luận văn
Bộ giáo dục đào tạo Trờng đại học nông nghiƯp hµ néi - - TRầN văn cờng Phân lập, xác định đăc tính sinh học E coli, Salmonella gây tiêu chảy cho lợn sau cai sữa nuôi tỉnh Lào Cai đề xuất biện pháp phòng trị Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyên ngành: Thú y Mà sè: 60.62.50 Ng−êi h−íng dÉn khoa häc: PGS.Ts cï h÷u phú Hà nội - 2009 Lời cam đoan - Tôi xin cam đoan rằng, số liệu kết nghiên cứu luận văn trung thực cha đợc sử dụng để bảo vệ học vị - Tôi xin cam đoan rằng, giúp đỡ cho việc thực luận văn đ1 đợc cảm ơn thông tin trích dẫn luận văn đợc rõ nguồn gốc Tác giả luận văn Trần Văn C−êng Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nơng nghiệp ………………………i Lêi c¶m ơn Tôi xin chân thành cảm ơn giúp đỡ thầy cô giáo Khoa Thú y Viện Sau Đại học Trờng Đại học Nông Nghiệp Hà Nội, thầy cô giáo đ1 giảng dạy suốt trình học thực tập Đặc biệt, xin bày tỏ lòng biết ơn PGS.TS Cù Hữu Phú, TS Nguyễn Hữu Nam đ1 tận tình hớng dẫn, giúp đỡ hoàn thành luận văn Xin chân thành cảm ơn L1nh đạo Chi cục Kiểm dịch động vật vùng Lào Cai, gia đình, anh em, bạn bè đồng nghiệp đ1 tạo điều kiện động viên giúp đỡ hoàn thành tốt chơng trình học tập Hà Nội, ngày 19 tháng 09 năm 2009 Tác giả luận văn Trần Văn Cờng Trng i hc Nụng nghip Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghip ii Mục lục Lời cam đoan 79 Lời cảm ơn 79 Mục lục 79 Danh mục chữ viết tắt 79 Danh mục bảng 79 Danh mục hình 79 Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 ý nghÜa khoa häc vµ thùc tiƠn Tổng quan tài liệu 2.1 Khái niệm hội chứng tiêu chảy 2.2 Một số nguyên nhân gây tiêu chảy lợn 2.3 Một số nghiên cứu vi khuẩn E coli gây bệnh đờng tiêu hoá 2.4 Mét sè nghiªn cøu vỊ vi khn Salmonella gây bệnh đờng tiêu hoá 19 2.5 Tình hình dịch bệnh đàn lợn nuôi địa bàn tỉnh Lo Cai 24 Đối tợng, nguyên liệu, nội dung phơng pháp nghiên cứu 26 3.1 Đối tợng, địa điểm thời gian nghiên cứu 26 3.2 Nội dung nghiên cứu 26 3.2.1 Nghiên cứu xác định vai trò cđa vi khn E coli vµ Salmonella héi chøng tiêu chảy lợn sau cai sữa 26 3.2.2 Thử nghiệm phác đồ điều trị tiêu chảy cho lợn sau cai sữa 27 3.3 27 Nguyên liệu dùng nghiên cứu 3.3.1 Mẫu bệnh phẩm 27 3.3.2 Các loại môi trờng, hoá chất 27 3.3.3 Động vật thí nghiƯm 27 Trường ðại học Nơng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………iii 3.4 Phơng pháp nghiên cứu 27 Kết nghiên cứu thảo luận 38 4.1 Nghiên cứu xác định vai trò vi khuẩn E coli Salmonella hội chứng tiêu chảy lợn sau cai sữa 38 4.1.1 Kết phân lập vi khuẩn từ mẫu bệnh phẩm phân lợn mắc hội chứng tiêu chảy 38 4.1.2 Kết xác định số lợng vi khuẩn E coli Salmonella sp có phân lợn tiêu chảy lợn bình thờng 43 4.1.3 Kết giám định đặc tính sinh hoá chủng vi khuẩn phân lập đợc 4.1.4 Kết xác định serotyp chủng vi khuẩn phân lập đợc 45 48 4.1.5 Kết xác định yếu tố gây bệnh chủng vi khuẩn E coli phân lập đợc 52 4.1.6 Kết kiểm tra độc lực số chủng vi khuẩn E coli Salmonella sp phân lập đợc động vật thí nghiệm 55 4.1.7 Kết xác định khả mẫn cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn E coli Salmonella phân lập đợc 58 4.2 Kết thử nghiệm phác đồ điều trị tiêu chảy cho lợn 64 Kết luận đề nghị 67 5.1 Kết luận 67 5.2 Đề nghị 68 Tài liệu tham khảo Trng i hc Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghip iv 69 DANH mục chữ viết tắt AEEC Adherence Enteropathogenic E coli BEt Ethidium bromide BHI Brain Heart Infusion C perfringens Clostridium perfringens DNA Deoxyribo Nucleic Acid DPF Delayed Permeability Factor E coli Escherichia coli EMB Eosin Methylen-Bleu EPEC Enteropathogenic E coli ETEC Enterotoxigenic Escherichia coli F Fimbriae LPS Lipopolysaccharid LT Heat-labile toxin M Mucous NCCLS National Committee for Clinical Laboratory Standards OMP Outer membrane protein PCR Polymerase Chain Reaction R Rough RPF Rapid Permeability Factor S Smooth SS Salmonella – Shigella ST Heat-stable toxin TAE Tris - Acetic - EDTA TGE Transmissible Gastro Enteritis (Bệnh viêm dày ruột truyền nhiễm) VTEC Verotoxigenic Escherichia coli VT2e Verotoxin 2e Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………v Danh mục bảng STT Tên bảng Trang 4.1 Kết phân lập vi khuẩn từ bệnh phẩm phân lợn tiêu chảy 4.2 Kết xác định số lợng vi khuẩn E coli Salmonella sp có 1g phân lợn tiêu chảy lợn bình thờng 4.3 54 Kết kiểm tra độc lực số chủng vi khuẩn E coli chuột bạch 4.8 52 Tỷ lƯ c¸c chđng vi khn E coli mang c¸c gen quy định sinh tổng hợp yếu tố gây bệnh( n=69) 4.7 48 Kết xác định serotyp chủng vi khuẩn Salmonella sp phân lập đợc 4.6 46 Kết xác định serotyp kháng nguyên O chủng vi khuẩn E coli phân lập đợc 4.5 43 Kết giám định đặc tính sinh hoá chủng vi khuẩn E coli Salmonella sp phân lập đợc 4.4 39 56 Kết kiểm tra độc lực cđa mét sè chđng vi khn Salmonella sp trªn cht bạch 57 4.9 a Kết xác định tính mẫn cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn E coli phân lập đợc 59 4.9 b Kết xác định tính mẫn cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn Salmonella phân lập đợc 61 4.10 Kết điều trị thực nghiệm số phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy lợn sau cai sữa Trng i hc Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa hc Nụng nghip vi 66 Danh mục hình STT Tên hình Trang 3.1 Quy trình phân lập vi khuẩn đờng ruột 29 4.1 Đàn lợn sau cai sữa bị tiêu chảy 41 4.2 Mổ khám kiểm tra bệnh tích lợn sau cai sũa bị tiêu chảy 41 4.3 Lợn bị mắc bệnh tiêu chảy E coli gây 42 4.4 Mổ khám lấy bệnh phẩm lợn mắc bệnh tiêu chảy 42 4.5 Hình tthái vi khuẩn E coli d−íi kÝnh hiĨn vi (x 1000 lÇn) 47 4.6 KÕt qu¶ thư ph¶n øng sinh Indol 47 4.7 Kết xác định serotyp kháng nguyên O chủng vi khuẩn E coli phân lập đợc 4.8 Tỷ lƯ c¸c chđng vi khn E coli mang c¸c gen quy định sinh tổng hợp yếu tố gây bệnh 4.9 50 55 Kết xác định tính mẫn cảm víi kh¸ng sinh cđa c¸c chđng vi khn E coli phân lập đợc 60 4.10 Kết xác định tính mẫn cảm với kháng sinh chủng vi khuẩn Salmonella phân lập đợc 62 4.11 Kết thử kháng sinh đồ với vi khuẩn phân lập 63 4.12 Kết điều trị thực nghiệm 65 Trng i hc Nụng nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nụng nghip vii Mở đầu 1.1 Tính cấp thiết đề tài Nền kinh tế phát triển, với hội nhập kinh tế toàn cầu, mức sống ngời dân đợc nâng cao, vai trò ngành chăn nuôi trở lên quan trọng, nhiệm vụ công tác chăn nuôi thú y nặng nề hơn; bên cạnh việc tăng nhanh số lợng, phải trọng việc nâng cao chất lợng đàn gia súc, gia cầm Mục tiêu chủ yếu kế hoạch phát triển chăn nuôi Việt Nam đến năm 2010 cần đạt: đàn lợn 32,8 triệu con, sản lợng thịt lợn 3,2 triệu tấn; đàn bò thịt 7,1 triệu con, sản lợng thịt bò 210 ngàn tấn; đàn bò sữa 200 ngàn con, sản lợng sữa 350 ngàn tấn; đàn gia cầm 283 triệu con, sản lợng thịt 1.427 ngàn 7,95 tỷ trứng gà, vịt (Cục chăn nuôi, 2006 ) Để đạt đợc mục tiêu có tính chiến lợc đó, đơng nhiên phải đầu t cho công tác giống, quan tâm đến vấn đề thức ăn, chơng trình quản lý; đồng thời phải trọng công tác thú y, tăng cờng áp dụng biện pháp khoa học kỹ thuật chẩn đoán làm sở cho công tác phòng, chống dịch bệnh vật nuôi có hiệu Hội chứng tiêu chảy với đặc điểm dịch tễ phức tạp gây nên thiệt hại to lớn, làm giảm suất, chất lợng đàn vật nuôi nói chung chăn nuôi lợn nói riêng Bệnh tiêu chảy xảy giống lợn lứa tuổi: lợn nái sinh sản, lợn theo mẹ, lợn sau cai sữa Bệnh thờng xt hiƯn thêi tiÕt thay ®ỉi ®ét ngét, thøc ăn phẩm chất, vệ sinh chăm sóc không đảm bảo Hội chứng tiêu chảy lợn thờng xảy quanh năm, nhng nhiều vào tháng có khí hậu ẩm ớt, thay đổi đột ngột sau đợt ma b1o Trên giới Việt Nam đ1 có số công trình nghiên cứu bệnh tiêu chảy lợn, vi khuẩn E coli, Salmonella sè bƯnh cđa chóng g©y cho vËt Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa hc Nụng nghip nuôi; nhng nay, Lào Cai cha có nghiên cứu hội chứng tiêu chảy lợn vi khuẩn E coli Salmonella lợn sau cai sữa bị tiêu chảy Nhiều kết công trình nghiên cứu nớc đ1 kết luận E coli Salmonella bệnh chung nhiều loại vật nuôi gây bệnh cho ngời Nhất nay, nớc ta gia nhập Tổ chức Thơng mại Thế giới (WTO) vấn đề an toàn vệ sinh thực phẩm có lợn thịt lợn bệnh yêu cầu cấp thiết Việc nghiên cứu vi khn E coli vµ Salmonella, tû lƯ nhiƠm, vai trò gây bệnh chúng, lợn từ sau cai sữa Lào Cai việc làm cần thiết, để từ có sở xây dựng biện pháp phòng, chống bệnh đạt hiệu cao, góp phần thúc đẩy chăn nuôi gia súc, gia cầm nói chung, chăn nuôi lợn nói riêng phát triển bền vững, tạo sản phẩm an toàn vệ sinh thực phẩm, có sức cạnh tranh cao thị trờng Sau nhiều năm công tác Chi cục Kiểm dịch động vật vùng Lào Cai qua thực tế theo dõi tình hình dịch bệnh đàn lợn với Chi cục Thú y Lào Cai, nhận thấy hội chứng tiêu chảy lợn sau cai sữa xảy phổ biến, gây nhiều thiệt hại cho ngời chăn nuôi Xuất phát từ yêu cầu cấp thiết thực tiễn sản xuất, đ1 tiến hành đề tài: "Phân lập, xác định đăc tính sinh học E coli, Salmonella gây tiêu chảy cho lợn sau cai sữa nuôi tỉnh Lào Cai đề xuất biện pháp phòng trị" 1.2 Mục tiêu nghiên cứu - Phân lập giám định vi khuẩn E coli Salmonella từ mẫu bệnh phẩm phân lợn tiêu chảy - Xác định đặc tính sinh học chủng vi khuẩn phân lập đợc - Xác định vai trò gây bệnh cđa vi khn E coli vµ Salmonella héi chøng tiêu chảy lợn - Xây dựng đề xuất phác đồ điều trị bệnh tiêu chảy lợn sau cai sữa đạt hiệu Trng i hc Nụng nghip Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ………………………2 ... AEEC Adherence Enteropathogenic E coli BEt Ethidium bromide BHI Brain Heart Infusion C perfringens Clostridium perfringens DNA Deoxyribo Nucleic Acid DPF Delayed Permeability Factor E coli Escherichia... Escherichia coli EMB Eosin Methylen-Bleu EPEC Enteropathogenic E coli ETEC Enterotoxigenic Escherichia coli F Fimbriae LPS Lipopolysaccharid LT Heat-labile toxin M Mucous NCCLS National Committee... Outer membrane protein PCR Polymerase Chain Reaction R Rough RPF Rapid Permeability Factor S Smooth SS Salmonella – Shigella ST Heat-stable toxin TAE Tris - Acetic - EDTA TGE Transmissible Gastro