Nghiên một số đặc tính sinh học của vi khuẩn salmonella spp và staphylococcus aureus ô nhiễm trong thịt lợn bán tại một số chợ ở bắc giang

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM LƯU NGỌC TUẤN NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA VI KHUẨN SALMONELLA SPP VÀ STAPHYLOCOCCUS AUREUS Ô NHIỄM TRONG THỊT LỢN BÁN TẠI MỘT SỐ CHỢ Ở BẮC GIANG LUẬN VĂN THẠC SỸ THÚ Ý THÁI NGUYÊN, NĂM 2013 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM LƯU NGỌC TUẤN NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA VI KHUẨN SALMONELLA SPP VÀ STAPHYLOCOCCUS AUREUS Ô NHIỄM TRONG THỊT LỢN BÁN TẠI MỘT SỐ CHỢ Ở BẮC GIANG Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.64.01.01 LUẬN VĂN THẠC SỸ THÚ Y Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS ĐẶNG XUÂN BÌNH THÁI NGUYÊN, NĂM 2013 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố công trình khác Tôi xin cam đoan thông tin trích dẫn luận văn rõ nguồn gốc Thái nguyên, ngày tháng 11 năm 2013 Tác giả luận văn Lưu Ngọc Tuấn ii LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, với nỗ lực cố gắng thân, xin đặc biệt bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy: PGS.TS Đặng Xuân Bình, ThS Đặng Thị Mai Lan người trực tiếp hướng dẫn trình nghiên cứu hoàn thành luận văn Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu thầy cô giáo khoa Sau Đại học khoa Chăn nuôi Thú y - Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên giành nhiều thời gian, công sức giúp đỡ trình học tập thực đề tài Tôi xin cảm ơn cô anh, chị, em Bộ môn công nghệ sinh học Viện Công nghệ sinh học, tập thể Phòng Nông nghiệp, Trạm Thú y huyện Tân Yên Yên Thế địa bàn tỉnh Bắc Giang bạn đồng nghiệp đặc biệt gia đình tạo điều kiện thuận lợi giúp đỡ trình hoàn thành luận văn Thái nguyên, ngày tháng 11 năm 2013 Tác giả luận văn Lưu Ngọc Tuấn iii MỤC LỤC LỜI CAM ĐOAN i LỜI CẢM ƠN .ii MỤC LỤC iii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT vii DANH MỤC CÁC BẢNG viii DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ viii DANH MỤC CÁC HÌNH x MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Mục tiêu nghiên cứu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài .2 3.1 Ý nghĩa khoa học 3.2 Ý nghĩa thực tiễn Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Ngộ độc thực phẩm .3 1.2 Nguyên nhân gây ngộ độc thực phẩm vi sinh vật 1.3 Một số đặc điểm vi khuẩn Salmonella Staphylococcus aureus .9 1.3.1 Một số đặc điểm vi khuẩn Salmonella .9 1.3.1.1 Hình thái tính chất bắt màu .9 1.3.1.2 Đặc điểm nuôi cấy 1.3.1.3 Sức đề kháng 10 1.3.1.4 Đặc tính sinh hóa 11 1.3.1.5 Cấu trúc kháng nguyên 11 1.3.1.6 Yếu tố gây bệnh 12 1.3.2 Một số đặc điểm vi khuẩn Staphylococcus aureus 17 1.3.2.1 Hình thái tính chất bắt màu .17 iv 1.3.2.2 Đặc điểm nuôi cấy 17 1.3.2.3 Sức đề kháng 19 1.3.2.4 Đặc tính sinh hoá 19 1.3.2.5 Cấu trúc kháng nguyên 20 1.3.1.6 Yếu tố gây bệnh 20 1.4 Các biện pháp khống chế ô nhiễm thịt ngộ độc thực phẩm vi khuẩn 28 1.5 Những nghiên cứu Salmonella Staphylococcus aureus gây 30 1.5.1 Những nghiên cứu nước 30 1.5.1.1 Những nghiên cứu nước Salmonela 30 1.5.1.2 Những nghiên cứu nước Staphylococcus aureus 32 1.5.2 Những nghiên cứu nước .34 1.5.2.1 Những nghiên cứu nước Salmonella 34 1.5.2.2 Những nghiên cứu nước Staphylococcus aureus 35 Chương NỘI DUNG, VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 38 2.1 Nội dung nghiên cứu 38 2.2 Vật liệu dùng cho nghiên cứu 38 2.2.1 Đối tượng nghiên cứu 38 2.2.2 Địa điểm nghiên cứu 38 2.2.3 Mẫu bệnh phẩm dùng phân lập vi khuẩn 38 2.2.4 Hóa chất dụng cụ nghiên cứu 38 2.2.4.1 Thiết bị dụng cụ thí nghiệm 38 2.2.4.2 Hóa chất thí nghiệm .39 2.2.4.3 Bố trí thí nghiệm 41 2.3 Phương pháp nghiên cứu .41 2.3.1 Phương pháp lấy mẫu xét nghiệm 41 2.3.2 Phương pháp xác định tiêu vi khuẩn Salmonella thịt lợn tươi 41 v 2.3.3 Phương pháp xác định tiêu vi khuẩn Staphylococcus aureus thịt lợn tươi 42 2.3.4 Phương pháp xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh hoá dược chủng vi khuẩn Salmonella Staphylococcus aureus phân lập .44 2.3.5 Các phương pháp xác định trình tự DNA nhân dòng, xác định gen liên quan đến độc tố enterotoxin Staphylococcus aureus .45 2.3.6 Phương pháp xử lý số liệu 48 Chương KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU VÀ THẢO LUẬN 49 3.1 Xác định tỷ lệ nhiễm số loại vi khuẩn thịt lợn tươi số chợ Bắc Giang 49 3.1.1 Xác định tiêu vi khuẩn nhiễm thịt lợn tươi số chợ Bắc Giang 49 3.1.1.1 Xác định tiêu Salmonella spp thịt lợn tươi 49 3.1.1.2 Xác định tiêu Staphylococcus aureus nhiễm thịt lợn tươi 50 3.1.2 Xác định tiêu vi khuẩn nhiễm thịt lợn tươi theo thời gian bán hàng .54 3.1.2.1 Xác định tiêu vi khuẩn Salmonella spp nhiễm thịt tươi theo thời gian bán hàng 54 3.1.2.2 Xác định tiêu vi khuẩn Staphylococcus aureus nhiễm thịt tươi theo thời gian bán hàng 55 3.1.3 Xác định tiêu vi khuẩn nhiễm thịt lợn tươi theo mùa vụ .58 3.1.3.1 Xác định tiêu vi khuẩn Salmonella spp nhiễm thịt lợn tươi theo mùa vụ 58 3.1.3.2 Xác định tiêu vi khuẩn Staphylococcus aureus nhiễm thịt lợn tươi theo mùa vụ 60 3.2 Giám định đặc tính sinh vật, hoá học chủng vi khuẩn phân lập được63 vi 3.2.1 Giám định đặc tính sinh vật, hoá học chủng vi khuẩn Salmonella spp63 3.2.2 Giám định đặc tính sinh vật, hoá học chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus phân lập .65 3.3 Xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh hoá dược chủng vi khuẩn Salmonella spp Staphylococcus aureus phân lập 66 3.3.1 Xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh hoá dược chủng vi khuẩn Salmonella spp .66 3.3.2 Xác định tính mẫn cảm với số loại kháng sinh hoá dược chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus phân lập 67 3.4 Xác định serotype chủng Salmonella phân lập 69 3.5 Đề xuất biện pháp phòng khống chế ngộ độc thực phẩm ô nhiễm vi khuẩn69 3.5.1 Kết tách chiết DNA tổng số vi khuẩn Salmonella 69 3.5.2 Kết tách DNA tổng số vi khuẩn Staphylococcus aureus .70 3.6 Đề xuất biện pháp phòng khống chế ngộ độc thực phẩm ô nhiễm vi khuẩn 72 KẾT LUẬN 74 TÀI LIỆU THAM KHẢO .75 MỘT SỐ HÌNH ẢNH MINH HỌA CHO ĐỀ TÀI 81 PHỤ LỤC 83 vii DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT TCVN : Tiêu chuẩn Việt Nam NĐTP : Ngộ độc thực phẩm VSATTP : Vệ sinh an toàn thực phẩm viii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1: Tính chất mẫn cảm hemolysine Staphylococcus aureus sản sinh 21 Bảng 3.1: Kết xác định vi khuẩn Salmonella spp nhiễm thịt lợn tươi 49 Bảng 3.2: Kết xác định vi khuẩn Staphylococcus aureus nhiễm thịt lợn tươi 51 Bảng 3.3: Kết xác định tiêu vi khuẩn Salmonella spp thịt tươi theo thời gian bán hàng 54 Bảng 3.4: Kết xác định tiêu vi khuẩn Staphylococcus aureus thịt tươi theo thời gian 56 Bảng 3.5: Kết xác định tiêu vi khuẩn Salmonella spp nhiễm thịt lợn tươi theo mùa vụ 59 Bảng 3.6: Kết xác định tiêu vi khuẩn Staphylococcus aureus nhiễm thịt lợn tươi theo mùa vụ 61 Bảng 3.7: Kết giám định số đặc tính sinh vật hóa học vi khuẩn Salmonella spp phân lập 64 Bảng 3.8: Kết giám định số đặc tính sinh vật hóa học vi khuẩn Staphylococcus aureus phân lập 65 Bảng 3.9: Kết thử tính mẫn cảm với kháng sinh hoá dược vi khuẩn Salmonella spp phân lập 66 Bảng 3.10: Kết thử tính mẫn cảm với kháng sinh hoá dược vi khuẩn Staphylococcus aureus phân lập 68 Bảng 3.11: Kết xác định serotype chủng Salmonella phân lập kháng huyết 69 Bảng 3.12: Kết đo OD chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus 71 71 kiểm tra nồng độ độ tinh DNA tổng số theo phương pháp phổ kế (phương pháp đo OD) Phương pháp dựa vào hấp thụ cực đại tia tử ngoại bước sóng 260nm (A260nm) acid nucleic bước sóng 280nm (A280nm) protein Để xác định nồng độ DNA ta dựa vào số A260, đơn vị A260nm ứng với nồng độ acid nucleic sợi kép đạt 50µg/ml Dựa vào tỉ lệ A260nm / A280nm ta xác định độ tinh sản phẩm tách DNA Một sản phẩm tách DNA coi tinh tỉ lệ A260nm / A280nm nằm khoảng 1,8 - 2,0 Nồng độ DNA (µg/ml) tính theo công thức: CDNA = A260nm x 50 x d (d: độ pha loãng mẫu) Kết kiểm tra 10 mẫu ngẫu nhiên có mẫu thu lượng DNA có nồng độ đủ lớn độ tinh cao Bảng 3.12: Kết đo OD chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus Nồng độ DNA (ng/µl) Độ tinh (260/280) TT Tên mẫu BG1 88,1 1,82 BG2 13,9 1,89 BG3 BG4 72,9 14,1 1,77 1,95 Hình 3.2: Điện di kiểm tra sản phẩm tách DNA tổng số 72 Giếng số 1: DNA tổng số chủng BG1 Giếng số 2: DNA tổng số chủng BG2 Giếng số 3: DNA tổng số chủng BG3 Giếng số 4: DNA tổng số chủng BG4 Kết điện di hình cho thấy DNA tổng số chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus nghiên cứu rõ nét, vạch phụ kèm theo kết đo OD mẫu DNA tổng số có tỉ lệ A260nm / A280nm nằm khoảng 1,8-2,0; chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus đủ điều kiện để nhân dòng đoạn gen SEB kĩ thuật PCR 3.6 Đề xuất biện pháp phòng khống chế ngộ độc thực phẩm ô nhiễm vi khuẩn Qua trình thực đề tài xin đưa số biện pháp phòng khống chế ngộ độc thực phẩm sau: - Gia súc giết mổ phải rõ nguồn gốc, khỏe mạnh không sử dụng thịt gia súc chết bệnh, chết không rõ nguyên nhân Tiêu chuẩn hóa việc giết thịt chế độ vệ sinh thú y sản xuất lò mổ đặc biệt lưu ý tới lò mổ tư nhân nước ta - Cần xây dựng sở giết mổ tập chung để quản lý vệ sinh dịch bệnh tiện lợi cho việc đầu tư sở vật chất kỹ thuật Những sở giết mổ phải thiết kế xây dựng theo tiêu chuẩn ngành Phải có đầy đủ nước để giết mổ, pha lọc Hệ thống cống rãnh hợp lý để tránh nhiễm khuẩn vào thân thịt Khi pha lóc thân thịt, phải treo lên móc trách tiếp xúc với nhà khu vực làm nội tạng Kiểm tra thường xuyên nghiêm ngặt quy trình giết mổ để tránh nhiễm khuẩn trình giết mổ, pha lọc 73 - Vận chuyển sản phẩm sau giết mổ phải che chắn cẩn thận tránh để bụi bẩn bám vào - Kiểm tra vệ sinh thú y thịt chế độ vệ sinh thú y thị trường kể thị trường thú y nông thôn - Tại khu chợ cần có khu vực bán thịt riêng đảm bảo Bàn bán thịt phải làm vật liệu không thấm lau chùi trước sau bán Không để nội tạng gần thân thịt bày bán, phải có vật ngăn cách chúng, để tránh từ nội tạng nhiễm vào thân thịt Thịt bày bán phải che đậy cẩn thận, tránh ruồi muỗi mang vi khuẩn lây nhiễm vào thịt Không bán thịt thừa từ sáng sang chiều 74 KẾT LUẬN - Mức độ nhiễm vi khuẩn Salmonela địa điểm khác biệt rõ rệt cao, cao chợ Cao Thượng (20%) chợ Cầu Gồ chợ Nhã Nam có tỷ lệ nhiễm thấp (12,50%) - Mức độ nhiễm Staphylococcus aureus khác biệt rõ ràng theo địa điểm - Mức độ nhiễm vi khuẩn Salmonela Staphylococcus aureus có khác biệt theo thời gian bán hàng - Mức độ nhiễm vi khuẩn Salmonela Staphylococcus aureus có khác biệt theo mùa vụ (mùa xuân - hè cao mùa thu - đông) - Các chủng vi khuẩn Salmonella Staphylococcus aureus phân lập thể đặc tính sinh vật, hóa học đặc trưng tài liệu nước mô tả - Các chủng vi khuẩn Salmonella Staphylococcus aureus phân lập mẫn cảm với loại kháng sinh với tỷ lệ khác nhau: Mẫn cảm mạnh với Norfloxacin, SMX/TMP, Cephalexin; kháng thuốc cao với Clindamycin, Oxacill - Các chủng Staphylococcus aureus mẫn cảm với kháng sinh Norfloxacin, Gentamicin, Cephalexin, SMX/ TMP kháng với Colistin - Vi khuẩn Salmonella phân lập là: Salmonella anatum (33,33%); Salmonella typhimurium (50,00%); Salmonella weltevreden (16,67%) - DNA tổng số chủng vi khuẩn Salmonella nghiên cứu rõ nét, vạch phụ kèm theo Do sản phẩm tách DNA tổng số chủng vi khuẩn Salmonella sử dụng cho nghiên cứu DNA tổng số chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus nghiên cứu rõ nét, chủng vi khuẩn Staphylococcus aureus đủ điều kiện để nhân dòng đoạn gen SEB kĩ thuật PCR 75 TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu Tiếng Việt Võ Thị Trà An, Nguyễn Ngọc Tuân Lê Hữu Ngọc (2006), “Tình hình nhiễm Salmonella phân thân thịt (bò, heo, gà) số tỉnh phía Nam”, Tạp chí KHKT Thú y, tập 13, số - 2006 Ngô Văn Bắc (2007), Đánh giá ô nhiễm vi khuẩn thịt lợn sữa, lợn choai xuất khẩu, thịt gia súc tiêu thụ nội địa số sở giết mổ Hải Phòng - Giải pháp khắc phục, Luận văn thạc sĩ nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội Ngô Văn Bắc, Trương Quang (2008), “Khảo sát tình trạng ô nhiễm vi khuẩn thịt lợn sữa, lợn choai xuất số sở giết mổ địa bàn Hải Phòng”, Tạp chí khoa học phát triển (Đại học Nông nghiệp - Hà Nội) - Tập VI - Số 1, tr 21-25 Đặng Xuân Bình, Dương Thuỳ Dung (2010), “Xác định số loại vi khuẩn nhiễm thịt lợn chợ thành phố Thái Nguyên”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y - Tập XVII - Số 4, tr 49-55 Phùng Quốc Chướng (1995), Tình hình nhiễm Salmonella lợn vùng Tây Nguyên khả phòng trị Luận án PTS khoa học nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp I Hà Nội Đỗ Trung Cứ, Trần Thị Hạnh, Nguyễn Quang Tuyên (2001), “Kết phân lập xác định số yếu tố gây bệnh vi khuẩn Salmonella spp gây bệnh phó thương hàn số tỉnh miền núi phía Bắc”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y - Tập VIII - Số 3, tr 10-17 Đỗ Đức Diên (1999), Vai trò E coli Salmonella hội chứng tiêu chảy lợn Kim Bảng (Hà Nam) thử nghiệm số giải pháp phòng trị Luận án Thạc sỹ Nông nghiệp 76 Trương Thị Dung (2000) Khảo sát số tiêu vệ sinh thú y điểm giết mổ lợn địa bàn thành phố Hà Nội, Luận văn thạc sĩ nông nghiệp, ĐHNN I, HàNội Trần Quang Diên (2002), Nghiên cứu tình hình nhiễm, đặc tính gây bệnh Salmonella gallinarum pullorum gà công nghiệp chế kháng nguyên chẩn đoán Luận án Tiến sỹ nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp I, Hà Nội 10 Lã Quý Đôn, Trần Đáng, Nguyễn Thị Dụ, Phạm Duy Tường, Phạm Xuân Đà, Nguyễn Văn Sơn (2008), “Ngộ độc thực phẩm, nguyên nhân cách phòng tránh”, Tài liệu lưu hành nội bộ- Hà Nội 11 Trần Xuân Đông (2002) Khảo sát thực trạng hoạt động giết mổ gia súc, số tiêu vệ sinh thú y sở giết mổ địa bàn thành phố Hạ Long thị xã tỉnh Quảng Ninh, Luận văn thạc sĩ nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội 12 Trần Xuân Hạnh (1995), “Phân lập giám định vi khuẩn Salmonella lợn tuổi giết thịt” Tạp chí Khoa học kỹ thuật Thú y, số 3, tr 89-93 13 Đậu Ngọc Hào (2010), “Vi khuẩn Staphylococcus aureus ngộ độc thực phẩm nguồn gốc động vật”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y - Tập XVII - Số 5, tr 65-72 14 Đậu Ngọc Hào (2011), “An toàn sản phẩm chăn nuôi từ sản xuất tới tiêu dùng”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y - Tập XVIII - Số 1, tr 84-88 15 Hồ Văn Nam, Nguyễn Thị Đào Nguyên, Trương Quang, Phùng Quốc Chướng, Chu Đức Thắng, Phạm Ngọc Thạch (1997), “Tình hình nhiễm Salmonella vai trò Salmonella bệnh viêm ruột ỉa chảy lợn” Tạp chí Khoa học kỹ thuật thú y, số 2, tr 39-45 16 Lê Hữu Nghị, Tăng Mạnh Nhật (2005), “Tình trạng ô nhiễm vi sinh vật thịt qua giết mổ bày bán số chợ thành phố Huế”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y - Tập XII - Số 2, tr 97-99 77 17 Nguyễn Thị Nội, Nguyễn Ngọc Nhiên, Cù Hữu Phú, Nguyễn Thị Sở (1989), “Kết điều tra tình hình nhiễm vi khuẩn đường ruột số sở chăn nuôi lợn” Kết nghiên cứu khoa học kỹ thuật Thú y (19851989) Viện Thú y, NXB Nông nghiệp, Hà nội 1989, tr 50-53 18 Nguyễn Vĩnh Phước (1980), “Vi sinh vật học ứng dụng chăn nuôi”, Nxb Nông nghiệp - Hà Nội, tr 151-250 19 Nguyễn Thị Nguyệt Quế (2006), Khảo sát thực trạng hoạt động giết mổ, số tiêu vi sinh vật nhiễm thịt lợn nơi giết mổ bán chợ thuộc quận Long Biên (HàNội), Luận văn thạc sĩ nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội 20 Lê Minh Sơn (2002), “Kết phân lập, xác định số độc tố độc lực vi khuẩn Staphylococcus aureus thịt lợn vùng hữu ngạn Sông Hồng”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y - Tập IX - Số 3, tr 24-28 21 Lê Minh Sơn (2003), Nghiên cứu số vi khuẩn gây ô nhiễm thịt lợn vùng hữu ngạn sông Hồng Luận án Tiến sỹ Nông nghiệp 22 Đinh Quốc Sự (2005), Thực trạng hoạt động giết mổ gia súc tỉnh, số tiêu vệ sinh thú y sở giết mổ địa bàn thị xã Ninh Bình - tỉnh Ninh Bình, Luận văn thạc sĩ nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội 23 Hồ Sưởng, Lương Đức Phẩm, Lê Văn Tố, Nguyễn Thị Hoa (1982), “Vi sinh vật bảo quản chế biến thực phẩm”, Tập 1, Nxb Nông nghiệp - Hà Nội, tr 65-78 24 Diệp Thế Tài, Nguyễn Thị Nguyệt, Trương Xuân Liên, Phẩm Minh Thu (2005), “Phát đồng thời gen mã hoá độc tố SEA, SEB Staphylococcus aureus thức ăn nhanh thành phố Hồ Chí Minh”, Đề tài Nghiên cứu khoa học - Viện Pasteur thành phố Hồ Chí Minh 25 Lê Văn Tạo (1993), "Phân lập, định danh vi khuẩn Salmonella gây bệnh cho lợn", Báo cáo khoa học mã số KN 02-15, NXB Nông Nghiệp, Hà Nội 78 26 Lê Thắng (1999), Khảo sát số tiêu vệ sinh thú y điểm giết mổ nhiễm khuẩn thịt lợn tiêu thụ nội địa thành phố Nha Trang Khánh Hoà, Luận văn thạc sĩ Nông nghiệp, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội 27 Nguyễn Như Thanh, Nguyễn Bá Hiên, Trần Thị Lan Hương (2001) Vi sinh vật Thú y NXB nông nghiệp Hà Nội 28 Nguyễn Văn Thiện (2000), Phương pháp nghiên cứu chăn nuôi, Nxb Nông nghiệp 29 Võ Thị Bích Thủy (2001), Nghiên cứu tình hình ô nhiễm vi khuẩn Salmonella spp thịt bò, thịt lợn, thịt gà Phân loại định typ vi khuẩn Salmonella Typhimurium Salmonella Enteritidis, luận văn thạc sỹ khoa học Nông Nghiệp, Đại Học Nông Nghiệp I, Hà Nội 30 Nguyễn Quang Tuyên, Hà Văn Quyết (2005), “Kết phân lập số vi khuẩn gây bệnh viêm vú bò sữa tỉnh Vĩnh Phúc”, Tạp chí Nông nghiệp Phát triển nông thôn tháng 10-2005, tr 66-69 31 Nguyễn Quang Tuyên, Lê Xuân Thăng (2009), “Kết xác định ô nhiễm số vi khuẩn thịt lợn khu vực thành phố Yên Bái”, Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y - Tập XVI - Số 3, trang 29-33 32 Đỗ Ngọc Thuý, Cù Hữu Phú, Văn Thị Hường, Đào Thị Hảo, Nguyễn Xuân Huyên, Nguyễn Bạch Huệ (2006), “Đánh giá tình hình nhiễm số loại vi khuẩn gây bệnh thịt tươi địa bàn Hà Nội”, Tạp chí khoa học kỹ thuật Thú y - Tập XIII - Số 33 Tiêu chuẩn Việt Nam (1990), Thịt sản phẩm thịt - Phương pháp phát đếm số Salmonella, TCVN 5153 34 Tiêu chuẩn Việt Nam (1990), Thịt sản phẩm thịt - Phương pháp phát đếm số Staphylococcus aureus, TCVN 5156 35 Tiêu chuẩn Việt Nam (2002), Thịt sản phẩm thịt - Lấy mẫu chuẩn bị mẫu thử, TCVN 4833-1và TCVN 4833-2 36 Tiêu chuẩn Việt Nam (2002), Thịt tươi - Quy định kỹ thuật, TCVN 7046 79 II Tài liệu tiếng nước 37 Baba T., Bae T., Schneewind O., Takeuchi F., Hiramatsu K (2008), Genome sequence of Staphylococcus aureus strain Newman and comparative analysis of staphylococcal genomes: polymorphism and evolution of two major pathogenicity islands, J Bacteriol, 190(1), 300-310 38 Barnes D.M Scrensin D.K (1975), Salmonellosis Discases of Sune Fourth Edition, pp 554 - 564 39 Bradley S.G (1979), “Cellular and molecular mechanisms of action of bacterial endotoxins” Ann Rev Microbiol, 33, p 67-94 40 Bruce A G., Kermit D H (2009), CBRNE - Staphylococcal enterotoxin B, http://emedicine.medscape.com/article/830715-overview 41 Clarke G.J, Wallis T.S, Starkey W.J, Collins J, Spencer A.J, Daddon G.J, Osborne M.P, Candy D.C and Stephen I (1988), “Expression of an antigen in strains of Salmonella typhimurium with antibodies tocholeratoxin” Med Microbiol, 25, p 139-146 42 Krause M, Fang F.C, Gedaily A.E, Libby S and Guiney D.G (1995), Mutational Ananysis of SpvR Binding to DNA in the Regulation of the Salmonella Plasmid Virulence Operon Academic Press Inc Plasmid, 34, p 37-47 43 Kluytmans J, van Belkum A, Verbrugh H (July 1997) “Nasal carriage of Staphylococcus aureus: epidemiology, underlying mechanisms, and associated risks” Clin Microbiol Rev 10 (3): 505-20 PMID 9227864 PMC: 172932 44 Haeghebaer S.,Le Q F., Gallay A., Bouvet P., Gomez M., Vaillant V (2002), Les toxi-infections alimentaires collectives en France, en 1999 et 2000, bull Epidémiol Bebdo, 23, 105-109 45 Peteron J.W (1980), “Salmonella toxin” Pharm Ather, VII, p 719-724 80 46 Quinn P J, Carter M E, Markey B K, Carter G R (1994) Clinical Veterinary Microbiology Wolfe publishing Mosby-Year book Europe Limited, Edinburgh 47 Quinn P.J, Carter M.E, Makey B, Carter G.R (2002), Clinical veterinary microbiology Wolfe Pulishing, London WC1 H9LB, England, p 209-236 48 Rahman K, De Grandis S.A, Clarke R.C, McEwen S.A, Galán J.E, Ginocchio C, Curtiss III R and Gyles C.L (1992), “Amplification of a invA gene sequence of Salmonella typhimurium by polymerase chain reaction as a specific method of Salmonella” Mol Cell Probes, 6, p 271-279 49 Sambrook J., Russell D W, (2001), Molecular Cloning: A labroratory Manual, Cold Spring Harbor Labroatory Press, NewYork 50 Steven R G., Derrick E F., Gordon L A (2005), Insights on Evolution of Virulence and Resistance from the Complete Genome Analysis of an Early Methicillin-Resistant Staphylococcus aureus Strain and a BiofilmProducing Methicillin-Resistant Staphylococcus epidermidis Strain, J Bacteriol, 187(7), 2426-2438 PMCID: PMC1065214 51 Tawaratsumida K, J.Biol Chem 2009; 284:9147-9152 52 Wallace.,D.J, Van Gilder, T., Shalow, S., Fiorentino, T., Segler, S.D., Smith, K.E., Shiferaw, B., Etzel, R., Garthright, W.E., Angulo, F.J and the FoodNet Working Group (2000) Incidence of Foodborne Illesses Reported by the Foodbrne Disease Active Surveillance Network (FoodNet)-1997.J Food Prot 63:807 - 809 53 Yves L.L., Florence B., Michel G (2003), satphylococcus aureus and food poisoning, Genet Mol Res, 2(1),63-76 81 MỘT SỐ HÌNH ẢNH MINH HỌA CHO ĐỀ TÀI Ảnh 1: Khuẩn lạc Staphylococccus aurus môi trường thạch Chapman Stone Ảnh 2: Khuẩn lạc Salmonella môi trường thạch XLD Ảnh 3: Phản ứng ngưng tụ huyết tương Staphilococcus aureus Ảnh 4: Phản ứng lên men đường sản sinh H2S Salmonella Ảnh 5: Thử tính mẫn cảm với kháng sinh hoá dược vi khuẩn Salmonella spp phân lập Ảnh 6: Thử tính mẫn cảm với kháng sinh hoá dược vi khuẩn Stahylococcus aureus phân lập 82 Ảnh 7: Bệnh tích chuột sau Ảnh 8: Bệnh tích chuột sau thử thử độc lực vi khuẩn Salmonella độc lực vi khuẩn phâp lập Staphylococcus aureus phâp lập Ảnh 9: Nhuộm Gram cho vi khuẩn Ảnh 10: Nhuộm Gram cho vi khuẩn Salmonella Staphyloccocus areus 83 PHỤ LỤC Xử lý thống kê sinh vật học Minitab One-way ANOVA: So KL versus Dia Diem Source Dia Diem Error Total S = 7.062 Level CG CT NN N 40 40 40 DF 117 119 SS 40.9 5834.4 5875.3 MS 20.5 49.9 R-Sq = 0.70% Mean 1.975 3.400 2.575 StDev 5.920 7.622 7.514 F 0.41 P 0.664 R-Sq(adj) = 0.00% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * ) ( * -) ( * ) + -+ -+ -+ 0.0 1.5 3.0 4.5 Pooled StDev = 7.062 One-way ANOVA: CFU/g versus Dia Diem Source Dia diem Error Total S = 200.8 Level CG CT NN N 40 40 40 DF 117 119 SS 508596 4719010 5227606 R-Sq = 9.73% Mean 64.6 222.6 124.6 StDev 40.0 285.0 195.3 Pooled StDev = 200.8 MS 254298 40333 F 6.30 P 0.003 R-Sq(adj) = 8.19% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( -* -) ( -* -) ( -* ) + -+ -+ -+ 80 160 240 84 One-way ANOVA: So KL versus Thoi diem Source Thoi diem Error Total S = 6.670 Level Chiều Sáng N 60 60 DF 118 119 SS 625.6 5249.7 5875.3 MS 625.6 44.5 R-Sq = 10.65% Mean 4.933 0.367 StDev 9.315 1.484 F 14.06 P 0.000 R-Sq(adj) = 9.89% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+-( * -) ( * -) -+ -+ -+ -+-0.0 2.0 4.0 6.0 Pooled StDev = 6.670 One-way ANOVA: CFU versus Thoi diem Source Thoi diem Error Total S = 256.4 Level Chiều Sáng N 60 60 DF 118 119 SS 394923 7759318 8154241 R-Sq = 4.84% Mean 217.8 103.1 StDev 302.3 200.3 Pooled StDev = 256.4 MS 394923 65757 F 6.01 P 0.016 R-Sq(adj) = 4.04% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( * ) ( -* ) -+ -+ -+ -+ -70 140 210 280 85 One-way ANOVA: So KL versus Mua vu Source Mua vu Error Total DF 118 119 S = 6.747 Level TD XH N 60 60 SS 504.3 5371.0 5875.3 MS 504.3 45.5 R-Sq = 8.58% Mean 0.600 4.700 StDev 3.264 8.966 F 11.08 P 0.001 R-Sq(adj) = 7.81% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ ( * ) ( -* ) + -+ -+ -+ 0.0 2.0 4.0 6.0 Pooled StDev = 6.747 One-way ANOVA: CFU versus Mua vu Source Mua vu Error Total DF 118 119 S = 239.5 Level TD XH N 60 60 SS 1385284 6768956 8154241 MS 1385284 57364 R-Sq = 16.99% Mean 53.0 267.9 StDev 115.1 318.6 Pooled StDev = 239.5 F 24.15 P 0.000 R-Sq(adj) = 16.29% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -( -* -) ( -* -) -+ -+ -+ -+ -0 100 200 300 [...]... tại một số chợ ở Bắc Giang 2 Mục tiêu nghiên cứu - Xác định tỷ lệ nhiễm một số loại vi khuẩn và Salmonella spp, Staphylococcus aureus trong thịt lợn ở một số chợ của tỉnh Bắc Giang - Nghiên cứu một số đặc tính sinh học của vi khuẩn Salmonella spp và Staphylococcus aureus ô nhiễm trong thịt lợn 3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài 3.1 Ý nghĩa khoa học - Cung cấp tư liệu khoa học về loài Salmonella. .. trên thịt lợn tươi và gây ngộ độc thực phẩm trên người, với mục đích cung cấp tư liệu khoa học có liên quan về đặc điểm dịch tễ, đặc tính sinh học của mầm bệnh đặc tính kháng nguyên để từ đó lựa chọn những biện pháp phòng NĐTP phù hợp, từng bước khống chế bệnh chúng tôi tiến hành đề tài: Nghiên một số đặc tính sinh học của vi khuẩn Salmonella spp và Staphylococcus aureus ô nhiễm trong thịt lợn bán tại. .. sự khô hạn và đóng băng, ở nơi khô ráo vi khuẩn sống trên 200 ngày Có thể sống ở môi trường có nồng độ NaCl cao (9%) Một số chất sát trùng như axit phenic 3-5% diệt vi khuẩn trong vòng 5-10 phút; formol 1% diệt vi khuẩn trong 1 giờ Cồn 700 diệt vi khuẩn trong vài phút, cồn nguyên chất không có tác dụng diệt tụ cầu khuẩn Nơi khô, lạnh vi khuẩn có sức đề kháng tốt Trong điều kiện thường, vi khuẩn sống... huyết tại bệnh vi n Ở các vụ nhiễm khuẩn huyết ở Anh thì nhiễm khuẩn do MRSA chiếm đến 96% 1.3 Một số đặc điểm của vi khuẩn Salmonella và Staphylococcus aureus 1.3.1 Một số đặc điểm của vi khuẩn Salmonella Salmonella được phát hiện lần đầu tiên năm 1885 bởi Salmon và Smith là Salmonella choleraesuis Năm 1934 chính thức được đặt tên là Salmonella Đến nay đã phát hiện hơn 2.000 serotype Salmonella khác... có nhiễm Staphylococcus aureus của tập đoàn Snow Trong khu vực Đông Nam Á 2 quốc gia có tỷ lệ ngộ độc Staphylococcus aureus cao là Indonesia và Philippines Vi t Nam cũng là một trong những nước có tỷ lệ nhiễm Staphylococcus aureus cao ở trong khu vực châu Á 9 Còn ở châu Âu thường nhiễm Staphylococcus aureus từ các bệnh vi n, tỷ lệ nhiễm Staphylococcus aureus chiếm 7% trong các vụ nhiễm khuẩn huyết tại. .. đồ 3.1: Tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Salmonella spp trên thịt tươi 50 Biểu đồ 3.2: Tỷ lệ nhiễm vi khuẩn Staphylococcus aureus trên thịt tươi 51 Biều đồ 3.3: Chỉ tiêu vi khuẩn Salmonella spp trên thịt tươi theo thời gian bán hàng 54 Biều đồ 3.4: Chỉ tiêu vi khuẩn Staphylococcus aureus trên thịt tươi theo thời gian 57 Biều đồ 3.5: Chỉ tiêu vi khuẩn Salmonella spp trên thịt tươi theo... tố của các vi sinh vật Trong đó vi khuẩn Salmonella spp và Staphylococcus aureus là một trong những nguyên nhân đang được quan tâm đặc biệt Ngoài khả năng gây ngộ độc thực phẩm ở người chúng còn là nguyên nhân phổ biến gây bệnh cho người và động vật 2 Xuất phát từ tình hình thực tiễn của các vụ ngộ độc thức ăn bị nhiễm khuẩn, đặc biệt là sự xuất hiện của vi khuẩn Salmonella spp và Staphylococcus aureus. .. về loài Salmonella spp và Staphylococcus aureus - Thiết lập cơ sở khoa học xác định đặc điểm dịch tễ có liên quan đến ngộ độc thực phẩm do Salmonella spp và Staphylococcus aureus, từ đó đề xuất biện pháp khống chế ô nhiễm thịt lợn 3.2 Ý nghĩa thực tiễn - Bổ sung tư liệu khoa học về tình hình nhiễm khuẩn nói chung, ô nhiễm Salmonella và Staphylococcus aureus nói riêng trong thịt lợn tươi - Đề xuất biện... giống vi 17 khuẩn có khả năng kháng thuốc, giúp vi khuẩn tồn tại rất lâu trong cơ thể người, vật nuôi và môi trường Khả năng kháng kháng sinh của chúng có thể thay đổi phụ thuộc vào địa phương, thời điểm làm kháng sinh đồ và vật chủ… 1.3.2 Một số đặc điểm của vi khuẩn Staphylococcus aureus 1.3.2.1 Hình thái và tính chất bắt màu - Tụ cầu có cấu tạo gồm vỏ, thành, màng, bào tương và nhân Vỏ, thành và màng... gây ra ô nhiễm, mất an toàn thực phẩm và có tới gần 5 50% trường hợp bị ngộ độc thực phẩm là do vi sinh vật Trong nhóm vi sinh vật nguy hiểm thì các vi khuẩn chủng Salmonella, Staphylococcus aureus, Clostridium botulinum, E coli và Listeria là đáng sợ nhất Trong điều kiện bình thường vi sinh vật sẽ phát triển, sinh sôi nảy nở trên bề mặt của thịt rồi dần dần tiến sâu vào các lớp bên trong của thịt, ...ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM LƯU NGỌC TUẤN NGHIÊN CỨU MỘT SỐ ĐẶC TÍNH SINH HỌC CỦA VI KHUẨN SALMONELLA SPP VÀ STAPHYLOCOCCUS AUREUS Ô NHIỄM TRONG THỊT LỢN BÁN TẠI MỘT SỐ CHỢ Ở BẮC... Staphylococcus aureus ô nhiễm thịt lợn bán số chợ Bắc Giang Mục tiêu nghiên cứu - Xác định tỷ lệ nhiễm số loại vi khuẩn Salmonella spp, Staphylococcus aureus thịt lợn số chợ tỉnh Bắc Giang - Nghiên cứu số. .. - Nghiên cứu số đặc tính sinh học chủng vi khuẩn Salmonella spp Staphylococcus aureus phân lập thịt lợn tươi số chợ tỉnh Bắc Giang - Xác định tính mẫn cảm với số kháng sinh hóa dược chủng vi khuẩn