Bảng 3.3 Kết quả khảo sát tốc độ dòng

- Các barbiturat, phenytoin, rifampicin, rifabutin, carbamazepin, ephedrin,

Bảng 3.3 Kết quả khảo sát tốc độ dòng

V(ml/phút) 1,0 1,1 1,2 1,3 1,4 1,5

Spíc - 2,0 ppm 50347 50452 50512 50491 50281 50263

Nhận xét:

Như vậy qua kết quả khảo sát, chúng tôi chọn tốc độ dòng tại giá trị 1,2 ml/phút. Đây là tỉ lệ pha động đảm bảo cho độ hấp thụ cao, độ lặp tốt, phù hợp với phép phân tích. Kết quả này cũng phù hợp với một số tài liệu đã công bố [22]. Các nghiên cứu tiếp theo chúng tôi chọn tốc độ dòng tại giá trị 1,2 ml/phút.

3.1.4. Khảo sát xác định khoảng nồng độ tuyến tính

Chúng tôi tiến hành pha dãy dung dịch có nồng độ xác định tiến hành đo phổ hấp thụ của các dung dịch trên ở điều kiện tối ưu đã được khảo sát.

Kết quả đo phổ được trình bày trong bảng 3.4

Bảng 3.4. Khảo sát khoảng nồng độ tuyến tính

TT Nồng độ dung dịch chuẩn (ppm) Spíc

1 0,1 13768 2 0,3 16876 3 0,5 18981 4 1,0 32356 5 2,0 60513 6 3,0 99813 7 5,0 154136 8 6,0 187125 9 6,5 201324 10 6,7 203131 11 7,0 207122

Từ số liệu ở bảng 3.4 ta sử dụng chương trình Microsoft Excel 2003 vẽ được đồ thị hình 3.4.

Hình 3.1. Đồ thị khảo sát khoảng nồng độ tuyến tínhcủa dexamethason axetat của dexamethason axetat

Nhận xét:

Qua đồ thị hình 3.1 ta thấy khoảng tuyến tính thể hiện mối quan hệ diện tích pic nồng độ của dexamethason axetat là 0,5 ppm đến 6,5 ppm.

3.2. Xây dựng đường chuẩn, xác định giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng (LOQ) của dexamethason acetat hạn định lượng (LOQ) của dexamethason acetat

Pha các dung dịch chuẩn làm việc dexamethason acetat có nồng độ 0,5 ppm, 1,0 ppm; 2,0 ppm; 3,0 ppm; 5,0 ppm; 6,0 ppm; 6,5 ppm. Tiến hành vận hành thiết bị ở các điều kiện đã khảo sát và theo các tài liệu đã tham khảo:

- Cột sắc ký: Cột C18 (250 x 4,6 mm, 5μm I.D.). - Tốc độ dòng: Thay đổi 1,2 ml/phút.

- Thể tích tiêm mẫu: 20 μl. - Detecter: 240 nm

Từ kết quả thu được ở trên để chúng tôi dùng phần mềm origin 7.5 để xây dựng phương trình hồi quy đầy đủ cho đường chuẩn của dexamethason acetat, đồng thời xác định giới hạn phát hiện và giới hạn định lượng. Kết quả thu được trình bày trong bảng 3.5.

Bảng 3.5.Số liệu xây dựng đường chuẩn

TT Nồng độ dung dịch chuẩn

(ppm) Tổng Spíc Số liệu thống kê

1 0.5 18981 y = 30623x + 2757.8 r = 0.9993 2 1.0 32356 3 2.0 60513 4 3.0 99813 5 5.0 154136 6 6.0 187125 7 6.5 201324

Từ số liệu ở bảng 3.5 ta sử dụng chương trình Microsoft Excel vẽ được đồ thị mối quan hệ tuyến tính giữa diện tích pic và nồng độ chất chuẩn được thể hiện trên hình 3.2.

Hình 3.2. Đồ thị đường chuẩn của dexamethason acetat

Phương trình đường chuẩn Data_B:

Y= A*X + B R: Độ lệch chuẩn tương đối

SD: Độ lệch chuẩn tuyệt đối N: Số lần thực nghiệm (N =7) P: Độ sai số cho phép

Thông số Giá trị Sai số

A B 30623 2757.8 503 2062 R SD N P 0,99933 2987 7 <0.0001

Tra bảng phân phối Student ta được giá trị t (P = 0,95; f = N-1 = 6) = 2,45 Theo kết quả tính toán của phần mềm origin 7.5 ta có: (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

∆A = t(0,95;6)*SA = 2,45*503 = 1232.4 ∆B = t(0,95;6)*SB = 2,45*2062 = 5051.9 Vậy phương trình hồi quy đầy đủ của đường chuẩn có dạng:

Ai = (30623± 1232.4)* X +( 2757.8 ± 5051.9) Trong đó:

Ai là diện tích píc của phân tích

X là nồng độ của dexamethoxason acetat (ppm)

3.2.1. Giới hạn phát hiện (LOD)

LOD được xem là nồng độ của chất phân tích mà hệ thống phân tích còn cho tín hiệu phân tích khác có nghĩa với tín hiệu của mẫu trắng hay tín hiệu nền.

Giới hạn phát hiện dexamethoxason acetat bằng phép đo HPLC theo đường chuẩn: §

Giá trị (LOD) này cho thấy có thể dùng phương pháp để phát hiện lượng vết dexamethoxason acetat trong đối tượng phân tích.

3.2.2 Giới hạn định lượng (LOQ)

LOQ được xem là nồng độ của chất phân tích mà hệ thống phân tích còn cho tín hiệu phân tích khác có ý nghĩa định lượng với mẫu trắng hay tín hiệu nền và đạt độ tin cậy ≥ 95%.

Giới hạn định lượng dexamethoxason acetat bằng phép đo HPLC theo đường chuẩn: §

Giá trị (LOQ) này cho thấy có thể dùng phương pháp để định lượng dexamethoxason acetat đối tượng phân tích.

y 3×S 3×2987 LOD = = = 0.29 ppm A 30623 y 10×S 10×2987 LOQ = = = 0.97 ppm A 30623

3.3. Đánh giá sai số và độ lặp lại của phép đo

Để đánh giá sai số và độ lặp lại của phương pháp từ đó xác định khoảng tin cậy của giá trị phân tích, chúng tôi chọn khảo sát ở tại ba giá trị nồng độ nằm ở đầu, giữa và cuối khoảng tuyến tính của đường chuẩn ở mỗi loại nồng độ tiến hành đo lặp lại 5 lần.

Các kết quả thực nghiệm được xử lý thống kê và trình bày trong bảng 3.6.

Bảng 3.6. Kết quả đánh giá sai số và độ lặp lại của phép đo

Nồng độ chuẩn bị (ppm) 0,500 3,000 6,500

Nồng độ xác định được (ppm) 0,504 3.052 6,500

0,505 3.023 6,498

0,502 3.013 6,504

0,501 3.056 6,502

0,502 3.045 6,505

Giá trị nồng độ trung bình: 0,503 3.036 6,502

Độ lệch chuẩn: SD 1,54.10-4 1.6.10-2 1.9.10-4

Độ lệch chuẩn tương đối: RSD% 0,0307 0,557 0,044

Chuẩn student: t 1,7 2.1 0.6

Độ chính xác: ε 1,2.10-4 1,6.10-2 7,5.10-5

Nhận xét:

Từ kết quả ở trong bảng 3.6 ta thấy rằng: Các giá trị thu được có độ lặp tương đối tốt. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});

So sánh t với t(α,k) = 2,45 (k=6; α= 0,95) cho thấy t < tα,k do đó phương pháp không mắc sai số hệ thống.

Khoảng tin cậy của giá trị phân tích của các phép đo hoàn toàn có thể đánh giá thông qua các giá trị và ε tương ứng.

3.4. Tổng kết các điều kiện áp dụng phân tích dexamethason acetat trong mẫu phân tích mẫu phân tích

Từ các kết quả nghiên cứu trên, chúng tôi tổng hợp các điều kiện phù hợp để đo dexamethason acetat bằng phương pháp HPLC thể hiện trong bảng 3.7.