Vi sinh vật tự Tôm Hùm-luận văn, khóa luận

GIỚI THIỆU CHUNGBộ tài liệu sưu tập gồm nhiều Luận văn, Khoá luận, Tiểu luận…và nhiều Giáo trình Hóa học trình độ Đại học, cao đẳng. Đây là nguồn tài liệu quý giá đầy đủ và rất cần thiết đối với các bạn sinh viên, học sinh, quý phụ huynh, quý đồng nghiệp và các giáo sinh tham khảo học tập. Xuất phát từ quá trình tìm tòi, trao đổi tài liệu, chúng tôi nhận thấy rằng để có được tài liệu mình cần và đủ là một điều không dễ, tốn nhiều thời gian, vì vậy, với mong muốn giúp bạn, giúp mình tôi tổng hợp và chuyển tải lên để quý vị tham khảo. Qua đây cũng gởi lời cảm ơn đến tác giả các bài viết liên quan đã tạo điều kiện cho chúng tôi có bộ sưu tập này. Trên tinh thần tôn trọng tác giả, chúng tôi vẫn giữ nguyên bản gốc.Trân trọngDanh mục Luận văn, Khoá luận, Tiểu luận1.Công nghệ sản xuất bia2.Nghiên cứu chiết tách và xác định thành phần hóa học trong hạt tiêu đen3. Giảm tạp chất trong rượu4.Tối ưu hoá quá trình điều chế biodiesel5.Tinh dầu sả6.Xác định hàm lượng Đồng trong rau7.Tinh dầu tỏi8.Tách phẩm mầu9.Một số phương pháp xử lý nước ô nhiễm10.Tinh dầu HỒI11.Tinh dầu HOA LÀI12.Sản xuất rượu vang13.VAN DE MOI KHO SGK THI DIEM TN14.TACH TAP CHAT TRONG RUOU15.Khảo sát hiện trạng ô nhiễm arsen trong nước ngầm và đánh giá rủi ro lên sức khỏe cộng đồng16.REN LUYEN NANG LUC DOC LAP SANG TAO QUA BAI TAP HOA HOC 10 LV 15117.Nghiên cứu đặc điểm và phân loại vi sinh vật tomhum

i LỜI CẢM ƠN Trong trình thực đồ án tốt nghiệp, nhận nhiều giúp đỡ, hướng dẫn, hỗ trợ từ phía gia đình thầy cô bạn bè Nhờ mà hoàn thành đồ án mong muốn, cho phép gửi lời cảm ơn sâu sắc chân thành đến: Trước hết ThS Lê Phương Chung, người trực tiếp hướng dẫn đề tài Trong suốt thời gian thực hiện, thầy tận tình hướng dẫn, truyền đạt nhiều kinh nghiệm, giúp giải vấn đề nảy sinh trình làm đồ án hoàn thành đồ án định hướng ban đầu Sau đó, xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Nguyễn Văn Duy, Viện phó, Viện Công nghệ sinh học Môi trường, Trường Đại học Nha Trang tận tình giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho thực tốt đồ án Đồng thời bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Viện Công nghệ sinh học Môi trường, Trường Đại học Nha Trang thầy cô Bộ môn Công nghệ sinh học tạo môi trường thuận lợi, cung cấp đầy đủ thiết bị, dụng cụ cho thực đề tài cách xuyên suốt Sau cùng, xin cảm ơn ủng hộ, giúp đỡ gia đình, bạn bè, chị Nguyễn Minh Nhật, anh chị cao học Một lần nữa, xin chân thành cảm ơn giúp đỡ quý báu Chúc tất người sức khỏe thành đạt SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang ii MỤC LỤC SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang iii DANH MỤC BẢNG Bảng 1.5: Độ bền nhiệt, pH enzyme số bacteriocin sinh tổng hợp vi khuẩn .13 Bảng 3.2 : Hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn 45 Bảng 3.4: Khả chịu muối N14 49 SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang iv DANH MỤC HÌNH Bảng 1.5: Độ bền nhiệt, pH enzyme số bacteriocin sinh tổng hợp vi khuẩn .13 Hình 2.1: Quy trình thực 30 Hình 2.2: Trình tự pha loãng 31 Hình 2.3: Quy trình thử tính kháng khuẩn dịch bacteriocin thô với chủng thị 34 Hình 2.4: Vùng kháng khuẩn dịch bacteriocin đĩa petri 35 Hình 2.5 : Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định hoạt tính bacteriocin 36 Hình 2.6: Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định đặc điểm vi khuẩn 37 Hình 3.2: Kết 11 chủng bật đối kháng với chủng Bacillus B1.1 44 Bảng 3.2 : Hoạt tính kháng khuẩn chủng vi khuẩn 45 Bảng 3.4: Khả chịu muối N14 49 Hình 3.5 : Khả chịu muối chủng N14 50 Hình 3.6 : Khả sinh catalase N14 51 Hình 3.7 : Khả di động chủng N14 51 Hình 3.8 : Khả sinh chủng N14 52 DANH MỤC TỪ, KÍ TỰ VIẾT TẮT STT Kí hiệu viết tắt TSB TSA Nghĩa Tryptone Soya Broth Tryptone Soya Agar BC Bacterial Cellulose Lactic Acid Bacteria Adenosine Triphosphate LAB ATP SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang v DNA HPK RR Acid Deoxyribo Nucleic Histidine protein kinase Response regulator SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang LỜI MỞ ĐẦU Vào thời kỳ khai sinh vi sinh học đại ngày nay, nhiều nhà khoa học nghiên cứu phát chất kháng sinh Từ kỷ 17, thầy thuốc Hoàng gia Anh biết cách chữa bệnh cách dùng rêu áp lên vết thương, hay dùng mẫu bánh mì để chữa trị thương tích Đến năm kỷ 18, thuật ngữ “chất kháng sinh” lần Pasteur Joubert sử dụng để mô tả tượng kìm hãm khả gây bệnh vi khuẩn Bacillus anthracis động vật nhiễm bệnh, số nhà khoa học khác phát hoạt tính kháng khuẩn vài chủng vi sinh vật Vào năm 1929, Alexander Fleming tìm thuốc kháng sinh penicillin từ nấm Penicillium notanum, có khả ức chế vi khuẩn sinh trưởng loại vi khuẩn, ứng dụng để chữa trị bệnh nhiễm trùng phạm vi rộng Việc tìm thuốc kháng sinh Alexander Fleming mở bước ngoặc cho y học loài người Chỉ với số lượng nhỏ hiệu tiêu diệt vi sinh vật penicillin cao Thuốc kháng sinh không ứng dụng điều trị bệnh cho người, mà dùng điều trị bệnh cho vật nuôi, tăng trọng cho vật nuôi bảo quản thực phẩm (như chlotetracycllin dùng để bảo quản thịt; tetracycline, oromycine… để bảo quản sản phẩm nhằm ngăn chặn trình thối rữa thịt cá, tôm) Tuy nhiên lạm dụng mức kháng sinh dẫn đến khả kháng thuốc vi sinh vật nên việc nghiên cứu chất kháng khuẩn để ứng dụng bảo quản thực phẩm cần phải theo hướng mới, hiệu Không thế, năm gần đây, người tiêu dùng nhận thức rõ tác động phụ gia thực phẩm sức khỏe chuộng loại thực phẩm chế biến không bổ sung chất bảo quản hóa học tổng hợp tính an toàn cho thực phẩm Và từ yêu cầu cao chất lượng, tính an toàn thực phẩm từ phía người tiêu dùng yêu cầu nghiêm ngặt phủ an toàn thực phẩm sản xuất, chế biến, bảo quản thúc đẩy nghiên cứu rộng rãi chất có khả bảo quản thực phẩm có nguồn góc tự nhiên SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang Xuất phát từ yêu cầu đó, việc tiếp tục tìm chất kháng khuẩn trở nên quan trọng lĩnh vực y dược chăn nuôi, công nghệ thực phẩm Một lựa chọn hợp lý ứng dụng bacteriocin, nhóm hợp chất có chất peptide, nguồn gốc từ vi sinh vật có khả kháng khuẩn mà không gây tác động kháng thuốc vi sinh vật Ngoài ra, bacteriocin không gây dị ứng cho người, an toàn với sức khỏe Đó lựa chọn xem có nhiều ưu điểm hiệu Vì thế, chọn tiến hành nghiên cứu đề tài “ Nghiên cứu đặc điểm phân loại vi sinh vật có khả sinh bacteriocin phân lập từ tôm hùm Khánh Hòa ”, giúp làm phong phú thêm sưu tập chủng vi sinh vật sinh chất kháng khuẩn, tạo nhiều lựa chọn cho việc tuyển chọn chủng, hiểu đặc tính chủng để tăng khả sinh bacteriocin Đề tài nhằm mục đích sau đây: - Phân lập chủng vi sinh vật có khả kháng khuẩn từ tôm hùm Sàng lọc chủng vi sinh vật phân lập từ tôm hùm có khả sinh - bacteriocin Xác định đặc điểm vi sinh vật sàng lọc Định danh vi sinh vật có khả sinh bacteriocin phân lập phương pháp sinh học phân tử SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang Chương I TỔNG QUAN 1.1 Bacteriocin Nghiên cứu lâu đời bacteriocin công trình nghiên cứu Gratia cộng tác viên vào năm 1925 khả kháng khuẩn Escherichia coli (colicin V) thuật ngữ bacteriocin không xuất năm 1950 Định nghĩa bacteriocin dựa đặc tính colicin, chất sinh tổng hợp gây tử vong, phổ hoạt động hẹp bị giới hạn loài tương tự vi khuẩn sản xuất Ba chủng vi khuẩn Gram (+) nghiên cứu cho việc sản sinh bacteriocin lúc là: Bacillus sp.;Listeria sp Staphylococcus sp Các nghiên cứu năm 1980 cho thấy có gia tăng đáng kể số lượng công bố bacteriocin Từ thời điểm bắt đầu bùng nổ nghiên cứu bacteriocin, định hướng chất kháng khuẩn an toàn lĩnh vực công nghệ thực phẩm[12],[23] 1.1.1 Khái niệm Bacteriocin chất kháng khuẩn có chất peptide hay protein tổng hợp ribosome vi khuẩn Gram âm Gram dương để chống lại vi khuẩn khác có quan hệ gần gũi với chúng Như vậy, loại vi khuẩn tạo bacteriocin có khả kháng lại bacteriocin Ngoài không gây phản ứng dị ứng người vấn đề sức khỏe, bị phân hủy nhanh enzym proteinase, lipase 1.1.2 Các chủng vi sinh vật sinh bacteriocin Bacteriocin sinh tổng hợp vi khuẩn Gram âm vi khuẩn Gram dương với đặc điểm : - Bacteriocin vi khuẩn gram âm: gồm nhiều loại khác kích thước, nguồn gốc chủng vi sinh vật sản xuất, kiểu tác động chế miễn dịch Bacteriocin vi khuẩn Gram âm yếu bacteriocin vi khuẩn Gram dương - Bacteirocin vi khuẩn Gram dương: bacteriocin nhiều vi khuẩn gram âm Tuy nhiên chúng khác vi khuẩn gram âm chỗ là: việc tạo bacteriocin không cần thiết phải gây chết vi sinh vật chủ sinh tổng hợp bacteriocin vi khuẩn Gram dương cần nhiều gen vi khuẩn Gram âm SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang Những nghiên cứu trước bacteriocin chủ yếu tập trung vào vi khuẩn Gram âm, điển hình E coli sinh tổng hợp colicin Tuy nhiên nghiên cứu bacteriocin sinh tổng hợp vi khuẩn Gram dương tiến hành có nhiều báo cáo cung cấp thông tin vấn đề Ba chủng vi khuẩn Gram dương nghiên cứu cho việc sản sinh bacteriocin lúc Bacillus sp.;Listeria sp Staphylococcus sp Ngày chủng vi khuẩn lactic sinh bacteriocin nghiên cứu nhiều hơn, tính ưu việt bacteriocin dùng bảo quản thực phẩm an toàn với người sử dụng, không độc với tế bào nhân chuẩn, bị phân hủy proteinase hệ tiêu hóa nên ảnh hưởng đến quần xã sinh vật ruột người Thêm vào chúng hoạt động khoảng pH rộng, chống lại nhiều vi khuẩn gây hư hỏng thực phẩm, chế hoạt động dựa màng tế bào vi khuẩn nên không gây tính đề kháng chéo với kháng sinh mã hóa gen nằm plasmid nên thuận tiện cho thao tác di truyền Vi khuẩn lactic từ lâu sử dụng thực phẩm chúng có hoạt tính kháng loại vi sinh vật khác Đặc tính vi khuẩn lactic sinh acid hữu sinh bacteriocin kháng khuẩn kháng nấm Bảng 1.1: Một số chủng vi khuẩn sinh bacteriocin loại I Bacteiocin Nisin A Nisin Z Mutacin 1140 Carnocin U149 Cytolysin Lacticin 481 Lactocin S Salivaricin A Mersacidi Vi khuẩn Lactococcus lactis (nhiều chủng) Lactococcus lactis (nhiều chủng) Streptococcus mutans JH1000 Carnobacterium piscicola 149 Enterococcus faecalis DS16 Lactococcus Lactis CNRZ481 Lactobacillus sake L45 Streptococcus Salivarius 20P3 Bacillus spp Bảng 1.2 : Một số chủng vi khuẩn sinh bacteriocin loại II Bacteiocin Vi khuẩn SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang Bavaricin A Bavaricin MN Carnobacteriocin B2 Carnobacteriocin BM1 Curvacin A Divercin V41 Enterocin A Enterocin P Leucocin A/B –Talla Mesentericin Y105 Acidocin J1132 Lactacin F Lacticin 3147 Lactobin A Lactococcin G Divergicin A Lactococcin A – Plantaricin 1.25β Lactobacillus sake MI401 Lactobacillus sake MN Carnobacterium pisciocola LV17B Carnobacterium pisciocola LV17B L curvatus LTH1174 Carnobacterium pisciocola divergens V41 Enterococcus faecium CTC492/T136 Enterococcus faecium P13 Leuconostoc gelidum UAL187; Leuconostoc carosum Talla Leuconostoc mesenteroides Y105 L acidophilus JCM 1132 L johnsonii 11088 Lc lactis DPC3147 L amylovorus LMG P-13139 Lc latis LMG2081 Cb divergens LV13 Lc lactis subsp cremoris LMG 2130 L plantarum TMW 1.1.3 Phân loại Cho đến có khoảng 200 loại bacteriocin xác định, nhiên việc phân loại bacteriocin chưa xác định rõ ràng vấn đề tranh cãi Các bacteriocin thường phân loại dựa tiêu chí khác Những tiêu chí họ vi khuẩn sản xuất, trọng lượng phân tử chúng cuối trình tự chuỗi amino acid [20] Trong đó, phương pháp phân loại chấp nhận sử dụng phổ biến bacteriocin chia thành lớp: lớp I, lớp II lớp III lớp IV Hai nhóm bacteriocin lớp I lớp II đối tượng tìm hiểu nghiên cứu nhiều hơn hai nhóm lại SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang 46 kháng khuẩn rộng (kháng vi khuẩn Gram dương Gram âm) ; chủng có vùng kháng khuẩn ≥18mm với chủng thị Bacillus B1.1 ; chủng có vùng kháng khuẩn lớn ≥18 mm với chủng thị Vibrio V1.1 Qua cho thấy chủng vi khuẩn đối kháng với chủng thị nhờ vào thành phần kháng khuẩn tồn dịch kháng khuẩn thô Những thành phần kháng khuẩn mà chúng sinh trưởng, phát triển tạo acid, bacteriocin, CO2, H2O2 Do đó, đến chưa khẳng định chủng sinh bacteriocin Chọn 11 chủng bật, ổn định (các chủng ô màu bảng 3.2) qua lần thử để kiểm tra tiếp 3.3 Xác định hoạt tính bacteriocin Sau tuyển chọn chủng có hoạt tính kháng khuẩn, để kiểm tra dịch kháng khuẩn có phải bacteriocin không, ta tiến hành xử lý proteinase K tripsin Bacteriocin vốn có chất protein, hỗn hợp protein với chất khác Vì để kiểm tra chất protein, ta sử dụng enzyme đặc trưng proteinase K Ngoài độ bền enzyme dấu hiệu để nhận biết bacteriocin Mỗi loại bacteriocin có thành phần cấu trúc aminoacid khác nên chịu phân cắt đặc hiệu enzyme khác nhau, thích hợp với Khi bị phân cắt enzyme khiến bacteriocin hoạt tính kháng khuẩn Trước thực trình thử nghiệm, tiến hành thử với enzyme catalase để loại bỏ khả sinh H2O2 Kết sau thử nghiệm, tuyển chọn chủng N14 bị bất hoạt sau xử lý với enzyme proteinase K tripsin Do peptide kháng khuẩn dịch bị phân hủy enzyme nên kháng lại chủng thị nữa, hay tạo vòng kháng với B1.1 SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang 47 N14 B1.1 Trypsin Proteinase K ĐC Hình 3.3 : Thử nghiệm với enzyme proteinase K tripsin Các chủng khác cho kết thử nghiệm vòng kháng sau xử lý proteinase K lại có vòng kháng sau xử lý enzyme tripsin Do đó, chưa thể xác định dịch kháng khuẩn có phải dịch bacteriocin thô hay không 3.4 Quan sát hình thái tế bào vi khuẩn Nuôi cấy chủng tuyển chọn môi trường thạch TSA quan sát hình thái khuẩn lạc chủng tuyển chọn N14 để phục vụ cho việc định danh sau Kết thể sau : - Hình thái khuẩn lạc : Khuẩn lạc tròn, màu trắng sữa, trơn, lồi lên bề mặt thạch, bờ - Hình thái tế bào : Vi khuẩn Gram (+), trực khuẩn ngắn SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang A B D C 48 Hình 3.4 : Hình thái khuẩn lạc tế bào vi khuẩn N14 A : khuẩn lạc đĩa cấy ria ; B : hình thái khuẩn lạc phóng to C : hình thái tế bào khuẩn lạc ; D : cấy điểm Kết luận chủng N14 vi khuẩn gram dương vi tế bào bắt màu tím thuốc nhuộm tím violet Điều giải thích sau, vi khuẩn Gram dương có thành tế bào dày, dạng lưới, cấu tạo peptidoglycan, có khả giữ phức hợp tím kết tinh – liugol nhuộm Khi tẩy cồn, có lỗ petidoglycan co lại, khiến thành tế bào bắt giữ phức hợp bên tế bào Do tế bào không bắt màu nhuộm fuchsin bổ sung, kết tế bào vi khuẩn có màu tím SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang 49 3.5 Đặc điểm sinh hóa chủng vi khuẩn 3.5.1 Khả chịu muối Chủng chọn lọc nuôi môi trường TSB nồng độ muối khác từ 1% - 12% 370C, để kiểm tra khả chịu muối chủng Kết sau 24 nuôi thể bảng sau : Bảng 3.4: Khả chịu muối N14 Nồng độNaCl(%) Chủng 10 11 12 N14 + + + + + + + - - - - - Từ bảng 3.4, cho thấy chủng N14 chủng chịu mặn, có khả sinh trưởng phát triển tốt môi trường có nồng độ muối thấp Do chủng có khả sinh sống vùng gần bờ, vùng vịnh cửa sông, nhu cầu Na + cần thiết chủng Sau 24 giờ, qua hình 3.5 ta thấy khuẩn lạc mọc dày đường ria nồng độ từ 1-3% chủng Chủng phát triển mạnh nồng độ 2%, kết luận chủng N14 sống tốt vùng biển có độ mặn không cao Ở nồng độ muối 6%, khuẩn lạc bắt đầu thưa dần, đến nồng độ 7% có khả phát triển yếu Vậy nồng độ 7% giới hạn khả chịu muối Từ nồng độ 8% trở vi khuẩn phát triển nồng độ cao Qua có kết luận rằng, chủng N14 có khoảng giới hạn khả chịu muối cao từ 1% - 7%, môi trường nuôi cấy thích hợp bổ sung muối có nồng độ - 2% SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang 50 9% 10% 5% 6% 1% 11% 8% 7% 2% 12% 3% 4% Hình 3.5 : Khả chịu muối chủng N14 3.5.2 Thử catalase Nuôi cấy dịch vi khuẩn sau 24 giờ, tiến hành nhỏ giọt H 2O2 30% vào dịch vi khuẩn, kết cho thấy dương tính khả sinh enzyme catalase Enzyme enzyme diện vi khuẩn hiếu khí kỵ khí tùy tiện có khả biến dưỡng lượng theo phương thức hô hấp hiếu khí Sự thủy phân hydrogen peroxide giải phóng O2 gây tượng sủi bọt 2H2O2 Catalase 2H2O + O2 SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang 51 ĐC N14 Hình 3.6 : Khả sinh catalase N14 3.5.3 Tính di động Để kiểm tra khả này, ta cấy thẳng chủng vi khuẩn vào môi trường thạch TSA Nuôi cấy sau 24 giờ, kết cho thấy chủng vi khuẩn mọc theo đường cấy, chứng tỏ chúng khả di động Qua hình 3.7, ta thấy chủng N14có khả sinh làm nứt thạch, đẩy thạch lên N14 Hình 3.7 : Khả di động chủng N14 SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang 52 3.5.4 Khả sinh Khi vi khuẩn sử dụng nguồn carbon để lên men, tùy phương thức lên men tạo sản phẩm khác bao gồm rượu, acid hữu cơ, CO Qua trình thử nghiệm khả này, cho kết dương tính, song khả sinh yếu, xuất bóng khí ống Durham đẩy ống lên môi trường Vậy kết luận sản phẩm cuối trình lên men chủng N14 có CO2 N14 ĐC Hình 3.8 : Khả sinh chủng N14 3.6 Định danh phương pháp sinh học phân tử Kết giải trình tự DNA chủng N14 thu đoạn gen có kích thước 835bp Trình tự sau phân tích, chỉnh sửa phần mềm BioEdit 7.1.3.0 Genious Pro 5.5.7, so sánh với trình tự nucleotide tương đồng Genbank chương trình BLAST (www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/) Kết cho thấy chủng N14 có độ tương đồng cao với chủng Proteus sp 99% Như vậy, kết luận sơ chủng vi khuẩn N14 phân lập được, có khả sinh bacteriocin thuộc chủng Proteus sp SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang 53 Chương IV : KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Ý KIẾN 4.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu chúng em đưa số kết luận sau : 1) Đã phân lập 46 chủng có 20 chủng có hoạt tính kháng khuẩn 2) Từ chủng phân lập tuyển chọn chủng N14 sinh - bacteriocin 3) Xác định sơ đặc điểm chủng N14 : Có khuẩn lạc tròn màu trắng sữa, trơn,bờ Khả chịu muối nồng độ - 7%, có khả sống nơi có độ - mặn không cao Sinh hơi, hay sản phẩm cuối trình lên men nguồn carbon có - 4.2 chứa CO2 Không có khả di động Sinh enzyme catalase 4) Chủng xác định chủng Proteus sp.N14 có kích thước gen 835bp Kiến nghị 1) Nghiên cứu sâu đặc điểm sinh hóa chủng N14 2) Xác định điều kiện nuối cấy tối ưu để chủng N14 phát triển sinh trưởng tối ưu 3) Kiểm tra lại chủng lại số chủng đem thử nghiệm enzyme để đưa kết luận xác hơn, làm phong phú thêm sưu tập chủng vi khuẩn sinh bacteriocin 4) Tiến hành phân loại bacteriocin 5) Nghiên cứu khả ứng dụng bacteriocin lĩnh vực khác y học, công nghiệp thực phẩm… TÀI LIỆU THAM KHẢO  Tài liệu tiếng Việt Lê Thị Hồng Tuyết (2004) “Nghiên cứu bcateriocin sản xuất Lactobacillus acidophilus NrrlB – 2092” Luận văn thạc sĩ Sinh học, ĐHQG TpHCM SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang 54 Ngô Thị Phương Dung, Huỳnh Thị Yến Ly, Huỳnh Xuân Phong, Đại học Cần Thơ “Phân lập tuyển chọn vi khuẩn lactic có khả sinh chất kháng khuẩn” Tạp chí Khoa học 2011 : số 19a 176-184 Nguyễn Đức Hùng, Lê Đình Hùng, Huỳnh Lê Tâm (2004) “Sổ tay kiểm nghiệm vi sinh thực phẩm thủy sản” Nhà xuất nông nghiệp, Hà Nội Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Quyến, Phạm Văn Ty(2005) “Vi sinh vật học” Nhà xuất giáo dục Nguyễn Thị Đà, Hoa Thị Minh Tú, Lê Thanh Bình (2008) “Một số tính chất bcteriocin tổng hợp vi khuẩn lactic phân lập từ sữa bò tươi” Tạp chí Khoa học Công nghệ, tập 46, số 6, 2008, Tr 33-34 Nguyễn Thị Bích Thủy (2004) “Một số dẫn liệu ảnh hưởng điều kiện môi trường lên sinh trưởng tôm (juvenile) tôm hùm (Panulirus ornatus) vùng biển miền trung Việt Nam” Tuyển tập công trình nghiên cứu khao học công nghệ (1984 – 2004), trung tâm nghiên cứu thủy sản III – nha trang Tr 73 - 81 Nguyễn Thị Bích Thủy(2006) “Kỹ thuật nuôi tôm hùm GT kỹ thuật nuôi giáp xác” Nhà xuất Nông Nghiệp, TP Hồ Chí Minh Trần Linh Thước (2006) “Phương pháp phân tích vi sinh vật nước, thực phẩm mĩ phẩm” Nhà xuất giáo dục, Hà Nội SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang 55  Tài liệu tiếng Anh Axelsson L, Holck A (1995) “The genes involved in production of and immunity to sakacin A, a bacteriocin from Lactobacillus sake Lb706” J.Bacteriol 177 (8): 2125-37 10 Broadbent JR, Chou YC, Gillies K, Kondo JK (1989) “Ninsin inhitbits several gram – positive, mastitis–causing pathogens” J.Dairy Sci, 1989, Dec;72(12) :3342-5 11 Brötz H and Sahl H-G (2000) “New insights into the mechanism of action of lantibiotics—diverse biological effects by binding to the same molecular target” Journal of Antimicrobial Chemotherapy (2000) 46, 1-6 46 (1): 1–6 DOI:10.1093/jac/46.1.1 PMID 10882681 12 Desriac F, Defer D, Bourgougnon N, Brillet B, Le Chevalier P, Fleury Y (2010) “Bacteriocin as Weapons in the Marine Animal-Associated Bacteria Warfare: Inventory and Potential Applications as an Aquaculture Probiotic” Marine Drugs 2010 , , 1153-1177, DOI 10.3390/md8041153 13 Gert N.Moll, Wil N.Konings, Arnold J.M.Driessen (1999) “Bacteriocin: mechanism of membrane insertion and pore formation” Antonie van Leeuwenhoek, 76, 185 – 198 14 H.chen, D.G.Hoover (2003) “Bacteriocin and their food applications” Comprehensive review in food sience and food safety 2, 82 – 85 15 Hühne K, Axelsson L, Holck A, Kröckel L (1996) “Analysis of the sakacin P gene cluster from Lactobacillus sake Lb674 and its expression in sakacin-negative Lb sake strains" Microbiology (Reading, Engl.) 142(6): 1437–48 PMID 8704983 16 Jack RW, Tagg JR, Ray B (1995) “bacteriocin of gram-positive bacteria” Microbiol Rev 59:171-200 17 Joerger MC, Klaenhammer TR (1986) “Characterization and purification of helveticin J and evidence for a chromosomally determined bacteriocin produced by Lactobacillus helveticus 481” J.Bacteriol, 1986 Aug167(2):439-46 18 Jofré A, Garriga M, Aymerich T (2007) “Inhibition of Listeria monocytogenes in cooked ham through active packaging with natural SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang 56 antimicrobials and high-pressure processing” J Food Prot, 70 (11): 2498502, PMID 18044426 19 Jose´ L Balcázar, Sara Loureiro, Yolanda J Da Silva, José Pintado and Miquel Planas (2010) “Identification and characterization of bacteria with antibacterial activities isolated from seahorses (Hippocampus guttulatus)” The Journal of Antibiotics (2010) 63, 271– 274, DOI:10.1038/ja.2010.27, published online 26 March 2010 20 Juan C Oscáriz, Antonio G Pisabarro (2001) “Classification and mode of action of membrane-active bacteriocin produced by gram positive bacteria” Int Microbiol (2001) 4: 13-19, DOI 10.1007/s101230100003, published online 25 August 2001 21 Katla T, Møretrø T, Sveen I, Aasen IM, Axelsson L, Rørvik LM, Naterstad K (2002) “Inhibition of Listeria monocytogenes in chicken cold cuts by addition of sakacin P and sakacin P-producing Lactobacillus sakei” J.Appl Microbiol 93 (2): 191-196, DOI : 10.1046/j.13652672.2002.01675.x PMID 12147066 22 M.A Riley, M.A Chavan (Eds.) “Bacteriocins ecology and evolution” 23 Poeta P, Costa D, Sáenz Y, Klibi N, Ruiz-Larrea F, Rodrigues J, Torres C (2005) “Characterization of antibiotic resistance genes and virulence factors in faecal enterococci of wild animals in Portugal” J.Vet Med B Infect Dis Vet Public Health, 2005, Nov;52(9):396-402 24 Vesterlund S, Paltta J, Lauková A, Karp M, Ouwehand AC (2004) “Rapid screening method for the detection of antimicrobial substances” J.Microbiol Methods, 2004 , Apr;57(1):23-31 SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang 57 PHỤ LỤC Phụ lục : Thành phần hỗn hợp a Môi trường TSB Trypticase peptone Phytone peptone NaCl K2HPO4 Glucose Nước cất 17g 3g 5g 2,5g 2,5g 1000ml b Thuốc nhuộm tím violet Tím violet Rượu Phenol tinh thể Nước cất 1g 1g 2g 100ml c Thuốc nhuộm liugol Iod tinh thể KI Nước cất 1g 2g 200ml d Thuốc nhuộm Fuschin Fuschin kiềm Rượu ethylic 95% Phenol tinh thể Nước cất 1g 10ml 5g 100ml SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang 58 Phụ lục : Giải trình tự Hình trình tự đoạn gen 16S rDNA chủng Proteus sp N14 (835 bp) ACGGGAGGCA GCAGTGGGGA ATATTGCACA ATGGGCGCAA GCCTGATGCA 50 51 GCCATGCCGC GTGTATGAAG AAGGCCTTAG GGTTGTAAAG TACTTTCAGC 100 101 GGGGAGGAAG GTGTTAAGAT TAATACTCTT ATCAATTGAC GTTACCCGCA 150 151 GAAGAAGCAC CGGCTAACTC CGTGCCAGCA GCCGCGGTAA TACGGAGGGT 200 201 GCAAGCGTTA ATCGGAATTA CTGGGCGTAA AGCGCACGCA GGCGGTCAAT 250 251 TAAGTCAGAT GTGAAAGCCC CGAGCTTAAC TTGGGAATTG CATCTGAAAC 300 301 TGGTTGGCTA GAGTCTTGTA GAGGGGGGTA GAATTCCACG TGTAGCGGTG 350 351 AAATGCGTAG AGATGTGGAG GAATACCGGT GGCGAAGGCG GCCCCCTGGA 400 401 CAAAGACTGA CGCTCAGGTG CGAAAGCGTG GGGAGCAAAC AGGATTAGAT 450 SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang 59 451 ACCCTGGTAG TCCACGCTGT AAACGATGTC GATTTAGAGG TTGTGGTCTT 500 501 GAACCGTGGC TTCTGGAGCT AACGCGTTAA ATCGACCGCC TGGGGAGTAC 550 551 GGCCGCAAGG TTAAAACTCA AATGAATTGA CGGGGGCCCG CACAAGCGGT 600 601 GGAGCATGTG GTTTAATTCG ATGCAACGCG AAGAACCTTA CCTACTCTTG 650 651 ACATCCAGCG AATCCTTTAG AGATAGAGGA GTGCCTTCGG GAACGCTGAG 700 701 ACAGGTGCTG CATGGCTGTC GTCAGCTCGT GTTGTGAAAT GTTGGGTTAA 750 751 GTCCCGCAAC GAGCGCAACC CTTATCCTTT GTTGCCAGCG CGTGATGGCG 800 801 GGAACTCAAA GGAGACTGCC GGTGATAAAC CGGAG 835 SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang 60 Bảng so sánh trình tự đoạn gen 16S rDNA chủng Proteus sp.N14 với trình tự tương đồng Genbank công cụ BLAST Accession Description NR_043998.1 Proteus penneri Max Total Query score score coverage value ident strain 1498 NCTC 12737 16S ribosomal RNA, partial E Max 1498 100% 0.0 99% 1487 100% 0.0 99% 1476 100% 0.0 99% 1423 100% 0.0 97% Links sequence NR_043997.1 Proteus mirabilis strain 1487 NCTC 11938 16S ribosomal RNA, partial sequence NR_025336.1 Proteus vulgaris strain 1476 DSM 30118 16S ribosomal RNA, partial sequence NR_043999.1 Proteus myxofaciens strain 1423 NCIMB 13273 16S ribosomal RNA, partial sequence SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang [...]... dựa vào vật chuyên chở nhiều thành phần riêng biệt (Lan EFG) Bacteriocin sẽ nhận biết được những vi sinh vật sinh bacteriocin nhờ sự không có mặt của những thụ thể đặc biệt và kết quả là chúng không bám được vào tế bào vi sinh vật đó[14] 1.1.5 Cơ chế hoạt động của bacteriocin 1.1.5.1Phạm vi hoạt động Phạm vi hoạt động của bacteriocin được xem xét dựa trên phạm vi kháng khuẩn, giống vi sinh vật sinh ra,... các chủng vi khuẩn phân lập được với chủng chỉ thị Khi đã tuyển chọn được chủng vi khuẩn sinh kháng khuẩn, tiếp tục xác định hoạt tính bacteriocin bằng cách sử dụng enzyme proteinase K và trypsin Sau đó, sử dụng chủng sinh bacteriocin để xác định đặc điểm và phân loại chủng vi khuẩn sinh bacteriocin 2.2.1 Phương pháp phân lập vi sinh vật Mục đích của thí nghiệm tạo bộ sưu tập các chủng vi sinh vật có... liệu 2.1.2 Mẫu tôm hùm Mẫu tôm hùm được thu mua ở trại tôm Bình Ba, Khánh Hòa Tôm hùm sử dụng cho thí nghiệm có kích thước khoảng 27cm, nặng 600g Mẫu tôm được bảo quản sống đưa về phòng thí nghiệm và tiến hành phân lập vi sinh vật từ máu, nội tạng, và cơ thịt 2.1.3 Chủng chỉ thị Các chủng chỉ thị là chủng Bacillus B1.1 đại diện cho nhóm vi khuẩn Gram dương và Vibrio V1.1 đại diện cho nhóm vi khuẩn Gram... loài thuộc họ tôm hùm Gai (Palinuridae), 9 loài thuộc họ tôm Mũ Ni (Scyllaridae) và 4 loài thuộc họ Nephropidae Trong đó, một số loài thuộc họ tôm hùm Gai được nuôi phổ biến hiện nay như tôm hùm Bông (tôm hùm Sao, tôm hùm Hèo), tôm hùm Đá (xanh chân ngắn), tôm hùm Đỏ (hùm lửa), tôm hùm Sỏi (xanh chân dài, hùm ghì), tôm hùm Tre (Tề Thiên) SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang 19 Hệ thống phân loại tôm hùm Ngành... nhiều [8] 1.2.4 Đặc điểm sinh sản Tôm hùm sinh sản rải rác quanh năm nhưng mùa vụ sinh sản của giống Palinurus chủ yếu từ tháng 4-5 và tháng 9 hàng năm Sức sinh sản của tôm hùm SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang 21 tương đối lớn và chúng có thể đẻ nhiều lần trong một năm (thường là 2 lần/năm) Tôm hùm có kích thước vỏ đầu ngực từ 90 – 99 mm đã bắt đầu tham gia sinh sản Đến mùa sinh sản tôm thành thục kết đàn... 1.2.5 Giá trị của tôm hùm Tôm hùm được tôn vinh là vua của các loại hải sản giá trị dinh dưỡng cao Thịt tôm hùm chắc, dai, ngọt ăn một lần không thể nào quên Tập trung sự tinh túy nhất ở con tôm hùm là gạch san đúng nơi đầu tôm và chạy thành dải vàng dọc sống lưng Gạch tôm hùm béo, thơm, nhiều đạm Hình 1.6: Tôm hùm Bông Về chất lượng sản phẩm, theo các tài liệu phân tích, phần ăn được của tôm hùm chiếm... khác nhau, tôm càng nhỏ thì nhu cầu dinh dưỡng càng cao, ở giai đoạn trước lột xác 2-4 ngày tôm ăn rất mạnh, giai đoạn lột xác tôm sẽ ăn chậm lại SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang 20 Tôm hùm cũng như nhiều giáp xác khác sinh trưởng thông qua quá trình lột xác Ở giai đoạn tôm còn nhỏ chu kỳ lột xác ngắn, tôm càng lớn chu kì lột xác càng dài, sau mỗi lần lột xác thì kích thước và khối lượng của tôm tăng lên... chèn vào gen vi khuẩn không gây bệnh hoặc vi rút mà có thể sinh sản và tiết ra bacteriocin Lợi ích chính của vi c sử dụng bacteriocin là nó sẽ giảm mầm bệnh nguy hiểm của con người chống cự lại thuốc kháng sinh Các nhà nghiên cứu thuộc Đại học Tổng hợp Klemson vừa phát hiện ra một loại thuốc chống vi khuẩn mới không gây tính lờn thuốc từ chính những vi khuẩn tạo ra loại pho mát Thụy Sĩ Những vi khuẩn này... màu tự nhiên của vỏ, làm cho tôm phát triển không bình thường[7] Nhìn chung, tôm hùm lớn lên nhờ quá trình lột xác Tôm càng nhỏ, quá trình lột xác càng ngắn và tôm lớn càng nhanh Tôm hùm có chu kỳ lột xác dài hơn so với các loài giáp xác khác, do đó, tốc độ tăng trưởng của chúng cũng chậm hơn Qua mỗi lần lột xác kế tiếp, tỷ lệ phần trăm chiều dài giáp đầu ngực của tôm giảm xuống nhưng độ dài vỏ tôm. .. bacteriocin sinh bởi vi khuẩn SVTH: Nguyễn Thị Thảo Trang 14 Gram dương Megacin A-216 là một kháng nguyên và tế bào cũng sinh ra một kháng thể có khả năng chống lại ảnh hưởng giết chính nó Vi c nghiên cứu những kháng thể đến bacteriocin trong huyết thanh của con người có lẽ là một lĩnh vực thú vị cho những nghiên cứu sau này Một thuộc tính cần thiết để bảo đảm sự sống sót của vi sinh vật sinh bacteriocin ... vi sinh vật sinh bacteriocin Bacteriocin sinh tổng hợp vi khuẩn Gram âm vi khuẩn Gram dương với đặc điểm : - Bacteriocin vi khuẩn gram âm: gồm nhiều loại khác kích thước, nguồn gốc chủng vi sinh. .. phân loại vi sinh vật có khả sinh bacteriocin phân lập từ tôm hùm Khánh Hòa ”, giúp làm phong phú thêm sưu tập chủng vi sinh vật sinh chất kháng khuẩn, tạo nhiều lựa chọn cho vi c tuyển chọn... chủng vi khuẩn sinh bacteriocin Xác định đặc điểm chủng vi sinh vật kiểm định phương pháp định danh vi sinh vật theo phương pháp truyền thống dựa đặc điểm hình thái, đặc điểm sinh lý, sinh hóa