Thu nhận enzyme cellulase từ nấm mốc trichoderma harzianum
Chủ đề: THU NHẬN ENZYME CELLULASE TỪ NẤM MỐC TRICHODERMA HARZIANUM GVHD: TS Vũ Ngọc Bội Nhóm THU NHẬN ENZYME CELLULASE TỪ NẤM MỐC TRICHODERMA HARZIANUM • • • Nuôi nấm sợi thu enzyme Thu chế phẩm enzyme thô Tinh enzyme sắc kí lọc gel Phương pháp sản xuất enzyme từ vi sinh vật Nguồn thu enzyme: nấm sợi Trichoderma Harzianum Đặc điểm sinh lý, sinh hoá sinh thái - Khuẩn lạc Trichoderma Harzianum môi trường PGA có dạng bông, non có màu trắng, già có màu vàng xanh màu bào tử, mặt trái Petri có màu vàng nhạt đến vàng nghệ - Đặc tính sinh lý: sinh trưởng nhiệt độ tối thiểu 0 0 C, tối ưu 20- 30 C, tối đa 34- 38 C - Độc tố: không sinh độc tố - Sinh thái: chiếm ưu vùng khí hậu nhiệt đới Phương pháp nuôi: Để thu nhận enzyme cellulase, người ta thường nuôi cấy theo phương pháp bề mặt môi trường xốp (môi trường bán rắn) - Độ ẩm : 55% - Cơ chất : cellulose: Cám mì : bã mía (6:4) Pha khoáng cho môi trường •NaNO3 3.5 g/l •K2HPO4 1,5g/l •MgSO4.7H2O 0,5g/l •KCl 0.5 g/l •FeSO4.7H2O 0.01g/l - pH môi trường ban đầu cho nấm sợi 4,5 – 5,5 - Trong trình nuôi, cần thường xuyên cung cấp oxy - Xốp: không khí lưu thông từ bên từ môi trường vào khối môi trường Lượng nước cần bổ sung vào để đạt độ ẩm cần thiết(độ ẩm 55%): A(B%-C%) F= 100% F: lượng nước bổ sung vào môi trường để có độ ẩm cần thiết(ml) A: khối lượng chất cần bổ sung B: độ ẩm cần đạt C: độ ẩm có sẵn chất 100%: độ ẩm 100% Sơ đồ quy trình thu nhận Hấp khử trùng 121độ C 20’ Môi Trường Xử lí môi trường Bã mía,cám mì, khoáng,nước Ủ Thu canh trường Giống Nhân giống Nghiền Khuấy 30’ Nước Trích ly Lọc Bã Đồng hoá Thu chế phẩm enzim thô Trích ly Tủa Li tâm Hoà vào đệm Na acetat Thu tủa Sắc kí lọc gel Tinh Enzyme tinh khiết Click to edit Master text styles Second level Third level Fourth level Fifth level Thu nhận enzim sắc kí lọc gel Đối với sản phẩm tủa cồn lạnh acetone, trình tinh thực Biogel P-100 Đối với sản phẩm tủa muối , trình tinh xảy qua hai bước: loại muối gel Sephadex G- 25 tinh Biogel p- 100 Click to edit Master text styles Second level Third level Fourth level Fifth level Click to edit Master text styles Second level Third level Fourth level Fifth level • • Hóa chất: Gel “Biogel P- 100” có đặc tính : hạt mịn , kích thước hạt 45- 90µm, khả ngậm nước: 12ml/g gel khô, phạm vi phân tách 5000- 150000 Dal • Gel Sephadex G- 25 có đặc tính phạm vi phân tách:1000-5000 Dal, khả ngậm nước :2,5 ml/g gel khô, thể tích ml/g gel khô • Đệm Na-acetat 50mm, pH = khử bọt khí trước dùng Biogel-P100 Huyền phù hoá hạt gel Trong 12 h 20oC Hydrat hoá 4h 100oC Gạn lớp bề mặt 5-10 phút Khử khí dung dịch Thêm dd đêm với V gấp 2lần lần Gạn lớp bề mặt Ổn định gel Nạp gel vào cột Dung dịch gel Mẫu enzim Tiến hành chạy sắc kí Hạt mịn • Thu xác định mẫu tách Dịch khỏi cột đo bước sóng 280nm detector hệ sắc kí thể độ hấp thụ dạng sắc kí đồ Tiến hành thu phân đoạn cuối phân tích hàm lượng protein Enzyme sau làm xác định trọng lượng phân tử kĩ thuật điện di gel polyacrylamide [...]... cột Dung dịch gel Mẫu enzim Tiến hành chạy sắc kí Hạt mịn • Thu và xác định mẫu tách được Dịch ra khỏi cột được đo ở bước sóng 280nm bằng detector trong hệ sắc kí và được thể hiện độ hấp thụ dưới dạng sắc kí đồ Tiến hành thu các phân đoạn cuối cùng và phân tích hàm lượng protein Enzyme sau khi đã làm sạch và xác định trọng lượng phân tử bằng kĩ thu t điện di trên gel polyacrylamide ... Thu nhận enzim bằng sắc kí lọc gel Đối với các sản phẩm tủa bằng cồn lạnh và acetone, quá trình tinh sạch chỉ được thực hiện trên Biogel P-100 Đối với các sản phẩm tủa bằng muối , quá trình tinh sạch xảy .. .THU NHẬN ENZYME CELLULASE TỪ NẤM MỐC TRICHODERMA HARZIANUM • • • Nuôi nấm sợi thu enzyme Thu chế phẩm enzyme thô Tinh enzyme sắc kí lọc gel Phương pháp sản xuất enzyme từ vi sinh vật Nguồn thu. .. pháp sản xuất enzyme từ vi sinh vật Nguồn thu enzyme: nấm sợi Trichoderma Harzianum Đặc điểm sinh lý, sinh hoá sinh thái - Khuẩn lạc Trichoderma Harzianum môi trường PGA có dạng bông, non có... tố: không sinh độc tố - Sinh thái: chiếm ưu vùng khí hậu nhiệt đới Phương pháp nuôi: Để thu nhận enzyme cellulase, người ta thường nuôi cấy theo phương pháp bề mặt môi trường xốp (môi trường bán