Nghiên cứu về phân lân vi sinh hữu cơ

Phân vi sinh vật (phân vi sinh) là sản phẩm chứa các vi sinh vật sống, đã được tuyển chọn có mật độ phù hợp với tiêu chuẩn ban hành, thông qua các hoạt động sống của chúng tạo nên các chất dinh dưỡng mà cây trồng có thể sử dụng được (N,P,K, S, Fe…) hay các hoạt chất sinh học, góp phần nâng cao năng suất hoặc chất lượng nông sản. Phân vi sinh vật phải bảo đảm không gây ảnh hưởng xấu đến người, động, thực vật, môi trường sinh thái và chất lượng nông sản. Mật độ vi sinh vật: Ở Việt Nam mật độ vi sinh vật có ích hay nói cách khác mật độ vi sinh vật sống đã được tuyển chọn chứa trong phân bón vi sinh vật phải đảm bảo từ 108109 vi sinh vậtgam(g) hoặc mililit (ml) phân bón vi sinh vật trên nền cơ chất đã được khử trùng hoặc 105106 vi sinh vậtg hoặc ml phân bón vi sinh vật trên nền cơ chất không vô trùng. Một số giống vi sinh vật đang được sử dụng trong sản xuất phân bón vi sinh vật ở Việt Nam như: + Phân vi sinh vật cố định nitơ là sản phẩm chứa các vi sinh vật sống cộng sinh với cây họ đậu (đậu tương, đậu đen, đậu xanh, lạc…) Acetobacter, Aerobacter, Azospirillum, Azotobacter, Azotomonas, Clostridium, Chlorobidium, Frankia, Pseudomonas, Rhizobium, Rhodospirillium, Pisolithus hội sinh trên vùng rễ cây trồng cạn hay tự do trong đất, nước có khả năng sử dụng nitơ từ không khí, tổng hợp thành đạm cung cấp cho đất và cây trồng. + Phân vi sinh vật phân giải hợp chất photpho khó tan (phân lân vi sinh) sản xuất từ các vi sinh vật có khả năng chuyển hóa các hợp chất photpho khó tan thành dễ tiêu cho cây trồng sử dụng. Một số giống vi sinh vật khó tan như Achromobacter, Aspergillus, Bacillus, Penicillium, Serratia… + Phân vi sinh vật kích thích, điều hòa sinh trưởng thực vật có chứa các vi sinh vật có khả năng sinh tổng hợp các hoạt chất sinh học có tác dụng điều hòa hoặc kích thích quá trình trao đổi chất của cây. Một số giống vi sinh vật điều hòa sinh trưởng như Agrobacterium, Anthrobacter, Flavobacterium, VAM. + Phân vi sinh vật chức năng là một dạng của phân bón vi sinh vật, ngoài khả năng tạo nên các chất dinh dưỡng cho đất, cây trồng, còn có thể ức chế, kìm hãm sự phát sinh, phát triển của một số nấm bệnh vùng rễ cho vi khuẩn và vi nấm gây nên. Một số tác nhân ảnh hưởng đến hiệu lực của vi sinh vật như: + Thuốc diệt trừ nấm, trừ sâu: các loại hóa chất xử lý hạt giống, chứa các kim loại nặng như thủy ngân, đồng hay chì đều độc với các vi sinh vật. Do vậy không nên trộn hạt giống đã xử lý hóa chất diệt trừ nấm, trừ sâu với vi sinh vật. Hiện nay chưa có nghiên cứu về ảnh hưởng của thuốc trừ sâu đến sự tồn tại và hoạt tính của vi sinh vật có ích. + Các dinh dưỡng khoáng Đạm: Để phát huy hiệu quả của phân bón vi sinh vật cần thiết phải cân đối được khả năng cung cấp dinh dưỡng của vi sinh vật và nhu cầu của cây trồng. Nếu bón quá nhiều phân khoáng sẽ gây nên lãng phí và ngược lại nếu cung cấp không đủ cây trồng sẽ bị thiếu dinh dưỡng . Do vậy khi sử dụng phân bón vi sinh vật nhất thiết phải tuân thủ theo khuyến cáo của nhà sản xuất. Phân lân: Vi sinh vật phân giải lân có khả năng khoáng hóa lân hữu cơ hoặc chuyển hóa lân vô cơ khó tan thành lân dễ tiêu cung cấp cho đất và cây trồng, nghĩa là chỉ có tác dụng khi có sẵn nguồn lân vô cơ hoặc hữu cơ trong đất. Do vậy khi bón phân hữu cơ vi sinh có vi sinh vật phân giải lân nên bón thêm lân để tăng hiệu quả. Phân kali: Một số loài vi khuẩn có nhu cầu về kali. Vai trò của kali là tạo áp suất thẩm thấu trong quá trình trao đổi chất của vi khuẩn cũng như trong dịch huyết tương của cây trồng. Cần bón đủ kali theo nhu cầu sinh trưởng và phát triển của cây để cây phát triển tốt và các vi sinh vật hoạt động. Độ chua của đất: Vi sinh vật nói chung đều bị ảnh hưởng bởi độ pH đất, hoạt tính sinh học của chúng sẽ giảm trong điều kiện pH thấp vì tác động trực tiếp của pH thấp đến sự sinh trưởng hoặc trao đổi chất. Đất có pH thấp thường ít các nguyên tố Ca, Mg, P, Mo…và chứa nhiều nguyên tố độc hại với cây trồng như nhôm và mangan. Hiện nay đã nghiên cứu tuyển chọn ra nhiều chủng vi sinh vật có dải pH rộng nên có nhiều phân vi sinh vật có khả năng sử dụng cho mọi loại đất trồng với pH khác nhau. Nhiệt độ: Nhiệt độ đất ảnh hưởng trực tiếp đến hoạt động sống và quá trình sinh tổng hợp các chất sinh học của vi sinh vật. Dải nhiệt độ tốt nhất đối với các vi sinh vật làm phân bón vi sinh khoảng 25350C. Độ ẩm đất: Độ ẩm đất có vai trò quan trọng trong quá trình sinh trưởng, phát triển và sinh tổng hợp hoạt chất sinh học của vi sinh vật tồn tại trong đất. Thiếu nước vi khuẩn không di chuyển được, đồng thời cũng không sinh sản được. Thiếu nước ngăn cản sự phát triển của cây ảnh hưởng gián tiếp đến hoạt động của vi sinh vật. Đa số vi sinh vật sống hiếu khí nghĩa là cần ôxy để sinh trưởng phát triển do vậy nước dư thừa sẽ có hại cho quá trình sinh trưởng và phát triển của chúng. Phèn mặn: Trên vùng đất khô, phèn mặn có ảnh hưởng rất lớn đến hoạt động sống của vi sinh vật. Nồng độ muối cao ảnh hưởng trực tiếp đến cấu trúc màng tế bào của vi sinh vật, đồng thời tác động đến quá trình trao đổi chất của vi sinh vật. Hiện nay người ta quan tâm nhiều đến việc tuyển chọn các vi sinh vật chịu được nồng độ cao và kết quả đã tạo được một số loại phân bón vi sinh vật có khả năng thích ứng với độ phèn mặn cao. Vi khuẩn cạnh tranh: Trong đất nhất là ở các vùng trồng chuyên canh đặc biệt là độc canh tồn tại rất nhiều vi sinh vật tự nhiên, các vi sinh vật này cạnh tranh với vi sinh vật hữu hiệu và làm giảm hiệu quả của chúng. Do vậy việc tuyển chọn ra các vi sinh vật có khả năng cạnh tranh cao sử dụng cho sản xuất phân bón vi sinh vật được quan tâm và hiện nay Viện Khoa học kỹ thuật Nông nghiệp Việt Nam đã tuyển chọn được một số chủng vi khuẩn đáp ứng yêu cầu cạnh tranh cao.

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG VIỆN CNSH & MT o0o BÁO CÁO SEMINAR CÔNG NGHỆ VI SINH VẬT Chủ đề : ỨNG DỤNG CÔNG NGHỆ VI SINH VẬT TRONG SẢN XUẤT PHÂN LÂN VI SINH GVHD : Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC SVTH : Nhóm Lớp Huỳnh Thị Hậu Đặng Thị Kim Hường Lê Lai Nguyễn Thị Thanh Tuyền Nguyễn Mạnh Tường (nt) : 54CNSH Nha Trang, ngày tháng năm 2015 Nhóm MỤC LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT .4 LỜI NÓI ĐẦU Giới thiệu 1.1 Định nghĩa 1.2 Phân loại 1.2.1 Dựa vào thành phần 1.2.2 Dựa vào nguyên liệu 1.3 Các loại phân lân vi sinh phổ biến .9 Các chủng vi sinh vật thường sử dụng 11 Cơ chế phân giải 12 3.1 Lân vô 12 3.2 Lân hữu 13 Yêu cầu chất lượng 14 Quy trình sản xuất 15 5.1 Đặt vấn đề 15 5.2 Phân lập tuyển chọn 15 5.2.1 Phân lập vi sinh vật có khả phân giải lân 15 5.2.2 Kiểm tra đặc điểm sinh hóa 17 5.3 Nuôi cấy thu sinh khối 19 5.3.1 Dựa sở thông số kỹ thuật lên men sinh khối vi sinh vật để thu enzyme 20 5.3.2 Cách tiến hành 20 5.3.3 Quy trình thu nhân sinh khối, phương pháp li tâm lắng 22 5.4 Pha trộn tạo sản phẩm phân vi sinh chất mụn dừa 23 Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page Nhóm 5.5 Bao gói tạo sản phẩm 24 Ứng dụng nông nghiệp 24 Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page Nhóm DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT Chữ viết tắt/ ký hiệu VSV S v/ phút TCVN Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Cụm từ đầy đủ Vi sinh vật Lưu huỳnh Vòng/ phút Tiêu chuẩn Việt Nam Page Nhóm LỜI NÓI ĐẦU Với mục đích nâng cao suất sản xuất Nông Nghiệp cải thiện môi trường sản xuất phân bón vi sinh phương án hay độc đáo Trong đó, phân lân vi sinh đóng chiếm vai trò quan trọng không Trải qua trình khảo sát phát chủng Bacillus subtilis từ đất có đủ điều kiện thuận lợi để đưa vào quy trình sản xuất phân lân vi sinh giá rẻ hợp với túi tiền người nông dân Mục tiêu đặt sản xuất 10 phân lân vi sinh đáp ứng nhu cầu người dân vùng Tây Nguyên nước ta Quy trình sản xuất bao gồm phân lập tuyển chọn chủng, nuôi cấy thu sinh khối, pha trộn tạo sản phẩm chất mụn dừa bao gói tao sản phẩm Nếu quy trình thành công, sản phẩm góp phần không nhỏ giúp người dân nâng cao chất lượng sống môi trường điều mong muốn! Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page Nhóm ỨNG DỤNG CÔNG NGHỆ VI SINH VẬT TRONG SẢN XUẤT PHÂN LÂN VI SINH Giới thiệu Cùng với phát triển không ngừng xã hội, ngành Nông Nghiệp có thay đổi đáng kể Để phát triển theo hướng CNH – HĐH ngành Nông Nghiệp góp phần không nhỏ vào việc thu nhỏ diện tích đất nông nghiệp màu mỡ chưa quy hoạch quản lý tốt Mặt khác, thiên tai hạn hán làm suy giảm chất lượng đất canh tác Bên cạnh đó, việc khai thác sử dụng mức dẫn tới tình trạng thoái hóa đất nghiêm trọng Do nhu cầu xã hội ngày phát triển yêu cầu người phải sử dụng nhiều biện pháp để nâng cao suất Đồng thời, hoạt động gây ô nhiễm môi trường Đặc biệt, phân bón hóa học sử dụng tồn dư với dư lượng lớn môi trường Vậy làm để trả lại độ phì nhiêu cho đất? Đó sử dụng sản phẩm phân hữu vi sinh vật Với khả phân giải chất hữu tạo sinh khối dinh dưỡng cho trộng.Đồng thời, sản phẩm bán với giá hợp túi tiền người nông dân Nhờ bón phân vi sinh nên sản phẩm an toàn, đất không bị ô nhiễm, tăng chất lượng đất trồng khả hấp thụ dinh dưỡng Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page Nhóm Phospho yếu tố quan trọng với trồng.Chính Phospho dễ tiêu đất không đáp ứng nhu cầu trồng có suất cao Bón phân lân vi sinh biện pháp hay để bảo vệ sức khỏe người an toàn môi trường 1.1 Định nghĩa Phân lân vi sinh vật sản phẩm phân giải hợp chất photpho khó tan thành dạng dễ tiêu chứa chủng vi sinh vật sống tuyển chọn với mật độ tế bào đạt tiêu chuẩn hành, cung cấp dinh dưỡng cho trồng, tạo điều kiện nâng cao suất chất lượng nông sản Phân lân chủng vi sinh vật không ảnh hưởng xấu đến người, động thực vật, môi trường sinh thái chất lượng nông sản 1.2 Phân loại 1.2.1 Dựa vào thành phần  Phân lân vô cơ: Thường dạng khoáng apatit, phosphoric, phosphat sắt, phosphat nhôm … Muốn trồng sử dụng phải qua chế biến, để trở thành dạng dễ tan Cũng yếu tố khác, Phospho luôn tuần hoàn chuyển hóa.Nhờ VSV lân hữu vô hóa biến thành muối axit phosphoric Các dạng lân phần sử dụng, biến thành lân hữu cơ, phần bị cố định dạng lân khó tan Ca3(PO4)2, FePO4, AlPO4 Những dạng khó tan Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page Nhóm môi trường có pH thích hợp chuyển hóa thành dạng dễ tan VSV giữ vai trò quan trọng trình  Phân lân hữu cơ: Các dạng lân thường gặp đất là: - Phytin họ hàng: Là muối Ca Mg axit phytic Trong đất chất có họ hàng với phytin inositol, inositolmonophosphat, inositoltriphosphat Tất có nguồn gốc thực vật Phytin chiếm 40 – 80% phospho hữu đất - Axit nucleic nucleoprotein: Có nguồn gốc từ thực vật VSV, hàm lượng chúng đất < 10% - Phospholipit: Sự kết hợp lipit phosphat không nhiều đất Phân lân hữu thường nằm hợp chất hữu có xác động vật thực vật.Tuy nhiên trồng hấp thụ loại phân vô dạng hòa tan Đo dó, vi sinh vật đất đóng vai trò quan trọng trình chuyển hóa 1.2.2 Dựa vào nguyên liệu  Phân VSV chất mang không khử trùng Đó sản phẩm phân VSV, chất mang sau xử lý phối trộn trực tiếp với sinh khối VSV không thông qua khử trùng  Phân VSV chất mang khử trùng Sinh khối VSV sau lên men chủng VSV cho vào chất mang vô trùng theo tỉ lệ 1:1 tạo phân VSV chất mang vô trùng Chất mang chất để VSV trú ngụ trì mật độ thời gian từ sản xuất đến sử dụng Ngoài ra, yêu cầu đặc tính vật lý, cảm quan, Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page Nhóm chất mang phải đảm bảo không gây ảnh hưởng xấu đến VSV, thực vật môi trường Loại chất mang thường sử dụng than bùn mụn dừa 1.3 Các loại phân lân vi sinh phổ biến Trên thị trường dòng phân lân vi sinh túy ít, chủ yếu phân lân vi sinh hỗn hợp kết hợp dòng vi sinh vật có khả phân giải nitơ, kali, photpho,… Ví dụ: Phân hữu vi sinh Triscomix ( lân vi sinh): sản xuất từ nguồn vi sinh vật phân giải lân cellulose; dùng để hạ phèn, cải tạo đất, hạn chế ngộ độc hữu cơ, phân giải lân khó tan thành dễ tan, phòng ngừa nấm hại rễ  Phân lân vi sinh Bio-gro: - Vi sinh vật cố định nitơ: >1.0x 106 - 107 - Vi sinh vật cố định nitơ: 4.0x 106- 107 - Chất mang: Hữu > 8.4% - Độ ẩm: 20->25% Công dụng: Tăng độ khỏe, chống chịu sâu bệnh, giảm lượng NO 3- nông sản, phục hồi độ màu mỡ đất, giữ ẩm cho đất, hạn chế rửa trôi dinh dưỡng đất Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page Nhóm  Phân vi sinh Bio-Plant: - 1ml phân chứa 109 tế bào vi sinh vật bao gồm: VSV cố định đạm, VSV chuyển hóa photpho, VSV chuyển hóa kali, VSV chuyển hóa magiê, canxi, sắt, … - Vai trò: Tăng dinh dưỡng, cải thiện chất lượng trồng, kích thích tăng trưởng, tạo chất kích thích cho sinh trưởng, tăng sức đề kháng với sâu bệnh  Phân bón Humix: - Nguyên liệu hữu phân chuồng, bột (tôm, cua, cá, ghẹ), … - Khoáng: N, P, K, Ca, Mg, S, … - VSV cố định đạm, VSV chuyển hóa lân, VSV phân hủy chất xơ, VSV đặc chế - Chế phẩm đặc chế Humix hỗn hợp enzyme chiết xuất từ VSV hoạt chất nhập từ nước có vai trò: tăng độ phì nhiêu cho đất, tái tạo hệ sinh thái đất, cung cấp dinh dưỡng, sản phẩm an toàn cho người thân thiện với môi trường Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 10 Nhóm Quy trình sản xuất 5.1 Đặt vấn đề Vi khuẩn B.subtilis có khả chuyển hóa lân thành dạng hòa tan cao, thời gian hình thành vòng phân giải ngắn (3 ngày) Mức độ hòa tan lân đồng chênh lệch nhiều chủng Ngoài ra, vi khuẩn B.subtilis không gây hại cho trồng nên sử dụng để sản xuất phân bón Đây loài vi khuẩn có vùng phân bố rộng dễ phân lập, dễ dàng nuôi cấy để thu sinh khối, mở rộng quy mô sản xuất từ nhỏ đến lớn áp dụng kĩ thuật đại vào sản xuất Nguồn nguyên liệu lên men đơn giản, dễ tìm, giá thành rẻ giúp tiết kiệm chi phí sản xuất từ hạ giá thành sản phẩm Vì lí nên nhóm tiến hành tìm hiểu về: “Quy trình sản xuất phân lân vi sinh từ vi khuẩn Bacillus subtilis” 5.2 Phân lập tuyển chọn 5.2.1 Phân lập vi sinh vật có khả phân giải lân Bước 1: Thu mẫu Lấy mẫu đất trồng ngô, lúa, đậu tương, mẫu quặng, tầng mặt thìa vô trùng, độ sâu từ đến 5cm, lần lấy từ 40 -50g, khu đất lấy từ – 10 vị trí lấy khác Mẫu đất đựng túi nilon polypropylen khử trùng, ghi nhãn cho mẫu đem đến phòng thí nghiệm tiến hành phân lập Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 15 Nhóm Bước 2: Phân lập vi khuẩn B.subtilis môi trường TSA có bổ sung Ca3(PO4)2 Các mẫu đất lấy vị trí khác trộn Cân mẫu đất 10g cho vào bình tam giác chứa 99ml nước cất vô trùng lắc thật Sau pha loãng liên tục từ 10-1 - 10-7 Dùng que trang thủy tinh dàn dịch vừa nhỏ lên bề mặt thạch cho bề mặt thạch thật khô Các thao tác làm lửa đèn cồn tủ box để tránh lây nhiễm vi sinh vật Nuôi cấy tủ ấm nhiệt độ 25- 300C từ 3- ngày, vi sinh vật có vòng phân giải Ca3(PO4)2 Cấy truyền vào ống nghiệm chứa môi trường thạch nghiêng giữ tủ ấm 3- ngày Khi chủng vi sinh vật phát triển kín bề mặt thạch ống nghiệm đem cất giống vào tủ lạnh nhiệt độ 40C Giữ giống -50C 2- tháng, tháng cấy truyền lần Bước 3: Đếm số lượng tế bào Số lượng tế bào sống môi trường dinh dưỡng đặc, biểu thị đơn vị CFU, CFU khuẩn lạc phát triển từ tế bào ban đầu loại vi sinh vật môi trường dinh dưỡng mà ta quan sát Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 16 Nhóm Cách đếm: Tiến hành pha loãng phương pháp phân lập môi trường thạch đĩa Nuôi từ - ngày 300C tủ ấm, lấy đếm số lượng khuẩn lạc đĩa Từ tính số lượng tế bào 1g 1ml chất 5.2.2 Kiểm tra đặc điểm sinh hóa 5.2.2.1 Xác định khả phân giải Ca3(PO4)2 - Cấy chấm điểm vi sinh vật phân lập môi trường thạch Pikovskaya - Theo dõi khả hình thành vòng phân giải chủng – ngày - Vi sinh vật có hoạt tính phân giải tạo thành vòng suốt xung quanh khuẩn lạc chưa phân giải có màu đục - Đo đường kính vòng phân giải - Kết khảo sát khả phân giải phosphat: Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 17 Nhóm Từ bảng kết cho thấy tất chủng vi sinh vật có khả chuyển hóa Ca3(PO4)2 môi trường đặc thành dạng hòa tan Trong chủng B14 có đường kính phân giải lớn Các nghiên cứu cho thấy nguồn phosphate khác có ảnh hưởng đến khả sinh trưởng, phát triển B.subtilis mức độ hòa tan lân chúng Ca3(PO4)2 nguồn Phospho sử dụng tốt Cả hai loại quặng apatide phososphoride ảnh hưởng tốt đến khả sinh trưởng Bacillus, chúng ức chế khả sinh trưởng vi khuẩn làm giảm khả phân giải lân 5.2.2.2 Quan sát hình thái nhuộm Gram nhuộm bào tử chủng vi sinh vật thu  Nhuộm Gram: Tiến hành nhuộm kép hóa chất thuốc tím, dung dịch lugol, cồn 700 fucsin  Nhuộm bào tử: Nhuộm hóa chất HCl 1% (hoặc phemnol 5%), fucsin ziel, cồn 330 hay H2SO4, methylene – loeffler Kết quả: Bào tử bắt màu hồng đỏ, vi khuẩn bắt màu xanh Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 18 Nhóm Kết cho thấy B.subtilis chủng vi khuẩn Gram dương, có khả di động, sinh nội bào tử, tế bào sinh dưỡng có dạng hình que 5.3 Nuôi cấy thu sinh khối Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 19 Nhóm 5.3.1 Dựa sở thông số kỹ thuật lên men sinh khối vi sinh vật để thu enzyme - Môi trường lên men cấp : môi trường rỉ đường + 2% tinh bột 0,1%,CaCO3 2% - Môi trường lên men cấp 2: Môi trường sữa đậu nành có nồng độ 15% đậu bổ sung 15% đường ,bổ xung CaCO3 2% 5.3.2 Cách tiến hành Lên men cấp Giống gốc chứa Bacillus sbutilis tăng sinh môi trường tăng sinh có pH = 24h có nhiệt độ 37oC Cho dung dịch vào môi trường lên men cấp : rỉ đường + tinh bột 2% Với điều kiện thông số: - pH = 6,5 – 7,0 - Độ ẩm 60-65% - Nhiệt độ lên men :30 - Thời gian len men : 36h - Tỷ lệ giống gốc : 5% - Môi trường lên men : - Tốc độ cánh khuấy : o – 6h ;220 v/phút; o – 12h: 300 v/phút; Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 20 Nhóm o 12 - kết thúc : 350v/phút Lên men cấp Lượng giống sử dụng môi trường cấp 10% với: - Độ ẩm 60-65%, pH = - Nhiệt độ lên men :30 - Thời gian len men : 36h - Tỷ lệ giống gốc : 5% - Môi trường lên men : - Tốc độ cánh khuấy : o – 6h ;220 v/phút; o – 12h: 300 v/phút; o 12- kết thúc : 350v/phút - Sau 72h thu sản phẩm Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 21 Nhóm - Lưu lượng cung cấp khí 0,75% (m3 khí/ 1m3 môi trường ) Kết nhân sinh khối phương pháp lên men chìm đạt 108 -109 CFU/ml sau 36- 48h lên men cho môi trường lên men 5.3.3 Quy trình thu nhân sinh khối, phương pháp li tâm lắng Dịch lên men sau nhân sinh khối thiết bị lên men chìm đưa vào máy li tâm liên tục (separator) để tách nước tự Vận tốc li tâm ban đầu 15000 vòng/phút sau tăng từ từ 20000vòng/ phút Sau sấy khô phối trộn với hợp chất hữu Thiết bị sấy thu sinh khối Đánh giá chất lượng Sinh khối sau thu được, tiến hành xác định mật độ tế bào phương pháp đo OD Nếu mật độ tế bào đạt 108 – 109 tế bào VSV/g hay ml Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 22 Nhóm sinh khối ta tiến hành công đoạn Nếu mật độ tế bào thấp cao 108 – 109 tế bào VSV/g hay ml sinh khối phải tiến hành lên men lại với thời gian tỉ lệ giống thích hợp 5.4 Pha trộn tạo sản phẩm phân vi sinh chất mụn dừa Chuẩn bị nguyên liệu phối trộn: - Rác phế thải, có nguồn gốc từ thực vật: Lá cây, vỏ dừa nghiền nhỏ tạo dạng mụn - Phân chuồng ủ diệt trứng kí sinh trùng - Phân chuồng rác hai nguồn nguyên liệu dồi có sẵn nông trại cung cấp liên tục lâu dài 5.4.1 Quy trình phối trộn: Bước 1: Sản xuất giá thể Nguyên liệu mụn dừa xử lý để giảm hàm lượng muối giảm hàm lượng Tanin Sấy phơi khô, sau phối trộn với chất dinh dưỡng chậm tan chất phụ gia Ủ yếm khí hiếu khí với phân chuồng nhằm tiêu diệt phần VSV tạp trứng sâu bọ, bay hợp chất dễ bay phân giải phần nhỏ chất hữu khó tan Bước 2: Sản xuất phân bón Chế phẩm Bacillus sau nhân sinh khối, sau tưới vào nguyên liệu mụn dừa Ủ hảo khí để có nguyên liệu bán thành phẩm Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 23 Nhóm Bước 3: Sấy khô để thu chế phẩm dạng khô 5.5 Bao gói tạo sản phẩm Phân bón đóng gói bao bì PP Khối lượng bao: 50kg theo yêu cầu khách hàng Kiểm tra khối lượng sản phẩm theo Quyết định 02/2008/QĐ-BKHCN ngày 25 tháng 02 năm 2008 Bộ trưởng Bộ khoa học công nghệ Ban hành Quy định việc kiểm tra đo lường hàng đóng gói sẵn Ứng dụng nông nghiệp  Phân lân vi sinh thường bón trực tiếp vào đất, người ta trộn vào hạt, có nhiều cách bón khác nhau: - Có thể trộn chế phẩm với đất nhỏ tơi, sau đem rắc vào luống gieo hạt (nếu ruộng cạn), rắc mặt ruộng (nếu ruộng nước); - Có thể đem chế phẩm ủ trộn với phân chuồng, sau trộn vào luống gieo hạt (nếu ruộng cạn), rắc mặt ruộng (nếu ruộng nước); - Có thể trộn chế phẩm VSV với đất phân chuồng sau thúc sớm cho (càng bón sớm tốt); - Phương pháp nhằm làm tăng số lượng VSV hữu ích vào đất Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 24 Nhóm  Những ý sử dụng phân lân vi sinh - Do tác dụng phân VSV chậm phân hóa học, nên với loại trồng ngắn ngày chủ yến bón lót Với loại trồng thu hoạch theo lứa tác dụng phân vi sinh chậm phân hoá học, nên loại trồng ngắn ngày chủ yếu bón lót Với loại trồng thu hoạch theo lứa, sau đợt thu hoạch bón bổ sung Khi bón phân vi sinh cần giữ độ ẩm cho đất, đặc biệt tuần đầu Cách bón cho loại soạn riêng - Phân vi sinh phát huy tác dụng phân hoá học bón với khối lượng hạn chế, ví dụ: lúa không bón kg urê kg lân 360m2 - Với đất chua phải bón vôi trước - ngày bón phân vi sinh - Không trộn phân vi sinh với loại phân hoá học tro bếp - Bảo quản phân vi sinh nơi thoáng mát Về mùa hè, bảo quản tháng, mùa đông bảo quản tháng Không nên dự trữ phân vi sinh sinh vật sống, chúng cần thức ăn không khí để thở Để tránh mua phải hàng giả, bà nông dân nên mua phân xưởng sản xuất đại lý phân xưởng qua cán khuyến nông, nơi đào tạo, hướng dẫn có trách nhiệm với sản phẩm  Hiệu sử dụng phân lân - Phân VSV giúp chuyển hóa phosphate khó tan tác dụng nâng cao hiệu phân khoáng nhờ hoạt tính phân giải chuyển hóa chủng VSV Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 25 Nhóm - Tận dụng nguồn phosphate địa phương có hàm lượng lân thấp - Các nước Châu Âu, Châu Mỹ nước Châu Phi cho thấy hiệu to lớn phân lân vi sinh - Tại Ấn Độ, VSV phân giải lân đánh giá có tác dụng tương đương với 50kg P2O5/ha - Sử dụng VSV phân giải lân quặng phosphate thay 50kg lân khoáng cần bón mà không ảnh hưởng đến suất trồng - Tại Ấn Độ Trung Quốc quốc gia đẩy mạnh chương trình phát triển ứng dụng công nghệ sản xuất phân lân vi sinh quy mô lớn với diện tích hàng triệu - Tại Việt Nam công trình nghiên cứu cho biết gói chế phẩm VSV phân giải lân (50kg) sử dụng cho cà phê vùng đất đỏ Badan có tác dụng tương đương với 34,3 kg P 2O5/ha Bón phân vi sinh có tác dụng làm tăng số lượng vi sinh vật phân giải lân đất, dẫn đến tăng cường độ phân giải lân khó tan đất 23-25% - Cây trồng phát triển tốt hơn, thân mập hơn, to hơn, dày hơn, tăng sức đề kháng sâu bệnh, tăng suất đậu tương 5-11%, lúa 4.7-15% so với đối chứng  Ưu, nhược điểm: Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 26 Nhóm - Ưu điểm: Nhìn chung có đặc điểm như: Phân giải lân khó tiêu thành dễ tiêu, tăng yếu tố dinh dưỡng, tăng chất lượng trồng, nâng cao chất lượng nông sản, an toàn thục phẩm, giá thành hạ, thân thiện với môi trường - Nhược điểm: Không ổn định chất lượng, yếu tố đảm bảo chất lượng hàm lượng VSV chủng VSV, không đảm bảo hàm lượng VSV chủng VSV dẫn đến phân chất lượng, mặc khác sử dụng không hay chủng VSV không phù hợp ành hưởng đến hệ VSV đất đồng thời gây ô nhiễm môi trường - Hiện thị trường chủ yếu phân vi sinh hỗn hợp tác dụng chuyên hóa hiệu không cao, tác dụng chậm chủ yếu dùng để bón lót, chưa nhà nông sử dụng rộng rãi so với phân vô Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 27 Nhóm TÀI LIỆU THAM KHẢO - Nguyễn Đức Lượng, Nguyễn Hữu Phước (1996), Công nghệ vi sinh vật Tập 2: Vi sinh vật công nghiệp, TP Hồ Chí Minh, trường Đại Học Bách Khoa - Biên tập Khánh Hà (2011), Kỹ thuật sản xuất phân vi sinh, Cổng thông tin điện tử Sở Khoa Học Công Nghệ, theo đường link: http://sokhcn.vinhphuc.gov.vn/noidung/bantinkhcn/Lists/PhoBienKienThuc/View_Detail.aspx?ItemID=28 [Truy cập ngày 28/4/2015] - PGS TS Phạm Văn Toản, Th.S Lương Hữu Thành (2008), Nghiên cứu sản xuất thử nghiệm phân bón vi sinh vật đa chủng, phân bón chức phục vụ chăm sóc trồng cho số vùng sinh thái, Luận văn Nghiên cứu sản xuất thử nghiệm phân bón vi sinh vật đa chủng, phân bón chức phục vụ chăm sóc trồng cho số vùng sinh thái, theo đường link: http://luanvan.co/luan-van/luan-van-nghien-cuu-san-xuat-thu- nghiem-phan-bon-vi-sinh-vat-da-chung-phan-bon-chuc-nang-phuc-vucham-soc-cay-trong-cho-43476/ [Truy cập ngày 28/4/2016] - Và số tài liệu khác Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 28 Nhóm Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 29 [...]... phân vi sinh cần giữ độ ẩm cho đất, đặc biệt 2 tuần đầu Cách bón cho từng loại cây được soạn riêng - Phân vi sinh chỉ phát huy được tác dụng khi phân hoá học bón với khối lượng hạn chế, ví dụ: đối với lúa không bón quá 4 kg urê và 7 kg lân trên 360m2 - Với đất chua phải bón vôi trước 2 - 3 ngày rồi mới bón phân vi sinh - Không trộn phân vi sinh với các loại phân hoá học và tro bếp - Bảo quản phân vi. .. dephosphorylaza phân giải phytin theo phản ứng sau: Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 13 Nhóm 6 4 Yêu cầu về chất lượng Theo TCVN của bộ nông nghiệp và phát triển nông thôn – Vi n khoa học kỹ thuật Nông Nghiệp Vi t Nam quy định tiêu chuẩn phân bón vi sinh vật phân giải Phosphate  Thời gian bảo hành của phân lân vi sinh ít nhất là 6 tháng  Mật độ vi sinh vật phải phù hợp: Bảng xác định mật độ vi sinh vật phù... tăng cường phân giải lân: o Độ pH: 6.5 – 7.0 ảnh hưởng tốt đến sự phát triển của hệ VSV phân giải lân Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 12 Nhóm 6 o Độ ẩm: Lớn, ở những nơi ngập nước, hàm lượng axit hữu cơ cao (do hoạt động của VSV) o Hợp chất hữu cơ: Hàm lượng hợp chất hữu cơ tươi làm tăng sự sinh trưởng của hệ VSV o Hệ rễ: Kích thích sự sinh trưởng của VSV và tăng cường giải lân 3.2 Lân hữu cơ - Nhiều...  Phân vi sinh siêu đậm đặc Trichomix: - Hỗn hợp VSV bao gồm: Bacillus subtilis, Pseudomonas sp, Streptomycess spp - Vai trò: Phòng ngừa bệnh vàng lá, thối rễ, chạy dây, cây non, thối trái, phân hủy nhanh rơm rạ, hạn chế ngộ độc hữu cơ, phân giải lân, kích thích rễ cây phát triển tốt, dưỡng cây xanh tốt, dùng để ủ phân hữu cơ, phân chuồng, xác bã thực vật, khử mùi chuồng trại, rác thải 2 Các chủng vi. .. thuật sản xuất phân vi sinh, Cổng thông tin điện tử Sở Khoa Học và Công Nghệ, theo đường link: http://sokhcn.vinhphuc.gov.vn/noidung/bantinkhcn/Lists/PhoBienKienThuc/View_Detail.aspx?ItemID=28 [Truy cập ngày 28/4/2015] - PGS TS Phạm Văn Toản, Th.S Lương Hữu Thành (2008), Nghiên cứu sản xuất thử nghiệm phân bón vi sinh vật đa chủng, phân bón chức năng phục vụ chăm sóc cây trồng cho một số vùng sinh thái,... dễ tìm, giá thành rẻ giúp tiết kiệm chi phí sản xuất từ đó hạ giá thành sản phẩm Vì những lí do trên nên nhóm tiến hành tìm hiểu về: “Quy trình sản xuất phân lân vi sinh từ vi khuẩn Bacillus subtilis” 5.2 Phân lập tuyển chọn 5.2.1 Phân lập vi sinh vật có khả năng phân giải lân Bước 1: Thu mẫu Lấy mẫu đất trồng ngô, lúa, đậu tương, mẫu quặng, ở tầng mặt bằng thìa vô trùng, độ sâu từ 2 đến 5cm, lần lấy... dụng phân lân - Phân VSV giúp chuyển hóa phosphate khó tan không chỉ có tác dụng nâng cao hiệu quả của phân khoáng nhờ hoạt tính phân giải và chuyển hóa các chủng VSV Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 25 Nhóm 6 - Tận dụng nguồn phosphate địa phương có hàm lượng lân thấp - Các nước Châu Âu, Châu Mỹ cũng như các nước ở Châu Phi đều cho thấy hiệu quả to lớn của phân lân vi sinh - Tại Ấn Độ, VSV phân giải lân. .. P2O5/ha - Sử dụng VSV phân giải lân cùng quặng phosphate có thể thay thế được 50kg lân khoáng cần bón mà không ảnh hưởng đến năng suất cây trồng - Tại Ấn Độ và Trung Quốc là 2 quốc gia đang đẩy mạnh chương trình phát triển và ứng dụng công nghệ sản xuất phân lân vi sinh ở quy mô lớn với diện tích hàng triệu ha - Tại Vi t Nam các công trình nghiên cứu cho biết 1 gói chế phẩm VSV phân giải lân (50kg) sử dụng... đất hoặc phân chuồng sau đó thúc sớm cho cây (càng bón sớm càng tốt); - Phương pháp này nhằm làm tăng số lượng VSV hữu ích vào đất Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC Page 24 Nhóm 6  Những chú ý khi sử dụng phân lân vi sinh - Do tác dụng của phân VSV chậm hơn phân hóa học, nên với những loại cây trồng ngắn ngày chủ yến bón lót Với các loại cây trồng thu hoạch theo lứa do tác dụng của phân vi sinh chậm hơn phân hoá... khả năng phân giải Ca3(PO4)2 - Cấy chấm điểm vi sinh vật đã phân lập trên môi trường thạch Pikovskaya - Theo dõi khả năng hình thành vòng phân giải của các chủng trong 3 – 7 ngày - Vi sinh vật có hoạt tính phân giải sẽ tạo thành vòng trong suốt xung quanh khuẩn lạc còn chưa phân giải có màu đục hơn - Đo đường kính vòng phân giải - Kết quả khảo sát khả năng phân giải phosphat: Th.S NGUYỄN THỊ KIM CÚC ... loại phân lân vi sinh phổ biến Trên thị trường dòng phân lân vi sinh túy ít, chủ yếu phân lân vi sinh hỗn hợp kết hợp dòng vi sinh vật có khả phân giải nitơ, kali, photpho,… Ví dụ: Phân hữu vi sinh. .. ( lân vi sinh) : sản xuất từ nguồn vi sinh vật phân giải lân cellulose; dùng để hạ phèn, cải tạo đất, hạn chế ngộ độc hữu cơ, phân giải lân khó tan thành dễ tan, phòng ngừa nấm hại rễ  Phân lân. .. tiêu chuẩn phân bón vi sinh vật phân giải Phosphate  Thời gian bảo hành phân lân vi sinh tháng  Mật độ vi sinh vật phải phù hợp: Bảng xác định mật độ vi sinh vật phù hợp Thông thường phân bón