khảo sát khả năng kháng oxy hóa của cao methanol rễ cây ô rô (acanthus ilicifolius) in vivo trên chuột tổn thương gan

TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN TRƢƠNG THỊ THANH TRÚC KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG OXY HÓA CỦA CAO METHANOL RỄ CÂY Ô RÔ (Acanthus ilicifolius) IN VIVO TRÊN CHUỘT TỔN THƢƠNG GAN LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành Sinh học Mã số ngành: 524201 05-2015 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành luận văn này, xin chân thành gửi lời cảm ơn đến: Cô Ts Đái Thị Xuân Trang tận tình hƣớng dẫn, truyền đạt kiến thức quý báo, chỉnh sửa luận văn, hƣớng dẫn cách xử lý số liệu, quan tâm động viên suốt trình thực luận văn Quý thầy cô Bộ môn Sinh, Bộ môn Hóa – Khoa Khoa học tự nhiên trƣờng Đại học Cần Thơ tạo điều kiện để hoàn thành luận văn Anh Quách Hải Đăng Khôi - lớp Sinh học K36 tập thể lớp sinh học k37 đồng hành giúp đỡ suốt thời gian học tập thực luận văn Tôi xin gửi lời tri ân chân thành sâu sắc đến gia đình, ngƣời thân bạn động viên tạo điều kiện cho suốt trình học tập nghiên cứu Cần Thơ, ngày 20 tháng 04 năm 2015 Trƣơng Thị Thanh Trúc i LỜI CAM KẾT Tôi xin cam kết luận văn dựa kết nghiên cứu dƣới hƣớng dẫn Cô Đái Thị Xuân Trang Các số liệu kết có đƣợc luận văn hoàn toàn trung thực chƣa đƣợc công bố luận văn trƣớc Cán hƣớng dẫn Sinh viên thực Đái Thị Xuân Trang Trƣơng Thị Thanh Trúc ii MỤC LỤC LỞI CẢM TẠ i LỜI CAM KẾT ii MỤC LỤC iii DANH SÁCH HÌNH v DANH SÁCH BẢNG vi DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT vii CHƢƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Lý chọn đề tài 1.2 Mục tiêu đề tài CHƢƠNG LƢỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan Ô rô 2.1.1 Khóa phân loại 2.1.2 Đặc điểm phân loại 2.1.3 Phân bố sinh thái 2.1.4 Thành phần hóa học công dụng 2.1.5 Các nghiên cứu nƣớc Ô Rô 2.2 Tổng quan stress oxy hóa gốc tự 2.2.1 Stress oxy hóa 2.2.2 Khái niệm chống oxy hóa 2.2.3 Các chất kháng oxy hóa phổ biế n 2.4 Các bệnh liên quan đến stress oxy hóa 10 2.3.1 Bê ̣nh lão hóa 11 2.3.2 Bê ̣nh Alzheimer 11 2.3.3 Bê ̣nh ung thƣ 11 2.3.4 Bê ̣nh đái tháo đƣờng 12 2.3.5 Bê ̣nh cao huyết áp 13 2.4 Tổng quan gan bệnh lý gan stress oxy hóa 13 2.4.1 Cấu trúc gan loại tế bào có gan 13 2.4.2 Chức gan 14 2.4.3 Bệnh lý gan stress oxy hóa 15 2.4.3.1 Tổ n thƣơng gan thiế u máu cu ̣c bô ̣ 15 2.4.3.2 Gố c tƣ̣ và bê ̣nh gan nhiễm mỡ không rƣơ ̣u 15 2.4.3.3 Gố c tƣ̣ và bê ̣nh xơ hóa gan 16 CHƢƠNG PHƢƠNG TIỆN VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.1 Vật liệu 17 3.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 17 3.2.1 Khảo sát khả kháng oxy hóa tổng số cao chiết methanol rễ Ô rô in vivo chuột (Total Antioxidant Status (TAS) assay) 18 3.2.2 Khảo sát khả kháng oxy hóa cao chiết methanol rễ Ô rô gan chuột bằ ng phƣơng pháp DPPH 18 3.3 Thống kê phân tích số liệu 18 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN iii 4.1 Khả kháng oxy hóa tổng số (TAS assay) cao chiế t methanol gan chuột bị tổn thƣơng 19 4.1.1 Khảo sát khả kháng oxy hóa tổng số (TAS assay) vitamin C theo nồng độ 19 4.1.2 Khả kháng oxy hóa tổng số in vivo bằ ng phuong pháp TAS gan chuột bị tổn thƣơng điều trị sau tuầ n 21 4.1.3 Khả kháng oxy hóa tổng số in vivo bằ ng phuong pháp TAS gan chuột bị tổn thƣơng điều trị sau tuầ n 23 4.2 Khả kháng oxy hóa cao chiết methanol gan chuột bị tổn thƣơng bằng phƣơng pháp DPPH 25 4.2.1 Khảo sát khả kháng oxy hóa vitamin C theo nồng độ bằng phƣơng pháp DPPH 25 4.2.2 Khảo sát khả kháng oxy hóa cao chiết methanol rễ Ô rô nồng độ 45 mg/kg gan chuột tuần bằng phƣơng pháp DPPH 25 4.2.3 Khảo sát khả kháng oxy hóa cao chiết methanol rễ Ô rô nồng độ 45 mg/kg gan chuột tuần bằng phƣơng pháp DPPH 27 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO 30 PHỤ LỤC A 35 PHỤ LUC B 39 iv DANH SÁCH HÌNH Hình 2.1 Cây Ô rô (Acanthus ilicifolius L.) Hình 2.2 Cơ chế hoạt động chất chống oxy hóa Hình 2.3 Cấu trúc vitamin C phản ứng oxy hóa Hình 2.4 Cấu trúc vitamin E phản ứng oxy hóa Hình 2.5 Cấ u trúc gan Hình 4.1 Đƣờng chuẩn khả kháng oxy hóa vitamin C Hình 4.2 Hàm lƣợng chất kháng oxy hóa tính tƣơng đƣơng vitamin C gan chuột sau tuần (mg/ml) Hình 4.3 Hiệu kháng oxy hóa nghiệm thức sau tuần (%) Hình 4.4 Hàm lƣợng chất kháng oxy hóa tính tƣơng đƣơng vitamin C gan chuột sau tuần (mg/ml) Hình 4.5 Hiệu kháng oxy nghiệm thức sau tuần (%) Hình 4.6 Đƣờng chuẩn vitamin C theo phƣơng pháp DPPH Hình 4.7 Gốc tự đƣợc hấp thu gốc tự lại dịch gan sau tuần (%) Hình 4.8 Gốc tự đƣợc hấp thu gốc tự lại dịch gan sau tuần (%) v DANH SÁCH BẢNG Bảng 4.1 Khả kháng oxy hóa cao methanol rễ Ô rô gan chuột bị tổn thƣơng điều trị sau tuần bằng phƣơng pháp TAS Bảng 4.2 Bảng 4.2 Khả kháng oxy hóa cao methanol rễ Ô rô gan chuột bị tổn thƣơng điều trị sau tuần bằng phƣơng pháp TAS Bảng 4.3 Khả kháng oxy hóa cao Ô rô sau tuần Bảng 4.4 Khả kháng oxy hóa cao Ô rô sau tuần vi DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT AVEs CAT DNA DPPH GPX PKC RNA RNS ROS RSS SOD Advanced Glycation End Product-AGEs Catalase Deoxyribonucleic acid 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl Glutathione peroxidase Protein kinase C Ribonucleic acid Reactive nitrogen species Reactive oxygen species Reactive sulfua species Superixide dismutase vii CHƢƠNG GIỚI THIỆU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ Gan đóng vai trò quan trọng trình chuyển hóa thực hiên số chức khác thể nhƣ dự trữ glycogen, tổng hợp protein huyết tƣơng thải độc Gan điều hòa nhiều phản ứng hóa sinh mà phản ứng xảy số tổ chức đặc biệt thể Những bệnh lý liên quan đến gan thƣờng loại virus (A, B, C,…), thuốc, rƣợu hóa chất xâm nhập vào gan Theo thống kê vào năm 2006 WHO, Việt Nam chiếm 5% tỉ lệ ngƣời bị bệnh gan, đến năm 2011 Việt Nam đứng hàng thứ 53 chiếm 15,7% số ngƣời mắc bệnh gan Gan tổn thƣơng có nhiều tác nhân bên nhƣ: ô nhiễm môi trƣờng, lạm dụng thuốc, ăn uống không điều độ, stress, uống nhiều rƣợu bia chất kích thích khác… Những tác động làm gan bị suy yếu làm việc sức dẫn đến tình trạng stress oxy hóa Stress oxy hoá nguyên nhân cho phát triển nhiều bệnh làm trầm trọng thêm triệu chứng bệnh nguy hiểm nhƣ bệnh Alzheimer, bệnh tiểu đƣờng, Parkinson, bệnh ung thƣ, nhồi máu tim, viêm loét dày v.v Hiện nay, bệnh gan chƣa có thuốc đặt trị, bệnh nhân chủ yếu đƣợc điều trị bằng thuốc làm tăng khả phục hồi bảo vệ gan Một số thuốc bảo vệ gan đƣợc nhập vào Việt Nam nhƣ Silymarin, Biphenyldimethyl dicarboxylat có tác dụng tƣơng đối tốt nhƣng giá thành cao, không phù hợp với điều kiện kinh tế đa số ngƣời bệnh phải dùng thuốc dài ngày Vì việc nghiên cứu thuốc bảo vệ gan từ nguồn nhiên liệu nƣớc điều cần thiết Với phong phú đa dạng sinh học bậc khu vực Đông Nam Á nƣớc ta có nguồn thảo dƣợc dồi Những dƣợc liệu chữa bệnh gan có nhiều đƣợc sử dụng rộng rãi nhƣ actiso, nghệ vàng,… Việc tìm kiếm, bổ sung vào danh mục dƣợc liệu việc cần thiết mang ý nghĩa thực tiễn Cây Ô rô (Acanthus ilicifolius L.) loài thực vật có khả kháng oxy hóa, kháng khuẩn, trị bệnh ung thƣ, loét dày,… Đặc biệt, số bệnh liên quan đến gan Đây loài thực vật mọc hoang nhiều vùng ven bờ biển, ao hồ, hầu hết tỉnh đồng bằng sông Cửu Long Cây Ô rô thu hoạch quanh năm, dễ trồng vùng nhiệt đới nhƣ Việt Nam Mặc dù vậy, nghiên cứu khả điều trị bệnh Ô rô hạn chế Cây Ô-rô đƣợc dùng dân gian, điều trị bệnh theo kinh nghiệm ngƣời mà chƣa có nghiên cứu, chứng minh khoa học Vì vậy, nghiên cứu “Khảo sát hiệu kháng oxy hóa cao methanol rễ Ô rô (Acanthus ilicifolius L.) in vivo chuột tổn thƣơng gan” điều cần thiết 1.2 MỤC TIÊU ĐỀ TÀI Khảo sát khả kháng oxy hóa cao chiết bằng dung môi methanol rễ Ô Rô gan chuột bị tổn thƣơng CCl4 PHỤ LỤC A Bảng Đƣờng chuẩn vitamin C theo nồng độ (mg/ml) Nồng độ Vitamin C (mg/ml) Giá trị OD 0,96347a±0,00357 20 0,82743b±0,00250 40 0,71590c±0,00689 60 0,64282d±0,00130 80 0,53373e±0,00621 100 0,42267f±0,00352 120 0,37465g±0,00121 Bảng Giá trị OD hàm lƣợng chất kháng oxy hóa (mg/ml vitamin C) dịch gan với vitamin C sau tuần phƣơng pháp TAS Nghiệm thức Giá trị OD Hàm lƣợng chất kháng oxy hóa (mg/ml vitamin C) Bình thƣờng 0,2195c±0,00921 179,02a±2,3 Không điều trị 0,9217a±0,0254 3,48c±6,35 Thuốc Silymarin 0,7203b±0,0144 53,82b±3,59 Cao Ô rô 0,7642b±0,0104 42,86b±2,6 Bảng Hiệu kháng oxy hóa gan chuột sau tuần phƣơng pháp TAS Nghiệm thức Hiệu kháng oxy hóa (%) Bình thƣờng 74,91a±1,05 Không điều trị -5,33c±2,9 Thuốc Silymarin 17,68b±1,64 Cao Ô rô 12,67b±1,19 36 Bảng Giá trị OD hàm lƣợng chất kháng oxy hóa (mg/ml vitamin C) dịch gan với vitamin C sau tuần phƣơng pháp TAS Nghiệm thức OD Hàm lƣợng chất kháng oxy hóa (mg/ml vitamin C) Bình thƣờng 0,6308b±0,0265 76,20a±6,61 Không điều trị 0,8220a±0,0159 28,40b±3,97 Thuốc Silymarin 0,8120a±0,014 38,48b±3,02 Cao Ô rô 0,8120a±0,014 30,90b±3,49 Bảng Hiệu kháng oxy hóa sau tuần (%) phƣơng pháp TAS Nghiệm thức Hiệu kháng oxy hóa (%) Bình thƣờng 40,21 Không điều trị 22,09 Thuốc Silymarin 25,91 Cao Ô rô 23,03 Bảng Đƣờng chuẩn vitamin theo nồng độ phƣơng pháp DPPH Nồng độ vitamin C (μg/ml) OD 1,0948a±0,00541 0,88333b±0,00889 10 0,77300c±0,00885 15 0,61900d±0,00622 20 0,4705e±0,0104 25 0,41717f±0,00949 30 0,32067g±0,00243 35 0,1728h±0,0128 Bảng Giá trị OD hàm lƣợng chất kháng oxy hóa (μg/ml vitamin C) sau tuần phƣơng pháp DPPH 37 Nghiệm thức OD Hàm lƣợng chất kháng oxy hóa (μg/ml vitamin C) Bình thƣờng 1,0247ab±0,0171 0,150b±1,950 Không điều trị 1,1430a±0,0683 -12,039c±0,655 Thuốc Silymarin 0,924b±0,0253 5.855a±1.51 Cao Ô rô 1,0867a±0,0136 3,461ab±0,557 Bảng Hiệu kháng oxy hóa dịch gan sau tuần phƣơng pháp DPPH Nghiệm thức Hiệu kháng oxy hóa % Bình thƣờng 2,58 Không điều trị -26,24 Thuốc Silymarin 16,1 Cao Ô rô 10,4 Bảng Lƣơ ̣ng gố c tƣ ̣ đƣơ ̣c hấ p thu và gố c tƣ ̣ còn la ̣i sau tuầ n Nghiệm thức Gố c tƣ̣ còn đƣơ ̣c hấ p Gố c tƣ̣ còn la ̣i % thu % Bình thƣờng 2,58 97,42 Không điều trị -26,24 126,34 Thuốc Silymarin 16,1 83,9 Cao Ô rô 10,4 89,6 Bảng 10 Giá trị OD hàm lƣợng chất kháng oxy hóa (μg/ml vitamin C) sau tuần phƣơng pháp DPPH Nghiệm thức Hàm lƣợng chất kháng oxy hóa (μg/ml vitamin C) OD 38 Bình thƣờng 1,0268b± 0,0488 0,241ab±0,682 Không điều trị 1,3317a ± 0,0164 -4,49b±2,73 Thuốc Silymarin 0,8843c ± 0,0378 4,25a±1,01 Cao Ô rô 0,9442bc ±0,0139 -2,239b±0,545 Bảng 11 Hiệu kháng oxy hóa (%) sau tuần phƣơng pháp DDPH Nghiệm thức Hiệu kháng oxy hóa đƣợc tính theo % Bình thƣờng 11,36 Không điều trị 1,12 Thuốc Silymarin 20,04 Cao Ô rô 6,00 Bảng 12 Lƣơ ̣ng gố c tƣ ̣ đƣơ ̣c hấ p thu và gố c tƣ ̣ còn la ̣i sau tuầ n Nghiệm thức Gố c tƣ̣ còn đƣơ ̣c hấ p Gố c tƣ̣ còn la ̣i % thu % Bình thƣờng 11,36 88,64 Không điều trị 1,12 98,88 Thuốc Silymarin 20,04 79,96 Cao Ô rô 6,00 94 39 PHỤ LỤC B CÁC BẢNG THỐNG KÊ ANOVA Thí nghiệm khảo sát khả kháng oxy hóa tổng số (TAS assay) cao chiết methanol rễ Ô rô nồng độ 45 mg/kg gan chuột One-way ANOVA: OD versus NỒNG ĐỘ VITAMIN C Source DF SS MS F P 1.646806 0.274468 2657.82 0.000 Error 35 0.003614 0.000103 Total 41 1.650420 NỒNG ĐỘ S = 0.01016 R-Sq = 99.78% R-Sq(adj) = 99.74% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev 0.96347 0.00875 20 0.82743 0.00612 40 0.71590 0.01687 60 0.64282 0.00318 80 0.53373 0.01520 100 0.42267 0.00863 120 0.37465 0.00297 -+ -+ -+ -+-*) (* (* *) *) *) *) -+ -+ -+ -+-0.48 Pooled StDev = 0.01016 Grouping Information Using Tukey Method NỒNG ĐỘ N Mean 0.96347 20 0.82743 40 0.71590 Grouping A B C 40 0.64 0.80 0.96 60 0.64282 80 0.53373 100 0.42267 120 0.37465 D E F G One-way ANOVA: od versus Nghiệm thức tuần Source DF SS MS F P 1.66169 0.55390 353.74 0.000 Error 20 0.03132 0.00157 Total 23 1.69301 Nghiệm thức S = 0.03957 R-Sq = 98.15% R-Sq(adj) = 97.87% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level - N Mean StDev Bình thường 0.21950 0.02255 Cao Ô rô 0.76417 0.02549 Không điều trị *-) 0.92167 0.06220 Thuốc Silymarin 0.72033 0.03515 -+ -+ -+ -+ - (-*-) (*-) (- (-*-) -+ -+ -+ -+ - 0.20 0.40 0.60 Pooled StDev = 0.03957 Grouping Information Using Tukey Method Nghiệm thức N Mean Grouping Không điều trị 0.92167 Cao Ô rô 0.76417 B Thuốc Silymarin 0.72033 B Bình thường 0.21950 A C One-way ANOVA: Khả kháng oxy hóa versus Nghiệm thức 41 0.80 Source DF SS MS F P 103855.9 34618.6 353.74 0.000 Error 20 1957.3 97.9 Total 23 105813.2 Nghiệm thức S = 9.893 R-Sq = 98.15% R-Sq(adj) = 97.87% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev Bình thường 179.02 5.64 Cao Ô rô 42.86 6.37 Không điều trị 3.48 15.55 Thuốc Silymarin 53.82 8.79 -+ -+ -+ -+ -(-*) (-*) (-*) (-*) -+ -+ -+ -+ -0 50 100 150 Pooled StDev = 9.89 Grouping Information Using Tukey Method Nghiệm thức N Mean Grouping Bình thường 179.02 Thuốc Silymarin 53.82 B Cao Ô rô 42.86 B Không điều trị 3.48 A C One-way ANOVA: Hiệu xuất kháng oxy hóa (%) versus Nghiệm thức Source DF SS MS F P 21703.8 7234.6 353.74 0.000 Error 20 409.0 20.5 Total 23 22112.8 Nghiệm thức S = 4.522 R-Sq = 98.15% R-Sq(adj) = 97.87% Individual 95% CIs For Mean Based on 42 Pooled StDev Level N Mean StDev Bình thường 74.914 2.578 Cao Ô rô 12.667 2.913 Không điều trị -5.333 7.109 Thuốc Silymarin 17.676 4.018 + -+ -+ -+ (-*-) (*-) (-*) (*-) + -+ -+ -+ 25 50 75 Pooled StDev = 4.522 Grouping Information Using Tukey Method Nghiệm thức N Mean Grouping Bình thường 74.914 Thuốc Silymarin 17.676 B Cao Ô rô 12.667 B Không điều trị -5.333 A C One-way ANOVA: OD versus Nghiệm thức tuần Source DF SS MS F P 0.14220 0.04740 24.44 0.000 Error 20 0.03879 0.00194 Total 23 0.18099 Nghiệm thức S = 0.04404 R-Sq = 78.57% R-Sq(adj) = 75.35% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev Bình thường 0.63080 0.06481 Cao Ô rô 0.81200 0.03420 Không điều trị ) 0.82200 0.03889 Thuốc Silymarin 0.78167 0.02960 -+ -+ -+ -+ ( * ) ( * ) ( * - ( -* ) 43 -+ -+ -+ -+ 0.630 0.700 0.770 0.840 Pooled StDev = 0.04404 Grouping Information Using Tukey Method Nghiệm thức N Mean Grouping Không điều trị 0.82200 A Cao Ô rô 0.81200 A Thuốc Silymarin 0.78167 A Bình thường 0.63080 B One-way ANOVA: Hiệu suất kháng oxy hóa sau tuần versus Nghiệm thức Source DF SS MS F P 1277.6 425.9 24.44 0.000 Error 20 348.6 17.4 Total 23 1626.1 Nghiệm thức S = 4.175 R-Sq = 78.57% R-Sq(adj) = 75.35% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev Bình thường 40.209 6.143 Cao Ô rô 23.033 3.242 Không điều trị 22.085 3.687 Thuốc Silymarin 25.908 2.805 + -+ -+ -+ ( * -) ( * ) ( -* ) ( * ) + -+ -+ -+ 21.0 Pooled StDev = 4.175 Grouping Information Using Tukey Method Nghiệm thức N Mean Bình thường 40.209 Grouping A 44 28.0 35.0 42.0 Thuốc Silymarin 25.908 B Cao Ô rô 23.033 B Không điều trị 22.085 B Thí nghiệm khảo sát khả bảo vệ gan cao chiết methanol rễ Ô rô nồng độ 45 mg/kg gan chuột One-way ANOVA: OD versus Nồng độ vitamin C (μg/ml) theo DPPH Source DF SS MS F P 3.994971 0.570710 1285.48 0.000 Error 40 0.017759 0.000444 Total 47 4.012730 nd S = 0.02107 R-Sq = 99.56% R-Sq(adj) = 99.48% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev 1.0948 0.0133 0.8833 0.0218 10 0.7730 0.0217 15 0.6190 0.0152 20 0.4705 0.0254 25 0.4172 0.0233 30 0.3207 0.0060 35 0.1728 0.0313 + -+ -+ -+ (* *) (*) (* (*) (* (*) (*) + -+ -+ -+ 0.25 0.50 Pooled StDev = 0.0211 Grouping Information Using Tukey Method nd N Mean 1.09483 0.88333 Grouping A B 45 0.75 1.00 10 0.77300 15 0.61900 20 0.47050 25 0.41717 30 0.32067 35 0.17283 C D E F G H One-way ANOVA: OD versus Nghiệm thức tuần theo DPPH Source DF SS MS F P 0.71086 0.23695 36.97 0.000 Error 20 0.12819 0.00641 Total 23 0.83905 Nghiệm thức S = 0.08006 R-Sq = 84.72% R-Sq(adj) = 82.43% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev Bình thường 1.0268 0.1195 Cao Ô rô 0.9442 0.0341 Không điều trị 1.3317 0.0401 Thuốc Silymarin 0.8843 0.0927 + -+ -+ -+ ( -* ) ( * -) ( * -) ( * ) + -+ -+ -+ 0.90 Pooled StDev = 0.0801 Grouping Information Using Tukey Method Nghiệm thức N Mean Grouping Không điều trị 1.33167 Bình thường 1.02683 B Cao Ô rô 0.94417 B C Thuốc Silymarin 0.88433 C A 46 1.05 1.20 1.35 One-way ANOVA: Hàm lượng chất kháng oxy hóa tương ứng với vi µg/ml versus Nghiệm thức tuần Source DF SS MS F P 1137.4 379.1 36.97 0.000 Error 20 205.1 10.3 Total 23 1342.5 Nghiệm thức S = 3.202 R-Sq = 84.72% tamin C R-Sq(adj) = 82.43% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev Bình thường 0.155 4.779 Cao Ô rô 3.461 1.365 Không điều trị -12.039 1.605 Thuốc Silymarin 5.855 3.708 -+ -+ -+ -+ -( -* ) ( * -) ( * -) ( * -) -+ -+ -+ -+ 12.0 -6.0 0.0 Pooled StDev = 3.202 Grouping Information Using Tukey Method Nghiệm thức N Mean Grouping Thuốc Silymarin 5.855 A Cao Ô rô 3.461 A B Bình thường 0.155 B Không điều trị -12.039 C One-way ANOVA: Hiệu suất kháng oxy hóa versus Nghiệm thức tuần Source DF SS MS F P 6398.9 2133.0 36.97 0.000 Error 20 1153.9 57.7 Total 23 7552.8 Nghiệm thức S = 7.596 R-Sq = 84.72% R-Sq(adj) = 82.43% 47 6.0 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level - N Mean StDev Bình thường 2.577 11.334 Cao Ô rô 10.421 3.237 Không điều trị -26.344 3.807 Thuốc Silymarin 16.097 8.795 + -+ -+ -+ ( * -) ( -* -) ( -* ) ( * -) + -+ -+ -+ -30 -15 15 Pooled StDev = 7.596 Grouping Information Using Tukey Method Nghiệm thức N Mean Grouping Thuốc Silymarin 16.097 A Cao Ô rô 10.421 A B Bình thường 2.577 B Không điều trị -26.344 C One-way ANOVA: OD versus Nghiệm thức tuần theo DPPH Source DF SS MS F P 0.15788 0.05263 6.07 0.004 Error 20 0.17346 0.00867 Total 23 0.33134 Nghiệm thức S = 0.09313 R-Sq = 47.65% R-Sq(adj) = 39.80% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev Bình thường 1.0247 0.0418 Cao Ô rô 1.0867 0.0334 Không điều trị 1.1430 0.1673 -+ -+ -+ -+ -( * -) ( -* -) ( -* -) 48 Thuốc Silymarin 0.9243 0.0620 ( * -) -+ -+ -+ -+ -0.90 1.00 1.10 1.20 Pooled StDev = 0.0931 Grouping Information Using Tukey Method Nghiệm thức N Mean Grouping Không điều trị 1.14300 A Cao Ô rô 1.08667 A Bình thường 1.02467 A B Thuốc Silymarin 0.92433 B One-way ANOVA: hàm lượng chất kháng oxy hóa tương ứng vitamin C µg /ml C versus Nghiệm thức tuần Source DF SS MS F P 252.6 84.2 6.07 0.004 Error 20 277.5 13.9 Total 23 530.1 Nghiệm thức S = 3.725 R-Sq = 47.65% R-Sq(adj) = 39.80% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev -+ -+ -+ -+ Bình thường 0.241 1.672 ( -* -) Cao Ô rô -2.239 1.336 Không điều trị -4.492 6.691 Thuốc Silymarin 4.255 2.481 ( -* -) ( -* -) ( -* -) -+ -+ -+ -+ -4.0 Pooled StDev = 3.725 Grouping Information Using Tukey Method 49 0.0 4.0 8.0 Nghiệm thức N Mean Grouping Thuốc Silymarin 4.255 A Bình thường 0.241 A B Cao Ô rô -2.239 B Không điều trị -4.492 B One-way ANOVA: Hiệu suất kháng oxy hóa versus Nghiệm thức tuần Source DF SS MS F P 1181.4 393.8 6.07 0.004 Error 20 1298.0 64.9 Total 23 2479.5 Nghiệm thức S = 8.056 R-Sq = 47.65% R-Sq(adj) = 39.80% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev Level N Mean StDev Bình thường 11.361 3.615 Cao Ô rô 5.998 2.889 Không điều trị 1.125 14.471 Thuốc Silymarin 20.040 5.366 + -+ -+ -+ ( -* ) ( * ) ( * ) ( * ) + -+ -+ -+ Pooled StDev = 8.056 Grouping Information Using Tukey Method Nghiệm thức N Mean Grouping Thuốc Silymarin 20.040 A Bình thường 11.361 A B Cao Ô rô 5.998 B Không điều trị 1.125 B 50 10 20 30 [...]... cao Ô rô có khả năng hấp thu gốc tự do ở gan tƣơng đƣơng với thuốc Silymarin Kết luận, cao Ô rô 45 mg/kg có khả năng kháng oxy hóa và bảo vệ gan tránh khỏi stress oxy hóa từ hóa chất CCl4 sau 4 tuần 4.2.3 Khảo sát khả năng kháng oxy hóa của cao chiết methanol rễ cây Ô rô nồng độ 45 mg/kg trên gan chuột 8 tuần bằng phƣơng pháp DPPH Thí nghiệm khả sát khả năng kháng oxy hóa của cao chiết cây Ô rô sau... nghĩa So với các nhóm chuột còn lại hiệu quả kháng oxy hóa của nhóm chuột uống thuốc Silymarin và cao Ô rô lần lƣợt là 25,91% và 23,03% khác biệt không có ý nghĩa thống kê 24 so với chuột không điều trị 22,09% Sau 8 tuần, chuột bị tổn thƣơng nặng nên hiệu quả kháng oxy hóa của cao Ô rô không cao 4.2 KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG OXY HÓA CỦA CAO CHIẾT METHANOL RỄ CÂY Ô RÔ TRÊN GAN CHUỘT BỊ TỔN THƢƠNG BẰNG PHƢƠNG... 4.1 KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG OXY HÓA TỔNG SỐ (TAS ASSAY) CỦA CAO CHIẾT METHANOL RỄ CÂY Ô RÔ TRÊN GAN CHUỘT BỊ TỔN THƢƠNG Những bệnh về gan chủ yếu là do sự peroxid hóa lipid, các tổn hại oxy hóa và stress oxy hóa Sự stress oxy hóa là sự mất cân bằng giữa chất oxy hóa và chất kháng oxy hóa dẫn đến tổn hại gan, gây nên những bệnh thƣờng gặp nhƣ viêm gan, ung thƣ gan, xơ gan, … Phƣơng pháp đo lƣờng khả năng. .. phẫu chuột nhƣ sau: 100 mg gan chuột đƣợc tách ra nghiền mịn với 200 μL dung dịch điệm phosphate lạnh nồng độ 100 mM, pH = 7,4 Sau khi li tâm trong 10 phút ở 10000 vòng/phút, phần dịch nổi ở trên đƣợc sử dụng cho việc khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa và bảo vệ gan của cao chiết methanol rễ cây Ô rô (Bhat et al., 2008) 3.2.1 Khảo sát khả năng kháng oxy hóa tổng số của cao chiết methanol rễ cây Ô rô in vivo. .. quả kháng oxy hóa tăng lên 17,68% và 12,67% nên cao Ô rô nồng độ 45 mg/kg khối lƣợng chuột có khả năng kháng oxy hóa ở gan bị nhiễm CCl4 22 90 Hiệu quả kháng oxy hóa (%) 80 74.91 70 60 50 40 30 17.68 20 12.67 10 -5.33 0 -10 Bình thường Không trị bệnh Thuốc Silymarin Cao Ô rô Hình 4.3 Hiệu quả kháng oxy hóa ở các nghiệm thức sau 4 tuần (%) Từ kết quả trên cho thấy, khả năng kháng oxy hóa của cao Ô rô. .. và cao Ô rô đều có khả năng kháng oxy hóa và hiệu quả kháng oxy hóa của hai nhóm này lần lƣợt là 16,1 % và 10,4 %, khác biệt có ý nghĩa thống kê so với nhóm không điều trị và hiệu quả kháng oxy hóa cao hơn so với nhóm chuột bình thƣờng Cao Ô rô có khả năng kháng oxy tƣơng ứng với hàm lƣợng vitamin C là 3,461±0,557 μg/ml Ở nhóm chuột không điều trị, khả năng kháng oxy hóa là -12,039±0,655 μg/ml vitamin... nghiên cứu trên thế giới liên quan đến cây Ô Rô đƣợc thực hiện để chứ minh hoạt động dƣợc lý của cây Ô Rô Hoạt động kháng viêm từ cây Ô rô (Acanthus ilicifolius L.) đã đƣợc nghiên cứu (K.T Mani Senthil Kumar, 2008) Hoạt động kháng khuẩn của cao chiết alcoholic, butanolic and chloroform từ rễ và lá cây Ô rô đƣợc chứng minh (S.Bose, 2008) Hoạt động kháng oxy hóa và gây độc tế bào của hoa cây Ô rô (Muhamad... nhằm khảo sát khả năng bảo vệ gan của cao chiết methanol rễ cây Ô rô 45 mg/kg khối lƣợng chuột Gan chuột sau thời gian gây bệnh và điều trị sẽ đƣợc mang đi xử lý và thực hiện phản ứng DPPH Phản ứng này xác định khả năng bảo vệ gan dựa trên khả năng hấp thu gốc tự do DPPH Các mẫu dịch gan sau khi thực hiện phản ứng đƣợc đo quang phổ ở bƣớc sóng 517 nm 4.2.1 Khảo sát khả năng kháng oxy hóa của vitamin... phổ của mẫu giảm xuống Kết quả thống kê cho thấy, giá trị OD đƣợc đo ở các nồng độ đều khác biệt có nghĩa ở mức 5% (P ... nhƣng không gây tổn thƣơng Khảo sát khả kháng oxy hóa bảo vệ gan phận khác Ô rô Khảo sát thành phần hóa học khả kháng khuẩn cao chiết Ô rô Khảo sát khả kháng oxy hóa cao chiết Ô rô thận chuột 29... dụng cho việc khảo sát hoạt tính kháng oxy hóa bảo vệ gan cao chiết methanol rễ Ô rô (Bhat et al., 2008) 3.2.1 Khảo sát khả kháng oxy hóa tổng số cao chiết methanol rễ Ô rô in vivo chuột (Total... 4.2 Khả kháng oxy hóa cao methanol rễ Ô rô gan chuột bị tổn thƣơng điều trị sau tuần bằng phƣơng pháp TAS Bảng 4.3 Khả kháng oxy hóa cao Ô rô sau tuần Bảng 4.4 Khả kháng oxy hóa cao Ô rô sau