Phương pháp đơn giản để chiết xuất và tinh chế resveratrol từ polygonum cuspidatum

Phương pháp đơn giản để chiết xuất và tinh chế resveratrol từ polygonum cuspidatum

Trường đại học Dược Hà Nội Bộ môn Dược liệu Báo cáo khoa học Nhóm tổ lớp A4 – K68 Contents lists available at ScienceDirect Journal of Pharmaceutical Analysis www.elsevier.com/locate/jpa www.sciencedirect.com Dong-Geng Wanga, Wen-Ying Liub, Guang-Tong Chena,b,✕ aMedical School, Nan Tong University, Nan Tong 226001, China bDepartment of Pharmaceutical Analysis, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China Received 31 May 2012; accepted December 2012 Available online 10 December 2012 Phương pháp đơn giản để chiết xuất tinh chế Resveratrol từ Polygonum cuspidatum I,Đặt vấn đề 1.Mục tiêu nghiên cứu: Tìm phương pháp đơn giản để chiết xuất tinh chế Resveratrol từ Polygonum cuspidatum 2,Tính cấp thiết nghiên cứu: Hình 1: trans- resveratrol (A), Trans- polydatin( B) • Resveratrol hợp chất không flavonoid polyphenol công thức C14H12O3, hòa tan ether, chloroform, methanol, ethanol, acetone, acid acetic, ethyl ester dung môi hữu khác • Nhiệt độ: nóng chảy 253-255 ℃, thăng hoa 261 ℃ Trans – resveratrol có hoạt tính sinh học mạnh hơn, hàm lượng lại thấp so với dạng muối glycoside => Thủy phân Transpolydatin để tăng hàm lượng resveratrol Các phương pháp truyền thống dùng:  Sử dụng nhiệt lượng lớn ethanol cho lọc, cô đặc tinh chế  Sử dụng phân tích polymer đánh dấu có thời gian tương tác đặc hiệu với resveratrol để tinh chế  Chiết xuất lỏng siêu tới hạn( SFE)  Thủy phân emzym  Chạy sắc kí ngược hiệu cao Nhược điểm:tốn dung môi, ô nhiễm môi trường, chi phí cao => Xây dựng phương pháp đơn giản để chiết xuất tinh chế resveratrol, cải thiện nhược điểm nâng cao suất chiết Resveratrol từ P cuspidatum II, Phương pháp tiến hành, 1,Quy trình chiết xuất Resveratrol từ P cuspidatum Hình 2: Quy trình chiết xuất resveratrol 2, Chạy sắc kí HPLC kết hợp với máy phân tích khối phổ •Dịch resveratrol sau chiết tiến hành chấm chạy sắc kí thu vết •Sau phân tích thông qua hệ thống phân tích khối phổ để xác định xác chất thu resveratrol •Chạy sắc kí: - Pha động: methanol: nước= 45:55(v:v) - Pha tĩnh: cột C18(250mm x10mm x 5µm) - Sau phát bước sóng 290nm Sau resveratrol xác định hệ thống HPLC nhúng dung môi base pH =8 -9 để loại bỏ tạp chất ảnh hưởng đến kết chiết xuất Resveratrol acid mạnh, hợp chất tan nước •Rửa kết thúc màu pha nước thay đổi từ đỏ sang không màu • Nồng độ resveratrol xác định HPLC tính theo công thức % resveratrol = (VoCo/ViCi).100% (2) Với Vo, Co thể tích nồng độ resveratrol sau chiết pha dung môi hữu Vi, Ci thể tích nồng độ resvertrol trước chiết xuất dung môi III, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Chiết xuất resveratrol từ P cuspidatum Đánh giá hiệu suất chiết Resveratrol bước HPLC Lọc • So sánh phương pháp lọc trực tiếp gián tiếp • Xét ảnh hưởng tỉ lệ thể tích dịch chiết:nước Tẩy rửa • So sánh hiệu suất chiết pH khác • Tìm môi trường pH thích hợp Thủy phân • So sánh thủy phân H2SO4 HCl • Tìm điều kiện thủy phân phù hợp Chiết lỏng – lỏng • So sánh khả chiết dung môi khác • Tìm dung môi chiết phù hợp 2.Lọc a, Vai trò lọc • Loại bỏ hợp chất không phân cực phân cực physion, chysophanol, emodin… mảnh vụn dược liệu khỏi dịch chiết ethanol 95% => tiến hành lọc so sánh hai phương pháp lọc khác - PP 1: lọc trực tiếp - PP 2: Lọc gián tiếp • Dịch chiết P.cuspidatum: • Dịch chiết ethanol 95%: 1.cô đặc áp suất thấp (loại bỏ 1.Làm thành bột mịn kích thước ethanol) 2.pha loãng/nước => lọc •Nhược điểm: Không loại bỏ hoàn toàn hợp chất không/ít phân cực dạng đơn phân tử dịch lọc Tiến hành thủy phân dung dịch HCl 0,1 M để thu resveratrol •Tiến hành thủy phân điều kiện là: • H2SO4 pH= 1, • Nhược điểm: resveratrol polydatin bị oxy hóa nên không thu resveratrol • HCl, pH= • Cả resveratrol polydatin không bị oxy hóa mà xảy phản ứng thủy phân •Kết thực nghiệm: Sau 8h polydatin bị thủy phân hoàn toàn •Kết chạy sắc kí: Hình 3D sắc kí đồ dịch chiết thủy phân Chiết xuất lỏng- lỏng a, Lựa chọn dung môi chiết • Sự có mặt thành phần pha chịu ảnh hưởng Rf, To tỉ lệ V pha => lựa chọn đóng vai trò vô quan trọng •Tiến hành thử dung môi kết thu hồi resveratrol thu bảng sau: • Mỗi dung môi tiến hành làm lần lấy kết trung bình • Dung môi methyl tert- butyl ether cho hiệu suất chiết cao Vì lựa chọn methyl tert- butyl ether làm dung môi chiết b, Sắc kí đồ sau chiết Hình 5:Sắc kí đồ mẫu sau chiết lỏng – lỏng Hình A: sắc kí đồ pha hữu Hình B: Sắc kí đồ pha nước lỏng – lỏng: •5 Tẩy rửa Hình : Ảnh hưởng pH đến hiệu xuất chiết Resveratrol Resveratrol acid yếu: vùng pH định tồn dạng phân tử không phân cực Khi rửa giải với dung dịch có:  pH10 tồn dạng ion chuyển hoàn toàn sang pha nước Như điều kiện khảo sát để chiết xuất resveratrol 8[...]... lọc Khắc phục được nhược điểm của phương pháp 1 b, Hiệu quả của tỷ lệ dịch chiết : nước trong chiết xuất Resveratrol •Tỉ lệ dịch chiết: nước (khối lượng/thể tích, g/ml) là yếu tố quan trọng trong chiết xuất resveratrol Hình 4: Ảnh hưởng của tỷ lệ dịch chiết và nước trong chiết xuất resveratrol  Resveratrol là 1 polyphenol, thủy phân từ polydatin cho hiệu quả chiết xuất tăng lên đáng kể => Tiến hành... >10 nó tồn tại dạng ion và được chuyển hoàn toàn sang pha nước Như vậy điều kiện được khảo sát để chiết xuất resveratrol là 8 ... Phương pháp đơn giản để chiết xuất tinh chế Resveratrol từ Polygonum cuspidatum I,Đặt vấn đề 1.Mục tiêu nghiên cứu: Tìm phương pháp đơn giản để chiết xuất tinh chế Resveratrol từ Polygonum cuspidatum. .. dựng phương pháp đơn giản để chiết xuất tinh chế resveratrol, cải thiện nhược điểm nâng cao suất chiết Resveratrol từ P cuspidatum II, Phương pháp tiến hành, 1,Quy trình chiết xuất Resveratrol từ. .. dịch chiết : nước chiết xuất Resveratrol •Tỉ lệ dịch chiết: nước (khối lượng/thể tích, g/ml) yếu tố quan trọng chiết xuất resveratrol Hình 4: Ảnh hưởng tỷ lệ dịch chiết nước chiết xuất resveratrol