Vấn đề kết hợp y học cổ truyền với y học hiện đại và hiện đại hóa y học cổ truyền là xu hướng chung của thời đại. Theo cách đánh giá của WHO, Việt Nam là nước không chỉ là nước có bề dày truyền thống phát triển y học cổ truyền từ hàng nghìn năm nay, mà thực sự là nước có tiềm năng về y học cổ truyền và đã đạt được nhưng thành công ban đầu trong vấn đề kết hợp y học cổ truyền với y học hiện đại. Những thành tựu đó đã góp phần tích cực trong việc giảm nhẹ chi phí y tế, nâng cao hiệu quả điều trị đối với một số bệnh mạn tính. Y học cổ truyền cần được hiện đại hóa để không có nguy cơ trở thành một thứ đồ cổ trong chiều sâu của thời gian, mà sẽ là một khoa học để phục vụ cho yêu cầu của xã hội hiện đại. Hiện đại hóa là cách dùng kiến thức, công cụ và các phương pháp nghiên cứu khoa học kỹ thuật hiện đại để hiểu và chứng minh cơ sở khoa học của nguyên lý, lý thuyết và phương pháp chữa bệnh của y học cổ truyền, của các bài thuốc và đặc biệt là các chất có tác dụng dược lý có trong cây thuốc. Tuy nhiên, hiện nay các nguyên liệu dược liệu đang bị làm giả, làm nhái rất nhiều và nhiều chế phẩm từ dược liệu còn kém chất lượng .Điều này có thể ảnh hưởng rất nghiêm trọng đến sức khỏe của người sử dụng, cũng như gây mất lòng tin của mọi người khi sử dụng các chế phẩm và cây cỏ từ dược liệu. Vì vậy việc xây dựng một tiêu chuẩn chất lượng cho dược liệu là vấn đề hết sức cần thiết. Trong phạm vi bài báo cáo này xin đề cập đến việc xây dựng tiêu chuẩn dược liệu Trinh nữ hoàng cung, một trong những cây được sử dụng trong dân gian để điều trị u xơ tiền liệt tuyến và u xơ tử cung, ngoài ra còn điều trị ung thư như tử cung, dạ dày, phổi, tuyến tiền liệt.
Trang 1MỤC LỤC
MỤC LỤC 1
1 ĐẶT VẤN ĐỀ 2
2.TỔNG QUAN 3
2.1 Tổng quan về thực vật học 3
2.1.1 Mô tả 3
2.1.2 Bộ phận dùng 4
2.1.3 Phân bố sinh thái 4
2.1.4 Cách trồng 5
2.1.5 Thu hái và chế biến 5
2.1.6 Sự nhầm lẫn với một số cây khác 5
2.2 Thành phần hóa học chính 8
2.3 Tác dụng dược lý 8
2.4 Công dụng 9
2.5 Tiêu chuẩn chất lượng và phương pháp thử 9
2.5.1 Vi phẩu lá, rễ 10
2.5.2 Khảo sát bột dược liệu 10
2.5.3 Phân tích sơ bộ thành phần hóa thực vật 10
2.5.4 Phân tích định tính và xác định hợp chất Alkaloid 11
3 KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 12
3.1 Đặc điểm vi phẩu và soi bột 12
3.2 Phân tích sơ bộ thành phần hóa thực vật 16
3.3 Định tính Alkaloid toàn phần 17
4 XÂY DỰNG TIÊU CHUẨN DƯỢC LIỆU 18
4.1 Mô tả 18
4.2 Đặc điểm vi học và soi bột 19
4.3 Thành phần hóa thực vật 19
4.4 Các chỉ số khác 20
5 THÔNG TIN VỀ HIỆU QUẢ SỬ DỤNG TNHC CHỮA BỆNH 21
6 KẾT LUẬN 23
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Trang 2Những thành tựu đó đã góp phần tích cực trong việc giảm nhẹ chi phí y tế,nâng cao hiệu quả điều trị đối với một số bệnh mạn tính.
Y học cổ truyền cần được hiện đại hóa để không có nguy cơ trở thành một thứ
đồ cổ trong chiều sâu của thời gian, mà sẽ là một khoa học để phục vụ choyêu cầu của xã hội hiện đại
Hiện đại hóa là cách dùng kiến thức, công cụ và các phương pháp nghiên cứukhoa học - kỹ thuật hiện đại để hiểu và chứng minh cơ sở khoa học củanguyên lý, lý thuyết và phương pháp chữa bệnh của y học cổ truyền, của cácbài thuốc và đặc biệt là các chất có tác dụng dược lý có trong cây thuốc
Tuy nhiên, hiện nay các nguyên liệu dược liệu đang bị làm giả, làm nhái rấtnhiều và nhiều chế phẩm từ dược liệu còn kém chất lượng Điều này có thểảnh hưởng rất nghiêm trọng đến sức khỏe của người sử dụng, cũng như gâymất lòng tin của mọi người khi sử dụng các chế phẩm và cây cỏ từ dược liệu
Vì vậy việc xây dựng một tiêu chuẩn chất lượng cho dược liệu là vấn đề hếtsức cần thiết
Trong phạm vi bài báo cáo này xin đề cập đến việc xây dựng tiêu chuẩndược liệu Trinh nữ hoàng cung, một trong những cây được sử dụng trongdân gian để điều trị u xơ tiền liệt tuyến và u xơ tử cung, ngoài ra còn điều trịung thư như tử cung, dạ dày, phổi, tuyến tiền liệt
Trang 32 TỔNG QUAN
2.1 TỔNG QUAN THỰC VẬT HỌC
Tên khoa học: Crinum latifolium
Họ: Thuỷ Tiên Amaryllidaceace
Tên khác: Tỏi lơi lá rộng,Vạn châu lan, thập bát học sĩ, tỏi thái lan
2.1.1 Mô tả:
Trinh nữ hoàng cung là loại cỏ, thân hành như củ hành tây to, đường kính
10-15 cm Các bẹ là úp vào nhau thành một thân giả dài khoảng 10-10-15 cm, là mọc từthân hành, hình dãi mũi giác, có nhiều là mỏng kéo dài từ 80-100cm, rộng 5-8cm, haibên mép lá lượn sóng Gân lá song song, mặt trên lá lỡm thành rãnh, mặt dưới lá cómột sống lá nổi rất rõ, đầu bẹ lá nơi sát đất có màu đỏ tím
Hoa mọc thành tán gồm 6-18 hoa, trên một cán hoa dài 30-60cm Cánh hoamàu trắng pha hồng, dài 10-15cm, bao gồm 6 phiến bằng nhau, hàn liền 1/3 thànhống hẹp, khi nở đầu phiến quăn lại, nhị 6, bầu hạ; lá bắc rộng, hình thìa dài 7cm, màulục, đầu nhọn Từ thân hành mọc rất nhiều củ con có thể tách ra để trồng riêng dễdàng
Mùa hoa quả : tháng 8-9
Mép lá: Đặc trưng với hai bên mép là hình lượn sóng
Trang 42.1.2 Bộ phận dùng : lá, thân hành
2.1.3 Phân bố và sinh thái
Chi Crinum L có khoảng 100 loài, phân bố chủ yếu ở vùng nhiệt đới Trong
đó, một số loài được trồng làm cảnh và làm thuốc tương đối phổ biến
Cây trinh nữ hoàng cung có nguồn gốc từ Ấn Độ, hiện được trồng rộng rãi ởnhiều nước trong khu vực Đông Nam Á như Thái Lan, Malaysia, Philippin,Campuchia, Lào, Việt nam, Ấn Độ và cả phía nam Trung Quốc Ở Việt Nam, câyđược trồng chủ yếu từ các tỉnh từ Quảng Nam – Đà Nẵng trở vào, sau được trồng ởcác tỉnh phía bắc
Trinh nữ hoàng cung là cây ưa ẩm, ưa sáng hoặc có thể chịu bóng tối mộtphần, sinh trưởng và phát triển tốt trong điều kiện khí hậu nóng và ẩm của vùng nhiệtđới, với nhiệt độ trung bình tưd 22 đến 27oC, lượng mưa trên 1500mm/năm Trinh nữhoàng cung sinh trưởng mạnh trong mùa xuân hè, mỗi năm 1 cây có thể sinh ra 6-8
lá mới Cây trồng ở các tỉnh phía bắc có hiện tượng hơi tàn lụi vào mùa đông Cây cókhả năng đẻ nhánh khỏe, hàng năm có thể có thêm 3-5 hành con từ thân hành mẹ.Cây trồng được 3 năm sẽ tạo thành một khóm lớn, có đến 20 nhánh ở các tuổi khácnhau
Trinh nữ hoàng cung ra hoa hằng năm, nhưng không đậu quả ở Việt Nam.Trong khi đó, ở Thái Lan, Ấn Độ …, có thể thu được hạt giống để nhân trồng
2.1.4 Cách trồng
Trinh nữ hoàng cung đang được trồng ở nhiều nơi, từ miền bắc tới miền nam
Do tác dụng chữa trị bệnh của TNHC, nhiều nhà khoa học đã quan tâmnghiên cứu trồng đại trà
Cây được nhân giống bằng thân hành (giò, tựa như củ khoai bông) vào mùa xuân(tháng 2,3) ở miền Bắc và vào đầu mùa mưa ở miền Nam Chọn thân hành bánh tẻchưa ra hoa, không sâu bệnh để làm giống Năm đầu, cây hầu như không đẻ nhánh
Từ năm thứ hai trở đi, cây mới bắt đầu đẻ nhánh Vì vậy, tốc độ nhân giống kháchậm, nhất là khi cần nhân một dòng đã chọn lọc Hiện nay, đã có phương pháp nhândòng vô tính khá nhanh bằng kỹ thuật nuôi cấy in vitro
Trinh nữ hoàng cung hơi ưa bóng râm, ưa ẩm (luôn luôn là 60-70 %) Chọnloại đất thịt nhẹ hoặc trung bình, có khả năng giữ ẩm Đất cần cày bừa kỹ, bón lótcho mỗi hecta 25-30 tấn phân chuồng, 500kg supe lân, 300kg sulfat kali Khi trồngcần cắt bỏ rễ, cắt bớt lá, vùi sâu vừa hết phần thân hành
Thường xuyên làm cỏ, xới, vun kín thân hành, tưới đủ ẩm.Cây có thể chịungập úng trong vài ngày
Sau khi trồng 30-45 ngày, bắt đầu bón thúc lần đầu, mỗi hecta bón 50kg urêpha loãng với nước, tưới xung quanh gốc Đến tháng 6-7, đã có thể thu hoạch lá Saumỗi lần thu hoạch lá (khoảng 20-30 ngày), lại bón thúc như trên Chỉ thu những lábánh tẻ, thu đến khi cây ngừng sinh trưởng (vào mùa đông, nhất là ở miền bắc).Trồng một lần có thể thu hoạch trong nhiều năm hằng năm khi cây chuẩn bị sinhtrưởng trở lại, cần bón thúc thêm phân, lượng phân các loại bằng ½ lượng phân bónlót để duy trì độ phì và độ tơi xốp của đất
Trinh nữ hoang cung bị một loài sâu hại đặc biệt rất nghiêm trọng, đó làBrithys crini Fabricius thuộc họ Noctuidae, bộ Lepidoptera Sâu xuất hiện vào đầutháng 2, gây hại tất cả các bộ phận
Trang 5Cây TNHC cho năng suất thấp và không được bón đạm hoá học làm giảmdược tính và làm cho TNHC nhiễm sâu bệnh Trồng đại trà thì dùng thuốc đặc trị khi
bị nặng; trồng một vài cây có thể cắt hết lá vứt đi xa, từ thân củ TNHC thường dễdàng phát triển trở lại
Nhân giống bằng nuôi cấy mô đã được nghiên cứu để cung cấp nhánh câycon
2.1.5 Thu hái và chế biến
Để làm thuốc, thu hái toàn cây quanh năm, dùng tươi hay phơi khô
Khi dùng, ta chỉ hái những lá hơi già dài khoảng 50 phân vào buổi chiều tối
Lá hái được đem phơi trong chỗ mát cho đến khô Khi khô bỏ túi nilon bọc cất kín.Khi uống, ta lấy ra ngắt từng đoạn cho vừa đủ một nắm tay, đun rang vàng hạ thổ,rồi bỏ vào ấm đất sắc 2 lần vào khoảng giữa buổi sáng và buổi tối, sau bữa ăn 30phút Thuốc uống không đắng, không đau đầu buồn nôn Uống xong nên nằm nghỉmột chốc
Cách uống: Người bệnh uống một đợt 21 ngày Uống liên tục 7 ngày, nghỉ 2
ngày, rồi uống tiếp tuần 2, tuần 3 Người bệnh nặng uống 2,3 đợt, mỗi đợt cách nhau
7 giây.Nếu uống lá tươi thì mỗi ngày uống 3 lá, ngắt đoạn rang vàng hạ thổ bỏ vào
ấm đất sắc uống như thuốc bắc
Chú ý: Quá trình thu hái, chế biến lá TNHC, không dùng đồ sắt…
2.1.6 Sự nhầm lẫn với một số cây khác.
Về tên gọi thì dễ nhầm với cây trinh nữ (cây xấu hổ)
Về hình dáng, trinh nữ hoàng cung có hình dáng bên ngoài rất giống với câynáng hoa trắng, cây huệ biển Thậm chí, trinh nữ hoàng cung còn có hình dáng bênngoài rất giống với một loại cây có tác dụng làm giảm khả năng sinh sản Sự nhầmlẫn nhiều khi rất tai hại, nó không những không giúp cho điều trị mà có thể ảnhhưởng xấu đến sức khỏe
Phân biệt với một số cây khác để tránh nhầm lẫn gây ngộ độc Hiện nay trongnhân dân có nhiều người nhầm lẫn cây trinh nữ hoàng cung với một số cây nángkhác, sử dụng lá đun sôi lấy nước uống bị ngộ độc, nôn ói Do đó phải phân biệt rõcây trinh nữ hoàng cung với các cây náng khác có tại Việt Nam
Ngay trong chi Crinum chỉ có Crinum latifolium L có tác dụng trị u xơ theo
kinh nghiệm dân gian
Một đặc điểm của lá TNHC khác với các cây náng hoa trắng và náng hoa đỏ
là mép lá soăn hình lượn sóng, trong khi 2 cây cùng họ cao hơn, lá to và dài hơn.Hoa gồm 1 cán dài 40 – 60 cm, to cỡ ngón tay cái, hoa tựa như hoa loa kèn to, cómàu trắng và màu hồng phấn từ cuống hoa trở lên độ ¼ hoa rất đẹp, nhưng nhiều khicuống không mang nổi hoa mà bị đổ, nhất là trồng ở đất tốt, không đủ nắng TNHCcũng như các cây thuộc họ thuỷ tiên có hoa thơm, náng hoa trắng có hoa thơm hơn
Trang 6Đặc điểm Trinh nữ hoàng cung Náng hoa trắng
Hình thái - Thân hành như củ hành tây
- Lá mỏng hơn, màu xanh nhạt hơn-Mặt dưới sóng có một gờ sắc chạydọc
- Đối xứng qua sóng lá
- Tinh thể calci oxalat hình kim
Để có thể phân biệt cây trinh nữ hoàng cung với cây lan huệ cùng chi Crinum, phải
dựa trên sự khác nhau về hình thái thực vật
Sự khác nhau về hình thái giữa hai cây này trình bày trong bảng sau:
- Hoa ít thơm
- Cánh noa mảnh, rộng, màu phớt hồng
- Nụ hoa chưa nở phồng to, ngắn
- Số hoa thường là 6 trên một tán hoa, có
khi là 9, 10, 12
- Chỉ nhụy hoa màu trắng
- Cuống hoa tròn, đế tán hoa hơi cong,
dài khoảng 7 cm, đế hao và cuống hoa
màu xanh
-Khi hoa nở hết, các cánh hoa vẫn xếp
xát nhau giữ hình ống
- Lá có màu xanh nhạt hơi vàng
- Thân thường ngắn, có màu đỏ tía
- Hoa rất thơm-Cánh hoa hẹp, màu trắng xanh
- Nụ hoa lúc chưa nở thon dài hơn
- Trên một tán hoa thường có 12 hoa
-Chỉ nhụy hoa màu đỏ tía
- Cuống hoa dài hơn trinh nữ hoàng cung(10-12 cm), đế hoa và cuống hoa màu đỏtía
- Khi hoa nở hết, các cánh hoa tách rơinhau ra, uốn cong xuống
- Lá có màu xanh đậm hơn, lá dầy hơn látrinh nữ hoàng cung
- Thân cao hơn, thường có màu xanh,đôi khi cũng có màu đỏ tía
Trang 7Hình một số cây có thể nhầm lẫn với Trinh Nữ Hoàng Cung
Crinum ensifoliumCrinum moorei
Trang 82.2 Thành phần hóa học chính
Trinh nữ hoàng cung được nghiên cứu về mặt hóa học từ những năm 1980.Hoạt chất chính gồm có các alkaloid không dị vòng như latisolin và nhiều alkaloid dịvòng từ các tác giả ngoại quốc như Shibnath Glosal năm 1983, 1985, 1986, 1988,1989; Jeffs Peter W 1985; Kobayashi Shigeru 1984 Ngoài ra, rễ và thân rễ cũngchứa 2 glucan A và B Glucan A gồm 12 đơn vị glucose, còn Glucan B có khoảng
110 gốc của glucose ( theo Tomada Mashashi và cộng sự, 1985)
Ở Việt Nam, theo Nguyễn Hoàng và cộng sự năm 1997, cây này có 11 alkaloid vànhiều acid amin và acid hữu cơ Trần văn Sung và cộng sự năm 1997 đã phân lậpđược từ thân cây này 5 alkaloid, trong đó 2 chất L lycorin và pratorin được nhậndạng bằng quang phổ khối luợng và phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton carbon 13
Võ Thị Bạch Huệ và cộng sự năm 1988 đã phân lập được từ lá 2 alkaloid làcrimanidin, 6-hydroxycrinamidin được nhận dạng bằng các phân tích hóa học vàquang phổ
2.3 Tác dụng dược lý
Cao methanol của rễ, thân va cao chiết alkaloid toàn phần của trinh nữ hoàngcung đều có tác dụng ức chế sự phân bào, kiềm hãm sự tăng trưởng của rễ hành ta;hoạt tính của trinh nữ hoàng cung bằng hoặc hơn 50% so với hoạt tính của colchicin
ở cùng nồng độ
Trong công trình nghiên cứu khả năng tăng cường sự sinh sản in vitro của tếbào lympho T khi sử dụng cao chiết nóng từ trinh nữ hoàng cung (1-8 mg/ml), đãdùng bạch cầu đơn nhân to lấy từ máu ngoại vi của người cho máu khỏe mạnh, nuôicấy trong môi trường chứa cao chiết theo tỷ lệ 1:3 Cao chiết bằng nước nóng củadược liệu nầy có tác dụng kích thích sự sinh sản của tế bào lympho T và đặc biệt cótác dụng kích thích trực tiếp các tế bào CD4 Còn trong thử nghiệm in vitro trênchuột, cho chuột nhắt trắng uống cao chiết nóng của trinh nữ hoàng cung cũng chothấy có tác dụng kích thích sự phát triển của tế bào lympho T và hoạt hóa mạnh tếbào lympho trong máu ngoại vi của chuột thử nghiệm Sự tăng sinh tế bào lympho T
có tầm quan trọng đặc biệt trong miễn dịch học ung thư
Một số alkaloid trong cây trinh nữ hoàng cung có hoạt tính sinh học Lycorin
ức chế sự tổng hợp protein và DNA của tế bào chuột và ức chế sự phát triển của ubáng cấy ở chuột Trong thử nghiệm invitro, lycorin làm giảm khả năng sống của tếbào u Lycorin làm ức chế sự tổng hợp vitamin C trong cây cỏ, làm ngừng sự pháttriển của virus gây bệnh bại liệt, ức chế sự tổng hợp các tiền chất cần cho sự sinhtrưởng của virus gây bệnh bại liệt và enzyme polypeptidase Lycorin có độc tính cấptính thấp
Lycorin- O- glycosid ở mức liều microgam kích thích tế bào lympho láchchuột nhắt trắng, có tác dụng điều hòa miễn dịch Pseudolycorin có tác dụng làmngưng sự phát triển của tế bào Hela, ngăn cản sự tổng hợp protein trong tế bào ubáng và làm chậm tổng hợp DNA Hipparin ức chế một cách hồi phục sự thụ tinh củachuột cống đực
Trong bài nghiên cứu về tác dụng hồi phục tổn thương tế bào lympho T vàdòng tủy của viên nang Crila- dịch chiết alkaloid toàn phần của lá cây tring nữ hoàngcung – Tác giả Nguyễn Thị Ngọc Trâm và cộng sự đã nghiên cứu trên chuột bị chiếutia gama thực nghiệm có tác dụng sau đây : hồi phục, tăng sinh tế bào dòng lympho
cả số lượng dòng T, NK và tăng chức năng chế tiết IL2, TNF ; có khả năng hồi
Trang 9phục bậc cầu trung tính và bạc cầu ưa acid của dòng tủy về trị số sinh học.
2.4 Công dụng
Theo kinh nghiệm dân gian và của các thầy Đông y, TNHC có tác dụng thônghuyết, tán ứ, tiều viêm thũng, giảm đau, giải độc, thanh nhiệt, làm tan u xơ Lá củaTNHC có vị cay, tính mát, ít độc, đối với một số bệnh, như sưng tấy ung bướu,kháng ung thư, trị nhọt lở độc, đòn ngã, viêm tuyến sữa, bong gân, đau khớp xương,đau đầu Có tài liệu cho rằng náng hoa trắng trị bệnh mạnh hơn TNHC, nhưng khôngnên dùng trong hay uống vì có độc, gây ói mửa và chóng mặt nhưng trị ngoài thì hiệunghiệm như hơ nóng bóp cổ chân sai khớp, bong gân cổ chân Các dạng u xơ tuyếntiền liệt, u xơ bướu cổ, u xơ tử cung, u xơ vú, viêm họng, viêm loét dạ dày, phongthấp, mụn nhọt… nhiều trường hợp dùng lá TNHC khỏi bệnh Gặp bạo bệnh cần cólời khuyên của thầy thuốc
Cách dùng chữa bệnh theo kinh nghiệm:
Dùng lá tươi được cho lá tốt hơn Lấy 3 lá tươi TNHC dài khoảng 4-5 tấc, rửasạch, thái nhỏ Sắc với 2 bát (chén) nước, còn lại ½ bát Chia làm 3 lần uống sau khi
ăn no
Chữa bằng lá khô, chú ý khi thu hoạch rửa sạch, chần qua nước sôi rồi lấy rangay, lá mau khô hơn, chất lượng thuốc tốt hơn Mỗi ngày dùng 20 g Cách sắc vàuống như trên
Dùng lá tươi hay khô phải là lá lấy từ cây không bón thuốc hoá học, cách sắc
và uống như trên
Chú ý uống sau khi ăn no, phụ nữ có thai không được dùng, vì sẽ bị sẩy thai.Thời gian điều trị, theo kinh nghiệm y học cổ truyền: cần uống liên tục, khôngngắt quảng, không nghỉ giữa chừng, nữ uống 49 ngày, nam uống 64 ngày
Đối với bệnh nhân nam, đề phòng thuốc làm yếu sinh lý, cần thêm cành láđinh lăng lá nhỏ tươi 50 g, khô 20g, sắc chung với lá TNHC, nước đỗ ngập dượcliệu Sắc còn nữa bát (chén ăn cơm), chia làm 3 lần uống trong ngày
2.5 Tiêu chuẩn chất lượng và phương pháp thử
Để kiểm nghiệm một dược liệu là đúng hay sai hay để xây dựng tiêu chuẩncho một dược liệu mới thì không phải dựa vào mô tả là đủ, mà cần phải dựa vào đặcđiểm vi học, các hằng số vật lý, định tính, thử tinh khiết, định lượng và một số nộidung khác
Cấu tạo giải phẩu của các cơ quan thực vật là một đặc điểm quan trọng trongkiểm nghiệm dược liệu Trong phần lớn các trường hợp, hình dạng và cấu trúc củavách tế bào có ý nghĩa quan trọng nhất trong khảo sát vi học Vì vậy, khi quan sátcác mẫu người ta thường loại bỏ tế bào chất, nhuộm màu màng tế bào để việc quansát dể dàng hơn
Trang 10Tiêu bản vi phẩu của trinh nữ hoàng cung được thực hiện qua các giai đoạnsau:
2.5.1 Vi phẩu lá, rễ
Chọn mẫu: dùng mẫu tươi
Cắt vi phẩu: Cắt xuyên tâm bằng tay với lưỡi lam Chọn lát cắt thật mỏng đểnhuộm
Nhuộm vi phẩu tiến hành tuần tự như sau:
-Ngâm lát cắt vào dung dịch Javel từ 15-30 phút, rửa bằng nước cấtnhiều lần
-Ngâm lát cắt vào dung dịch acid acetic 1%-3% trong 2 phút để tẩyJavel còn sót lại Rửa bằng nước cất
-Ngâm tiếp lát cắt vào dung dịch cloral hydrat (nếu thấy lát cắt chưathật trắng và trong) khoảng 10-15 phút nữa Rửa lại bằng nước cất
-Ngâm vào dung dịch lục iod từ 5-10 giây Rửa lại bằng nước cất.-Ngâm tiếp vào dung dịch son phèn khoảng 15-30 phút Rửa lại bằngnước cất đến khi dung dịch rửa hết màu
Vi phẩu chuẩn bị xong soi bằng nước
2.5.2 Khảo sát bột dược liệu
Mỗi dược liệu đều có những đặc điểm mô học đặc trưng, chúng được thể hiệnmột phần qua bột dược liệu Những đặc điểm này có thể có thể dùng để phân biệtdược liệu này với dược liệu khác, để xây dựng tiêu chuẩn kiểm nghiệm
Khảo sát bột dược liệu bằng kính hiển vi để tìm ra những đặc điểm vi học đặctrưng của bột dược liệu, giúp cho việc định danh, xác định độ tinh khiết, phân biệtdược liệu này với dược liệu dễ bị nhầm lẫn và phát hiện giả mạo nếu có
Bột lá dược liệu trinh nữ hoàng cung : bột màu nâu, mùi hắc
Phương pháp thử
Nhỏ 1-2 giọt chất lỏng để soi (thường là nước) nhỏ lên lame Lấy một lượng bộtdược liệu khoảng bằng đầu tăm cho vào giọt nước đó, khuấy kỹ Đậy lamelle lên trênlame, dùng ngón tay di nhẹ trên lame cho bột phân tán đều Dùng giấy lọc thấmnhanh nước thừa ở mép lamelle
2.5.3 Phân tích sơ bộ thành phần hóa thực vật
Thành phần hóa học của một dược liệu là rất phức tạp và thường không thểbiết được một các tường tận Vì thế, thông thường việc nghiên cứu thành phần hóahọc của dược liệu thường bắt đầu bằng việc xác định các nhóm hợp chất thường gặptrong thực vật bằng phản ứng hóa học
Trong phân tích thành phần hóa thực vật, người ta thường sử dụng các phảnứng hóa học đặc trưng cho một nhóm hợp chất để xác định sự có mặt của hợp chấtnầy trong nguyên liệu thực vật Việc phân tích này được tiến hành theo 2 bước:
Phân tích sơ bộ:
Các chất trong nguyên liệu thực vật được phân thành một vài phân đoạn đơn giảnbằng cách sử dụng các qui trình chiết đơn giản, trong những điều kiện nhất định( dung môi, pH môi trường,.v.v…) Định tính nhanh các hợp chất trong các phânđoạn bằng thuốc thử chung
Trang 11Dùng các phản ứng hóa học đặc trưng (thường là các phản ứng kết tủa, phảnứng màu) để phát hiện nhóm hợp chất có trong dịch chiết.
Yêu cầu chung của các phản ứng hay thuốc thử sử dụng trong định tính mộtnhóm hợp chất là chúng phải đặc hiệu, nhạy và dễ phát hiện Chúng cũng phải khônghay ít bị ảnh hưởng bởi sự có mặt của các hợp chất khác có trong phản ứng
Chiết tách hỗn hợp các chất có trong nguyên liệu thực vật thành 3 phân đoạnlần lượt với các dung môi ether ethylic, ethanol và nước
Sơ đồ chiết:
2.5.4 Phân tích định tính và xác định hợp chất Alkaloid
Hợp chất quan trọng trong Trinh Nữ Hoàng Cung là Alkaloid
Theo tài liệu đã nghiên cứu chiết Alkaloid bằng phương pháp chiết nước sôi
và chiết bằng Soxhlet
Chiết bằng nước sôi: Mẫu dược liệu 5g ngâm với 50ml ethanol 50o, ngâmtrong 1h, chiết 30 phút ở 90oC, lọc qua màng xốp 0.45µm Phần nước lọc ra được thulấy và bã còn lại được chiết 3 lần nữa với 50 ml ethanol 50o
Sơ đồ chiết bằng nước sôi:
Chiết bằng Soxhlet:
Lấy 5g bột lá được chiết bằng Et2O Soxhlet (ở 90oC) với HCl/cồn 50oC đến hếtmàu Để khô tơi và làm ẩm bột NH4OH đậm đặc qua đêm Sau đó chiết bằng CHCl3cho đến khi dịch chiết âm tính với thuốc thử chung alkaloid ( Bouchardat,Dragendoff, Valse Mayer,….) Dịch CHCl3 được cô đến cắn sệt
Trang 12Hình 3.1 Cấu tạo vi phẫu lá Trinh nữ hoàng cung
Hình 3.2 Mép lá với 2 lớp tế bào