Định lượng đồng thời theophylin, ephedrin hydroclorid, phenobarbital trong thuốc hỗn hợp trị hen suyễn bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

Trong các Dược điển hiện có ở Việt Nam và một số tài liệu tham khảo khác [2][8][13][14] [16][18] 'i- chỉ có chuyên luận kiểm nghiêm các dạng bào chế đơn thành phần của các hoạt chất trê

Người hướng dẫn: TS THÁI PHAN QUỲNH NHƯ

TS THÁI DUY THÌN

Nơi thực hiện: Phòng Hoá Lý I - Viện Kiểm nghiệm

Thời gian thực hiện: 2/2000 đến 5/2002

Hà Nội 5-2002

M T H t v p ) ,

' \ K l ế í ỉ ỳ /

Khoá luận này được thực hiện và hoàn thành tại phòng Hoá Lý I - Viện Kiểm nghiệm - Bộ Y tế và Bộ môn Hoá Dược - Trường Đại học Dược Hà Nội Trong quá trình thực hiện khoá luận tốt nghiệp, tôi đã nhận được sự hướng dẫn tận tình của các thầy cô hướng dẫn, các giảng viên, cán bộ của bộ môn Hoá Dược và các cán bộ của phồng Hoá Lý I - Viện Kiểm nghiệm - Bộ Y tế.

Trước tiên tôi xin chân thành cảm ơn sự hướng dẫn tận tình của

TS Thái Phan Quỳnh Như - Trưởng phòng Hoá Lý I - Viện Kiểm nghiệm và

TS Thái Duy Thìn - Bộ môn Hoá Dược - Trường Đại học Dược Hà Nội đã giúp tôi cố những tài liệu và kỹ năng cần thiết trong quá trình thực hiện khoá luận Đồng thời tôi cũng xin cảm ơn sự giúp đỡ của các thầy cô, các kỹ thuật viên khác trong bộ môn Hoá Dược và các cán bộ phòng Hoá Lý I - Viện Kiểm nghiệm đã giúp tôi hoàn thành khoá luận của mình trong thời gian ngắn nhất.

Tôi cũng xin chân thành cảm ơn Thư viện trường Đại học Dược Hà Nội

đã cung cấp những tài liệu liên quan, phòng Thí nghiệm trung tâm trường Đại học Dược đã giúp xử lý một số mẫu mà điều kiện máy mốc ở phòng thí nghiệm

Bộ môn Hoá Dược chưa cho phép thực hiện được.

SỤ Trần Thê'Phương

MỤC LỤC

Trang

ĐẶT VẤN ĐỀ !

PHẦN 1 : TỔNG QUAN 2

1.1 Theophylin 3

1.1.1 Đại cương 3

1.1.2 Các phương pháp định lượng 3

1.1.3 Tác dụng dược lý 3

1.2 Phénobarbital 4

1.2.1 Đại cương 4

1.2.2 Các phương pháp định lượng 4

1.2.3 Tác dụng dược lý 5

1.3Ephedrin 5

1.3.1 Đại cương 5

1.3.2 Các phương pháp định lượng 5

1.3.4 Phương pháp định lượng 3 thành phần trong hỗn hợp 5

1.4 Kỹ thuật sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) 6

1.4.1 Khái quát phương pháp HPLC 6

1.4.2 Các đại lượng đặc trưng trong kỹ thuật HPLC 7

1.4.3 Hệ thống HPLC 10

1.4.4 Pha tĩnh trong kỹ thuật HPLC 11

1.4.5 Pha động trong kỹ thuật HPLC 13

1.4.6 Cách đánh giá pic 15

1.4.7 Cách tính kết quct 16

PHẦN 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN c ú ư 17

2.1 Đối tượng nghiên cứu 17

2.1.1 Viên nén Tiphasmin 17

2.1.2 Viên bao đường Etadasmin 17

2.1.3 Viên nén Antasma 17

2.1.4 Viên nén Asmin 17

2.2 Phương pháp nghiên cứu 18

PHẦN 3: THỰC NGHIỆM VÀ KÊT QUẢ 19

3.1 Thiết bị, hoá chất, dung môi 19

3.1.1 Thiết bị 19

3.1.2 Hoá chất, dung môi 19

3.2 Xây dựng chương trình sắc ký 19

3.2.1 Khảo sát lựa chọn bước sóng 19

3.2.2 Lựa chọn dụng môi pha động 21

3.2.3 Khảo sát tốc độ dòng 21

3.2.4 Chương trình sắc ký 22

3.3 Khảo sát sự phụ thuộc tuyến tính giữa chất khảo sát và diện tích pic tương ứng thu được 23

3.4 Khảo sát độ lặp lại 26

3.5 Khảo sát độ đúng 30

3.6 ứng dụng chương trình để định lượng một số chế phẩm 31

3.6.1 Định lượng viên nén Tiphasmyl 31

3.6.2 Định lượng viên nén Asmin 33

3.6.3 Định lượng viên nén Antasma 33

3.7 Bàn luận 33

PHẦN 4: KẾT LUẬN 34

TÀI LIỆU THAM KHẢO 35

ĐẶT VÂN ĐỂ

Với sự phát triển nhanh chóng các thành tựu khoa học của ngành Dược các thuốc nhiều thành phần có tác dụng dược lý phối hợp ngày càng được sản

xuất, lưu hành và sử dụng rộng rãi trên thế giới, đặc biệt là ở nước ta, kể cả

thuốc nội và nhập ngoại Ví dụ các thuốc hỗn hợp vitamin, hỗn hợp hạ nhiệt giảm đau, chống dị ứng, chữa hen Nghiên cứu các phương pháp để kiểm tra chất lượng các thuốc này đang là vấn đề thu hút sự cố gắng của ngành kiểm nghiệm

Hiện nay trên thị trường có nhiều loại thuốc chữa hen có 3 thành phần[l]: Theophylin, Ephedrin hydroclorid, Phénobarbital như biệt dượcEtadasmyl, Tiphasmyl ( Công ty Dược vật tư y tế Tiền Giang ); Asmin (Xí nghiệp Dược phẩm trung ương 25 ); Dophasmin ( Xí nghiệp Dược phẩm trung ương II ); Asmalin ( Xí nghiệp Dược phẩm trung ương 5 ); Antasma ( Công ty vật tư y tế Bến Tre ); Tedralas ( Labomed - Pháp ) Trong các Dược điển hiện

có ở Việt Nam và một số tài liệu tham khảo khác [2][8][13][14] [16][18] 'i-

chỉ có chuyên luận kiểm nghiêm các dạng bào chế đơn thành phần của các hoạt chất trên và phương pháp định lượng có thể là: đo mật độ quang, định lượng trong môi trường khan, phương pháp chuẩn độ acid - base, phương pháp

so mầu Như vậy muốn định lượng các thành phần trong hỗn hợp thì phải thực hiện việc chiết tách phức tạp Hơn nữa, sự chênh lệch về lượng giữa các thành phần rất lớn trong đó lượng Phénobarbital rất nhỏ làm cho kết quả khó chính xác phụ thuộc nhiều vào người thực hiện, có thể không định lượng được bằng các phương pháp cổ điển

Để khắc phục tình trạng này, chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu đề tài

“Định lượng đồng thòi Theophylin, Ephedrin hydroclorid, Phénobarbital trong thuốc hỗn hợp trị hen suyễn bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao” với hai mục tiêu:

Khao sát và lựa chọn các điều kiện để xây dựng quy trình định lượng đồng thời Theophylin, Ephedrin hydroclorid, Phénobarbital trong hỗn hợp bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao ( HPLC ) với điều kiện sắc ký lỏng pha đảo, đẳng dòng, detector uv.

- Áp dụng phương pháp trên để định lượng một số chế phẩm có thành phần hoạt chất tương tự như trên đang lưu hành trên thị trường

PHẦN 1

TỔNG QUAN1.1 THEOPHYLIN

1.1.1 Đại cương [8][14]:

• Cổng thức:

• Tên khoa hoc: 1,3 - dimethyl xanthin

• Tính chất: tinh thể hình kim hay bột trắng không mùi, vị đắng, nóng chảy ở

270 - 2740C, khó tan trong nước, ethanol, cloroíorm Dễ tan trong nước nóng, ethanol nóng, trong các acid vô cơ, các dung dịch hydroxyd kim loại kiềm và amoniac Thực tế không tan trong ether

1.1.2 Các phương pháp định lượng:

• Phương pháp chuẩn đồ mối trường khan r 191: hoà chế phẩm vào anhydric acetic, thêm benzen khan và định lượng bằng acid percloric 0,1N vói chỉ thị tím tinh thể cho tới khi xuất hiện màu vàng bền

• Phương pháp chuẩn đỏ acid - base r2ir3iri3115in6in Sl: hoà chế phẩm vào nước, thêm dung dịch bạc nitrat Chuẩn độ bằng dung dịch natri hydroxyd cho tới khi xuất hiện màu xanh với chỉ thị là xanh bromothymol.1.1.3 Tác dụng dược lý [5]: thuộc dẫn chất xanthin, nó có tác dụng kíchthích thân kinh, đặc biệt là trung tâm hô hấp và vận mạch, làm giãn phế quản,giãn động mạch phổi, làm thông khí do tăng tần số, biên độ hô hấp

• Tên khoa hoc: acid 5 - ethyl - 5 - phenyl barbituric.

• Tính chất: tinh thể không màu hoặc bột kết tinh trắng, không mùi Bền vững ngoài không khí Rất khó tan trong nước lạnh và hexan; khó tan trong nước nóng, cloroíorm; tan trong ether; dễ tan trong ethanol 96°, các dung dịch hydroxyd, carbonat kim loại kiềm Nhiệt độ nóng chảy 176°c

1.2.2 Các phương pháp định lượng:

• Phương pháp chuẩn đỏ acid - base:

- Hoà tan chế phẩm vào dimethylíormamid ( DMF ) đã được trung hoàtrước ( CT xanh thymol 1% trong D M F ) Chuẩn độ bằng dung dịch natrihydroxyd trong hỗn hợp methanol : benzen tới khi xuất hiện màu xanh[3]

Hoà tan chế phâm vào pyridin, thêm dung dịch bạc nitrat trong pyridin Chuẩn độ bằng dung dịch Natri hydroxyd trong ethanol cho đến khi có màu xanh với chỉ thị thymolphtalein Song song tiến hành làm mẫu trắng[2][13][15][16][18]

1.2.3 Tác dụng dược lý [5]: Phénobarbital là một barbituric kinh điển có tác

dụng an thần, gây ngủ và chống co giật Nó có tác dụng ức chế vỏ não, vùng dưói đồi, đồi thị nên ức chế cả hai giai đoạn của giấc ngủ Ngoài

ra, nó còn ức chế trung tâm hô hấp và trung tâm tuần hoàn, giảm sức lọc cầu thận

• Tinh chât: tinh thê nhỏ hoặc bôt kết tinh trắng, vi đắng Dễ tan trong nước

cồn Không tan trong ether Nóng chảy ở 216 - 220°c [a]ổ° = -33 -36°

Do phân tử có 2 carbon bất đối nên có 4 đồng phân hoạt quang, 2 hỗn hợp racemic Dạng dược dụng là Ephedrin tả tuyền

1.3.2 Các phương pháp định lượng:

• Đinh lương c r bằng phương pháp đo bac T81: dùng chỉ thị hấp phụ Bromphenol xanh, môi trường acid acetic, chuẩn độ trực tiếp bằng bạc nitrat cho đến khi tủa vón lại và dung dịch có màu tím

• Phương pháp so màu T81: dựa vào phản ứng tạo phức màu với đồng Sulfat

• Đinh lương mỏi trường khan r2 ir3 iri3iri5iri6iri7iri81: hoà tan chế phẩm vào acid acetic băng, làm lạnh Chuẩn độ bằng acid percloric với chỉ thị tím tinh thể cho tới khi có màu xanh lá cây

1.3.4 Phương pháp định lượng 3 thànlr trong hỗn hợp :

chất tan vào pha tĩnh và pha động khi pha động luôn luôn chảy qua cột với một tốc độ nhất định.

Các chất cần phân tách trong dung dịch của hỗn hợp khi được đưa vào cột sẽ được hấp phụ hoặc liên kết vói pha tĩnh tuỳ thuộc vào bản chất của cột

và kiểu sắc ký áp dụng Dung môi pha động được bơm vào cột sắc ký dưới áp suất cao Các chất tan sẽ di chuyển qua cột với tốc độ khác nhau tuỳ thuộc vào cấu trúc và tính chất của mỗi chất Thời gian chất tan bị pha tĩnh lưu giữ được quyết định bởi bản chất sắc ký của pha tĩnh, cấu trúc và tính chất của các chất tan, bản chất và thành phần của pha động dùng để rửa giải chất tan ra khỏi cột Kết quả là các chất được phân tách khỏi nhau Sau khi ra khỏi cột, các chất sẽ được phát hiện bằng detector và được chuyển qua bộ phận xử lý kết quả Kết quả sau khi được xử lý sẽ được đưa ra máy ghi hoặc hiển thị trên màn hình

Tín hiệu phân tích định tính mỗi thành phần trong hỗn hợp là thời gian lưu của chất đó trên cột hay vị trí của pic tương ứng trên sắc ký đồ, còn tín hiệu phân tích định lượng là diện tích pic ( hoặc chiều cao pic ) thu được, phụ thuộc vào nồng độ của chất đó trong dung dịch đem đo HPLC

1.4.2 Các đại lượng đặc trưng trong kỹ thuật HPLC

• Thời sian lưu Ü R -lvà thể tích lưu:

Thời gian lưu là thời gian cần thiết để một chất tan di chuyển từ nơi tiêm mẫu qua cột sắc ký, tới detector và cho pic trên sắc đồ ( tính từ lúc tiêm tới khi xuất hiện đỉnh của pic ) Dựa vào thời gian lưu có thể phát hiện định tính chất đó là chất gì Nếu gọi tR là thời gian lưu của chất tan thì ta có:

*R = *0 + í ’rTrong đó: - t0: thời gian chết hay thòi gian không lưu giữ

- t ’R: thời gian lưu giữ thực của chất tan

Thời gian lưu phụ thuộc vào nhiều yếu tố như bản chất sắc ký của pha tĩnh; bản chất, thành phần, tốc độ của pha động; cấu tạo và bản chất của phân

tử chất tan; pH của pha động, nồng độ chất tạo phức

Tương ứng với thời gian lưu, đại lượng thể tích lưu của một chất là thể tích của pha động chảy qua cột sắc ký trong khoảng thời gian từ lúc bơm mẫu vào cột cho đến khi chất tan được rửa giải ra ở thời điểm có nồng độ cực đại.

bố, nó được tính theo công thức:

Trong đó: c s và CM lần lượt là nồng độ chất tan trong pha tĩnh và pha động

Khi nồng độ chất tan không cao quá thì K là một hằng số chỉ phụ thuộc vào bản chất các pha và chất tan, vào nhiệt độ

• Thừa số dung lương ( k ’ ) :

Đây là một đại lượng quan trọng được dùng để mô tả tốc độ di chuyển của một chất Nó cho ta biết khả năng phân bố của chất tan trong mỗi pha như thế nào Thừa số dung lượng được tính theo công thức:

k ’ =

Trong đó: Qs và QM là lượng chất tan phân bố trong pha tĩnh và pha động

Quan hệ giữa hệ số phân bố và thừa số dung lượng:

v s

k ’ = K s

V M

Trong đó: vs và VM là thể tích pha tĩnh và pha động

Ngoài ra có thể định nghĩa k ’ theo một cách khác:

T -T

k’ = R 0

T

1 M

• Hê số chon loc ( ạ ):

Tốc độ di chuyển tỷ đối của hai chất được đặc trưng bởi hệ số chọn lọc:

_ B _ B _ R, B

a ~ K ì? Y7

Theo quy ước, chất B là chất bị lưu giữ mạnh hơn chất A, như vậy a >1

a càng lớn thì hai chất tách ra khỏi nhau càng xa, thường dùng a trong khoảng 1,05 đến 2,0 để thời gian phân tích không quá dài

• Số đĩa lý thuyết ( N ) và chiều cao của đĩa ( H ì :

Hiệu lực của cột thường được đo bằng hai thông số: số đĩa lý thuyết và chiều cao đĩa lý thuyết Cột sắc ký được coi như có n tầng lý thuyết, ở mỗi tầng sự phân bố chất tan vào hai pha lại đạt đến một trạng thái cân bằng mới Mỗi tầng được giả định như là một lớp chất nhồi có chiều cao là H Ta có thể tính số đĩa lý thuyết N theo công thức sau:

( t Y f t Y

Trong đó: - WB là chiều rộng pic ở đáy pic

- W1/2 là chiều rộng pic đo ở nửa chiều cao của đỉnh

Nếu gọi L là chiều cao của cột sắc ký, chiều cao của đĩa lý thuyết được tính bằng công thức:

• Đỏ phân giải ( R c ):

Độ phân giải là đại lượng đo mức độ tách hai chất trên một cột sắc ký

Độ phân giải được định nghĩa như sau:

1/2f W B+w a ^ị độ rộng trung b ì nh gi ữ a hai pic

• Phương trình Van - Deemter:

Phương trình Van - Deemter mồ tả ảnh hưởng của tốc độ dòng pha động và các thông số động học khác đến hiệu lực của cột sắc khí:

- U: tốc độ dòng pha động

- A,B,C: các hệ số thay đổi phụ thuộc vào từng cột sắc ký và

do các yếu tố sau quyết định:

+ Sự khuyếch tán xoáy

+ Sự khuyếch tán phân tử

+ Tốc độ trao đổi chất khác nhau của các chất

Rs = t R B - t R, A khoả ng cách gi ữ a hai pic

H = A + ỵy + c.u

Trong đó: - H: chiều cao đĩa lý thuyết

1.4.3 Hệ thống HPLC:

Theo thứ tự từ đầu đến cuối hệ thống, có các bộ phận chính như sau:

• Bình chứa dung môi

• Bơm cao áp: đẩy pha động qua cột sắc ký

• Van bơm mẫu: bơm vào cột một thể tích mẫu nhất định

• Cột tách

• Detector

• Máy ghi sắc ký hoặc máy vi tính

1.4.4 Pha tĩnh trong HPLC:

Cung như săc ký cột ở áp suất thường, pha tĩnh (stationenary phase)

trong HPLC chính là chất nhồi cột để làm nhiệm vụ tách một hỗn hợp chất phân tích Nó là những chất rắn, xốp và kích thước hạt rất nhỏ, đường kính cỡ hạt từ 3 -1 0 micrômet, diện tích bề mặt riêng thường từ 50 - 500 m2/g

• Phân loai pha tĩnh:

- Căn cứ theo bản chất chính của quá trình sắc ký trong cột tách, người ta chia nó thành nhiều loại như hấp phụ, phân bố, trao đổi ion và rây phân

tử Tương ứng với loại chất nhồi như thế người ta có một loại sắc ký riêng trong kỹ thuật tách HPLC

- Căn cứ vào trạng thái là rắn hay lỏng thì pha tĩnh được chia làm 2 loại: nếu pha tĩnh là chất rắn, người ta có sắc ký lỏng rắn LSC ( Liquid Solid Chromatography), nếu pha tĩnh là chất lỏng thì chúng ta có sắc ký lỏng lỏng LLC ( Liquid Liquid Chromatography )

Xét vê cấu trúc xốp của pha tĩnh là các hạt rắn thì pha tĩnh có 2 kiểu xốp: xốp toàn phần hạt và xốp chỉ lớp vỏ ngoài ( xốp bề m ặ t )

• Điều kiên đối vói mốt pha tĩnh:

- Phải trơ và bền vững với các điều kiện của môi trường sắc ký

- Có khả năng tách chọn lọc một hỗn hợp chất tan nhất định trong điều kiện sắc ký nhất định

- Tính chất bề mặt phải ổn định

- Cân bằng động học của sự tách phải xẩy ra nhanh và lặp lại tốt

- Cỡ hạt phải tương đối đồng nhất

• Chế tao pha tĩnh: pha tĩnh được chế tạo trên các chất nền sau:

- Pha tĩnh trên nền Silicagel

- Pha tĩnh trên nền oxyd nhôm

- Pha tĩnh trên nền cao phân tử hữu cơ

- Pha tĩnh trên nền mạch carbon

Trong các loại trên thì pha tĩnh trên nền Silicagle ưu việt hơn và được sửdụng nhiều nhất

• Pha tĩnh trẽn nền Silicagel: Trên nền Silicagel, có 2 loại Silicagel hấp phụ cho sắc ký pha thuận và sắc ký pha đảo

- Silicagel trung tính: sử dụng cho sắc ký hấp phụ pha thuận Loại này

trên bề mặt của nó có chứa các nhóm -OH Đó là các nhóm hoạt động

có tính chất phân cực và ái nước Loại chất nhồi cột này dùng để tách các chất không phân cực và ít phân cực Pha động của loại này là những chất không phân cực hoặc ít phân cực Với loại pha tĩnh này, nước có ảnh hưởng nhiều đến bề mặt hoạt động của chúng ( tức là các nhóm -OH ái nước ) Chính yếu tố này làm ảnh hưởng đến độ lặp lại của quá trình tách sắc ký

- Silicagel đã alkyl hoá: được sử dụng cho sắc ký hấp phụ pha đảo Nhóm

-OH của silicael trung tính được alkyl hoá bằng các gốc alkyl của mạchcarbon thẳng hay các gốc carbon vòng như nhân phenyl Chính vì bị thế mất nhóm -OH nên bề mặt của chất nhồi loại này không phân cực hay ít

phân cực Loại chất nhồi cột này dùng để tách các chất không phân cực,

ít phân cực, các chất phân cực và có thể cả cho sắc ký cặp ion Pha động cho loại này là các chất hữu cơ phân cực như methanol, acetonnitril hay nước hoặc là hỗn hợp của các chất này với nhau theo những tỉ lệ nhất định Pha tĩnh loại này là kỵ nước, nghĩa là bề mặt hoạt động của

nó không bị ảnh hưởng của các phân tử nước, mà trái lại nước lại là một thành phần của dung môi rửa giải có ý nghĩa thực tế lớn Sự tách các chất nhồi loại này có độ lặp lại tốt hơn Do đó loại này được ứng dụng nhiều hơn loại Silica trung tính

- Silicagel đã được Sunfonic hoá hay nitro hoá: được sử dụng cho sắc ký

trao đổi ion ( cation ) Đây là sản phẩm của sự sunfonic hoá hay nitro hoá các silicagel trung tính đê thay các nhóm -OH trên bê mặt Silicagel trung tính bằng các nhóm -SO3H hay -N 02H Các nhóm chưc nay co ion H+ có thể trao đổi được với các cation kim loại khác Đây là các pha tĩnh trao đổi cation mạnh, còn nếu thay thế nhóm -OH bằng nhóm -R- COOH thì ta có loại pha tĩnh trao đổi cation acid yếu Pha tĩnh loại này được dùng để tách các chất có cấu tạo ion như ion các kim loại và hợp chất của chúng, hay các chất khi tan trong pha động thì phân ly thành ion như các acid, base Pha động sử dụng trong loại sắc ký này là các dung dich nước của các muối có chứa chât đệm, chât tạo phưc, dung dịch acid hay base, hoặc có thể có các chất hữu cơ tan trong nước

- Các Silicagel được amin hoá: được sử dụng cho sắc ký trao đổi anion

Các Silicagel này được chế tạo bằng các thay thế nhóm-OH bằng các nhóm -NH2, -NH, -NR2, -NR3, -CH2(OH) Pha tĩnh loại này sử dụng để tách các anion trong hợp chất có cấu trúc ion hay cac chât khi tan trong pha động thì phân ly thành các ion như các base, acid Pha động của loại này cũng giống như trên

1.4.5 Pha động trong HPLC:

Pha động là dung môi dùng để rửa giải các chất tan ( chất cần phân tích ) ra khỏi cột tách để thực hiện một quá trình sắc ký Đây là một yếu tố hết sức linh động và dễ dàng thay đổi Nó có thể là 1 dung môi hoặc có thể là một hỗn hợp nhiều dung môi trộn lẫn vói nhau theo những tỷ lệ nhất định Nócũng có thể là dung dịch các muối có chứa chất đệm, chất tạo phức Nóichung mỗi loại sắc ký sẽ có các hệ dung môi rửa giải riêng để có được hiệu quả phân tách tốt nhất

Pha động là một trong những yếu tố quyết định hiệu quả và hiệu suất tách sắc ký của một hỗn hợp mẫu Nó quyết định thòi gian lưu giữ các chất mẫu và hiệu quả sự tách sắc ký Pha động có thể ảnh hưởng đến:

• Trong HPLC, pha động phải thoã mãn một số điều kiện sau:

- Trơ đối với pha tĩnh

- Hoà tan được chất cần phân tích

- Bền vững theo thời gian

- Có độ tinh khiết cao

- Phải nhanh đạt các cân bằng trong quá trình sắc ký

- Phù hợp vói loại detector được lựa chọn để phát hiện các chất phân tích

- Có tính kinh tế, dễ kiếm

• Trong sắc ký hấp phụ pha thuận, pha động phải là các dung môi hữu cơ không phân cực hoặc ít phân cực như n - hexan, n-heptan, cloroform, tetraclorocarbon Trong quá trình chạy sắc ký, để cho quá trình tách được

ổn định, độ lặp lại cao, phải bão hoà pha động trước khi chạy sắc ký bằng nước.

• Trong sắc ký hấp phụ pha đảo, pha động là hệ dung môi phân cực, là những dung môi đồng tan với nước, có khi nước lại là thành phần chính trong pha động ví dụ như methanol, acetonitril Ta có thể tạo ra những pha động có độ phân cực khác nhau bằng cách thêm vào đó những tỷ lệ nước nhất định, do đó hệ pha này trở nên linh động và được ứng dụng nhiều Ngoài ra, trong nhiều trường hợp, thành phần pha động còn có thêm các chất đệm pH để ổn định pH cho quá trình sắc ký, chất tạo phức để tạo

ra sự rửa giải chọn lọc, chất tạo cặp ion để sử dụng trong sắc ký cặp ion

• Trong sắc ký trao đổi ion, pha động là dung dịch nước của các acid hay base, hoặc là dung dịch nước của các muối kim loại kiềm, kiềm thổ, có chứa chất đệm pH, chất tạo cặp ion, chất tạo phức Trong loại sắc ký này thì pH pha động và chất tạo phức có ý nghĩa rất lớn Trong sắc ký cặp ion, pha động vẫn sử dụng nước và methanol là dung môi chính thêm vào đó các chất chứa ion tạo cặp, chất đệm pH, chất tạo phức

• Có 4 yếu tố quan trọng cần chú ý trong lựa chọn pha động:

- Bản chất của dung môi để pha chế pha động