Nghiên cứu xác định hàm lượng chất cấm dexamethason acetat trong mỹ thẩm bằng phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH HÀN CHÍ TÚ NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CHẤT CẤM DEXAMETHASON ACETAT TRONG MỸ PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC NGHỆ AN BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC VINH HÀN CHÍ TÚ NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG CHẤT CẤM DEXAMETHASON ACETAT TRONG MỸ PHẨM BẰNG PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO Chuyên ngành: Hóa phân tích Mã số: 60.44.01.18 LUẬN VĂN THẠC SĨ HÓA HỌC Người hướng dẫn khoa học: PGS TS NGUYỄN KHẮC NGHĨA NGHỆ AN i LỜI CẢM ƠN Luận văn hoàn thành phòng thí nghiệm chuyên đề môn Hóa phân tích - Khoa Hóa - Trường Đại học Vinh Trung tâm Kiểm nghiệm Dược phẩm - Mỹ phẩm Nghệ An Để hoàn thành luận văn này, xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến: - PGS.TS Nguyễn Khắc Nghĩa giao đề tài, tận tình hướng dẫn tạo điều kiện thuận lợi cho việc nghiên cứu hoàn thành luận văn - TS Nguyễn Trung Dũng TS Mai Thị Thanh Huyền đóng góp nhiều ý kiến quí báu để hoàn thiện luận văn - Phòng đào tạo Sau đại học, khoa Hóa học thầy cô giáo, cán phòng thí nghiệm khoa Hóa trường Đại học Vinh, cán kỹ thuật viên thuộc Trung tâm kiểm nghiệm Dược phẩm - Mỹ phẩm Nghệ An giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cung cấp hóa chất, thiết bị dung cụ dùng cho đề tài Xin cảm ơn tất người thân gia đình bạn bè động viên, giúp đỡ, tạo điều kiện cho thực hoàn thành luận văn Nghệ An, tháng năm Người thực Hàn Chí Tú ii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ CÁI VIẾT TẮT v DANH MỤC HÌNH vi MỞ ĐẦU I LÝ DO CHỌN ĐỀ TÀI II BỐ CỤC CỦA LUẬN VĂN CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 1.1 GIỚI THIỆU VỀ MỸ PHẨM 1.1.1 KHÁI NIỆM 1.1.2 PHÂN LOẠI MỸ PHẨM 1.1.3 THÀNH PHẦN CỦA MỸ PHẨM 1.1.4 TÁC DỤNG CỦA MỸ PHẨM 1.1.5 SỰ PHÁT TRIỂN CỦA NẤM MỐC, VI KHUẨN TRONG MỸ PHẨM 1.1.6 CÁC THÀNH PHẦN ĐỘC HẠI CHO DA CÓ TRONG MỸ PHẨM 1.2 GIỚI THIỆU CÁC ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU 1.2.1 KEM RỬA MẶT NGĂN NGỪA MỤN 1.2.2 SỮA RỬA MẶT NHỜN DA 1.2.3 SỮA TẮM LUX 1.2.4 KEM DƯỠNG DA - LÀNH MỤN 1.2.5 KEM DƯỠNG DA 1.3 CHẤT CẤM DEXAMETHASON ACETAT 12 1.3.1 CÔNG THỨC HÓA HỌC 12 1.3.2 TÁC DỤNG DƯỢC LÝ CỦA DEXAMETHASON 13 1.3.3 CÁC ĐẶC TÍNH LÂM SÀNG 14 1.4 PHƯƠNG PHÁP SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO HPLC 15 1.4.1 NGUYÊN LÝ 15 1.4.2 PHÂN LOẠI 16 1.4.3 PHA TĨNH TRONG SẮC KÝ PHA ĐẢO 17 1.4.4 PHA ĐỘNG TRONG SĂĆ KÝ PHA ĐAO ̉ 19 1.5 CÁC ĐẠI LƯỢNG ĐẶC TRƯNG CỦA SẮC KÝ ĐỒ 22 1.5.1 THỜI GIAN LƯU: RETENION TIME (RT) 22 1.5.2 HỆ SỐ DUNG LƯỢNG K’ 22 1.5.3 ĐỘ CHỌN LỌC (Α) VÀ ĐỘ PHÂN GIẢI (RS) 23 1.5.4 SỐ ĐĨA LÝ THUYẾT N 23 1.5.5 HỆ SỐ BẤT ĐỐI XỨNG T 24 1.6 HỆ THỐNG THIẾT BỊ HPLC 24 1.6.1 BÌNH ĐỰNG DUNG MÔI 25 1.6.2 BỘ KHỬ KHÍ DEGASSE 25 1.6.3 BƠM (PUMP) 25 1.6.4 BỘ PHẬN TIÊM MẪU (INJECTION) 25 1.6.5 CỘT SẮC KÝ 26 1.6.6 ĐẦU DÒ (DETECTOR) 26 iii 1.6.7 BỘ PHẬN GHI TÍN HIỆU 27 1.6.8 IN KẾT QUẢ 27 1.7 CÁC PHƯƠNG PHÁP ĐỊNH LƯỢNG 27 1.7.1 PHƯƠNG PHÁP ĐƯỜNG CHUẨN 27 1.7.2 PHƯƠNG PHÁP MỘT MẪU CHUẨN 27 1.7.3 PHƯƠNG PHÁP THÊM 27 1.7.4 PHƯƠNG PHÁP THÊM CHUẨN 28 1.8 ĐÁNH GIÁ PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 28 1.8.1 KHẢO SÁT GIỚI HẠN PHÁT HIỆN (LOD) VÀ (LOQ) CỦA PHƯƠNG PHÁP 28 1.8.2 ĐÁNH GIÁ SAI SỐ VÀ ĐỘ LẶP LẠI CỦA PHÉP ĐO 28 CHƯƠNG II PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 29 2.1 THIẾT BỊ, DỤNG CỤ VÀ HÓA CHẤT 29 2.1.1 THIẾT BỊ 29 2.1.2 DỤNG CỤ 29 2.1.3 HÓA CHẤT 29 2.2 PHƯƠNG PHÁP LẤY MẪU, BẢO QUẢN MẪU VÀ XỬ LÝ MẪU 30 2.2.1 LẤY MẪU 30 2.2.2 CÁC SƠ ĐỒ XỬ LÝ MẪU 30 2.3 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 32 2.3.1 KHẢO SÁT CÁC ĐIỀU KIỆN TỐI ƯU 32 2.3.2 XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN 32 2.3.3 KHẢO SÁT GIỚI HẠN PHÁT HIỆN (LOD) VÀ GIỚI HẠN ĐỊNH LƯỢNG (LOQ) CỦA PHƯƠNG PHÁP 32 2.4 XỬ LÝ SỐ LIỆU THỰC NGHIỆM 33 CHƯƠNG III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 35 3.1 KHẢO SÁT TÌM ĐIỀU KIỆN TỐI ƯU CỦA PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH 35 3.1.1 KHẢO SÁT VẠCH PHỔ HẤP THỤ 35 3.1.2 KHẢO SÁT TỈ LỆ PHA ĐỘNG 36 3.1.3 KHAO ̉ SAT́ TỐC ĐỘ DÒNG 37 3.1.4 KHAO ̉ SAT́ XAĆ ĐIN ̣ H KHOAN ̉ G NỒNG ĐỘ TUYẾN TÍNH 38 3.2 XÂY DỰNG ĐƯỜNG CHUẨN, XÁC ĐỊNH GIỚI HẠN PHÁT HIỆN (LOD) VÀ GIỚI HẠN ĐỊNH LƯỢNG (LOQ) CỦA DEXAMETHASON ACETAT 39 3.2.1 GIỚI HẠN PHÁT HIỆN (LOD) 41 3.2.2 GIỚI HẠN ĐỊNH LƯỢNG (LOQ) 41 3.3 ĐÁNH GIÁ SAI SỐ VÀ ĐỘ LẶP LẠI CỦA PHÉP ĐO 42 3.4 TỔNG KẾT CÁC ĐIỀU KIỆN ÁP DỤNG PHÂN TÍCH DEXAMETHASON ACETAT TRONG MẪU PHÂN TÍCH 42 3.5 ÁP DỤNG KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU ĐỂ PHÂN TÍCH MỘT SỐ MẪU MỸ PHẨM 44 3.5.1 XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG DEXAMETHASON ACETAT MỘT SỐ MẪU MỸ PHẨM 44 3.5.2 XÁC ĐỊNH ĐỘ LẶP LẠI HÀM LƯỢNG DEXAMETHASON ACETAT CÓ TRONG MẪU MỸ PHẨM 45 3.6 CÁC SẮC ĐỒ CỦA PHÉP ĐO HPLC 47 3.6.1 SẮC ĐỒ MẪU TRẮNG 47 iv 3.6.2 CÁC SẮC ĐỒ MẪU CHUẨN DEXAMETHASON ACETAT CÓ NỒNG ĐỘ KHÁC NHAU 48 3.6.3 SẮC ĐỒ CÁC MẪU MỸ PHẨM 58 KẾT LUẬN 68 TÀI LIỆU THAM KHẢO 69 Tiếng Việt 69 v DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU VÀ CHỮ CÁI VIẾT TẮT HPLC : Sắc ký lỏng hiệu cao (High Performance Liquid Chromatography) LOD : Giới hạn phát (Limit of detection) LOQ : Giới hạn định lượng (Limit of quantitation) MeOH : Methanol ACN : Acetonitril HPLC-MS : Sắc ký lỏng hiệu cao ghép nối đầu dò khối phổ SKPB : Sắc ký phân bố SKPT : Sắc ký pha thường SKPĐ : Sắc ký pha đảo TLC : Sắc ký lớp mỏng (Thin Layer Chromatography) KPH : Không phát vi DANH MỤC HÌNH Trang Hình 1.1 Nang lông bị bít tắc, viêm nhiễm sử dụng mỹ phẩm Hình 1.2 Kem rửa mặt ngăn ngừa mụn Acnes Hình 1.3 Sữa rửa mặt Z Hình 1.4 Sữa tắm LUX Hình 1.5 Kem dưỡng da - Lành mụn B2 Hình 1.6 Kem dưỡng da VITAL CARE VITAMIN E CREME 10 Hình 1.7 Hình ảnh cấu trúc không gian dexamethason acetat 13 Hình 1.8 Bề mặt silica thủy phân 17 Hình 1.9 Tạo nhánh bề mặt silica 18 Hình 1.10 Cấu trúc cột ODS 18 Hình 1.11 Cấu trúc cột LC-DB 19 Hình 1.12 Cấu trúc cột có gốc isopropyl 19 Bảng 1.1 Tính chất số pha động sắc ký lỏng 20 Hình 1.13 Độ nhớt hỗn hợp nước dung môi hữu 25oC 21 Hình 1.14 Sơ đồ hệ thống HPLC 24 Hình 1.15 Đồ thị kỹ thuật đường chuẩn thêm chuẩn 28 Hình 2.1 Hệ thống sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) Agilent 1100 29 A Sơ đồ xử lý chất chuẩn 30 B Sơ đồ xử lý mẫu mỹ phẩm 31 Bảng 3.1 Kết quả khảo sát vạch đo phổ của dexamethason acetat 35 Bảng 3.2 Kết quả khảo sát tỉ lệ pha động của dexamethason acetat 37 Bảng 3.3 Kết quả khảo sát tốc độ dòng 37 Bảng 3.4 Khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính 38 Hình 3.1 Đồ thị khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính của dexamethason axetat 39 Bảng 3.5 Số liệu xây dựng đường chuẩn 40 Hình 3.2 Đồ thị đường chuẩn của dexamethason acetat 41 Bảng 3.6 Kết quả đánh giá sai số và độ lặp lại của phép đo 42 Bảng 3.7 Các điều kiện đo dexamethason acetat phương pháp HPLC 42 vii Bảng 3.8 Lượng cân các mẫu mỹ phẩm 44 Bảng 3.9 Kết đo mẫu phân tích 44 Bảng 3.10 Kết phân tích dexamethason acetate có mẫu KD2 45 Hình 3.3 Sắc đồ mẫu trắng 47 Hình 3.4 Sắc đồ mẫu chuẩn dexamethason acetat có nồng độ 0,5 ppm 50 Hình 3.5 Sắc đồ mẫu chuẩn dexamethason acetat có nồng độ 1,0 ppm 52 Hình 3.6 Sắc đồ mẫu chuẩn dexamethason acetat có nồng độ 2,0 ppm 54 Hình 3.7 Sắc đồ mẫu chuẩn dexamethason acetat có nồng độ 3,0 ppm 54 Hình 3.8 Sắc đồ mẫu chuẩn dexamethason acetat có nồng độ 5,0 ppm 55 Hình 3.9 Sắc đồ mẫu chuẩn dexamethason acetat có nồng độ 6,0 ppm 56 Hình 3.10 Sắc đồ mẫu chuẩn dexamethason acetat có nồng độ 6,5 ppm 57 Hình 3.11 Sắc đồ mẫu MP-KR05 - Kem rửa mặt ngăn ngừa mụn Acnes 59 Hình 3.12 Sắc đồ mẫu MP-SR01 - Sữa rửa mặt Z 61 Hình 3.13 Sắc đồ mẫu MP-ST04 - Sữa tắm LUX 63 Hình 3.14 Sắc đồ mẫu MP DK 02 - Kem dưỡng da - Lành mụn B2 65 Hình 3.15 Sắc đồ mẫu MP DK 03 - Kem dưỡng da vital care viitamin E creme 67 MỞ ĐẦU I Lý chọn đề tài Vào năm gần Việt Nam phát triển nhanh mặt kinh tế đời sống người dân ngày nâng cao yêu cầu làm đẹp người quan tâm, chị em phụ nữ [9] Đây yếu tố giúp cho ngành mỹ phẩm nước ta phát triển mạnh số lượng chất lượng đa dạng sản phẩm Nhưng hạn chế kiến thức làm đẹp chăm sóc da cách thiếu khoa học sử dụng loại mỹ phẩm, kem dưỡng da, kem bôi da không rõ nguồn gốc [14] Trong mỹ phẩm có chứa thành phần nguy hại loại mỹ phẩm, kem dưỡng da không phù hợp với da người việc làm đẹp trở nên vô nguy hiểm, có tác dụng ngược lại với mong muốn làm đẹp Cùng với số nhà sản xuất bất chấp an toàn người tiêu dùng trộn số thuốc vào mỹ phẩm, đặc biệt chất thuộc nhóm glucocorticoid, glucocorticoid rẻ tiền, dễ kiếm thường sử dụng để trộn mỹ phẩm Glucocorticoid thuốc có tác dụng chống viêm mạch, chống dị ứng, ức chế miễn dịch, thuốc phải bán theo đơn Các mỹ phẩm trộn glucocorticoid có nhiều tác dụng phụ không mong muốn như: teo da, xơ cứng bì, viêm da đỏ ửng, giản mao mạch, mụn trứng cá bội nhiễm nấm, vi khuẩn, vi rút , [22, 28] Xuất phát từ vấn đề trên, Ngày 2/9/2003, Việt Nam ký kết "Hiệp định Hệ thống hòa hợp ASEAN quản lý mỹ phẩm"[1] Theo có quy định nhóm glucocorticoid chất bị cấm sử dụng mỹ phẩm Xuất phát từ lý chọn đề tài:“Nghiên cứu xác định hàm lượng chất cấm dexamethason acetat mỹ phẩm phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC)” Để thực đề tài đề nhiệm vụ sau: Khảo sát tìm điều kiện tối ưu phương pháp phân tích - Khảo sát vạch phổ hấp thụ - Khảo sát tỉ lệ pha động - Khảo sát tốc độ dòng Khảo sát xác định khoảng nồng độ tuyến tính Khảo sát lập phương trình đường chuẩn dexamethason acetat Xác định giới hạn phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) dexamethason acetat Đánh giá sai số độ lặp lại phép đo Áp dụng kết nghiên cứu để phân tích số mẫu mỹ phẩm II Bố cục luận văn 56 Hình 3.9 Sắc đồ mẫu chuẩn dexamethason acetat có nồng độ 6,0 ppm 57 Hình 3.10 Sắc đồ mẫu chuẩn dexamethason acetat có nồng độ 6,5 ppm 58 3.6.3 Sắc đồ mẫu mỹ phẩm 59 Hình 3.11 Sắc đồ mẫu MP-KR05 - Kem rửa mặt ngăn ngừa mụn Acnes 60 61 Hình 3.12 Sắc đồ mẫu MP-SR01 - Sữa rửa mặt Z 62 63 Hình 3.13 Sắc đồ mẫu MP-ST04 - Sữa tắm LUX 64 65 Hình 3.14 Sắc đồ mẫu MP DK 02 - Kem dưỡng da - Lành mụn B2 66 67 Hình 3.15 Sắc đồ mẫu MP DK 03 - Kem dưỡng da vital care viitamin E creme 68 KẾT LUẬN Chúng giải nhiệm vụ đặt đề tài, vào kết nghiên cứu thu rút kết luận sau: Đã khảo sát tìm điều kiện tối ưu phương pháp phân tích Tìm điều kiện tối ưu cho phép xác định dexamethason acetat phương pháp HPLC + Vạch phổ detector 240 nm + Tỉ lệ pha động ACN: H2O = 34: 66 + Cột sắc ký: Cột C18 (250 x 4,6 mm, 5μm I.D.) + Thể tích tiêu chuẩn 20 μl tốc độ dòng 1,2 ml/phút Đã khảo sát xác định khoảng nồng độ tuyến tính Spic nồng độ dexamethason acetat 0,5 - 6,5 ppm Đã xây dựng phương trình đường chuẩn đầy đủ thể quan hệ Spic nồng độ chất dexamethason acetat Đánh giá LOD, LOQ cho thấy đủ tiêu chuẩn để xác định lượng vết chất dexamethason acetat với độ lặp lại tốt sai số cho phép Đã áp dụng kết nghiên cứu để xác định chất dexamethoxason acetat mẫu mỹ phẩm Nghiên cứu phát chất dexamethason acetat 01 mẫu mỹ phẩm (kí hiệu KD02) không tuân theo Hiệp định hệ thống hòa hợp ASEAN quản lý mỹ phẩm Còn mẫu không phát dexamethason acetat Chúng hy vọng nghiên cứu góp phần vào việc ứng dụng kỹ thuật HPLC để xác định dexamethason acetat đối tượng mỹ phẩm, nhằm phục phụ đắc lực cho ngành khoa học đặc biệt lĩnh vực mỹ phẩm bảo vệ sức khỏe người 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt [1] ASEN (2003), Hiệp định hệ thống hòa hợp ASEAN quản lý mỹ phẩm, Bản dịch Cục quản lý Dược, 2008 [2] ASEAN (2005), Determination of heavy metals (arsenic, cadmium, lead and mercury) in cosmetic products, 1- (phương pháp hòa hợp ASEAN có mã số ACM THA 05) [3] Trần Tử An (2006), Môi trường độc chất môi trường, Trường Đại học Dược Hà Nội, tr 72-79, 138-141, 264-292, 295-297 [4] Trần Tử An (2007), Kiểm nghiệm dược phẩm, Nhà xuất Y học, Hà Nội [5] Bộ Y tế (2002), Dược điển Việt Nam (xuất lần thứ ba), Nhà xuất Y học, Hà Nội [6] Bộ Y tế (2006), Quyết định số 4/2006/QĐ-BYT, Bộ trưởng Bộ Y tế việc triên khai, áp dụng hướng dẫn thực hành nguyên tắc, tiêu chuẩn “thực hành tốt sản xuất mỹ phẩm” Hiệp hội nước Đông nam Á [7] Bộ Y tế, Cục quản lý Dược (2011), Thông tư 06/2011/TT-BYT, phụ lục số 06-MP, 01-MP, Hà Nội [8] Bộ Y tế (2009), Dược điển Việt Nam IV, phụ lục 5, Các kỹ thuật sắc ký [9] Vương Ngọc Chính (2005), Hương liệu mỹ phẩm, NXB Đại Học Quốc Gia TP.HCM [10] Nguyễn Xuân Dũng, Tử Vọng Nghị, Phạm Luân (1986), Các phương pháp tách - Sắc ký lỏng cao áp, Đại học tổng hợp Amsterdam Hà Nội [11] Nguyễn Thanh Hà, Phạm Khánh Phong Lan (2007), “Phân tích Arsen số chế phẩm kem dưỡng da quang phổ hấp thụ nguyên tử”, Tạp chí Kiểm nghiệm thuốc, tr 18-21 [12] Trần Đức Hậu, Nguyễn Đình Hiển, Thái Duy Thìn, Hình Kim Thoa, Nguyễn Văn Thục (2006), Hóa dược tập 2, Bộ môn hóa dược, Đại học Dược Hà Nội [13] Làm để có da khỏe đẹp, NXB Văn Hóa Thông Tin [14] Nguyễn Thành Long (2006), Mỹ phẩm, Chuyên đề tự chọn, Đại học Dược Hà nội, tr.15-27 [15] Phạm Luân (1999), Cơ sở lý thuyết phân tích sắc ký lỏng hiệu cao Đại học quốc gia Hà Nội, tr 106-105 [16] Makoto Takagi, Trần Thị Ngọc Lan (dịch) (2010), Các phương pháp phân tích hóa học, Khoa Hóa, Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia thành phố Hồ Chí Minh, tr 184-194 [17] Thái Đại Quân (2013), Nghiên cứu xác định vitamin C thuốc, thực phẩm chức năng, hoa nước giải khát phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao HPLC, Luận văn Thạc sỹ Khoa hóa học, Trường Đại học Vinh, tr 23-24 [18] Hồ Viết Quý (2009), Các phương pháp phân tích công cụ hóa học đại, NXB đại học Sư phạm, Hà Nội, tr 203-217 70 [19] Louis Hồ Tấn Tài (1999), Các sản phẩm tẩy rửa chăm sóc cá nhân, NXB, in công ty Liksin, TP.HCM [20] Tổng cục Tiêu chuẩn Đo lường, Trung tâm Thông tin (2003), Tuyển tập tiêu chuẩn Hóa mỹ phẩm [21] Đào Hữu Vinh, Nguyễn Xuân Dũng cộng (1985), Các phương pháp sắc ký Nhà xuất khoa học kỹ thuật [22] Nguyễn Thị Xuyên, Hoàng Việt Dũng, Hoàng Mỹ Hạnh, Đào Văn Đôn, Nguyễn Thị Thanh Phương (2013), “Định lượng đồng thời dexamethason acetat, betamethason, prednisolon triamcinolon mỹ phẩm sắc ký lỏng hiệu cao”, Tạp chí Y - Dược học Quân số - 2013 Tiếng Anh [23] ASEAN Identificantion of dexamethason, betamethason, hydrocortison acetat, betamethason 17-valerate, and triamcinolon acetonid in cosmetic products by TLC and HPLC, ACM MAL 07 [24] C.G.Smyrniotakis, Helen A Archontaki, (2007) “C18 columns for the simultaneous determination of oxytetracycline and its related subsatances by reversed-phase high performance liquid chromatography and UV detection” the Journal of Pharmaceutical and biomedial analysis, 43, 506 - 514 [25] Gulliver, T & Eid, N (2005), "Effects of glucocorticoids on the hypothalamic - pituitaryadrenal axis in children and adults" Immunol Allergy Clin North Am, 25(3), pp.541-555 [26] Miller J.C Miller J.N (1988), Statistics for analytical chemistry, Ellis Horwood Limited, England [27] Nam Y S, I K Kwon et al, (2012), Quantitative monitoring of corticosteroids in cosmetic products manufactured in Korea using LC-MS/MS Forensic Scient 220 (1-3), pp.23-28 [28] Wu Da-nan, Zheng He-Hui, Wang Ping, Li Jie, (2008), Determination of glucocorticoids in cosmetics by ultra performance liquid chromatography Chinese journal of health laboratory technology [...]... hiệu năng cao (HPLC) ra đời năm 1967-1968 trên cơ sở phát triển và cải tiến từ phương pháp sắc ký cột cổ điển HPLC là một phương pháp chia tách trong đó pha động là chất lỏng và pha tĩnh chứa trong cột là chất rắn đã được phân chia dưới dạng tiểu phân hoặc một chất lỏng phủ lên một chất mang rắn, hay một chất mang đã được biến bằng liên kết hóa học với các nhóm chức hữu cơ 16 Sắc ký lỏng hiệu năng cao. .. Pha tĩnh được giữ lại trên chất mang rắn bằng cơ chế hấp phụ vật lý → sắc ký lỏng- lỏng (liquid-liquid chromatography) Pha tĩnh liên kết hóa học với chất nền → sắc ký pha liên kết (bonded phase chromatography) Trong quá trình sử dụng, người ta nhận thấy sắc ký pha liên kết có nhiều ưu điểm hơn sắc ký pha lỏng - lỏng vì một số nguyên nhân sau: Pha tĩnh trong hệ sắc ký lỏng- lỏng dễ bị hòa tan bởi pha... là đại lượng biểu thị hiệu năng của cột trong một điều kiện sắc ký nhất định Mỗi đĩa lý thuyết trong cột sắc ký giống như một lớp pha tĩnh có chiều cao là H Tất nhiên lớp này có tính chất động, tức là một khu vực của hệ phân tích mà trong đó một cân bằng nhiệt động được thiết lập giữa nồng độ trung bình của chất tan trong pha tĩnh và pha động Vì vậy, với một điều kiện sắc ký xác định thì chiều cao H... của phương pháp HPLC rất rộng, như phân tích các hợp chất thuốc trừ sâu, thuốc kháng sinh, các chất phụ gia thực phẩm trong lĩnh vực thực phẩm, dược phẩm, môi trường… Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) có khả năng tách các hợp chất đặc thù như: - Các hợp chất cao phân tử và ion thuộc các đối tượng nghiên cứu y học, sinh học, … - Các hợp chất tự nhiên không bền - Các hợp chất kém bền nhiệt, các chất. .. Việc sử dụng các chất nhồi có kích thước nhỏ (5-10 (m) làm cho hiệu quả tách của phương pháp này tốt hơn so với phương pháp lỏng cổ điển Có thể nói một cách đơn giản HPLC là một sắc ký cột (column chromatography) đi kèm với một detector nhạy để có thể phát hiện được các chất tách ra trong quá trình chạy sắc ký Với những tiến bộ kỹ thuật về cột, detector đã chuyển sắc ký cột thành phương pháp phân tích... chiết sử dụng trong HPLC, người ta chia HPLC thành 4 loại: Sắc ký hấp phụ hay sắc ký lỏng rắn(adsorption/liquid chromatography) Sắc ký phân bố (partition chromatography) Sắc ký ion (ion chromatography) Sắc ký rây phân tử (size exclusion/gel permeation chromatography) Trong đó, sắc ký phân bố (SKPB) được ứng dụng nhiều nhất vì có thể phân tích được những hợp chất từ không phân cực đến những hợp chất rất... Các phương pháp định lượng Có 4 phương pháp định lượng [18]: 1.7.1 Phương pháp đường chuẩn Chuẩn bị một dãy dung dịch chuẩn, xây dựng đồ thị chuẩn sự phụ thuộc giữa nồng độ chất chuẩn và diện tích pic thu được, sau đó xử lý thống kê Phương trình hồi qui của đường chuẩn theo diện tích pic có dạng: y = ax + b Trong đó: x: nồng độ y: diện tích pic a, b: hằng số Đo diện tích pic của chất nghiên cứu trong. .. Mất sắc tô da từng phần + Che đậy nhiễm khuẫn và xuất hiện nấm da - Thần kinh: mất ngủ, sảng khoái Ít gặp, 1/1000 < ADR < 1/100 Quá mẫn, đôi khi gây choáng phản vệ, tăng bạch cầu, huyết khối tắc mạch, tăng cân, ngon miệng, buồn nôn, khó ở, nấc, áp xe vô khuẩn Lượng dùng: Loại dược này chỉ dùng theo đơn của bác sỹ 1.4 Phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC 1.4.1 Nguyên lý Phương pháp sắc ký lỏng hiệu. .. được đặt trong bộ phận điều nhiệt (oven column) 1.6.6 Đầu dò (detector) Là bộ phận phát hiện các chất khi chúng ra khỏi cột và cho các tín hiệu ghi trên sắc ký đồ để có thể định tính và định lượng Tùy theo tính chất của các chất cần phân tích mà người ta sử dụng loại detector thích hợp và phải thoả mãn điều kiện trong một vùng nồng độ nhất định của chất phân tích A = k.C Trong đó: A: Là tín hiệu đo... vấn đề khác như hao tốn dung môi, hóa chất, độ chính xác của phép phân tích kém Để thay đổi thời gian lưu ta dựa vào các yếu tố trên 1.5.2 Hệ số dung lượng K’ Hệ số dung lượng của một chất cho biết khả năng phân bố của chất đó trong hai pha cộng với sức chứa của cột, tức là tỷ lệ giữa lượng chất tan trong pha tĩnh và lượng chất tan trong pha động ở thời điểm cân bằng Thường được tính theo công thức