Nội dung chính 1. Tại sao phải xác địnhphát hiện GMO 2. Xác định GMO dựa trên cơ sở nào? 3. Các phương pháp xác định TẠI SAO? • Xác nhận sản phẩm hữu cơGMF • Xem sự kiện được chứng nhận hay chưa ở nước sở tại • Dán nhãn • Sử dụng trong nghiên cứu phát triển giống mới: tính ổn định di truyền, đánh giá khả năng phát tán gen vào môi trường…
4/19/2016 CÁC PHƯƠNG PHÁP XÁC ĐỊNH GMO/GMF Nguyễn Tiến Thành 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF Nội dung Tại phải xác định/phát GMO Xác định GMO dựa sở nào? Các phương pháp xác định 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 4/19/2016 TẠI SAO PHẢI PHÁT HIỆN GMO 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF TẠI SAO? • Xác nhận sản phẩm hữu cơ/GMF • Xem kiện chứng nhận hay chưa nước sở • Dán nhãn • Sử dụng nghiên cứu phát triển giống mới: tính ổn định di truyền, đánh giá khả phát tán gen vào môi trường… 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 4/19/2016 Cơ sở phương pháp xác định GMO/GMF • Dựa khác biệt không tự xảy cách tự nhiên GMO non-GMO • Sự khác biệt mặt di truyền, ADN ngoại lai đưa vào • Sự khác biệt protein mã hoá gen chuyển vào 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF Đoạn gen chuyển GMO hoạt động/biến đổi • GMO = non GMO + đoạn gen chuyển vào (chèn vào) Đoạn chèn bị biến đổi chức dự kiến, ví dụ kháng thuốc trừ cỏ) Các cá thể mang đoạn chèn bị loại bỏ (môi trường chọn lọc…) 4/19/2016 Đoạn chèn nguyên vẹn (giữ chức dự kiến) chèn nhiều vị trí khác cá thể chọn cuối (dựa ưu thế) để phát triển tiếp Trong cá thể này, vị trí chèn đoạn chèn cụ thể đặc trưng (sự kiện chuyển gen) Các phương pháp xác định GMO/GMF 4/19/2016 Cấu trúc đoạn chèn hệ gen chủ Hệ gen chủ 4/19/2016 Gen Hệ gen chủ Các phương pháp xác định GMO/GMF Đoạn gen chuyển GMO hoạt động/biến đổi Đoạn ADN chuyển sản phẩm protein biểu tương ứng Phát tán môi trường, sang sinh vật khác (ví dụ phấn hoa sang trồng khác) lai tạo, sinh sản thành hệ (mang đoạn chèn nguyên vẹn bị biến đổi) Thức ăn trực tiếp cho sinh vật khác: chuột, động vật, sâu bọ (ADN, protein bị biến đổi?) Sản phẩm chế biến ADN, protein bị biến đổi, có mặt sản phẩm cuối hay không? Sản phẩm không qua chế biến (có mặt ADN, protein) 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 4/19/2016 Sự biến đổi đoạn AND chuyển chèn protein tương ứng • Trong GMO: • ADN đoạn chèn tồn tế bào phận • Protein tương ứng biểu không đồng phụ thuộc tác động bên (môi trường, điều kiện dinh dưỡng) • Từ GMO qua trình chế biến, ADN protein giữ nguyên, bị biến đổi phân giải hoàn toàn tới sản phẩm cuối Trong GMO sản phẩm có chứa GMO tồn ADN ngoại lai chèn vào sản phẩm protein tương ứng phát GMO/sản phẩm chứa GMO thông qua có mặt đối tượng 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF Các bước phân tích GMO Không sử dụng nước sở Sản phẩm nghi chứa GMO? Không Kiểm tra GMO hay GMO? Có Chưa Sự kiện chứng nhận AT chưa? Rồi Định lượng Dán nhãn hay không? 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 10 4/19/2016 Q1 Có chứng chứng tỏ thực phẩm/nguyên liệu không chứa GMO miễn giảm dán nhãn hay không? Quy trình định dán nhãn sản phẩm hay không? (ví dụ ÚC) Q2 Có chứa GMO thương mại hoá không? Thực phẩm/nguyên liệu thuộc diện miễn dán nhãn Thực phẩm/nguyên liệu GMO Q3 Thực phẩm/nguyên liệu chứa kiện cấp chứng nhận chưa Thực phẩm/nguyên liệu GMO Không phép sử dụng/bán Q4 Thực phẩm/nguyên liệu có phải yêu cầu dán nhãn bổ sung không 4/19/2016 Dãn nhãn bổ sung theo tiêu chuẩn Q5 Thực phẩm/nguyên liệu có chứa ADN hay protein không? Dãn nhãn thực phẩm/nguyên liệu có chứa GMO Các phương pháp xác định GMO/GMF Không yêu cầu dán nhãn GMO 11 Các vấn đề cần quan tâm với phương pháp kiểm tra GMO/GMF • Mục đích phép kiểm tra: định tính hay định lượng? • Chi phí: tăng lên độ xác yêu cầu tăng • Sản phẩm dạng gì: nguyên liệu, sản phẩm trung gian, hay sản phẩm cuối: • Sản phẩm đồng hay không? Sản phẩm đồng cho phép độ xác cao hơn, định cỡ mẫu… 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 12 4/19/2016 Giới hạn phát (LOD) • Thể độ nhạy phương pháp xác định • Là ngưỡng mà phương pháp sử dụng phát được: ví dụ LOD 1%, 1% phát • Xác định LOD cho sản phẩm chứa nhiều thành phần khác phức tạp hơn: • tỷ lệ GMO sử dụng thấp nhiều, ví dụ bánh sử dụng bột đậu nành 1%, có 1% lượng bột đậu nành đậu nành chuyển gen 0.01 % khối lượng bánh • Sử dụng thông qua ADN, protein: tách chiết từ mẫu, có ADN protein từ thành phần khác loại nguyên liệu: ví dụ từ ngô, đậu nành, bột mì, ADN tổng từ nguồn khác 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 13 Giới hạn phát (LOD) • Ở Úc: luật dán nhãn ngưỡng tính theo thành phần, thông qua tỷ lệ/tổng số để định dán nhãn hay không? • Ví dụ: đặt ngưỡng 1% tổng sản phẩm nguyên liệu GM 1% tổng sản phẩm không cần kiểm tra • Và LOD phương pháp cần đảm bảo 0.01% 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 14 4/19/2016 Giới hạn phát (LOD) • Ở Nhật: ngưỡng dán nhãn 5% tổng sản phẩm • Đậu tương: sản phẩm dạng bột đậu tương ; chiếm 5% số đậu tương hạt GM dán nhãn • Bột Đậu tương làm bánh (bao gồm bột nguyên liệu khác): tính tổng khối lượng bánh: lượng đậu tương chuyển gen chiếm 5% không phải dán nhãn (mặc dù sử dụng toàn đậu tương chuyển gen) • Nếu ngưỡng dán nhãn 5% tổng số sản phẩm, lượng nguyên liệu sử dụng 5% tổng số sản phẩm, LOD yêu cầu = 0.25% 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 15 Phân loại nhóm phương pháp • Theo đối tượng xác định • Dựa protein • Dựa DNA • Theo mục đích • Định tính: sàng lọc GMO, xác định gen chuyển kiện chuyển gen gì? • Định lượng : tuyệt đối tương đối 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 16 4/19/2016 Các phương pháp dựa ADN • Dựa trình tự ADN đặc trưng cho GMO thành phần khác thực phẩm • ADN khuyếch đại số lượng = PCR, phương pháp dựa DNA có độ nhạy cao • Gồm bước • Tách chiết ADN tổng số • Khuếch đại đoạn ADN đích PCR với cặp mồi thích hợp Đánh giá kết quả: định tính định lượng 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 17 Tách chiết ADN từ mẫu • Công đoạn tốn thời gian nhất, định chất lượng ADN ảnh hưởng tới công đoạn tiếp theo: có mặt thành phần khác lipid, protein, polysacharide ảnh hưởng tới phản ứng khuếch đại ADN • 1st: bổ sung hoá chất để phá tế bào giải phóng ADN (thường chất tẩy rửa anion, lysozyme) • 2nd: loại protein (kết tủa protein) thành phần khác • 3rd: kết tủa chọn lọc ADN alcohol Sau tiếp tục tinh nhựa liên kết ADN (tuy nhiên làm tổn thất ADN) 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 18 4/19/2016 Khuếch đại (tăng số lượng) ADN PCR • Sử dụng mồi đặc hiệu để khuếch đại vùng đó, tạo thành sản phẩm có kích thước dự kiến • Mồi thiết kế dựa trình tự vùng mong muốn khuếch đại, xác định kích thước sản phẩm khuếch đại • Tuỳ thuộc vùng khuếch đại sử dụng cho mục đích định tính hay định lượng 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 19 Đánh giá kết • Điện di sản phẩm PCR gel agarose cho kết có băng sản phẩm (dương tính) băng sản phẩm (âm tính) định tính • Với Real time PCR định lượng lượng ADN ban đầu 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 20 10 4/19/2016 Phương pháp PCR định lượng • Real time PCR = PCR có theo dõi nhân lên sản phẩm gen • Sử dụng phương án phát quang cường độ tỷ lệ thuận với sản phẩm nhân gen để theo dõi: SYGR, Taqman… Dựa giá trị Ct (chu kỳ tín hiệu vượt ngưỡng) tính toán lượng ADN ban đầu Hoặc tính tỷ lệ ADN ứng với GMO/ tổng ADN loại nguyên liệu % GMO 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 29 Ưu điểm chung phương pháp sử dụng PCR • Có thể sử dụng cho Định tính định lượng • Có thể sử dụng cho sàng lọc GMO xác định kiện cụ thể • Dựa ADN, tất tế bào có • Có thể định lượng tương đối • Độ nhạy cao 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 30 15 4/19/2016 Nhược điểm chung phương pháp sử dụng PCR • Cần thời gian, kỹ • ADN bị biến đổi, phân giải sau trình chế biến sản phẩm • Phản ứng PCR bị ảnh hưởng yếu tố bên • Dễ bị ảnh hưởng nhiễm tạp • Yêu cầu trình tự đoạn ADN đích 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 31 Ví dụ • Trong sản phẩm bánh mì sử dụng % bột ngô so với khối lượng bánh mì, có chiếm lượng nhỏ ngô biến đổi gen MON89034 làm để đưa yêu cầu dán nhãn với bánh mì này? 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 32 16 4/19/2016 • Tính trạng MON89034 gì? sử dụng gen gì? Cry1A.105 Cry2Ab2, • Chọn vùng tiếp giáp đoạn chèn với hệ gen ngô để sử dụng 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 33 Chọn ADN đặc trưng cho hệ gen ngô • Chỉ có hệ gen, hoạt động đồng điều kiện • Có mặt tất giống ngô (kể ngô thường ngô GM) • Trình tự biết rõ • ví dụ gen hmg 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 34 17 4/19/2016 Thiết kế mồi đặc hiệu để nhân đoạn ADN chọn • Dựa trình tự đoạn ADN đặc trưng cho MON89034 gen đối chứng, thiết kế mồi • Mồi phải đảm bảo số yêu cầu cụ thể: đặc hiệu tạo sản phẩm độ dài khoảng 100 -200 bp, yêu cầu Tm, độ dài… • Có thể gắn mồi với đuôi phát quang không 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 35 Tách chiết ADN tổng số từ mẫu • Sử dụng phương pháp tách chiết ADN tổng số từ mẫu bánh mì cho đảm bảo chất lượng ADN tốt, không nhiễm tạp thành phần khác ảnh hưởng tới phản ứng PCR • ADN tổng số bao gồm ADN từ ngô chuyển gen ADN từ ngô thông thường ADN từ thành phần khác (lúa mì…) 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 36 18 4/19/2016 Chạy Real time PCR • Sử dụng cặp mồi thiết kế để nhân đoạn đích đặc trưng cho MON89034 ngô thông thường • Theo dõi trình nhân gen hệ thống máy PCR đặc biệt, tín hiệu thu thường xuyên có đoạn phát quang, sử dụng chất màu ADN (như SBGR) • Tính toán lượng ADN ban đầu tương ứng với MON89034 ngô thường • Xác định tỷ lệ ADN ban đầu ngô MON89034 ngô thường = tỷ lệ lượng ngô sử dụng dán nhãn hay không • Ví dụ tỷ lệ 1% dán nhãn hay không? (với Việt nam) 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 37 http://gmo-crl.jrc.ec.europa.eu/summaries/MON89034_validated_Method.pdf Một số sản phẩm kit thương mại • Eurofin (http://www.eurofins.de/kits-en/gmo-testkits/gmoident.aspx#kit_corn) • The GMO Investigator™ Kit (Biorad): sàng lọc dựa P-35s Tnos • Lifetechnology (http://www.lifetechnologies.com/order/catalog/en/US) • Qiagen (https://www.qiagen.com/vn/products/life-scienceresearch/food-safety-testing/gmo-dna-detection/) • Neogen (http://www.neogen.com/FoodSafety/FS_Product_List.asp?Test_Kit _Cat=205) 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 38 19 4/19/2016 Nhóm phương pháp dựa protein • Dựa sản phẩm protein biểu gen chuyển • Dựa đặc tính kích thước, pH: chạy điện di SDS chiều, chiều để phân tách protein thành băng riêng biệt, sau xác định tiếp cách phương pháp khác • Nhóm phương pháp sử dụng phản ứng miễn dịch kháng thể (antibody) • Lai western blot • ELISA • Sắc ký miễn dịch 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 39 ELISA – nguyên tắc • Mỗi protein thường có kháng thể đặc hiệu cho (liên kết với protein) sử dụng kháng thể đặc hiệu để phát protein • Enzyme Linked Immunosorbent Assay: phản ứng miễn dịch liên kết enzyme 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 40 20 4/19/2016 ELISA - kết Cơ chất S chuyển hoá Enzyme tạo sản phẩm có màu (hấp phụ UV vis) định lượng sản phẩm lượng protein 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 41 ELISA – ưu điểm • Chuẩn bị mẫu không phức tạp Nhanh (2-4 tiếng, bao gồm chuẩn bị mẫu) • Sử dụng tốt cho định tính bán định lượng • Chi phí rẻ ($10-50) • Phương pháp thực đơn giản • Có tính kinh tế sơ với pp dựa ADN • Cần kỹ so với pp dựa ADN • Thiết bị đơn giản hơn, rẻ tiền 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 42 21 4/19/2016 ELISA –nhược điểm • Độ nhạy thấp phương pháp dựa ADN, khoảng 0.5%-1% GMO • ELISA Kit cần bảo quản tốt 4°C • Chi phí thiết bị mức trung bình (máy đọc vi phiến ELISA) • Cần kháng thể đặc hiệu: không có, thời gian tạo kháng thể đặc hiệu cho 4/19/2016 43 Các phương pháp xác định GMO/GMF ELISA –nhược điểm (tiếp) • Định lượng dựa protein không xác biến thiên hàm lượng tác động bên thời tiết, điều kiện dinh dưỡng • Chỉ áp dụng cho trưòng hợp protein biểu tạo lượng đủ phát hiện, không áp dụng với truờng hợp có protein nội sinh giống protein đưa vào • Yêu cầu cao cấu trúc protein: không biến tính, không bị gắn thêm đoạn protein hay polysacharite khác 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 44 22 4/19/2016 Sắc ký miễn dịch – Nguyên tắc 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 45 Sắc ký miễn dịch – Kết Âm tính 4/19/2016 Dương tính Các phương pháp xác định GMO/GMF 46 23 4/19/2016 Sắc ký miễn dịch – Ưu điểm • Đơn giản, sử dụng thực địa • Không cần đào tạo • Chuẩn bị mẫu nhanh đơn giản • Phép thử định tính nhanh (5-10 phút) • Rẻ (AUS$5-20) • Bảo quản que thử nhiệt độ thường • Không cần thiết bị đắt tiền 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 47 Sắc ký miễn dịch – Nhược điểm • Độ nhạy thấp (~1% (w/w) GM protein) • Cần kháng thể đặc hiệu thời gian tạo kháng thể thường kéo dài vài tháng, vài năm • Mỗi que thử phép kiểm tra • Nhiều GMO không biểu đủ lượng protein tái tổ hợp cho phép thử • Chỉ phù hợp cho phép thử nhanh, đối tượng chưa qua công đoạn chế biến 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 48 24 4/19/2016 Phương pháp khác • Sử dụng ống nghiệm: kháng thể cố định chất mang, ví dụ hạt nano carbon, phản ứng miễn dịch tốt có di chuyển hạt chất mang kháng thể 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 49 Phương pháp dựa protein – Ưu điểm chung • Rẻ tiền, đơn giản • Chuẩn bị mẫu đơn giản • Không đòi hỏi kỹ cao • Phù hợp cho sản phẩm chưa qua chế biến (đặc biệt tác động làm biến tính protein) • Nhanh 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 50 25 4/19/2016 Phương pháp dựa protein – nhược điểm chung • Cần có kháng thể đặc hiệu với protein đích • Sự tương tác kháng thể với protein khác có cấu trúc tương tự • Không phù hợp để sử dụng cho phép thử sàng lọc tính đặc hiệu kháng thể • Hàm lượng protein tế bào (từ phần sinh vật) khác nhau, áp dụng protein biểu • Thường cho số tuyệt đối lượng protein, thực tế để định sản phẩm có phải dán nhãn hay không, cần tỷ lệ tương đối • Không phù hợp sử dụng để kiểm soát trôi gen protein bị thay đổi từ gen chuyển từ cá thể sang cá thể khác 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 51 Một số kít thương mại • EnviroLogix (http://www.envirologix.com/artman/publish/cat_index_5.shtml) Mẫu: Corn leaf or seed tissue LOD (Limit of Detection): Presence or absence Reagents: Extraction buffer (provided) Results In: 10 minutes or less 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 52 26 4/19/2016 Một số kít thương mại • Agrastrip, Agraquant ( http://www.romerlabs.com/en/products/gmo/) 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 53 Một số phương pháp phát GMO khác • Phương pháp sử dụng phổ cận hồng ngoại (Near Infrared (NIR) Spectroscopy) • Phương pháp xác định phổ axit béo (áp dụng cho giống biến đổi gen có thay đổi axit béo • Lai phân tử DNA (Southern blot) • Lai phân tử protein (western blot) 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 54 27 4/19/2016 Các bước kiểm tra GMO mẫu • Quy trình lấy mẫu • Lấy mẫu cần đại diện cho toàn lô mẫu, đặc biệt mẫu thô (dạng hạt rời) độ đồng thấp • Cần quan tâm tới: kế hoạch lấy mẫu, cỡ mẫu, mẫu đại diện, chuẩn bị mẫu, phân tích báo cáo kết 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 55 Cỡ mẫu • Quyết định độ nhạy phương pháp (LOD), phải đảm bảo đủ lớn phép phát đối tượng cần phân tích độ nhạy yêu cầu, đặc biệt với mẫu không đồng nhất, cỡ mẫu nhỏ, không đủ nhạy để phát GMO • Cỡ mẫu lớn giảm rủi ro cho người bán người mua Nhưng cỡ mẫu cần phải phù hợp với số lượng mẫu cần phân tích, chi phí độ nhạy phát • Tỷ lê thành phần cần xác định định cỡ mẫu, quy trình tách chiết thu nhận thành phần xác định định cỡ mẫu 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 56 28 4/19/2016 Cỡ mẫu • Công thức tính cỡ mẫu GIPSA (USDA) • 1-(r/100) = (1-(p/100))n • n: cỡ mẫu (số hạt) • p: % số hạt biến đổi gen mẫu • r: xác xuất từ chối lô mẫu • Ví dụ: người mua chấp nhận ngưỡng tỷ lệ hạt GM 1%, xác xuất từ chối lô hàng 5%, số hạt cần lấy mẫu: 299 hạt Nếu người mua cấp nhận ngưỡng 0.5%, độ tin cậy 95%, số hạt cần cho mẫu 598 hạt Nếu ngưỡng chấp nhận 5%, cỡ mẫu 60 hạt 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 57 Chuẩn bị phân tích mẫu • Cần nghiền nhỏ mẫu • Hạn chế nhiễm tạp chéo từ dụng cụ lấy mẫu, vận chuyển bảo quản • Phương pháp tách chiết cần đảm bảo thu nhận đủ lượng chất lượng ADN (hoặc protein) để phân tích • Phân tích mẫu với phương pháp thích hợp tuỳ theo mục đích phân tích 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 58 29 [...]... % GMO 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 29 Ưu điểm chung của các phương pháp sử dụng PCR • Có thể sử dụng cho Định tính định lượng • Có thể sử dụng cho sàng lọc GMO xác định sự kiện cụ thể • Dựa trên ADN, tất cả tế bào đều có như nhau • Có thể định lượng tương đối • Độ nhạy cao 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 30 15 4/19/2016 Nhược điểm chung của các phương pháp sử dụng PCR •... động ổn định trong mọi điều kiện, có mặt trong mọi giống 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 27 Phương pháp PCR định lượng 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 28 14 4/19/2016 Phương pháp PCR định lượng • Real time PCR = PCR có theo dõi sự nhân lên của sản phẩm gen • Sử dụng các phương án phát quang cường độ tỷ lệ thuận với sản phẩm nhân gen để theo dõi: SYGR, Taqman… Dựa trên các giá... minutes or less 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 52 26 4/19/2016 Một số kít thương mại • Agrastrip, Agraquant ( http://www.romerlabs.com/en/products/gmo/) 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 53 Một số phương pháp phát hiện GMO khác • Phương pháp sử dụng phổ cận hồng ngoại (Near Infrared (NIR) Spectroscopy) • Phương pháp xác định phổ axit béo (áp dụng cho các giống biến đổi gen có sự... vẩy Các phương pháp xác định GMO/GMF Antoansinhhoc.vn 23 Phương pháp PCR định tính xác định cấu trúc đoạn gen chuyển • Dựa trên trình tự vùng tiếp giáp giữa promoter và gen mã hoá vốn không có sẵn trong tự nhiên • Xác định được gen sử dụng cụ thể • Có thể sử dụng để phát hiện sự trôi gen vào cây trồng khác • Không xác định được sự kiện chuyển gen cụ thể • Độ nhạy 0.1% GMO 4/19/2016 Các phương pháp xác. .. nuôi), để xác định, có thể sử dụng phương pháp gì? Định tính sàng lọc dựa trên vùng promoter/terminator • Việt nam mới chỉ chấp nhận sự kiện đậu tương MON 89788, với sản phẩm khô đậu tương cần sử dụng các phương pháp gì để quyết định cho sản phẩm khô đậu tương được phép đưa vào Việt nam? Định tính sàng lọc định tính xác định sự kiện chuyển gen MON89788 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 26... (http://www.neogen.com/FoodSafety/FS_Product_List.asp?Test_Kit _Cat=205) 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 38 19 4/19/2016 Nhóm các phương pháp dựa trên protein • Dựa trên sản phẩm protein biểu hiện của gen chuyển • Dựa trên đặc tính kích thước, pH: chạy điện di SDS 1 chiều, 2 chiều để phân tách protein thành các băng riêng biệt, sau đó có thể xác định tiếp bằng cách phương pháp khác • Nhóm phương pháp sử dụng phản ứng miễn dịch bằng... Các phương pháp xác định GMO/GMF 45 Sắc ký miễn dịch – Kết quả Âm tính 4/19/2016 Dương tính Các phương pháp xác định GMO/GMF 46 23 4/19/2016 Sắc ký miễn dịch – Ưu điểm • Đơn giản, sử dụng trên thực địa • Không cần đào tạo • Chuẩn bị mẫu nhanh đơn giản • Phép thử định tính nhanh (5-10 phút) • Rẻ (AUS$5-20) • Bảo quản que thử ở nhiệt độ thường • Không cần thiết bị đắt tiền 4/19/2016 Các phương pháp xác. ..4/19/2016 Các vùng ADN được sử dụng • Vùng A: sàng lọc • Vùng B: đặc trưng cấu trúc đoạn ADN chuyển, nhưng có thể trong nhiều cây trồng khác nhau, sử dụng để định tính • Vùng C: đặc trưng cho sự kiện chuyển gen cụ thể, có thể sử dụng định tính và định lượng 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 21 Phương pháp PCR định tính sàng lọc • Xác định sản phẩm có chứa GMO hay không? • Dưa trên các trình... là 60 hạt 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 57 Chuẩn bị và phân tích mẫu • Cần nghiền nhỏ mẫu • Hạn chế sự nhiễm tạp chéo từ các dụng cụ lấy mẫu, vận chuyển và bảo quản • Phương pháp tách chiết cần đảm bảo thu nhận được đủ lượng và chất lượng ADN (hoặc protein) để phân tích • Phân tích mẫu với phương pháp thích hợp tuỳ theo mục đích phân tích 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 58 29... 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 54 27 4/19/2016 Các bước kiểm tra GMO trong mẫu • Quy trình lấy mẫu • Lấy mẫu cần đại diện cho toàn bộ lô mẫu, đặc biệt là mẫu thô (dạng hạt rời) độ đồng nhất thấp • Cần quan tâm tới: kế hoạch lấy mẫu, cỡ mẫu, mẫu đại diện, chuẩn bị mẫu, phân tích và báo cáo kết quả 4/19/2016 Các phương pháp xác định GMO/GMF 55 Cỡ mẫu • Quyết định độ nhạy của phương pháp (LOD),