Clinical Microbiology, 25, pp 615-618 78 Robers R S (1947), “An immunologycal study of Pasteurella septicaemia”, Journal of comparative pathology, 57 79 Rosenbush C T and Merchant I A (1939), “A study of the Haemorrhagic septicaemia Pasteurella”, Journal of Bacteriology, 37, pp.69 80 Seleim R S (2005), “Review: Major pathogenic components of Pasteurella multocida and Mannhemia (Pasterella) haemolytica isolated from animal origin”, Bacteriology Department, Animal Health Research Institute, Nadi El-Seed St Dokki, 12311 Cairo, Egypt 79 81 Smith H (1990), “Pathogenicity and the microbe in vivo”, Journal of General Microbiology, Vol136, pp.371 - 383 82 Van Oirschot J T (1993), “Efficacy of porcine vắc xins”, Keynot lectures, pp.15-19 83 Yeo B K and Mokhtar (1992), “Haemorhagic septicaemia of buffalo in sabah, Malaysia, Pasteurellosis proceedings No43, pp.112-115 in Production Animal”, ACIAR [...]... quan của thời tiết khí hậu của Cao Bằng đến tỷ lệ mắc bệnh tụ huyết trùng ở trâu, bò 2.1.2 Phân lập và xác định đặc tính sinh vật hóa học của vi khuẩn Pasteurella multocida trong bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tại Cao Bằng - Phân lập và xác định đặc tính sinh vật hóa học của vi khuẩn P multocida từ dịch ngoáy mũi trâu, bò khỏe trong ổ dịch cũ - Phân lập và xác định đặc tính sinh vật hóa học của vi khuẩn. .. của vi khuẩn Pasteurella multocida gây bệnh tụ huyết trùng trâu, bò tại Cao Bằng và lựa chọn vắc xin phòng bệnh 2 Mục tiêu nghiên cứu - Xác định đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trâu bò tại các huyện, thị xã thuộc tỉnh Cao Bằng - Khảo sát sự lưu hành vi khuẩn Pasteurella multocida ở trâu, bò khỏe và trâu, bò nghi mắc bệnh tụ huyết trùng - Giám định đặc tính sinh vật hóa học, yếu tố gây bệnh và serotype... 2.1.1 Nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trâu bò tại Cao Bằng - Tình hình bệnh tụ huyết trùng tại Cao Bằng từ năm 2008 - 2011 - Tần xuất xuất hiện dịch bệnh tụ huyết trùng tại Cao Bằng từ năm 2008 - 2011 - Tỷ lệ trâu, bò mắc bệnh và chết do bệnh tụ huyết trùng ở loài gia súc, mùa vụ, lứa tuổi, vùng địa lý - Triệu chứng, bệnh tích đặc trưng ở trâu, bò mắc bệnh tụ huyết trùng - Nghiên... đặc tính sinh vật hoá học của vi khuẩn P multocida, phương pháp chẩn đoán, phân lập và chế tạo vắc xin phòng bệnh Trần Xuân Hạnh và Tô Thị Phấn (2007)[8] tiến hành nghiên cứu một số đặc tính của vi khuẩn P multocida phân lập từ trâu, bò, lợn Phan Thanh Phượng (1986 - 1990)[28] đã nghiên cứu, chế tạo và sử dụng vắc xin nhũ hoá bằng công nghệ lên men sục khí để phòng chống bệnh tụ huyết trùng trâu, bò, ... vi khuẩn P multocida từ các mẫu bệnh phẩm của trâu, bò mắc bệnh - Xác định serotype vi khuẩn P multocida phân lập được - Xác định độc lực của các chủng P multocida phân lập được - Thử tính mẫn cảm với kháng sinh và hoá dược của vi khuẩn P multocida phân lập được được - Đánh giá mức độ tương đồng giữa kháng nguyên trong vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng trâu, bò và kháng nguyên vi khuẩn P multocida ở... tụ huyết trùng ở trâu, bò Cao Bằng và trên địa bàn các tỉnh miền núi phía Bắc * Những điểm mới của đề tài - Bổ sung một số đặc điểm dịch tễ về sự lưu hành của vi khuẩn Pasteurella ở trâu, bò khỏe; xây dựng bản đồ dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trên địa bàn tỉnh Cao Bằng - Phân lập vi khuẩn Pasteurella multocida từ những trâu, bò mắc bệnh tụ huyết trùng, so sánh tự tương đồng về kháng nguyên với trâu bò. .. mang trùng - Xác định tình trạng miễn dịch chủ động tự nhiên đối với kháng nguyên vi khuẩn Pasteurella multocida của trâu, bò trong ổ dịch - Đánh giá sự an toàn và khả năng đáp ứng miễn dịch của trâu, bò sau khi tiêm một số loại vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng trâu, bò đang lưu hành tại Vi t Nam 4 Đối tượng và địa điểm nghiên cứu - Đối tượng nghiên cứu: Trâu, bò ở mọi lứa tuổi, vi khuẩn Pasteurella multocida. .. của vi khuẩn Pasteurella multocida phân lập được - Đánh giá mức độ tương đồng giữa kháng nguyên trong vắc xin phòng bệnh tụ huyết trùng trâu, bò và kháng nguyên vi khuẩn Pasteurella phân lập được ở trên thực địa 3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài * Ý nghĩa khoa học: - Bổ sung tư liệu về đặc điểm dịch tễ bệnh tụ huyết trùng trâu, bò - Bổ sung tư liệu về kết quả phân lập, giám định đặc tính sinh. .. nghiên cứu một số đặc điểm dịch tễ bệnh THT và xác định 7 tỷ lệ mang trùng Pasteurella ở đàn trâu, bò tỉnh Hà Tây Đỗ Ngọc Thúy và cs (2007) [35] đã ứng dụng kỹ thuật PCR để xác định Type các chủng vi khuẩn P multocida phân lập từ vật nuôi 1.2 Dịch tễ học bệnh tụ huyết trùng 1.2.1 Nguồn bệnh và phương thức lây lan Nguồn lây bệnh tụ huyết trùng là những trâu, bò, lợn và gia cầm bị bệnh và mang trùng Trong... [50] Vi khuẩn pasteurella gây bệnh cho nhiều loài gia súc nên tên của chúng được gắn với tên của loài vật mà chúng gây bệnh: Pasteurella suiseptica gây bệnh ở lợn Pasteurella boviseptica gây bệnh ở bò Pasteurella oviseptica gây bệnh ở dê, cừu Pasteurella aviseptica gây bệnh ở gà… Đến năm 1939, Rosenbush và Merchant [79] đã đề nghị đặt tên cho vi khuẩn này là Pasteurella multocida, để chỉ khả năng gây bệnh