luận văn
Bộ giáo dục đào tạo trờng đại học nông nghiƯp hµ néi VĂN TH HƯ NG NGHIÊN C U M T S ð C TÍNH SINH H C C A VI KHU N SALMONELLA PHÂN L P ðƯ C T L N SAU CAI S A B TIÊU CH Y VÀ CH T O TH NGHI M VACXIN PHềNG B NH Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyªn ng nh : THó Y M· sè : 60.62.50 Ng−êi h−íng dÉn khoa häc: PGS.TS CÙ H U PHÚ Hµ Néi - 2009 L I CAM ðOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên c u c a riêng Các s li u, k t qu nêu lu n văn trung th c chưa t ng đư c cơng b b t kì cơng trình khác Tơi xin cam đoan r ng thơng tin trích d n lu n văn ñ u ñã ñư c ch rõ ngu n g c Hà N i, Ngày tháng năm 2009 Tác gi Văn Th Hư ng Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………i L I C M ƠN ð hoàn thành lu n văn này, v i s n l c c g ng c a b n thân, tơi xin đư c đ c bi t bày t lòng bi t ơn sâu s c t i th y: PGS.TS Cù H u Phú, ngư i ñã tr c ti p hư ng d n trình nghiên c u hồn thành lu n văn Tơi xin đư c chân thành c m ơn t i th y: TS Nguy n H u Nam, th y cô b môn B nh lý tồn th th y giáo Khoa Thú y; Vi n sau ð i h c – Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i ñã t n tình giúp ñ t o m i u ki n cho tơi hồn thành lu n văn Tơi xin đư c bày t lịng bi t ơn t i chuyên gia: GS Koichi Takeshi, GS Makino Sou-ichi, Khoa Thú y ng d ng s c kh e c ng ñ ngTrư ng ð i h c Nông nghi p Thú y Obihiro, Nh t B n giúp tơi q trình th c hi n đ tài Tơi xin c m ơn Ban lãnh ñ o Vi n Thú y, anh, ch , em B môn Vi trùng- Vi n Thú y, Lãnh đ o cơng ty gi ng chăn nuôi Hà Nôi, Hưng Yên, B c Ninh, H i Phịng, Thái Bình b n đ ng nghi p đ c bi t gia đình t o m i ñi u ki n thu n l i nh t giúp đ tơi q trình hoàn thành lu n văn Hà n i, ngày tháng 09 năm 2009 Văn Thi Hư ng Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………ii M CL C L i cam ñoan i L i c m ơn ii M cl c iii Danh m c t vi t t t v Danh m c b ng vi Danh m c hình vii ð TV Nð 1.1 Tính c p thi t c a ñ tài 1.2 M c tiêu nghiên c u 2 T NG QUAN TÀI LI U 2.1 Tình hình nghiên c u v vi khu n Salmonella b nh chúng gây 2.2 M t s ñ c ñi m c a vi khu n Salmonella 2.3 B nh vi khu n Salmonella gây 2.4 Bi n pháp phòng tr b nh Salmonella gây 2.5 M t s hi u bi t v vacxin vacxin phịng b nh Phó thương hàn N I DUNG, NGUYÊN LI U, ð I TƯ NG VÀ PHƯƠNG l n 22 l n 28 29 PHÁP NGHIÊN C U 32 3.1 N i dung nghiên c u 32 3.2 ð i tư ng, ñ a ñi m th i gian nghiên c u 33 3.3 Nguyên li u dùng cho nghiên c u 33 3.4 Phương pháp nghiên c u 34 3.5 Phương pháp s lý s li u 44 K T QU VÀ TH O LU N 46 4.1 K t qu phân l p vi khu n Salmonella 46 4.1.1 K t qu phân l p vi khu n Salmonella t m u b nh ph m 46 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………iii 4.1.2 K t qu xác ñ nh t l phân l p vi khu n Salmonella m t s quan ph t ng c a l n b nh 4.2 K t qu giám ñ nh m t s đ c tính ni c y sinh hóa c a ch ng Salmonella phân l p ñư c 4.3 64 K t qu xác ñ nh ñ c l c c a m t s ch ng vi khu n Salmonella phân l p ñư c chu t nh t tr ng 4.7 61 K t qu xác ñ nh m t s y u t gây b nh c a ch ng vi khu n Salmonella phân l p ñư c 4.6 57 K t qu ki m tra m c ñ m n c m c a ch ng Salmonella phân l p ñư c v i m t s lo i kháng sinh 4.5 53 K t qu xác ñ nh serotyp c a ch ng vi khu n Salmonella phân l p ñư c 4.4 48 K t qu 69 gây b nh th c nghi m l n b ng ch ng Salmonella phân l p ñư c 72 4.8 K t qu ch t o th nghi m vacxin phòng b nh Salmonella cho l n 76 4.8.1 Ch vacxin vô ho t có b tr keo phèn phịng b nh Salmonella cho l n 76 4.8.2 K t qu ki m tra an toàn hi u l c vacxin chu t thí nghi m 79 K T LU N VÀ ð NGH 81 5.1 K t lu n 81 5.2 ð ngh 82 TÀI LI U THAM KH O Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………iv 83 DANH M C CÁC T ADP Adenosine DiPhosphate ATP Adenosine TriPhosphate BHI Brain Heart Infusion BPW Buffered Pepton Water CHO Chinese Hamster Ovary Cell CIRAD Centre VI T T T de Cooperation Internationale en Recherche Agronomique pour le Developpement DHL Deoxycholate Hydrogen sulfide Lactose DNA DeoxyriboNucleic Acid DPF Delayer Permebility Factor DT104 Definitive phage Type 104 EDTA Ethylene Diamine Tetra Acetic acid ETEC EnteroToxigenic E coli GDP Guanin DiPhosphate GTP Guanin TriPhosphate InvA Invasion A LIM Lysine Indole Motility LPS LipoPolySaccharide LT Heat- Labile Toxin mARN Messenger Acide RiboNucleotide RPF Rapid Permebility Factor ST Heat- stabile Toxin Stn Salmonella toxin TSI Triple- Sugar- Iron PCR Polymerase Chain Reaction RV Rappaports Vassiliadis Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………v DANH M C B NG STT 3.1 Tên bảng Trang B ng ủỏnh giỏ m c ñ m n c m c a vi khu n v i m t s lo i kháng sinh 3.2 41 Trình t c p m i kích c s n ph m dùng ñ xác ñ nh m t s y u t gây b nh c a ch ng Salmonella phân l p ñư c 42 4.1 K t qu phân l p vi khu n Salmonella t m u phân ph t ng 47 4.2 K t qu phân l p vi khu n Salmonella m t s quan ph t ng c a l n b nh 4.3 49 K t qu ki m tra m t s ñ c tính ni c y c a ch ng vi khu n Salmonella phân l p ñư c 4.4 K t qu giám ñ nh m t s ñ c tính sinh hố 53 c a ch ng vi khu n Salmonella phân l p ñư c 4.5 K t qu xác ñ nh serotyp c a ch ng vi khu n Salmonella phân l p ñư c 4.6 60 K t qu ki m tra m c ñ m n c m v i m t s lo i kháng sinh c a ch ng vi khu n Salmonella phân l p ñư c 4.7 55 63 K t qu ki m tra m t s y u t gây b nh c a ch ng vi khu n Salmonella phân l p ñư c 66 4.8 K t qu ki m tra ñ c l c c a m t s ch ng Salmonella phân l p ñư c 71 4.9 Các ch ng vi khu n Salmonella ch n gây b nh 72 4.10 K t qu gây b nh th c nghi m Salmonella l n 35 ngày tu i 73 4.11 B nh tích đ i th l n gây b nh th c nghi m 75 4.12 K t qu ki m tra m t s ch tiêu lô vacxin 78 4.13 K t qu th hi u l c c a vacxin chu t nh t tr ng 79 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………vi DANH M C HÌNH STT 3.1 Tên hình Trang Quy trình phân l p giám đ nh vi khu n Salmonella t m u phân ph t ng 36 3.2 Quy trình s n xu t vacxin vô ho t b tr keo phèn 45 4.1 K t qu phân l p vi khu n Sallmonella t m u phân ph t ng 47 4.2 K t qu phân l p vi khu n Salmonella m ts quan ph t ng c a l n b nh 49 4.3 Ru t l n bi viêm vi khu n Salmonella gây 52 4.4 Lách sưng to 52 4.5 Khu n l c Salmonella môi trư ng CHROM 56 4.6 Khu n l c Salmonella môi trư ng DHL 56 4.7 Ph n ng lên men ñư ng c a vi khu n Salmonella 57 4.8 Vi khu n Salmonella môi trư ng TSI 57 K t qu xác ñ nh serotyp c a ch ng vi khu n Salmonella l n m c b nh Salmonella gây phân l p ñư c 60 4.10 K t qu ki m tra m t s y u t gây b nh c a ch ng vi khu n Salmonella phân l p ñư c 67 4.11 K t qu c a ph n ng PCR xác ñ nh y u t gây b nh c a ch ng vi khu n Salmonella 4.12 67 Gây b nh th c nghi m cho l n 76 Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………vii ð T V N ð 1.1 Tính c p thi t c a đ tài Trong nh ng năm g n ñây, n n kinh t nư c ta có nh ng bư c phát tri n vư t b c v m i m t, ñ i s ng kinh t xã h i ngày ñư c c i thi n ðóng góp m t ph n khơng nh cho s thành cơng ph i k đ n thành t u c a ngành nông nghi p, có ngành chăn ni thú y mà đ c bi t ngành chăn nuôi l n Ngành chăn ni l n góp ph n đáp ng nhu c u th c ph m nư c m t ph n dành cho xu t kh u thu ngo i t Theo CIRAD (2006)[43], th t l n chi m 77% t ng lư ng lo i th t tiêu dùng hàng ngày th trư ng Vi t Nam Tuy nhiên, m t thách th c khơng nh đ i v i vi c phát tri n chăn nuôi l n d ch b nh v n thư ng xuyên x y ñàn l n m i l a tu i, làm gi m su t, gi m ch t lư ng gi ng ho c nhi m vào s n ph m th t l n gây nguy m t an toàn v sinh th c ph m M t nh ng b nh thư ng g p ph i k ñ n b nh tiêu ch y vi khu n Salmonella gây l n sau cai s a, g i b nh Phó thương hàn khơng n thành d ch l n, v i ñ c ñi m d ch t h t s c ph c t p, ñã ñang gây nên nh ng thi t h i ñáng k cho ngư i chăn ni Có th nói r ng b t kỳ m t s chăn nuôi dù quy mô l n hay nh ñ u xu t hi n b nh Khi ñ i s ng c a nhân dân ngày ñư c nâng cao, v n đ an tồn th c ph m có l n th t l n s ch b nh, không b nhi m Salmonella m t yêu c u c p thi t Có r t nhi u tác gi cơng b r ng s nhi m Salmonella vào thân th t l n trình gi t m ch y u liên quan đ n s nhi m trùng Salmonella ru t (Borch cs, 1996[38]; Berends cs, 1997[35]) Do đó, vi c gi m t l tr i b nhi m m m b nh Salmonella s làm s an toàn th t l n tăng lên M c tiêu c a nhà khoa h c, nhà s n xu t Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………1 xây d ng đàn gia súc s ch Salmonella Nhìn chung vi khu n Salmonella b nh chúng gây r t nhi u nhà vi sinh v t toàn th gi i quan tâm l n ñã ñư c Vi t Nam ñã có m t s cơng trình nghiên c u v Salmonella b nh chúng gây l n như: Nguy n Th N i cs (1989)[20]; Lê Văn T o cs (1993)[26]; Tr n Xuân H nh (1995)[11]; Cù H u Phú cs (2000)[21]; ð Trung C (2004)[6] Theo Bryan (1988)[40]; Nielsen Wegener (1997)[62]; Berends cs 1998[36]; Schwartz (1999)[71]: Các ñàn l n b nhi m Salmonella không nh ng gây thi t h i kinh t cho ngư i chăn ni mà cịn ngu n tàng tr m m b nh gây h i ñ i v i ngư i B i v y mà m i bi n pháp ngăn ch n có hi u qu gia súc đ u c n thi t ñi u ki n tiên quy t góp ph n gi m thi u d ch b nh, tăng thu nh p cho ngư i chăn nuôi, ch ng ô nhi m môi trư ng b o v s c kho c ng ñ ng Vì v y mà vi c phân l p vi khu n Salmonella, xác ñ nh serotyp ñ c tính gây b nh c a chúng l n, nh m m c đích phát hi n s m tìm hư ng phịng tr b nh có hi u qu ln nh ng vi c làm c p thi t Xu t phát t th c ti n nghiên c u yêu c u c a s n xu t, ti n hành nghiên c u ñ tài: "Nghiên c u m t s đ c tính sinh h c c a vi khu n Salmonella phân l p ñư c t l n sau cai s a b tiêu ch y ch t o th nghi m vacxin phòng b nh" 1.2 M c tiêu nghiên c u - Phân l p, xác đ nh hình thái, tính ch t ni c y, đ c tính sinh v t hóa h c, serotyp y u t gây b nh c a vi khu n Salmonella phân l p ñư c t l n sau cai s a m t s t nh phía B c - Ch t o th nghi m vacxin đa giá có ch a m t s serotyp thư ng g p nh t t nh ng trư ng h p nhi m b nh Salmonella l n Trư ng ð i h c Nông nghi p Hà N i – Lu n văn th c s khoa h c Nông nghi p ………………………2 Chúng tơi ch t o vacxin d ng vơ ho t có b tr keo phèn theo quy trình thư ng quy c a B mơn Vi trùng - Vi n thú y Các ch ng vi khu n S choleraesuis, S typhimurium S enteritidis ñư c nuôi c y riêng r theo lô khác b ng phương pháp lên men, s c khí Sau - 10 gi lên men, s c khí, l y m u ki m tra thu n t b ng nhu m Gram ki m tra ñ m ñ vi khu n ml canh trùng b ng phương pháp ñ m s khu n l c m c đĩa th ch, sau ti n hành vô ho t vi khu n b ng Formol v i n ng ñ 0,5% K t qu đư c trình bày b ng 4.12 B ng 4.12 K t qu ki m tra m t s ch tiêu lô vacxin Ch tiêu ki m tra Lơ vacxin ð mđ Thu n t (109 vk/ml) Vô trùng S choleraesuis 19 ð t ð t S typhimurium 22 ð t ð t S enteritidis 16 ð t ð t K t qu cho th y: - ð m đ vi khu n c a lơ S choleraesuis ñ t kho ng 19x109 vi khu n/ml canh trùng, lô S typhimurium 22x109 vi khu n/ml canh trùng, cịn lơ canh trùng S enteritidis 16x109 vi khu n/ml V i s lư ng vi khu n yêu c u ml canh trùng ñ ch t o vacxin ph i ñ t t i thi u 1,5x109 vi khu n lơ canh trùng ni c y đ u đ tiêu chu n ch vacxin - C lơ canh trùng đ u đ t ch tiêu thu n t canh trùng sau di t Formol 0,5% ñ u ñ t ch tiêu vô trùng ki m tra lo i môi trư ng: Th ch máu, th ch n m, nư c th t thư ng, nư c th t y m khí,… T k t qu ki m tra cho th y, c lô canh trùng ñ u ñ t ch tiêu c n thi t đ có th s d ng làm vacxin 78 4.8.2 K t qu ki m tra an toàn hi u l c vacxin chu t thí nghi m Sau ñã ki m tra canh trùng c a ch ng vi khu n S choleraesuis, S typhimurium S enteritidis ñ u ñ t tiêu chu n dùng làm vacxin, ti n hành tr n l n lô canh trùng v i theo t l 1:1:1 ñ ñ t ñư c m t lo i canh trùng ñ ng nh t, ñi u ch nh n ng ñ c a canh trùng, rôi b sung keo phèn v i t l 1/5 ñ ñ m b o 1ml vacxin có ch a – 5x109 vi khu n Vacxin ñư c chai (20 ml/chai), đóng nút, g n paraffin, dán nhãn, sau ti n hành l y m u đ ki m tra an toàn hi u l c đ ng v t thí nghi m - Ki m tra an toàn chu t nh t tr ng: Ch n 10 chu t kh e m nh, tiêm vacxin v i li u 0,5 ml/con vào phúc xoang chu t ñư c tiêm 0,2 ml/con nư c phía l vacxin vào tĩnh m ch Theo dõi sau ngày cho th y t t c chu t ñư c tiêm vacxin ñ u s ng kh e m nh, không có bi u hi n ph n ng sau tiêm ði u kh ng ñ nh r ng vacxin ñã ñ t yêu c u v ñ an tồn đ ng v t thí nghi m có th ti n hành ki m tra hi u l c c a vacxin ñ ng v t thí nghi m - Ki m tra hi u l c b o h c a vacxin chu t nh t tr ng: Ch n 10 chu t kh e m nh, m i chu t tiêm 0,2 ml vacxin vào dư i da chu t ñ i ch ng không tiêm vacxin Sau 21 ngày, ti n hành th thách v i h n h p canh trùng S choleraesuis, S typhimurium S enteritidis v i li u 10LD50 tương ng v i li u 0,5ml/con cho t t c chu t thí nghi m chu t ñ i ch ng K t qu thu đư c trình bày b ng 4.13 B ng 4.13 K t qu th hi u l c c a vacxin chu t nh t tr ng Lô vacxin S chu t tiêm (con) Li u tiêm vacxin (ml) Li u công (ml) Th i gian theo dõi TN 10 0,2 0,5 ngày 10 100 ð/C 0,5 24-48 gi 0 79 S S T l chu t chu t b o h ch t s ng (%) (con) K t qu cho th y: lơ thí nghi m, chu t đư c tiêm vacxin v i li u 0,2 ml/con, sau 21 ngày, chu t có mi n d ch nên đ u s ng kh e m nh th thách cư ng ñ c v i h n h p canh trùng S choleraesuis, S typhimurium S enteritidis tương ng v i ch ng s n xu t vacxin ñư c ñánh giá 100% s chu t ñư c b o h Trong ñó, c chu t lơ đ i ch ng khơng đư c tiêm vacxin, sau cơng cư ng đ c v i li u tương t ñ u b ch t vòng 24 gi (t l ch t 100%) ñ u phân l p l i ñư c vi khu n Salmonella t máu tim T ng h p k t qu ki m tra an toàn hi u l c b o h c a vacxin chu t b ch c a lô vacxin ch th , so sánh v i tiêu chu n c a Trung tâm Ki m nghi m thu c Thú y Trung Ương I v ki m nghi m vacxin ch t có b tr keo phèn, cho phép đánh giá: Lơ vacxin đ t ch tiêu an tồn 100% có hi u l c b o h cao chu t b ch (100%), ñ tiêu chu n ñ ti n hành ki m tra bư c ti p theo ñ ñánh giá hi u qu s d ng c a vacxin b n ñ ng v t 80 K T LU N VÀ ð NGH 5.1 K t lu n T l trung bình phân l p đư c vi khu n Salmonella t m u phân ph t ng thu th p t ñ a phương khác 54,73% T l phân l p ñư c Salmonella cao nh t h ch màng treo ru t (52,94%), ch t ch a ru t non (50,00%) sau ñó lách (41,18%), gan (32,35%), th p nh t máu tim (23,53%) Các ch ng Salmonella phân l p ñư c mang ñ y ñ ñ c tính sinh h c c a vi khu n Salmonella tài li u nư c mơ t K t qu xác ñ nh serotyp cho th y: 12,31% S choleraesuis, 38,46% S typhimurium, 24,62% S enteritidis, 9,23% S derby, 6,15% S rissen, 1,54% S anatum, 7,69% S stanley Các ch ng vi khu n Salmonella phân l p ñư c m n c m v i Ofloxacin Norfloxacin (100%), ti p ñ n Ciprofloxacin (90%) Neomycin (80%) Kháng hoàn toàn v i Trimethoprim + Sulfamethoxazole (100%) kháng cao v i m t s kháng sinh như: Cefazolin (80%) Spectinomycin (75%) 100% ch ng S choleraesuis ñư c ki m tra có mang gen Stn InvA; 100% ch ng S typhimurium có mang gen Stn 96,0% ch ng có mang gen InvA; 93,7% ch ng S enteritidis có mang gen Stn 87,50% ch ng gen InvA Khơng có ch ng vi khu n mang gen DT104 T t c ch ng vi khu n ñem th ñ u có ñ c l c cao, gây ch t 100% chu t thí nghi m vịng - 36 gi sau tiêm C ch ng vi khu n Salmonella ch n gây b nh cho l n đ u có đ c l c cao, gi t ch t h t l n thí nghi m vòng 28 - 96 gi C lô canh trùng S choleraesuis, S typhimurium S enteritidis dùng ch t o vacxin ñ u ñ t ch tiêu v : ð m ñ , thu n t, vơ trùng, đ tiêu chu n dùng làm vacxin 81 10 Lơ vacxin đư c ch t ch ng S choleraesuis, S typhimurium S enteritidis đ t ch tiêu an tồn 100% có hi u l c b o h 100% chu t nh t tr ng 5.2 ð ngh Ti p t c xác ñ nh hi u l c ñ dài mi n d ch c a vacxin, nh m đánh giá đư c hi u qu phịng b nh c a vacxin l n nghiên c u th nghi m di n r ng ñ áp d ng vào s n xu t 82 TÀI LI U THAM KH O I TÀI LI U TI NG VI T Võ Th Trà An, Nguy n Ng c Tuân, Lê H u Ng c (2006), “Tình hình nhi m Salmonella phân thân th t (bò, heo, gà) t i m t s t nh phía Nam”, T p chí Khoa h c k thu t thú y, s 2, tr 37-42 Phùng Qu c Chư ng (1995), Tình hình nhi m Salmonella l n t i vùng Tây Nguyên kh phòng tr Lu n án PTS khoa h c nông nghi p, Trư ng ð i h c Nông nghi p I Hà N i Phùng Qu c Chư ng (2005), “K t qu ki m tra tính m n c m c a m t s thu c kháng sinh c a vi khu n Salmonella phân l p t v t nuôi t i ðăkLăk” T p chí Khoa h c k thu t thú y, s 1, tr 53 ð Trung C , Tr n Th H nh, Nguy n Quang Tuyên (2001), “K t qu phân l p xác ñ nh m t s y u t gây b nh c a vi khu n Salmonella spp gây b nh Phó thương hàn l n m t s t nh mi n núi phía B c” T p chí Khoa h c k thu t thú y, s 3, tr 10-17 ð Trung C , Tr n Th H nh, Nguy n Quang Tuyên, ð Th Lan Phương (2003), “Xác ñ nh m t s y u t gây b nh c a Salmonella Typhimurium phân l p t l n b tiêu ch y m t s t nh mi n núi phía B c” T p chí Khoa h c k thu t thú y, s 4, tr 33-37 ð Trung C (2004), Phân l p xác ñ nh y u t gây b nh c a Salmonella l n t i m t s t nh mi n núi phía B c bi n pháp phịng tr Lu n án Ti n s nông nghi p, Vi n Thú y Qu c gia ð ð c Diên (1999), Vai trò c a E coli Salmonella h i ch ng tiêu ch y l n Kim B ng (Hà Nam) th nghi m m t s gi i pháp phòng tr Lu n án Th c s Nông nghi p Tr n Quang Diên (2002), Nghiên c u tình hình nhi m, đ c tính gây b nh c a Salmonella gallinarum pullorum gà công nghi p ch kháng 83 ngun ch n đốn Lu n án Ti n s nông nghi p, Trư ng ð i h c Nông nghi p I, Hà N i Trương Văn Dung, Yoshihara shinobu (2002), C m nang ch n đốn tiêu chu n v b nh gia súc Vi t Nam Vi n Thú y Qu c gia T ch c h p tác qu c t Nh t B n 10 ðào Tr ng ð t, Phan Thanh Phư ng, Lê Ng c M (1995), B nh đư ng tiêu hóa l n NXB Nơng nghi p, tr 63- 96 11 Tr n Xuân H nh (1995), “Phân l p giám ñ nh vi khu n Salmonella l n tu i gi t th t” T p chí Khoa h c k thu t Thú y, s 3, tr 89-93 12 Tr n Th H nh (2009), “T l nhi m Salmonella spp t i s gi t m l n công nghiêp th cơng nghi p” T p chí Khoa h c k thu t thú y, s 2, tr 51-56 13 Nguy n Bá Hiên (2001), M t s vi khu n ñư ng ru t thư ng g p bi n ñ ng c a chúng gia súc kh e m nh b tiêu ch y nuôi t i vùng ngo i thành Hà N i Lu n án Ti n s Nông nghi p, Trư ng ð i h c Nông nghi p I, Hà N i 14 Archie Hunter (2002), S tay d ch b nh đ ng v t Cơng ty in Th ng nh t, Hà N i 15 Nguy n Văn Lãm (1968), “Ch vacxin Phó thương hàn l n con” K t qu nghiên c u khoa h c k thu t thú y 1968- 1978, NXB Nông nghi p, tr 250- 289 16 Laval A (2000), “D ch t Salmonellosis” Báo cáo t i h i th o v b nh l n t i Vi n Thú y – Hà N i tháng 6/2000, Tài li u d ch c a Tr n Th H nh – Vi n Thú y 17 Ph m S Lăng, Phan ð ch Lân, Trương Văn Dung (2004), B nh ph bi n l n bi n pháp phòng tr NXB Nông nghi p 18 H Văn Nam, Nguy n Th ðào Nguyên, Trương Quang, Phùng Qu c Chư ng, Chu ð c Th ng, Ph m Ng c Th ch (1997), “Tình hình nhi m 84 Salmonella vai trò c a Salmonella b nh viêm ru t a ch y l n” T p chí Khoa h c k thu t thú y, s 2, tr 39-45 19 Nguy n Th N i, Nguy n Ng c Nhiên, Cù H u Phú, Nguy n Th S (1989), “K t qu u tra tình hình nhi m vi khu n ñư ng ru t t i m t s s chăn nuôi l n” K t qu nghiên c u khoa h c k thu t Thú y (19851989) Vi n Thú y, NXB nông nghi p, Hà n i 1989, tr 50-53 20 Nguy n Th N i, Nguy n Ng c Nhiên, Cù H u Phú (1989), “Enterobacteria in diarrhoea pig” K t qu 20 năm nghiên c u c a Vi n Thú y (1969 – 1989), Hà N i, tr 43 21 Cù H u Phú, Nguy n Ng c Nhiên, Vũ Bình Minh, ð Ng c Thuý (2000), “Phân l p vi khu n E.coli Salmonella l n m c b nh tiêu ch y, xác ñ nh m t s đ c tính sinh v t hố h c c a ch ng vi khu n phân l p đư c bi n pháp phịng tr ” K t qu nghiên c u Khoa h c k thu t thú y (1996-2000), NXB Nông nghi p, Hà N i, tr 171-176 22 Nguy n Vĩnh Phư c (1970), Vi sinh v t h c thú y NXB ð i h c trung h c chuyên nghi p Hà N i 23 Phan Thanh Phư ng (1988), Phịng ch ng b nh Phó thương hàn l n NXB Nơng thơn, Hà N i 24 Hồng Th Phi Phư ng, Tr n Th H nh (2004), “ nh hư ng c a th c ăn gây nhi m E.coli Salmonella ñ n bi n ñ i b nh lý m t s ch tiêu sinh lý, sinh hóa máu l n sau cai s a” T p chí Khoa h c k thu t thú y, s 4, tr 36-41 25 Lê Minh Sơn (2003), Nghiên c u m t s vi khu n gây ô nhi m th t l n vùng h u ng n sông H ng Lu n án Ti n s Nông nghi p 26 Lê Văn T o (1993), “Phân l p, ñ nh danh vi khu n Salmonella gây b nh cho l n” Báo cáo khoa h c mã s KN 02 – 15, NXB Nông nghi p, Hà N i 27 Lê Văn T o, Nguy n Th Vui (1994), “Phân l p ñ nh typ vi khu n Salmonella gây b nh cho l n” T p chí Nơng nghi p cơng nghi p th c ph m, 85 s 11, tr 430- 431 28 Nguy n Như Thanh, Nguy n Bá Hiên, Tr n Th Lan Hương 2001 Vi sinh v t Thú y NXB Nông nghi p, Hà N i 29 Tơ liên Thu (2004), “Tình tr ng kháng kháng sinh c a vi khu n Salmonella E.coli phân l p ñư c t th t l n th t gà t i vùng ñ ng b ng B c b ” T p chí Khoa h c k thu t thú y, s 4, tr 29 – 35 30 Tơ Liên Thu (2005), Nghiên c u tình tr ng ô nhi m m t s vi khu n vào th t l n, th t gà sau gi t m Hà N i m t s phương pháp làm gi m s nhi m khu n th t Lu n án Ti n s Nông nghi p, Vi n Thú y Qu c gia Hà N i 31 T Th V nh, ð ng Khánh Vân (1996), “Bư c đ u thăm dị xác ñ nh E.coli Salmonella l n bình thư ng l n m c h i ch ng tiêu ch y t i Hà Tây Hà N i” T p chí Khoa h c k thu t thú y, s 1, tr 41- 44 II TÀI LI U TI NG NƯ C NGOÀI 32 Asai T, Otagiri Y, Osumi T, Namimatsu T, Hirai H and Sato S (2002), “Isolation of Salmonella from Diarrheic Feces of Pig” J Vet Med Sci 64, 2, p 159- 160 33 Barners D.M, Sorensen K.D (1975), ”Salmonellosis” Diseases of Swine, 4th Edition Iowa State University press, p 12-18 34 Benjamin W.H, Turnbough C.N, Posey B.S and Briles D.E (1985), “The ability of Salmonella typhimurium to produce siderophore enterobactin, avirulence factors” Infect Immun, 50, p 392-397 35 Berends B.R, Van Kanpen F, Snijders J.M.A and Mossel D.A.A (1997), “Identification and quantification of risk factors regarding Salmonella spp on fork carcasses” Int J Food Microbiol, 36, p 199-206 36 Berends B.R, Van Knapen F, Mossel D.A.A, Burt S.A and Snij J.M.A (1998), “Impact on human health of Salmonella spp on pork in the 86 Netherlands and the anticipated effects of some currently proposed control strategies” Int J Food Mcrobiol, 44, p 219-229 37 Bergey’s (1994), Manual of determinative Bacteriology, 9th Edition, by the Williams and Wilkings Company 38 Borch E, Nesbakken T and Christensen H (1996), “Hazard identification in swine slaughter with respect to foodborne” Bacteria Int J Food Microbiol, 30, p 9-25 39 Bradley S.G (1979), “Cellular and molecular mechanisms of action of bacterial endotoxins” Ann Rev Microbiol, 33, p 67-94 40 Bryan F (1988), “Risks associated with vehicles of foodborne pathogens and toxins” J Food Prot, 51, p 498-508 41 Chiu C.H and Ou J.T (1996), “Rapid identification of Salmonella serovars in feces by specific detection of the virulence genes, invA and spvC, by an enrichment broth culture – multiplex PCR combination assay” J Clin Microbiol, 34, p 2619-2622 42 Chiu C.H, Su L.H and Chu C (2004), “Samonella enterica serotype Choleraesuis: Epidemiology, Pathogenesis, Clinical Disease and Treatment” Clinical Microbiology Reviews 2, p 311-322 43 CIRAD “Training Course Salmonella”, 23 – 37 October 2006 44 Clarke G.J, Wallis T.S, Starkey W.J, Collins J, Spencer A.J, Daddon G.J, Osborne M.P, Candy D.C and Stephen I (1988), “Expression of an antigen in strains of Salmonella typhimurium with antibodies tocholeratoxin” Med Microbiol, 25, p 139-146 45 Cleckner N, Roth J.R, Bostein D (1977), “Genetic engineering invivo using translocatable drug – resistance elements new methods in bacterial genetics” Hol Sen Gonet , 116, p 125 – 159 46 Cloeckaert A, Praud K, Doublet B, Demartin M and Weill F.X (2006), “Variant Salmonella genomic island J – L antibiotic resistance gene 87 cluster in Salmonella enterica serovar Newport” Antimicrob Agents Chemother, 50, p 3944-3946 47 Cortez A.L.L, Carvalho A.C.F.B, Ikuno A.A, Bürger K.P and Vidal – Martins A.M.C (2006), “Identification of Salmonella spp isolates from chicken abattoirs by multiplex – PCR” Res Vet Sci, 81, p 340-344 48 Crosa J.H, Brenner D.J, Ewing W.H and Falkow S (1973), “Molecular relationship among Salmonella” J Bacteriol, 115, p 307-315 49 Ewing, Edward (1970), Indentification of Enterobacteriaceae Edicion Revolucionnalria, Instituto Cubano Del libro 19 No 1002, Vedado Habana 50 Euzéby J.P (1999), “Revised Salmonella nomenclature”: designation of Salmonella enterica (ex Kauffmann and Edwards 1952) Le Minor and Propoff 1987 sp nov., nom rev as the neotype species of the genus Salmonella Lignieres 1900 (Approved Lists 1980), rejection of the name Salmonella choleraesuis (Smith 1894) Weldin 1927 (Approved Lists 1980), and conservation of the name Salmonella typhi (Schroeter 1886) Warren and Scott 1930 (Approvied Lists 1980), Request for an opinion Int J Sist Bacteriol, 49, p 927-930 51 Farmer J.J (1995), “Enterobacteriaceae: Introduction and identification” p 438-449 In Murray P.R, Baron E.J and Pfaller M.A (ed.), Manual of Clinical Microbiology, 6th Edition, American Society for Microbiology, Washington D.C 52 Finlay B.B and Falkow (1988), “Virulence factors associated with Salmonella species” Microbiological Sciences Vol 5, No.11 53 Frost A.J, Bland A.P, Wallis T.S (1997), “The early dynamic respose of the calf ileal ephithelium to Salmonella typhimurium” Vet – Pathol, 34, p 369-386 54 Gray J.T, Fedorka-Gray P.J and Stabel T.S (1995), “Influence of 88 inoculation route on the carrier state of Salmonella choleraesuis in swine” Vet Microbiol, 47, p 43 – 49 55 Griggs D.J, Hall M.C, Jin Y.F, and Piddock I.J.V (1994), “Quinolon resistantce in Veterinary Isolates of Salmonella” J Antimicrobiological Chemotherapy, p 1173-1189 56 Jones J.W, Richardson A.L (1981), “The attachment to invasion of helacells by Salmonella typhimurium the contribution of manose sensitive and manose – sensitive haemaglutinate activities” J Gen Microbiol, V127, p 361-370 57 Khakhria R and Johnson W (1995), “Prevalence of Salmonella serotypes and phage types in Canada” Southeast Asian J Trop Med Public Health 26 (Suppl 2) p 42-44 58 Kishima M, Uchida i, Namimatsu T, Osumi T, Takahashi S, Tanaka K, Aoki H, Matsuura K and Yamamoto K (2008), “Nationwide Surveillance of Salmonella in the Faeces of Pigs in Japan” 59 Krause M, Fang F.C, Gedaily A.E, Libby S and Guiney D.G (1995), “Mutational Ananysis of SpvR Binding to DNA in the Regulation of the Salmonella Plasmid Virulence Operon” Academic Press Inc Plasmid, 34, p 37-47 60 Morris I.A, Wray C, Sojka W.J (1976), “The effect of T and B lymphocyte depletion on the protection of mice vaccinated with a get E mutant of Salmonella typhymurium” Bristh J of Exp, Path 57 61 NCCLS (2000), Performance standards for antimicrobial disk susceptibility tests Approved standard, seventh edition edn Pennsylvania, USA: The National Committe for Clinical Laboratory Standards, p 5-10 62 Nielsen B and Wegener H.C (1997), “Public health and pork and fork products: regional perspectives of Denmark” Rev Sci Tech, 16, p 89 513-524 63 Nusera D.M, Maddox C.W, Hoien-Dalen P and Weigel R.M (2006), “Comparison of API 20E and invA PCR for identification of Salmonella enterica isolates from swine production units” J Clin Microbiol, 44, p 3388-3390 64 Peteron J.W (1980), “Salmonella toxin” Pharm Ather, VII, p 719-724 65 Plonait H, Bickhardt (1997), Salmonella infectionand Salmonella lehrbuchder Schweine Krankheiten Parey Buchverlag, Berlin, p 334 – 338 66 Popoff M.Y (2001), Antigenic formulas of the Salmonella serovas , 8th edition WHO Collaborating Centre for reference and Research on Salmonella Institus Pasteur, Paris, France, p 156 67 Pritchett L.C, Konkel M.E, Gay J.M and Besser T.E (2000), “Identification of DT 104 and U 302 phage types among Salmonella enterica serotype Typhimurium isolates by PCR” J Clin Microbiol, 38, p 3484-3488 68 Quinn P.J, Carter M.E, Makey B, Carter G.R (2002), Clinical veterinary microbiology Wolfe Pulishing, London WC1 H9LB, England, p 209236 69 Rahman K, De Grandis S.A, Clarke R.C, McEwen S.A, Galán J.E, Ginocchio C, Curtiss III R and Gyles C.L (1992), “Amplification of a invA gene sequence of Salmonella typhimurium by polymerase chain reaction as a specific method of Salmonella” Mol Cell Probes, 6, p 271-279 70 Saitoh M, Tanaka K, Nishimori K, Makino S, Kanno T, Ishihara R, Hatama S, Kitano R, Kishima M, Sameshima T, Akiba M, Nakazawa M, Yokomizo Y and Uchida I (2005), “The artAB genes encode a putative ADP- ribosyltransferase toxin homologue associated with Salmonella enterica serova Typhimurium DT104” Microbiology , 151, p 3089-3096 90 71 Schwartz K.J (1999), “Salmonellosis” In: Straw, B E., S D Allaire, W L Mengeling, and D J Taylo (eds), Disease of Swine, p 535-551 Iowa State University Press, Ames 72 Selbitz H.J (1995), Grundsaetzliche Sicherheisanfornderungen bein Einsatz von lebendimpfstoffen bei lebensmittelliefernden Tieren Berl Much Tieruzl Wschr, 144, p 428-423 73 Skyberg J.A, Logue C.M and Nolan L.K (2006),“Virulence genotyping of Salmonella spp with multiplex PCR“ Avian Dis, 50, p 77-81 74 Su L.H, Chiu C.H, Kuo A.J, Chia J.H, Sun C.F, Leu H.S and Wu T.L (2001), “Secular trends in incidence and antimicrobial resistance among clinical isolates of Salmonella at a university hospital in Taiwan, 19831999” Epidemiol Infect, 127, p 207-213 75 Suzuki S, Komase K, Matsui H, Abe A, Kawahara K, Tamura Y, Kijima M, Danbara H, Nakamura M and Sato S (1994), “Virulence region of plasmid pNL2001 of Salmonella enteritidis” Microbiology, 140, p 1307-1318 76 Timoney J.F, Gillespie J.H, Baelough J.E, Hagan and Bruner’s (1988), “Microbiology and infection disease of domentic animals”, Inthca and London Comstock Publising Associates, A Division of cornell University press, p 209-230 77 Tsolis R.M, Adams L.G, Fitcht T.A and Baumler A.J (1999), “Contribution of Salmonella enterica serovar Typhimurium virulence factors to diarrheal disease in calves Infect” Immun, 67, p 1879-1885 78 Valtonen M.V (1977), “Role of phagocytosis in mouse virulence of Salmonella typhimurium recombinmant with O- antigen 6, or 4, 12.” Infect Immun, 18, p 574 79 Weinstein D.L, Carsiotis M, Lissner CH.R, Osrien A.D (1984), “Flagella help Samonella typhimurium survive within murine macrophages” Infection 91 and Immuniti, 46 p 819-825 80 Wilcock B.P, Schwartz K.J (1992), “Salmonella” Disease of Swine, 7th Edition, p 570-583 81 Wilcock B.P (1995), “Salmonellosis” Disease of Swine, Sixth Edition, Iowa state University Press, U.S.A, p 508-518 92 ... ti n nghiên c u yêu c u c a s n xu t, ti n hành nghiên c u ñ tài: "Nghiên c u m t s ñ c tính sinh h c c a vi khu n Salmonella phân l p ñư c t l n sau cai s a b tiêu ch y ch t o th nghi m vacxin. .. b nh" 1.2 M c tiêu nghiên c u - Phân l p, xác đ nh hình thái, tính ch t ni c y, đ c tính sinh v t hóa h c, serotyp y u t gây b nh c a vi khu n Salmonella phân l p ñư c t l n sau cai s a m t s... tìm th y vi khu n Salmonella có phân l n 9,9%, năm 1973 tìm th y vi khu n Salmonella h ch ru t 7,3% T i Nh t B n, Asai cs (2002)[32] cho th y t l nhi m Salmonella l n sau cai s a b tiêu ch y