Thiết Lập Hệ Thống Tái Sinh IN VITRO Cây Hoa Cúc (Chrysanthemum Sp.)

TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM TRƯỜNG ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG KHOA KHOA HỌC ỨNG DỤNG ************ THIẾT LẬP HỆ THỐNG TÁI SINH IN VITRO CÂY HOA CÚC (Chrysanthemum sp.) Giảng viên hướng dẫn : TS TRẦN THỊ DUNG Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 12/2009 TÓM TẮT Đặng Thị Thu Thảo, Đại học Tôn Đức Thắng, Tp Hồ Chí Minh Tháng 12/2009, với đề tài “Thiết lập hệ thống tái sinh in vitro hoa Cúc Chrysanthemum sp.)”, hướng dẫn TS Trần Thị Dung Đề tài thực Khoa Khoa học ứng dụng, Trường Đại học Tôn Đức Thắng Thời gian thực từ tháng 10/2009 đến 12/2009 œMục đích đề tài: Tìm hiểu thông số môi trường thích hợp cho trình tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro, từ nuôi cấy thành hoa Cúc hoàn chỉnh in vitro làm sở cho vi nhân giống nghiên cứu chuyển gen có lợi hoa Cúc (Chrysanthemum sp.) œPhương pháp nghiên cứu: Mẫu hoa Cúc in vitro sử dụng để tiến hành khảo sát thông số sau: - Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro - Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến nhân chồi Cúc in vitro môi trường agar môi trường lỏng - Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến tạo rễ hoa Cúc in vitro œKết đạt được: Các mẫu Cúc in vitro tái sinh chồi môi trường MS có bổ sung mg/l NAA + mg/l 2,4-D + mg/l BA Mỗi mảnh mô sẹo có từ – chồi Sau tái sinh, chồi nhân nhanh để tạo số lượng lớn in vitro môi trường MS có bổ sung mg/l BA + 0,5 mg/l IBA môi trường MS lỏng có bổ sung mg/l GA3 + 0,05 mg/l NAA Các chồi mọc vươn lên khỏi môi trường, kích thích phát triển thân Khi đạt số lượng chồi mong muốn, tiến hành tạo rễ môi trường MS có bổ sung 0,5 mg/l IBA Rễ mập, có nhiều lông hút, thích hợp để chuyển sang giai đoạn ex vitro tạo hoa Cúc hoàn chỉnh ii MỤC LỤC CHƯƠNG TRANG Lời cảm ơn i Tóm tắt ii Mục lục iii Danh sách chữ viết tắt v Danh sách hình vi Danh sách bảng vii CHƯƠNG GIỚI THIỆU CHUNG 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích 1.3 Ý nghĩa đề tài .2 CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung hoa Cúc 2.1.1 Vị trí phân loại thực vật 2.1.2 Nguồn gốc phân bố 2.1.3 Tình hình sản xuất hoa Cúc 2.1.4 Giá trị kinh tế hoa Cúc 2.1.5 Đặc điểm thực vật .5 2.1.6 Đặc điểm sinh thái 2.1.7 Kỹ thuật trồng 2.2 Khái niệm chung nuôi cấy mô tế bào thực vật .8 2.2.1 Khái niệm chung .8 2.2.2 Các bước nhân giống in vitro 14 2.2.3 Một số kỹ thuật nhân giống vô tính in vitro 15 2.2.4 Các yếu tố ảnh hưởng đến sinh trưởng phát triển mẫu cấy 16 2.3 Các nghiên cứu trước nuôi cấy mô hoa Cúc 25 CHƯƠNG VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 29 3.1 Thời gian địa điểm tiến hành thí nghiệm .29 3.1.1 Địa điểm 29 iii 3.1.2 Thời gian 29 3.2 Nội dung nghiên cứu 29 3.3 Vật liệu thí nghiệm 29 3.3.1 Đối tượng nghiên cứu 29 3.3.2 Trang thiết bị thí nghiệm 29 3.3.3 Môi trường nuôi cấy 29 3.3.4 Điều kiện nuôi cấy 31 3.4 Phương pháp thí nghiệm 31 3.4.1 Thí nghiệm 1: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro 31 3.4.2 Thí nghiệm 2: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến nhân chồi hoa Cúc in vitro môi trường agar 32 3.4.3 Thí nghiệm 3: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến nhân chồi hoa Cúc in vitro môi trường lỏng .33 3.4.4 Thí nghiệm 4: Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến tạo rễ hoa Cúc in vitro 34 3.5 Phương pháp phân tích số liệu .34 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 35 CHƯƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .49 5.1 Kết luận 49 5.2 Kiến nghị 49 TÀI LIỆU THAM KHẢO 50 PHỤ LỤC 52 iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT MS: Môi trường Murashige Skoog (1962) BA: Benzyl adenine IAA: Indole – – acetic acid IBA: Acid indolebutyric NAA: – naphthalene acetic acid 2,4-D: 2,4 – dichlorophenoxyacetic acid GA3: Acid gibberellic ĐC: Đối chứng NSC: Ngày sau cấy CĐHST: Chất điều hòa sinh trưởng v DANH SÁCH CÁC HÌNH HÌNH TRANG Hình 2.1 Cây hoa Cúc Hình 2.2 Quy trình chuyển gen vào thực vật kỹ thuật đĩa nhờ vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens 11 Hình 2.3 Một số giống hoa Cúc thuộc chi Chrysanthemum sp .28 Hình 4.1 Ảnh hưởng NAA, 2,4-D BA đến tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro sau 40 ngày nuôi cấy 37 Hình 4.2 Ảnh hưởng NAA, 2,4-D BA đến tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro sau 60 ngày nuôi cấy 38 Hình 4.3 Ảnh hưởng BA IBA đến nhân chồi hoa Cúc in vitro môi trường agar 42 Hình 4.4 So sánh ảnh hưởng BA IBA đến nhân chồi hoa Cúc in vitro môi trường agar 43 Hình 4.5 Ảnh hưởng GA3 NAA đến nhân chồi hoa Cúc in vitro môi trường lỏng .45 Hình 4.6 Ảnh hưởng IBA đến tạo rễ hoa Cúc in vitro 47 Hình 4.7 Sơ đồ thiết lập hệ thống tái sinh in vitro từ mẫu hoa Cúc (Chrysanthemum sp.) 48 vi DANH SÁCH CÁC BẢNG BẢNG TRANG Bảng 3.1 Thành phần môi trường MS (Murashige – Skoog, 1962) 30 Bảng 3.2 Các nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro 31 Bảng 3.3 Các nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến nhân chồi hoa Cúc in vitro môi trường agar 32 Bảng 3.4 Các nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến nhân chồi Cúc in vitro môi trường lỏng .33 Bảng 3.5 Các nghiệm thức khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến tạo rễ hoa Cúc in vitro 34 Bảng 4.1 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro 35 Bảng 4.2 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến nhân chồi hoa Cúc in vitro môi trường agar 39 Bảng 4.3 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến nhân chồi hoa Cúc in vitro môi trường lỏng 44 Bảng 4.4 Ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến tạo rễ hoa Cúc in vitro .46 vii CHƯƠNG GIỚI THIỆU CHUNG 1.1 Đặt vấn đề Từ xa xưa, chơi Cúc thú chơi tao nhã bậc học sỹ gia đình giàu có Trải qua nhiều năm, với kỹ thuật lai ghép, phương pháp trồng hoa mới, chất lượng chủng loại hoa Cúc cải thiện nhiều Cho đến có khoảng 70 giống Cúc trồng với mục đích cắt cành Cây hoa Cúc (Chrysanthemum sp.) loài hoa trang trí phổ biến giới Hoa Cúc đa dạng màu sắc hình dáng, loại hoa cắt cành làm cảnh, loại hương liệu dược liệu Hoa Cúc nhanh chóng trở thành mục tiêu thương mại vi nhân giống, cách sử dụng kỹ thuật nuôi cấy mô để sản xuất với số lượng lớn Có nhiều công trình nghiên cứu nhân giống hoa Cúc nhiều quốc gia báo cáo nuôi cấy mô sẹo tái sinh thành con, nuôi cấy đỉnh sinh trưởng in vitro, nuôi cấy tế bào trần, nuôi cấy mô sẹo phát sinh từ thân và từ phần hoa [9] Nhân giống sinh dưỡng ex vitro cách cắt cành phương pháp đơn giản nông dân sử dụng đồng ruộng Tuy nhiên, thu nhận từ phương pháp bị thoái hóa sau vài hệ bị nhiễm virus Ngoài nhân giống, nghiên cứu tạo giống hoa có màu sắc lạ, giống Cúc có mang gen chống chịu sâu bệnh hay điều kiện thời tiết khắc nghiệt trọng, nhiên thường thực phương pháp lai tạo truyền thống nên thường gây đột biến, cho kết không mong muốn Thời gian gần đây, nhờ can thiệp kỹ thuật di truyền đem lại nhiều kết khả quan lĩnh vực nuôi cấy mô thực vật chuyển nạp gen gfp nhờ Agrobacterium tumefaciens vào mẫu Cúc đại đóa giúp giống có khả phát sáng Vì vậy, đề tài “Thiết lập hệ thống tái sinh in vitro hoa Cúc (Chrysanthemum sp.)” nhằm tìm môi trường thích hợp để tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro tạo thuận lợi cho nghiên cứu sau chuyển nạp gen ứng dụng khác hoa Cúc 1.2 Mục đích Tìm hiểu thông số môi trường thích hợp cho trình tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro, từ nuôi cấy thành hoa Cúc hoàn chỉnh in vitro làm sở cho vi nhân giống nghiên cứu chuyển gen có lợi hoa Cúc (Chrysanthemum sp.) 1.3 Ý nghĩa đề tài Xác định nồng độ chất điều hòa sinh trưởng thích hợp cho tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro Xác định nồng độ chất điều hòa sinh trưởng thích hợp cho nhân chồi hoa Cúc in vitro môi trường agar môi trường lỏng Xác định nồng độ chất điều hòa sinh trưởng thích hợp cho tạo rễ Cúc in vitro CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu chung hoa Cúc 2.1.1 Vị trí phân loại thực vật [4] Giới : Plantae Ngành : Magnoliophyta Lớp : Magnoliopsida Bộ : Asterales Họ : Asteraceae Chi : Chrysanthemum Tên khoa học: Chrysanthemum sp Hình 2.1 Cây hoa Cúc Tên tiếng Anh: Red – white chrysanthemum Tên thông thường: Cúc hoa 2.1.2 Nguồn gốc phân bố [25] Cây hoa Cúc có nguồn gốc từ Trung Quốc Khoảng 500 năm trước Tây Lịch Khổng Tử đề cập đến việc trồng hoa Cúc Ở Nhật vào kỷ thứ sau Tây Lịch có diện hoa Cúc Riêng Âu Châu, Cúc mang vào Hà Lan năm 1688, việc trồng hoa Cúc thời không thành công Đến năm 1789 M Blancard Marseilles đem ba loại Cúc từ Trung Hoa Pháp, có ba loại sống được, Cúc “Old Purple” ghi lịch sử hoa Cúc Ở Anh cuối kỷ 18 người ta thấy có loại Cúc nhập cảng, đến năm 1824 có 24 loại năm 1826 lên tới 48 loại Vào năm 1860, thăm viếng Nhật Bản, ông Robert Fortune đem nhiều loại Cúc Châu Âu Trong phát triển hoa Cúc, lai giống tiếp loại Cúc mà người ta thêm nhiều giống Ở Châu Úc, hoa Cúc trồng Tasmania vào năm 1836, New South Wales 1843, Victoria 1855 New Zealand 1860 Ở Mỹ cuối kỷ 19 Cúc trồng nhiều Riêng hoa Cúc Việt Nam có xuất xứ từ Trung Hoa, Nhật Châu Âu Hoa Cúc trồng phổ biến nhiều vùng trồng hoa nước ta Trong đó, vùng trồng lớn làng hoa Hà Nội, Mê Linh (Vĩnh Phúc), Nam Định Đà Lạt Hoa Cúc trồng làm cảnh Đà Lạt từ lâu thực Data file: CCCTN1 Title: THI NGHIEM – CHIEU CAO CHOI Function: ANOVA-1 Data case no to 12 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (Chieucaochoitn1) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square T A B L E F-value Prob Between 1.577 0.526 Within 0.041 0.005 103.247 0.0000 Total 11 1.618 Coefficient of Variation = 5.56% Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -1 3.00 2.430 0.810 0.08 0.04 3.00 3.560 1.187 0.04 0.04 3.00 5.470 1.823 0.10 0.04 3.00 3.930 1.310 0.04 0.04 -Total 12.00 15.390 1.283 Within 0.38 0.07 Bartlett's test Chi-square = 2.350 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 Data File : CCCTN1 Title : THI NGHIEM – CHIEU CAO CHOI Case Range : 13 - 16 Variable : Chieucaochoitn1 Function : RANGE Error Mean Square = 0.005000 Error Degrees of Freedom = No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test 56 0.11 LSD value = 0.1937 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 0.8100 Mean = 1.187 Mean = 1.823 Mean = 1.310 Ranked Order C B A B Mean = 1.823 Mean = 1.310 B Mean = 1.187 B Mean = 0.8100 57 A C PHỤ LỤC 2: Data file:%CHOIAG Title: THI NGHIEM - % MAU TAO CHOI Function: ANOVA-1 Data case no to 30 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (%taochoiag) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square T A B L E F-value Prob Between 11852.592 1316.955 Within 20 5926.963 296.348 4.444 0.0026 Total 29 17779.555 Coefficient of Variation = 25.82% Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -0 3.00 99.990 33.330 0.00 9.94 3.00 133.320 44.440 19.24 9.94 3.00 133.320 44.440 19.24 9.94 3.00 166.650 55.550 19.24 9.94 3.00 233.320 77.773 19.25 9.94 3.00 266.660 88.887 19.25 9.94 3.00 266.660 88.887 19.25 9.94 3.00 266.660 88.887 19.25 9.94 3.00 233.320 77.773 19.25 9.94 3.00 199.980 66.660 0.00 9.94 -Total 30.00 1999.880 66.663 Within 24.76 17.21 Bartlett's test Chi-square = 62.922 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 WARNING: One or more factor levels have a variance of zero This will cause a large Chi-Square value 58 4.52 Data File :%CHOIAG Title : THI NGHIEM - % MAU TAO CHOI Case Range : 31 - 40 Variable : %taochoiag Function :RANGE Error Mean Square = 296.3 Error Degrees of Freedom = 20 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 39.99 at alpha = 0.010 Original Order Ranked Order Mean = 33.33 C Mean = 88.89 A Mean = 44.44 BC Mean = 88.89 A Mean = 44.44 BC Mean = 88.89 A Mean = 55.55 ABC Mean = 77.77 AB Mean = 77.77 AB Mean = 77.77 AB Mean = 88.89 A Mean 10 = 66.66 ABC Mean = 88.89 A Mean = 55.55 ABC Mean = 88.89 A Mean = 44.44 BC Mean = 77.77 AB Mean = 44.44 BC Mean 10 = 66.66 ABC Mean = 33.33 C Data file:SCTN2 Title: THI NGHIEM – SO CHOI Function: ANOVA-1 Data case no to 30 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (sctn2) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 306.623 34.069 Within 20 4.095 0.205 166.394 0.0000 Total 29 310.718 Coefficient of Variation = 4.93% 59 Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -0 3.00 10.660 3.553 0.39 0.26 3.00 14.330 4.777 0.51 0.26 3.00 20.000 6.667 0.34 0.26 3.00 24.340 8.113 0.51 0.26 3.00 32.000 10.667 0.34 0.26 3.00 40.000 13.333 0.34 0.26 3.00 36.340 12.113 0.51 0.26 3.00 38.660 12.887 0.51 0.26 3.00 31.670 10.557 0.20 0.26 3.00 27.330 9.110 0.70 0.26 -Total 30.00 275.330 9.178 3.27 Within 0.60 0.45 Bartlett's test Chi-square = 3.345 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.840 Data File : SCTN2 Title : THI NGHIEM – SO CHOI Case Range : 31 - 40 Variable : sctn2 Function :RANGE Error Mean Square = 0.2050 Error Degrees of Freedom = 20 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 1.052 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 3.553 Mean = 4.777 Mean = 6.667 Mean = 8.113 Mean = 10.67 Mean = 13.33 Mean = 12.11 Mean = 12.89 Mean = 10.56 Mean 10 = 9.110 Ranked Order G Mean = 13.33 A Mean = 12.89 AB Mean = 12.11 B Mean = 10.67 C Mean = 10.56 C Mean 10 = 9.110 D B Mean = 8.113 D AB Mean = 6.667 Mean = 4.777 Mean = 3.553 F E D C A C D 60 E F G Data file:CCCTN2 Title: THI NGHIEM – CHIEU CAO CHOI TN2 Function: ANOVA-1 Data case no to 30 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (ccctn2) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square T A B L E F-value Prob -Between 9.659 1.073 Within 20 0.076 0.004 284.172 0.0000 Total 29 9.735 Coefficient of Variation = 5.34% Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -0 3.00 8.370 2.790 0.06 0.04 3.00 2.290 0.763 0.02 0.04 3.00 2.570 0.857 0.03 0.04 3.00 2.720 0.907 0.04 0.04 3.00 3.260 1.087 0.12 0.04 3.00 3.770 1.257 0.04 0.04 3.00 3.480 1.160 0.04 0.04 3.00 3.100 1.033 0.08 0.04 3.00 2.570 0.857 0.05 0.04 3.00 2.410 0.803 0.07 0.04 -Total 30.00 34.540 1.151 Within 0.58 0.06 Bartlett's test Chi-square = 8.438 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 61 0.11 Data File :CCCTN2 Title : THI NGHIEM – CHIEU CAO CHOI Case Range : 31 - 40 Variable : ccctn2 Function :RANGE Error Mean Square = 0.004000 Error Degrees of Freedom = 20 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.1469 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 2.790 Mean = 0.7633 Mean = Mean Ranked Order A Mean = 2.790 E Mean = 1.257 B 0.8567 E Mean = 1.160 BC = 0.9067 DE Mean = 1.087 C Mean = 1.087 Mean = 1.033 CD Mean = 1.257 B Mean = 0.9067 DE Mean = 1.160 BC Mean = 0.8567 E Mean = 1.033 Mean = 0.8567 E Mean = 0.8567 E Mean 10 = 0.8033 E Mean 10 = 0.8033 E Mean = 0.7633 E C CD 62 A PHỤ LỤC 3: Data file: CHIEU CAO CHOI Title: THI NGHIEM – CHIEU CAO CHOI TRONG MT LONG Function: ANOVA-1 Data case no to One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (cccl) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square T A B L E F-value Prob Between 7.662 3.831 Within 2.149 0.358 10.696 0.0105 Total 9.811 Coefficient of Variation = 8.58% Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -1 3.00 17.520 5.840 1.01 0.35 3.00 20.950 6.983 0.17 0.35 3.00 24.300 8.100 0.17 0.35 -Total 9.00 62.770 6.974 Within 0.60 Bartlett's test Chi-square = 6.652 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.036 Data File : ChIEU CAO CHOI Title : THI NGHIEM – CHIEU CAO CHOI MT LONG Case Range : 10 - 12 Variable : cccl Function : RANGE Error Mean Square = 0.3580 Error Degrees of Freedom = No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 1.811 1.11 at alpha = 0.01 63 0.37 Original Order Ranked Order Mean = 5.840 B Mean = 8.100 A Mean = 6.983 AB Mean = 6.983 AB Mean = 8.100 A Mean = 5.840 B Data file: SOLA Title: THI NGHIEM – SO LA Function: ANOVA-1 Data case no to One way ANOVA grouped over variable (NT) with values from to Variable (SOLA) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square T A B L E F-value Prob Between 9.496 4.748 Within 0.406 0.068 70.217 0.0001 Total 9.902 Coefficient of Variation = 3.89% Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -1 3.00 15.910 5.303 0.39 0.15 3.00 20.900 6.967 0.17 0.15 3.00 23.310 7.770 0.13 0.15 -Total 9.00 60.120 6.680 Within 1.11 0.26 Bartlett's test Chi-square = 2.122 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.346 Data File :SOLA Title : THI NGHIEM – SO LA Case Range : 10 - 12 Variable : SOLA Function :RANGE Error Mean Square = 0.06800 64 0.37 Error Degrees of Freedom = No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.7894 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 5.303 Mean = 6.967 Mean = 7.770 Ranked Order C B A Mean = 7.770 Mean = 6.967 Mean = 5.303 A B C Data file: SODOT Title: THI NGHIEM – SO DOT Function: ANOVA-1 Data case no to One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (sodot) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square T A B L E F-value Prob Between 22.574 11.287 Within 0.454 0.076 149.258 0.0000 Total 23.028 Coefficient of Variation = 5.27% Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -1 3.00 9.340 3.113 0.12 0.16 3.00 16.870 5.623 0.23 0.16 3.00 20.790 6.930 0.40 0.16 -Total 9.00 47.000 5.222 Within 1.70 0.27 Bartlett's test Chi-square = 2.213 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.331 65 0.57 Data File :SODOT Title : THI NGHIEM – SO DOT Case Range : 10 - 12 Variable : sodot Function : RANGE Error Mean Square = 0.07600 Error Degrees of Freedom = No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.8345 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 3.113 Mean = 5.623 Mean = 6.930 Ranked Order C B A Mean = 6.930 Mean = 5.623 Mean = 3.113 66 A B C PHỤ LỤC 4: Data file:%TAORE Title: THI NGHIEM - % TAO RE Function: ANOVA-1 Data case no to 15 One way ANOVA grouped over variable (NT) with values from to Variable (% tao re) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square T A B L E F-value Prob Between 6370.652 1592.663 Within 10 2223.111 222.311 7.164 0.0055 Total 14 8593.762 Coefficient of Variation = 20.97% Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -1 3.00 99.990 33.330 0.00 8.61 3.00 266.660 88.887 19.25 8.61 3.00 266.660 88.887 19.25 8.61 3.00 233.320 77.773 19.25 8.61 3.00 199.980 66.660 0.00 8.61 -Total 15.00 1066.610 71.107 Within 24.78 14.91 Bartlett's test Chi-square = 61.511 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.000 WARNING: One or more factor levels have a variance of zero This will cause a large Chi-Square value Data File :%TAORE Title : THI NGHIEM - % TAO RE Case Range : 16 - 20 Variable : % tao re Function : RANGE Error Mean Square = 222.3 67 6.40 Error Degrees of Freedom = 10 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 38.58 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 33.33 Mean = 88.89 Mean = Mean Mean Ranked Order B Mean = 88.89 A A Mean = 88.89 A 88.89 A Mean = 77.77 A = 77.77 A Mean = 66.66 AB = 66.66 AB Mean = 33.33 B Data file:SORE Title: THI NGHIEM – SO RE Function: ANOVA-1 Data case no to 15 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (so re) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square T A B L E F-value Prob Between 122.461 30.615 Within 10 1.331 0.133 229.982 0.0000 Total 14 123.792 Coefficient of Variation = 8.09% Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -1 3.00 2.320 0.773 0.20 0.21 3.00 10.000 3.333 0.67 0.21 3.00 27.660 9.220 0.19 0.21 3.00 17.670 5.890 0.19 0.21 3.00 10.000 3.333 0.34 0.21 -Total 15.00 67.650 4.510 Within 2.97 0.36 Bartlett's test Chi-square = 4.681 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.32 68 0.77 Data File :SORE Title : THI NGHIEM – SO RE Case Range : 16 - 20 Variable : so re Function : RANGE Error Mean Square = 0.1330 Error Degrees of Freedom = 10 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.9437 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 0.7733 Mean = 3.333 Mean = 9.220 Mean = 5.890 Mean = 3.333 Ranked Order D C A B C Mean = 9.220 A Mean = 5.890 Mean = 3.333 C Mean = 3.333 C Mean = 0.7733 B D Data file: CHIEUDAIRE4 Title: THI NGHIEM – CHIEU DAI RE Function: ANOVA-1 Data case no to 15 One way ANOVA grouped over variable (nt) with values from to Variable (daire4) A N A L Y S I S O F V A R I A N C E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square T A B L E F-value Prob Between 63.003 15.751 Within 10 0.088 0.009 1780.429 0.0000 Total 14 63.092 Coefficient of Variation = 4.12% 69 Var V A R I A B L E Number No Sum Average SD SE -1 3.00 18.210 6.070 0.09 0.05 3.00 3.920 1.307 0.15 0.05 3.00 8.290 2.763 0.11 0.05 3.00 2.210 0.737 0.05 0.05 3.00 1.580 0.527 0.04 0.05 -Total 15.00 34.210 2.281 2.12 Within 0.09 Bartlett's test Chi-square = 4.106 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.392 Data File : CHIEUDAIRE Title : THI NGHIEM – CHIEU DAI RE Case Range : 16 - 20 Variable : daire4 Function : RANGE Error Mean Square = 0.009000 Error Degrees of Freedom = 10 No of observations to calculate a mean = Least Significant Difference Test LSD value = 0.2455 at alpha = 0.010 Original Order Mean = 6.070 Mean = 1.307 Mean = 2.763 Mean = 0.7367 Mean = 0.5267 Ranked Order A Mean = 6.070 Mean = 2.763 Mean = 1.307 D Mean = 0.7367 D D Mean = 0.5267 D C B 70 A B C 0.55 [...]... mẫu lá cây hoa Cúc in vitro Khảo sát ảnh hưởng của các chất điều hòa sinh trưởng đến sự nhân chồi cây hoa Cúc in vitro trong môi trường agar và môi trường lỏng Khảo sát ảnh hưởng của các chất điều hòa sinh trưởng đến sự tạo rễ ở cây hoa Cúc in vitro 3.3 Vật liệu thí nghiệm 3.3.1 Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu là cây hoa Cúc in vitro do Viện Sinh học Nhiệt Đới cung cấp Đây là giống hoa mới... hưởng mạnh đến khả năng tái sinh và phân chia tế bào in vitro Thông thường các bộ phận của cây trong giai đoạn sinh dưỡng dễ tái sinh hơn trong giai đoạn sinh sản Các mẫu cấy từ vảy của cây Huệ tây ở giai đoạn sinh dưỡng tái sinh tốt hơn những mẫu cấy ở giai đoạn sinh sản Các chồi của cây trong giai đoạn ngủ đông (cuối thu đầu đông) khó nuôi cấy in vitro hơn chồi của những cây đã trải qua giai đoạn... (nylon film) được thiết kế như là một giá thể mới dùng trong ra rễ đoạn cắt cây hoa Cúc Chrysanthemum sp trong môi trường lỏng với hệ thống vi thủy canh in vitro và ex vitro Hệ thống này được sử dụng để kiểm tra hiệu quả ra rễ của các đoạn cắt cây hoa Cúc Mỗi lọ thủy tinh (250 ml) chứa 10 ống nylon (hệ thống in vitro) và mỗi hộp nhựa (500ml) chứa 25 ống nylon (hệ thống ex vitro) , hệ thống ra rễ truyền... - Tạo thể nhân giống in vitro - Nhân giống in vitro - Tái sinh cây hoàn chỉnh in vitro - Chuyển cây in vitro ra vườn ươm 2.2.2.1 Tạo thể nhân giống in vitro Mẫu được nuôi cấy trên môi trường dinh dưỡng thích hợp để tạo thể nhân giống in vitro Có hai thể nhân giống in vitro là thể chồi và thể cắt đốt Tạo thể nhân giống in vitro phụ thuộc vào đặc điểm nhân giống ngoài tự nhiên của cây trồng Đối với những... gen Khả năng tái sinh trong giới thực vật rất đa dạng Những cây hai lá mầm thông thường có khả năng tái sinh mạnh hơn cây một lá mầm và cây hạt trần rất khó tái sinh (trừ khi chúng còn non) Trong số các cây hai lá mầm: Solanaceae, 16 Begoniaceae, Crassulaceae, Gesneriaceae, Crucferae là những loài dễ tái sinh nhất Nếu một loài dễ tái sinh cơ quan trong môi trường tự nhiên (các giống lai Saintpaulia ionantha,... chồi ngọn (cơ quan tổng hợp auxin) thì hiện tượng ưu thế ngọn càng tăng dần tương ứng với sự tăng hàm lượng auxin và giảm hàm lượng cytokinin 23 Cytokinin còn ảnh hưởng đến quá trình trao đổi chất như quá trình sinh tổng hợp acid nucleic, protein, clorophin và do đó ảnh hưởng đến các hoạt động sinh lý của cây œ Cơ chế tác dụng của cytokinin lên sự sinh trưởng của cây Cytokinin tác động lên quá trình phân... và cytokinin có ý nghĩa rất quyết định trong quá trình phát sinh hình thái của mô nuôi cấy in vitro cũng như trên cây nguyên vẹn Nếu tỷ lệ auxin cao hơn cytokinin thì kích thích sự ra rễ, còn tỷ lệ cytokinin cao hơn auxin sẽ kích thích sự xuất hiện và phát triển của chồi Để tăng hệ số nhân giống, người ta tăng nồng độ cytokinin trong môi trường nuôi cấy ở giai đoạn tạo chồi in vitro Cytokinin có khả... hiệu ứng nhà kính Môi trường in vitro Môi trường in vitro là môi trường trên và dưới mặt thạch trong bình nuôi cấy Môi trường in vitro có ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và phát triển hình thái của cây in vitro Một số vấn đề của môi trường in vitro là mức độ quang hợp thấp không cân bằng CO2, mức độ hấp thu và vận chuyển các chất dinh dưỡng hạn chế, Vì vậy, cây con in vitro sinh trưởng chậm, xuất hiện... và hạt làm vật liệu nuôi cấy mô Khi cây già đi, khả năng tái sinh của chúng cũng giảm theo và các bộ phận của cây con dễ tái sinh hơn như trong trường hợp cây bụi Một vài ví dụ cụ thể chỉ sự khác nhau về khả năng tái sinh và phân chia tế bào giữa cây già và cây in vitro: Hedera helix, Lunaria annua và Anthurium andreanum Khi mô phân sinh và chồi đỉnh được tách khỏi cây mẹ thì chúng vẫn giữ được những... cây cần có một lượng cytokinin ngoại sinh cao để kích thích sự hình thành cụm chồi, đôi khi nồng độ chất điều hòa sinh trưởng giảm thấp làm cho phù hợp với quá trình nhân giống kéo dài Điều kiện nuôi cấy thích hợp giúp cho quá trình tăng sinh diễn ra nhanh Cây nhân giống in vitro ở trạng thái trẻ hóa và được duy trì trong thời gian dài 2.2.2.3 Tái sinh cây hoàn chỉnh in vitro Đây là giai đoạn tạo cây ... mẫu Cúc đại đóa giúp giống có khả phát sáng Vì vậy, đề tài Thiết lập hệ thống tái sinh in vitro hoa Cúc (Chrysanthemum sp.) nhằm tìm môi trường thích hợp để tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro. .. sinh trưởng đến tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro œ Mục đích: Xác định nồng độ NAA, 2,4-D BA thích hợp cho tái sinh chồi từ mẫu hoa Cúc in vitro œ Phương pháp thực hiện: Các chồi Cúc in vitro. .. hòa sinh trưởng ngoại sinh tác dụng độc lập với chất điều hòa sinh trưởng nội sinh Tác dụng phối hợp auxin cytokinin có tác dụng định đến phát triển phát sinh hình thái tế bào mô Tốc độ tái sinh