- Các barbiturat, phenytoin, rifampicin, rifabutin, carbamazepin, ephedrin,
KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 3.1 Khảo sát tìm điều kiện tối ưu của phương pháp phân tích
3.1. Khảo sát tìm điều kiện tối ưu của phương pháp phân tích
Để đánh giá sự phù hợp và ổn định của hệ thống thiết bị phân tích, chúng ta cần khảo sát lại các yếu tố ảnh hưởng quan trọng có thể dẫn đến sai số của phép phân tích.
- Dung dịch chuẩn gốc: Cân chính xác 50 mg (0,1 mg) chất chuẩn dexamethason acetat vào bình định mức dung tích 100,0 ml, thêm khoảng 70 ml methanol, lắc đến tan hoàn toàn và thêm methanol vừa đủ đến vạch, lắc đều, được dung dịch chuẩn gốc hydrocortison acetat có nồng độ khoảng 0,5 mg/ml.
- Dung dịch chuẩn làm việc: Pha các dung dịch chuẩn làm việc dexamethason acetat Dung dịch chuẩn 1: Có nồng độ 0,5 ppm bằng cách lấy 0,1 ml
Dung dịch chuẩn 2: Có nồng độ 1,0 ppm bằng cách lấy 0,2 ml Dung dịch chuẩn 3: Có nồng độ 2,0 ppm bằng cách lấy 0,4 ml Dung dịch chuẩn 4: Có nồng độ 3,0 ppm bằng cách lấy 0,6 ml Dung dịch chuẩn 5: Có nồng độ 5,0 ppm bằng cách lấy 1,0 ml Dung dịch chuẩn 6: Có nồng độ 6,0 ppm bằng cách lấy 1,2 ml Dung dịch chuẩn 7: Có nồng độ 6,5 ppm bằng cách lấy 1,3 ml
Dung dịch chuẩn gốc vào mỗi bình định mức dung tích 50,0 ml tương ứng, thêm methanol vừa đủ đến vạch, lắc đều. Lọc các dung dịch qua màng lọc 0,45 μm để tiêm sắc ký. Có ghi các ký hiệu của mỗi mẫu chuẩn.
3.1.1. Khảo sát vạch phổ hấp thụ
Pha dung dịch chuẩn làm việc dexamethason acetat có nồng độ 2,0 ppm. Tiến hành vận hành thiết bị ở các điều kiện theo các tài liệu đã tham khảo [6, 15, 17, 22]:
- Thành phần pha động: Acetonitril - nước (35: 65). - Cột sắc ký: Cột C18 (250 x 4,6 mm, 5 μm I.D.). - Tốc độ dòng: 1,2 ml/phút.
- Thể tích tiêm mẫu: 20 μl.
- Detecter: Thay đổi các bước sóng xung quanh giá trị 240 nm.
Khảo sát tìm bước sóng tối ưu xác định hàm lượng của dexamethason acetat. Kết quả thu được trình bày trong bảng 3.1.
Bảng 3.1. Kết quả khảo sát vạch đo phổ của dexamethason acetat
( (nm) 237 238 239 240 241 242
Spic - 2,0 ppm 50189 50209 50252 50485 50247 50212
RSD% 0.2194 0.2193 0.2191 0.2181 0.2191 0.2193 Nhận xét:
Như vậy qua kết quả khảo sát, chúng tôi chọn vạch hấp thụ 240 nm. Đây là vạch phổ đảm bảo cho độ hấp thụ cao, độ lặp tốt, phù hợp với phép phân tích. Kết quả này cũng phù hợp với một số tài liệu đã công bố [6],[22]. Các nghiên cứu tiếp theo chúng tôi chọn λ = 240 nm.
3.1.2. Khảo sát tỉ lệ pha động
Pha dung dịch chuẩn làm việc dexamethason acetat có nồng độ 2,0 ppm. Tiến hành vận hành thiết bị ở các điều kiện theo các tài liệu đã tham khảo:
- Thành phần pha động: Thay đổi tỉ lệ pha động acetonitril - nước xung quanh giá trị (35: 65).
- Cột sắc ký: Cột C18 (250 x 4,6 mm, 5μm I.D.). - Tốc độ dòng: 1,2 l/phút.
- Thể tích tiêm mẫu: 20 μl. - Detecter: 240 nm.
Khảo sát tìm tỷ lệ pha động tối ưu để xác định hàm lượng của dexamethason acetat. Kết quả thu được trình bày trong bảng 3.2.
Bảng 3.2. Kết quả khảo sát tỉ lệ pha động của dexamethason acetat
ACN: H2O 32:68 33:67 34:66 35:65 36:64 37:63
Spíc - 2,0 μg/ml 50123 50434 50492 50474 50231 50206
RSD% 0.3164 0.3145 0.3141 0.3142 0.3157 0.3159
Nhận xét:
Như vậy qua kết quả khảo sát, chúng tôi chọn tỉ lệ pha động ACN: H2O (34:66). Đây là tỉ lệ pha động đảm bảo cho độ hấp thụ cao, độ lặp tốt, phù hợp với phép phân tích. Kết quả này cũng phù hợp với một số tài liệu đã công bố. Các nghiên cứu tiếp theo chúng tôi sử dụng tỷ lệ pha động này [6, 10, 17, 22].
3.1.3. Khảo sát tốc độ dòng
Pha dung dịch chuẩn làm việc dexamethason acetat có nồng độ 2,0 μg/ml. Tiến hành vận hành thiết bị ở các điều kiện theo các tài liệu đã tham khảo:
- Thành phần pha động: Tỉ lệ pha động acetonit - nước (34 : 66). - Cột sắc ký: Cột C18 (250 x 4,6 mm, 5 μm I.D.).
- Tốc độ dòng: Thay đổi tốc độ xung quang 1,2 ml/phút. - Thể tích tiêm mẫu: 20 μl.
- Detecter: 240 nm.
Qua kết quả khảo sát cũng như dựa vào các tài liệu tham khảo yêu cầu xác định hàm lượng của dexamethason acetat ta thấy tốc độ dòng tại giá trị 1,2 ml/phút có độ hấp thụ lớn nhất được nêu trong bảng 3.3