Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám

Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám

Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám PHẦN I: TỔNG QUAN A Nấm ăn: Theo quan niệm cũ, nấm là thực vật, các loại cỏ khác, là thực vật không có sắc tố xanh (diệp lục tố) Tuy nhiên, những nghiên cứu ngày càng nhiều về sinh lý và biến dưỡng, cho thấy rằng nấm có nhiều điểm rất khác với thực vật: -Nấm không có khả quang hợp, nghĩa là không thể nhờ ánh sáng mặt trời để tổng hợp các chất cho thể từ nước và khí cacbonic Chúng sống bằng những chất lấy từ thể sinh vật khác (thực vật, động vật và cả vi sinh vật) -Vách tế bào chủ yếu bằng chitin và glucan Chitin là chất gặp nhiều ở động vật thực vật, thành phấn cấu tạo chủ yếu của lớp vỏ hoặc cánh cứng ở nhóm giáp xác (tôm, cua…) và côn trùng -Nấm dự trữ dưới dạng glucogen, thay vì tinh bột Mặc dù vậy, nấm cũng không thể là động vật vì: -Nấm sinh sản chủ yếu bằng bào tử (hữu tính hoặc vô tính) -Sự dinh dưỡng của nấm lien quan đến hệ sợi nấm, nấm lấy các chất dinh dưỡng thông qua màng tế bào của hệ sợi nấm (tương tự rễ thực vật) Ngoài với sự phong phú của các loài nấm, dự kiến một triệu rưỡi loài, mới chỉ mô tả được 65000 loài, là một nhóm lớn, chỉ đứng sau côn trùng ( mười triệu loài) Vì vậy nấm đã dược tách khỏi giớ thực vật và thảnh lập một giới riêng, gọi là giới nấm Như vậy: Nấm cũng là sinh vật và sinh vật có nhân thật (eukaryotae) khác với vi khuẩn là vi sinh vật chưa có nhân hoàn chỉnh hay còn gọi là tiền nhân (prokaryotae) Cấu tạo của nấm có thể đơn bào nấm men, hoặc đa bào các loại nấm sợi (trong đó có nấm ăn) Do cấu tạo vậy, nên nói đến nấm là người ta nghĩ đến những sợi nhỏ li ti và gọi chung là mốc, meo Tuy nhiên, GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám nói đến nấm ăn, người ta thường nghỉ đến các tai nấm hay quả thể nấm (còn gọi là nấm) Thực tế nấm ăn có hai giai đoạn đời sống của nó: - Giai đoạn tăng trưởng: thường xuất hiện rất dài Nấm ở giai đoạn này chủ yếu là dạng sợi Sợi tơ nấm (hypha) mỏng manh và gồm hai nhân, có nguồn gốc từ hai bào tử khác nảy mầm và phối hợp lại Sợi nấm hay hệ sợi nấm (mycelium), còn gọi là hệ sợi dinh dưỡng (vegetative mycelium), len lỏi chất để hút lấy thức ăn Thức ăn vào tế bào sợ nấm thông qua màng tế bào Khi khối tơ dạt dến mức dộ nhất định về số lượng, gặp điều kiện thích hợp, sẽ bện kết thành quả thể nấm Trong trường hợp bất lợi, sẽ hình thành bào tử tiềm sinh hay hậu bào tử (chlamydospore) - Giai đoạn phát triển: thường ngắn Lúc này, tơ nấm đan vào nhau, hình thành một dạng đặc biệt, khác tùy loài, gọi là quả thể nấm hay tai nấm (fruiting body) Quả thề thường có kích thước lớn và là quan sinh sản của nấm Trên quả thể có một cấu trúc, nơi đâu tập trung các đầu ngọn sợi nấm, đó là thụ tầng (hymenium) Chính ở hai nhân của tế bào (đầu ngọn) sẽ nhập lại thành một, sau dó, sẽ chia thành bốn nhân con, hình thành bào tử hữu tính (sexual spore) đảm bào tử (basidiospore) hoặc nang bào tử (ascopore) Tai nấm trưởng thành, bào tử được phóng thích, nảy mầm và chu trình lại tiếp tục Sau cùng, để khái niệm về nấm ăn có thể tóm tắt sau: • Là sinh vật dạng sợi, có nhân thật • Dinh dưỡng bằng cách lấy thức ăn qua màng tế bào sợi nấm • Sinh sản chủ yếu là bào tử, cấu trúc đặc biệt là tai nấm hay quả thể nấm GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Hình: Đời sống của nấm phát triển tự nhiên B Tổng quan nấm bào ngư: Giới thiệu chung nấm bào ngư: Nấm Bào ngư thuộc chi Pleurotus (Fr.) Kummer có số loài thường tạo cấu trúc sinh sản đặc biệt gọi thể bó (Coremia) mang bào tử trần vô tính (Conidia) giọt dịch đen, Oswald Hilber xác lập thành phân chi (subgenus) mới: Coremiopleurotus Hilber 1982, bao gồm loài: loài chuẩn (typus): Pleurotus cystidiosus O.K Miller (1969) P abalonus Han, Chen & Cheng (1974) Nhưng ghi nhận khoảng 50 loài nấm bào ngư: P abalonus, P cornucopiae, P cytidiosus, P djamor, P eryngii, P floridanus, P globulifer, P limpidus, P GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám ostreatus, P pulmonarius, P sajor-caju, P salmoneostramineus, P spicilifer, P versiformis… hầu hết loài nấm bào ngư có đặc điểm chung như: Nấm bào ngư tên dùng chung cho loài thuộc giống Pleurotus, có hai nhóm lớn: Nhóm chịu nhiệt (nấm kết thể từ 20 – 30 oC) nhóm chịu lạnh (nấm kết thể từ 15 – 25 oC) Nấm bào ngư có tên gọi Nấm Sò, Nấm Hương Trắng, Nấm Dai… Nấm bào ngư có chung tai nấm dạng phễu lệch, phiến nấm màng bào tử kéo dài xuống đế chân, cuống nấm gần gốc có lớp lông nhỏ mịn Tai nấm bào ngư non có màu sẫm tối, trưởng thành màu trở nên sáng Chu trình sống đảm bào tử hữu tính nảy mầm cho hệ sợi tơ dinh dưỡng sơ cấp thứ cấp, “Kết thúc việc hình thành quan sinh sản tai nấm” Tai nấm lại sinh đảm bào tử chu trình sống lại tiếp tục Nói chung loài thuộc phân chi Coremiopleurotus có hương vị thị trường khu vực giới ưa chuộng GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Bảng: Thành phần dinh dưỡng nấm Bào ngư (%) Protein Chất Carbo thô béo hydrate P eous 17,5 1,0 59,2 P florida 18,9 1,7 P cystidiosus 25,0 P ostreatus Tên loài - Năng Sợi Tro lượng 12,0 9,1 (Kcal) 261 58,0 11,5 9,3 265 1,8 7,4 11,9 10,7 271 10,5 1,6 81,8 7,5 6,1 367 P opuntia 8,9 2,4 72,9 7,5 15,8 330 P limpidus 38,7 9,4 46,6 27,6 5,3 313 A bisporus 26,3 1,8 59,9 10,4 12,0 328 L edodes 17,5 8,0 67,5 8,0 7,0 387 V diplasia 28,5 2,6 57,4 17,4 11,5 304 - Nhìn vào bảng số liệu ta thấy carbonhydrate protein thành phần chính, chiếm từ 70 đến 90% trọng lượng khô thể, tro ~ 10% chứa nhiều loại chất khoáng - Chất béo có hàm lượng thấp hầu hết loài, dao động khoảng - 2%, ngoại trừ P limpidus (9,4%) và L.edodes (8.0%) - Giá trị mặt lượng đánh giá sở thành phần protein thô, chất béo carbohydrate, trị số thấp khoảng từ 261 - 367 Kcal/100g chất khô GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Đặc điểm sinh học nấm bào ngư xám Giới nấm : MYCOTA hay FUNGI Ngàng nấm Nhật : EUMYCOTA Ngành phụ : BASIDIOMYCOTINA Lớp : HYMENOMYCETES Lớp phụ : HYMEOMYCETDAE Bộ : AGARICALES Họ : PLEUROTACEAE Chi Tên khoa học : PLEUROTUS : PLEUROTUS CORNUCOPIAE Mô tả mẫu: Nấm Bào Ngư Xám (Pleurotus cornucopiae) to, nhỏ, hình tròn phễu_ quạt (đường kính tán ~3.6-8.8cm, dày ~ 8-16mm), màu trắng tươi, có sắc xám nâu, mọc thành đám thành gỗ, cách mặt đất khoảng 35-55cm, mép tàn nguyên tù tròn, uốn cong xuống rách nhẹ Mặt tán nhẵn láng bóng, thường xám nâu Những thể non hình trống, hình chùy, hình thìa mọc dày đặc, màu trắng với chóp đỉnh màu xám nâu nhạt Cuống thường đính lệch bên, hình trụ thon dài ~ 2.5-7.5cm, đường kính ~ 3.8-14.5mm, màu trắng thường có nhiều tơ nấm sinh bao phủ, phần gốc Thịt nấm nạc mềm, mọng nước, màu trắng, dày ~ 3.3 – 7.3mm, mỏng dần phía mép Phiến nấm trắng, mềm xếp xen dày, bề rộng phiến dao động – 8mm Giá trị dược liệu Nghiên cứu S.C.TAM (1986) cho thấy Bào Ngư Xám (Pleurotus cornucopiae) có tác dụng làm hạ đường huyết GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Theo nghiên cứu nhà khoa học Trung Quốc - Phó Liên Giang (1985) ăn nấm với lượng 2.5g/kg sau 40 ngày lượng cholesterol máu giảm 253.13 mg xuống 193.12mg ăn nấm sò vơi1 luợng cao gấp đôi 5g/kg sau 40 ngày lượng cholesterol máu giảm xuống 128.57 mg Loài không chứa Lipit tinh bột, giàu Protein (21.1%, bao gồm đầy đủ a.a thiết yếu, kể Lysine Methionine) Khá giàu Vitamin Vitamin C 33mg, B1 0.2 – 0.3mg Niacin 18.2 – 21.3mg, tính 100g nấm khô Đây loại nấm ăn quí, đặc Biệt cho người ăn chay, dùng thường xuyên phòng ngừa ung thư chống khối u Đặc tính kháng sinh biết rõ với hợp chất Pleurotin, xác định từ 1947 (Hình 2) Năm 1993, Myzuno Cs, tách từ phân đọan Polysaccharide có chứa protein từ Pleurotus cornucopiae chứng minh hiệu lực chống u Sarcoma 180 chuột kha rõ ràng, so sánh với hoạt lực Polysacride, PSK, PSP tách từ kê tọa Grifolafrandosa, nấm Donco Lntimula sdodes, nấm Vân chi Trametes versicolor (Lê Xuân Thám et al., 1998, 1999a)  Polysacride kháng ung thư Các loại nấm thuộc nhiều taxon: Polyporus, Lyophyllum (Shimeiji) Pleurotus (Hiratake), Lentinus, Grifola, Flammulia (Shiitake), Ganoderma (Mannentaka), Schizophyllum, Trametes,… loại thể nấm tươi; thể khuẩn ty nấm (hệ sợi) (ký hiệu Mizuno YF, YM, YE) khỏa nghiệm nhà nghiên cứu phương pháp Sarcoma 180/mice ip po, chứng minh dẫn xuất trao đổi acid nucleic, Polysacchride, Heteroglucan C-D, Glucan có hoạt tính kháng ung thư cách rõ rệt chức tăng cường miễn dịch kháng ung thư Polysccharide nấm Pleurotus cornucopiae chứng minh (Zhuang et al.,1993) GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Bảng Hiệu lực chống ung thư Sarcoma 180 chuột polysaccharide-protein thô tan nước tách từ P.cornucopiae (theo Zhuang et al., 1993) Nhóm thực nghiệm Kích cỡ khối Mức ua (cm3) ức Thời gian T/C Tỷ Tỷ lệ sốngb (ngày) (%) lệ ức chếtd chế chế (%) toàn 18,98 ± 8,74 - 31,9 ± 7,8 Fl 2,59 ± 0,07 86,4 >68,4 ± 16,4 >214,4 2/5 0/5 Flo 2,89 ± 0,61 84,8 >84,0 ± >263,3 3/5 0/5 Flo-a 1,75 ± 0,66 90,8 >84,0 ± >263,3 3/5 0/5 Flo-b 11,46 ± 3,73 39,6 53,6 ± 14,6 168,0 0/5 1/5 FA-1 11,64 ± 4,54 48,7 >64,8 ± 21,4 >203,1 1/5 1/5 FA-2 4,83 ± 1,32 74,6 >74,4 ± 16,5 >233,3 2/5 0/5 FA-3 12,44 ± 4,99 34,5 58,2 ± 19,3 1/5 GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 100 bộc 0/8 Đối chứng 182,4 0/5 7/8 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Bảng Hiệu lực chống ung thư Sarcoma 180 chuột polysaccharid-protein thô không tan nước tách P.cornucopiae (theo Zhuang et al., 1993) Nhóm Kích cỡ Mức Thời gian T/C Tỷ lệ ức Tỷ lệ thực khối ua ức sốngb (ngày) (%) chế toàn chếtd nghiệm (cm3) chế bộc (%) Đốichứng 18,98 ±8,74 - 31,9 ± 7,8 100 0/8 7/8 Fll 4,43 ± 1,98 76,7 >54,4 ± 22,3 >170,5 1/5 2/5 Fll-1 1,74 ± 0,99 90,8 >72,8 ± 12,4 >228,2 3/5 0/5 Fll-2 17,46 ±4,76 8,0 >47,2 ± 18,4 >148,0 0/5 2/5 Fll-3 19,14 ±8,31 8,4 42,2 ± 18,8 132,3 0/5 3/5 Flll-1 7,91 ± 2,34 58,4 >68,8 ± 16,4 >215,7 1/5 0/5 Flll-1a 4,39 ± 1,09 76,9 >66,8 ± 19,2 >209,4 1/5 0/5 Flll-1b 9,19 ± 2,97 51,6 >68,4 ± 20,7 >214,4 1/5 0/5 Flll-2 2,94 ± 1,21 84,5 >73,0 ± 19,5 >228,7 3/5 0/5 GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Bảng Hiệu lực chống ung thư Sarcoma 180 chuột polysaccharide-protein tinh chế tách từ P.cornucopiae (theo Zhuang et al., 1993) Nhóm Kích cỡ Mức Thời gian T/C Tỷ lệ ức Tỷ lệ thực khối ua ức chế sốngb (ngày) (%) chế toàn chếtd nghiệm (cm3) (%) Đối chứng 20,7 ±4,1 - 28,4 ± 4,9 100 0/8 8/8 Flo-a-α 9,7 ± 3,2 53,1 >43,1 ± 17,8 >151,8 1/5 1/5 Flo-a-β 10,4 ±5,0 49,8 46,6 ± 19,3 >164,1 0/5 1/5 Flo-b-α 8,4 ± 4,1 59,4 >53,2 ± 13,1 >187,3 1/5 0/5 Flo-b-β 12,7 ±4,9 31,7 45,4 ± 11,7 159,9 0/5 1/5 Flll-2a 100,0 >84,4 >295,8 5/5 0/5 Flll-2b 3,2 ± 2,1 84,6 >65,2 ± 15,1 >229,6 1/5 1/5 bộc a kích thước khối u : Trung bình ± S.D tuần sau cấy u b Thời gian sống : Trung bình ± S.D 12 tuần sau cấy u c Tỷ lệ ức chế hoàn toàn khối u đo sau 12 tuần cấy u d Tỷ lệ chết xác định sau tuần cấy u Quy trình phân lập giống: GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 10 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Sau ngày: tơ ăn hết ½ cọng mì Sau ngày: tơ lan gần hết bề mặt môi trường Sau ngày tơ ăn hết bề mặt môi trường GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 39 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Sau 10 ngày: tơ đã phủ kín hết môi trường ⇒ ta đã có được meo giống ⇒ để sản xuất phôi Từ bịch meo giống này, mỗi cọng khoai mì sẽ được cấy vào một bịch mùn cưa, một bịch khoai mì có thể cấy được 80 bịch mùn cưa ⇒ tạo hàng trăm quả thể nấm giống với quả thể nấm ban đầu phân lập XÂY DỰNG TRẠI TRỒNG VÀ CHĂM SÓC 1-Nhà trồng nấm sò: -Dài: 50m GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 40 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám -Rộng: 5m -Nền nhà chôn âm đất: -1,2m -Phần tường dương đất: +1,2m -Từ nhà đến đỉnh mái nhà: 4m (Phần mái nhà cao 1,6m) -Tường xây balo (10cm x 20cm x 30cm), tường dày ~15- 20cm  - Tùy theo điều kiện kinh tế, khoảng tài chính, điều kiện đất đai, khí hậu mà xây dựng nhà trồng có quy mô lớn hay nhỏ, cách bố trí cửa, tường, hướng… Hình vẽ cấu tạo mái nhà trồng: Mái nhà trồng gồm lớp lót chính, lớp tre nẹp phụ Lớp tre nẹp Lớp lót tranh đan Lớp lót nylong Lớp tre nẹp Tác dụng lớp: Lớp tre nẹp có tác dụng làm lực nâng đỡ cho lớp trên; lớp tre nẹp có tác dụng làm lực ép lớp lại với nhau, chống tốc mái; lớp tôn ximăng có tác dụng chống thấm nước, đồng thời chống tốc mái; lớp tranh đan có tác dụng cách nhiệt bên ngoài, giữ nhiệt bên trong; lớp nylong có tác dụng chống thấm giữ nhiệt Hình vẽ cấu trúc khái quát nhà trồng 4m Mái nhà 1,2m + 1,2m Cửa Cửa Mặt phụ GVHD: HOÀ N G XUÂN THẾ đất Tường nhà 50 m 41 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Tác dụng phận: Việc chôn âm đất giúp giữ nhiệt, cách nhiệt tốt cho nhà trồng Các cửa bố trí bậc thang để lên xuống, có cửa đóng mở cần thiết Các cửa phụ giúp tạo thông thoáng, cho ánh sang khuếch tán vào nhà trồng, cửa phụ bố trí cánh cửa tranh đan, dạng có chống sập lại cần thiết, cửa phụ chăn vải lưới để chống côn trùng xâm nhập Trên mặt tường hai đầu nhà trồng, có bố trí ô cửa có tác dụng cửa phụ Hình ảnh ô cửa tường hai đầu nhà trồng Bên nhà trồng: Nền nhà trám làm ximăng Nhà trồng chia thành gian, gian dài 7m, rộng 5m, gian thông với ô cửa cao 2,1m, rộng 1m Tại gian bố trí giàn dây treo bịch Giàn treo bịch: Ta dùng gỗ, tre, sắt để cột đan thành giàn treo Ở gian, ta phải xây tường để làm chỗ gác giàn Ngoài ra, ta phải bố trí chống chịu lực để chống giàn treo Ta phải sử dụng dây nylong để treo bịch Dây nylong dài 3m, rộng 4cm, ta gấp lại làm ba theo chiều dọc, để tăng độ chịu lực treo Ta cột néo dây lại giàn để làm chùm treo bịch, chùm phải bố trí vòng dây bóp chùm để làm lực giữ bịch lại với Mỗi chùm ta treo 7- bịch nấm, bịch treo rạch bịch, giai đoạn bịch nấm có trọng lượng nặng thể tích lớn Còn bịch ép bịch, chùm ta treo 10- 12 bịch, giai đoạn bịch nấm có trọng lượng nhẹ thể tích nhỏ Hình vẽ cấu tạo giàn treo bịch: GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 42 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Việc làm giàn treo bịch phải ý đến độ bền, tính chịu lực treo giàn Do đó, ta phải lựa chọn gỗ, tre chắt chắn để làm giàn treo Đồng thời ta phải phun thuốc chống mối mọt Các dây treo bịch phải dẽo dai, có tính chịu lực tốt để chống đứt chùm nửa chừng Hướng nhà trồng: Chiều dài nhà trồng xây theo hướng Đông Bắc Tây Nam Mục đích việc xây theo hướng này: Để nhà trồng tránh sức gió mùa Đông Bắc, chống nắng nóng Tây Nam, hướng Tây Bắc Đông Nam chịu tác hại nên ta bố trí cửa hướng này, nhằm tiếp nhận ánh sáng khuếch tán tạo thông thoáng cho nhà trồng Việc chôn âm đất nhà trồng cần lưu ý: Vì nhà trồng âm cách mặt đất đến – 1,2 m, nên nước bị ứ đọng xuống Do đó, ta cần phải thiết kế tường nhà phải I-2-Nhà ươm nấm sò: Dài 25m, rộng 5m, cao 4m (tính từ nhà đến đỉnh mái) Nhà ươm chia thành gian gian đầu chứa nguyên liệu ủ đảo, gian có cạnh hình vuông 5m phân thành ô tường cao 1m Mục đích phân thành ô: Để chứa nguyên liệu ủ ô này, để đảo đống ủ ô bên Gian thứ GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 43 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám phân thành ô, ô thứ dùng nơi vào bịch nguyên liệu, ô thứ hai chứa củi đun Gian thứ nơi bố trí lò hấp trùng Gian thứ phòng ươm Mái nhà ươm thiết kế giống với nhà trồng Nhà ươm cửa để vào, cửa phụ để hứng ánh nắng khuếch tán tạo thông thoáng cho nhà ươm Hướng nhà ươm đặt theo hướng Tây Bắc Đông Nam Các điều kiện phòng ươm: Phòng ươm phải đảm bảo thông thoáng, tránh gió lùa ánh nắng chiếu trực tiếp, tránh xâm nhập côn trùng, đồng thời đảm bảo nhiệt độ từ 20 – 26 oC, độ ẩm thích hợp cho sinh phát triển hệ sợi nấm Ngoài ra, ta cần đặt nhiều vòi nước tưới làm ẩm nhà Bên phòng ươm kê giàn từ - tầng để ươm Các giàn ươm làm gỗ, kê cách mặt đất tính tầng 0,5m, tầng cách 0,5m Khi chất bịch nấm để ươm cần lưu ý: Các bịch nấm cách từ 3- 4cm để tránh sây sát, ảnh hưởng tới sinh- phát triển hệ sợi nấm I-4-6-Ươm giống: Sau cấy giống xong, ta tiến hành chất xếp bịch lên giàn ươm Các bịch xếp cách khoảng 3- 4cm để tránh sây sát Ta ươm vòng 25- 30 ngày Trong trình ta phải thường xuyên kiểm tra sinh phát triển hệ sợi nấm Ta phải đảm bảo: Nhiệt độ phòng ươm mức từ 20- 26oC, độ ẩm bịch nấm ~ 65 – 70%, ánh sáng khuếch tán yếu, phòng ươm phải thông thoáng, côn trùng xâm nhập I-4-7-Treo rạch bịch: Sau ươm giàn 25- 30 ngày, ta tiến hành chuyển bịch ươm sang nhà trồng để treo rạch bịch Cách làm dây treo treo bịch: Dùng dây nylong dài 3m, rộng 4cm, ta gập lại theo chiều dọc để tăng lực kéo dây, dây làm chạt treo Ta làm vòng dây nylong để bóp giữ bịch Cách treo: néo túm chạt treo lại với GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 44 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám lên giàn treo, luồn vòng dây vào chạt treo Sau luồn bịch nấm vào, khoảng 1- bịch ta dùng vòng dây bóp giữ lại cho chặt Mỗi chùm ta treo 7- bịch Lưu ý: Các bịch phải chúc ngược miệng treo, mục đích chúc ngược miệng bịch: Vì nước thoát rút theo hướng xuống, nên treo ngược lại nước thấm ngược tới hệ sợi nấm, giúp cho hệ sợi nấm có độ ẩm hòa Cách rạch bịch: Dùng dao rạch xung quanh bịch đường, đường dài 34cm, rộng 2- 3mm, sâu 1- 3mm, rạch phải ý đến dây treo Chúng ta nên rạch bịch theo đường thẳng Mục đích rạch theo đường thẳng: Vì rạch thẳng làm cho nước dư ẩm dễ dàng chảy xuống, giảm bớt bám bụi bặm, đồng thời tránh gãy ép bịch I-4-8-Cách chăm sóc thu hái: Cách chăm sóc: Khi treo rạch bịch ta không nên tưới nước trực tiếp lên bịch (kể dạng phun sương) mà tưới ướt ẩm nhà, để tránh ứ đọng nước vào chỗ rạch Sau khoảng 7- 10 ngày nấm bắt đầu ra, ta tưới nước trực tiếp lên bịch dạng phun sương (dùng bình bơm phun sương mang vào lưng để tưới khắp chùm bịch nấm nhà trồng) Trong thời gian ta phải đảm bảo nhiệt độ nhà trồng khoảng 22- 28 oC, độ ẩm không khí ~85- 90%, pH =7, thoáng khí, có ánh sáng khuếch tán đều, đồng thời tránh loài côn trùng phá hoại Trong giai đoạn ta phải chống cánh cửa phụ lên đón ánh sáng khuếch tán, tăng thoáng khí Ta nên bố trí ô cửa phụ vải mùng, để tránh xâm nhập côn trùng cắn phá nấm (bọ rầy, ruồi xanh, muỗi vằn, kiến cánh, bọ xít…) Trong giai đoạn này, thể nấm cần độ ẩm, thiếu nước nấm cằn cỗi, nhẹ cân, ăn dai Ngược lại, tưới nước nhiều, nấm có màu vàng, thối rữa Cách thu hái đợt (trước thời điểm ép bịch): Nấm sò mọc tập trung thành cụm, nên nấm đủ lớn ta cần hái cụm Hái nấm độ tuổi đạt suất, chất lượng cao Nếu hái nấm già ăn không ngon Hái nấm độ tuổi hái nấm trước lúc nấm phát tán bào tử Khi nhìn thấy “làn khói trắng” GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 45 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám bay từ nấm bào tử nấm (biểu nấm già) Khi hái nấm, ta cầm khóm nấm xoáy nhẹ theo chiều kim đồng hồ Ta phải cấu phần gốc sót lại Nếu để sót gốc, gốc sót chặn thể mới, gây khó khăn cho qua thể mới, đồng thời gốc sót gây lây nhiễm Sau thu hái hết lần, ta ngừng việc tưới nước, thu hái đợt 1, ta thu hái khoảng 2- lần nấm Mỗi lần cách khoảng 12- 15 ngày I-4-9-Ép bịch: Từ treo rạch bịch đến lúc ép bịch khoảng 40- 45 ngày Trước tiên ta tháo bịch nấm khỏi chùm treo bịch Tay trái túm chặt lấy miệng túi giữ yên, tay phải vừa ấn nén vừa xoay bịch, để tạo lực ép tốt hơn, đồng thời làm cho bịch có dạng trụ tròn lùn, rắn chắt thích hợp Chú ý: không ép mạnh, ép mạnh gây gãy bịch nấm chầy sát sợi nấm Ép xong, ta nhúng bịch nấm vào nước để rửa cung cấp lượng ẩm thích hợp cho bịch Nếu bịch nấm khô ta nên nhúng vào nước lâu Sau ép xong, ta treo bịch nấm vào chùm cũ, chùm lần treo khoảng 10- 12 bịch nấm Ta cần rạch thêm 2- đường nấm Mục đích việc ép bịch: -Tập trung dinh dưỡng, tăng độ tiếp xúc hệ sợi nấm với phần tử dinh dưỡng nguyên liệu nấm tiếp tục tốt -Làm nhỏ thể tích túi nấm, nhằm tiết kiệm số lượng chùm dây treo, để treo bịch nấm -Giúp ta hái nấm thời điểm mong muốn, đặc biệt ngày rằm âm lịch Sau ép bịch, khoảng 10- 12 ngày nấm bắt đầu lại, ta tiếp tục thu hái đợt Cách thu hái đợt ( sau thời điểm ép bịch): Sau ép bịch khoảng 10- 12 ngày ta tiến hành thu hái đợt 2, cách thu hái đợt đợt Đợt 2, ta thu hái 1- lần nấm GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 46 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám I-4-10-Loại bỏ bịch vệ sinh nhà trồng: Sau khoảng thời gian 55- 60 ngày kể từ ngày treo rạch bịch, ta tiến hành loại bỏ bịch vệ sinh nhà trồng Các bịch nấm loại bỏ: Ta tận dụng làm phân vi sinh, dùng nuôi giun quế Ngoài người ta xây dựng nhà riêng để chứa bịch nấm loại bỏ, để thu lượng nấm sò đáng kể Vệ sinh nhà trồng: Ta sử dụng dung dịch foocmon 0,5% để làm vệ sinh nhà trồng Cách pha foocmon: Cứ lít foocmon 0,5% ta hòa với 10 lít nước, để phun cho 40m nhà trồng (foocmon có khả khử khuẩn mạnh) Phần III: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ A Kết luận: Nếu tiến hành nuôi trồng thử meo giống, ta có thể đánh giá được chất lượng của nguồn giống đã phân lập Tuy nhiên vì thời gian thực hiện đồ án ngắn nên chúng em chỉ có thể khảo sát được sự phát triển của tơ nấm Từ kết GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 47 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám quả thí nghiệm, cho thấy nguồn giống nấm từ công ty Dona cho tơ nấm phát triển rất nhanh và mạnh Qua quá trình làm đồ án tại trường, chúng em đã thực hiện quy trình nuôi cấy meo giống, khảo sát được sự phát triển của tơ nấm qua các môi trường nuôi cấy Hoàn thành quy trình nhân giống sản xuất giống nấm Bào Ngư đại trà có chất lượng cao, với môi trường chất chủ yếu các phụ phế thải nông – lâm - công nghiệp Sản phẩm của quá trình nhân giống này có thể ứng dụng vào sản xuất phôi và nuôi trồng nấm bào ngư Tốc độ nhân giống nhanh, chỉ vòng một tháng, từ quả thể nấm có thể nhân giống thành khoảng một trăm bịch phôi nấm, đem nuôi trồng sẽ đạt được hiệu quả kinh tế cao B Kiến nghị: Nuôi cấy meo giống là một quá trình quan trọng quyết định cho cả quá trình sản xuất, vì vậy cần được chú trọng và quan tâm nhiều hơn, từ đó có thể chủ động về sản xuất và nâng cao hiệu quả kinh tế Hiện nay, trước thách chức hội việc phát triển nông nghiệp nông thôn nói chung, nghề trồng nấm nói riêng, việc trồng nấm theo hướng sản xuất hàng hóa với khoa học công nghệ sản xuất thích hợp thu hút quan tâm nhiều tổ chức, ban ngành, cá nhân nước Để thúc đẩy nhanh ngành sản xuất nấm Việt Nam Chúng ta cần tập trung giải số vấn đề sau:  Tạo loại giống nấm có suất cao, chất lượng tốt, có tính chống chịu (chịu nhiệt, chịu lạnh, bệnh…) từ giống địa phương giống nhập nội  Hoàn thiện quy trình sản xuất giống đặc biệt khâu sử lí nguyên liệu (cơ chất) để nhân giống nấm hạ giá thành giống thương phẩm xuống thấp  Nghiên cứu thị trường, liên doanh liên kết với công ty nước để tiến hành việc xuất nấm GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 48 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám  Hợp tác chặc chẽ với nước tổ chức quốc tế giới lĩnh vực nghiên cứu sản xuất nấm  Cần có nghiên cứu sâu hoạt chất chiết từ nấm Điều quan trọng theo ý kiến chúng em, cần phải thực mối liên kết chặt chẽ bốn nhà: nhà khoa học - nhà đầu tư công nghệ - nhà kinh doanh nhà nước, nhằm đảm bảo tính bền vững công nghệ sản xuất nấm, ổn định mở rộng thị trường GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 49 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám TÀI LIỆU THAM KHẢO 1) Lê Duy Thắng – Trần Văn Minh, Sổ tay hướng dẫn trồng nấm, NXB Nông Nghiệp 2) GS.TS.Nguyễn Lân Dũng, Công Nghệ Nuôi Trồng Nấm Tập I, II, NXB Nông Nghiệp 3) Giáo trình điện tử, Small- scale mushroom culivation 4) Kỹ thuật trồng nấm của Sở khoa học và công nghệ Tiền Giang Các trang web tham khảo: 1) http://www.google.com.vn 2) http://www.namdona.com 3) http://www.foodsubs.com/Mushroom.html 4) http://www.goldengourmetmushrooms.com/oyster.html 5) http://www.freshes.com/en/mushinfo/xingbao.html GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 50 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám PHỤ LỤC HÌNH ẢNH Nấm bào ngư Nhật Nấm rơm Nấm hầu thủ Nấm linh chi GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 51 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Bịch phôi nấm Cấy meo giống Meo nấm bị nhiễm mốc Bào ngư trắng Nấm mèo GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ Nồi hấp dụng cụ và môi trường 52 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 53 [...]... nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Phân lập sau 3 ngày: từ mô nấm tơ bắt đầu lan ra Sau 6 ngày phân lập: tơ ăn dài xuống dọc môi trường thạch GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 34 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Sau 9 ngày phân lập: tơ lan gần hết môi trường thạch Sau 12 ngày phân lập: tơ đã lan... sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám 2 Phân lập nấm: Hình: Phân lập từ quả thể nấm Như đã nói ở trên, có nhiều cách phân lập nấm để tạo giống gốc như: từ tơ nấm, bào tử nấm và quả thể nấm Nhưmg hiệu quả nhất vẫn là phân lập từ quả thể nấm, vì: - Biết chắc chắn nấm phân lập như thế nào, vì phương pháp sử dụng là nhân giống vô... meo giống đã già để trông nấm GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 25 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Phần II: QUÁ TRÌNH THỰC NGHIỆM GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 26 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám A Xử lý nguyên liệu: 1 Môi trường thạch: Môi trường PGA (cải tiến): Thành phần Số lượng Nước chiết... học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám - Quá trình vận chuyển giống: phải hết sức nhẹ nhàng, tránh va chạm mạnh, dựng đứng chai giống Không được mở nút bông ra xem, ngửi, để giống nơi thoáng mát, sạch sẽ, không có ánh sáng trực tiếp C Tổng quan về giống và meo giống nấm: 1 Giống ban đầu (giống gốc): Khởi đầu của quá trình nhân giống, hay làm meo giống là phải có giống. .. Bào tử Ngâm nước vô trùng 4h Cấy truyền lên MT PGA trong ống nghiệm thạch nghiêng Kiềm tra nhiễm tạp Giống gốc Cấy truyền Giữ giống GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ Nhân giống cho sản xuất 14 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Sơ đồ cấy truyền, nhân giống trong sản xuất: 3 Môi trường dinh dưỡng cho nuôi cấy nấm: Muốn nuôi. .. làm tăng về số lượng giống phân bố - Môi trường giá môi, giúp tơ nấm thích nghi với cơ chất sẽ nuôi trồng GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 15 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Ngoài ra, còn có thêm môi trường cọng, là dạng trung gian, tiện lợi cho thao tác chuyền giống, đồng thời giúp mao trong bịch giống đồng đều hơn... mốc, ngoia2 ra vôi cũng giúp khử độc (nhờ gốc Ca2+) B Phân lập và nhân nhanh giống: 1 Quy trình phân lập và nhân nhanh giống: 2 Thuyết minh quy trình:  Tạo meo cấp I: GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 30 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Hình: Khử trùng tủ cấy và mẫu phân lập Giai đoạn khử trùng: -Tủ cấy lau sạch bằng cồn, đốt đèn cồn... học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám (nếu trộn nước vôi ủ) Cuối cùng, thêm các chất bổ sung và cho vào dụng cụ chứa, để đem đi khử trùng Riêng ở nước ta, trong quy trình nhân giống còn có thêm công đoạn làm giống cọng, nhằm giúp đơn giản thao tác cấy từ hạt sang nguyên liệu thô, nhưng quan trọng hơn là ơ nấm phát triển nhanh và tuổi meo phát... cấy GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 19 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Nơi thực hành phân lập hoặc cấy chuyền giống cần kín gió, vì gió sẽ mang mầm nhiễm từ không khí chui vào ống nghiệm Tuy nhiên, cũng cần lưu ý rằng phòng quá kín sẽ làm nhiệt độ và độ ẩm tăng cao, dẫn đến sự phát sinh của nấm mốc Trong phòng... dạng bột và bảo quản trong tủ lạnh (để không chảy nước và vón cục) Lượng cho vào môi trường là 0,2% (2g/lít môi trường) Hóa chất dùng bổ sung vào môi trường nuôi cấy nấm chủ yếu là nguyên tố khoáng, như K (kali hay Pô-tát), P (Phosphat hay lân), Mg GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 16 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám (Magiê) ... nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Phân lập nấm: Hình: Phân lập từ quả thể nấm Như đã nói ở trên, có nhiều cách phân lập nấm để tạo giống gốc như:... Kết quả: Phân lập từ quả thể: Nấm mới được phân lập GVHD: HOÀNG XUÂN THẾ 33 Đồ án chuyên ngành công nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Phân lập sau... nghệ sinh học Phân lập và nuôi trồng meo giống bào ngư xám Nơi thực hành phân lập hoặc cấy chuyền giống cần kín gió, vì gió sẽ mang mầm nhiễm từ không khí chui vào ống nghiệm