khảo sát khả năng kháng oxy hóa của cao phân đoạn lá cây ô rô (acanthus ilicifolius l ) in vitro

TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN SINH HỌC - - LÊ THỊ NGỌC HÀ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG OXY HÓA CỦA CAO PHÂN ĐOẠN LÁ CÂY Ô RÔ (Acanthus ilicifolius L.) IN VITRO LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH: SINH HỌC Cần Thơ, 2015 TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA KHOA HỌC TỰ NHIÊN BỘ MÔN SINH HỌC - - LÊ THỊ NGỌC HÀ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG OXY HÓA CỦA CAO PHÂN ĐOẠN LÁ CÂY Ô RÔ (Acanthus ilicifolius L.) IN VITRO LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH: SINH HỌC CÁN BỘ HƢỚNG DẪN TS ĐÁI THỊ XUÂN TRANG Cần Thơ, 2015 Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ LỜI CẢM ƠN  Luận văn tốt nghiệp đóng góp phần quan trọng hành trang học tập sinh viên nói chung sinh viên ngành Sinh học nói riêng Nó giúp tiếp cận đƣợc với thực tế, có thêm nhiều kiến thức ngành học định hƣớng cho lựa chọn nghiên cứu khoa học sau này; từ trang bị kiến thức thực tế tổng quan giúp có khả định hƣớng tốt công việc có chuẩn bị tốt sau kết thúc học tập trƣờng Tôi xin gửi lời tri ân sâu sắc đến Cô Đái Thị Xuân Trang tận tình hƣớng dẫn giúp đỡ suốt trình thực đề tài Tôi xin gửi lời biết ơn chân thành đến quí Thầy Cô Bộ môn Sinh học – Khoa Khoa học Tự Nhiên cho tảng kiến thức, cho niềm tin để học hỏi trao dồi thêm kỹ Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn đến Cô Ngô Thị Kim Thoa (Bộ môn Sinh học – Khoa Khoa học Tự Nhiên), Thầy Nguyễn Trọng Tuân (Bộ môn Hóa học – Khoa Khoa học Tự Nhiên) anh chị cán Phòng Khoa học Đất – Khoa Nông nghiệp & Sinh học Ứng dụng giúp đỡ tạo điều kiện để hoàn thành tốt luận văn Tôi xin cảm ơn anh Quách Hải Đăng Khôi sinh viên lớp Cử nhân Sinh học K36 bạn lớp Cử nhân Sinh học K37 chia sẻ, động viên, khích lệ giúp đỡ trình thực luận văn Xin chân thành cảm ơn! Cần Thơ, tháng 05 năm 2015 Lê Thị Ngọc Hà i Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ LỜI CAM KẾT Tôi xin cam đoan luận văn đƣợc hoàn thành dựa kết nghiên cứu dƣới hƣớng dẫn Cô Đái Thị Xuân Trang Các số liệu kết trình bày luận văn hoàn toàn trung thực chƣa đƣợc cá nhân công bố luận văn trƣớc Cán hƣớng dẫn Tác giả luận văn Ký tên Ký tên TS Đái Thị Xuân Trang Lê Thị Ngọc Hà ii Luận văn tốt nghiệp Trƣờng Đại Học Cần Thơ Trường Đại học Cần Thơ Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Khoa Khoa Học Tự Nhiên Bộ Môn Sinh Học Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc  NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ HƢỚNG DẪN Cán hƣớng dẫn: TS Đái Thị Xuân Trang Đề tài: Khảo sát khả kháng oxy hóa cao phân đoạn Ô Rô (Acanthus ilicifolius L.) Sinh viên thực hiện: Lê Thị Ngọc Hà MSSV: 3112357 Lớp: Sinh học – Khóa: 37 Nội dung nhận xét: a) Nhận xét hình thức LVTN: b) Nhận xét nội dung LVTN (đề nghị ghi chi tiết đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực đề tài:  Những vấn đề hạn chế: c) Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): d) Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2015 Cán hƣớng dẫn TS Đái Thị Xuân Trang iii Luận văn tốt nghiệp Trƣờng Đại Học Cần Thơ Khoa Khoa Học Tự Nhiên Bộ Môn Sinh Học Trường Đại học Cần Thơ Cộng Hòa Xã Hội Chủ Nghĩa Việt Nam Độc Lập - Tự Do - Hạnh Phúc  NHẬN XÉT ĐÁNH GIÁ CỦA CÁN BỘ PHẢN BIỆN Cán phản biện: …………………………………………………………… Đề tài: Khảo sát khả kháng oxy hóa cao phân đoạn Ô Rô (Acanthus ilicifolius L.) Sinh viên thực hiện: Lê Thị Ngọc Hà MSSV: 3112357 Lớp: Sinh học – Khóa: 37 Nội dung nhận xét: a) Nhận xét hình thức LVTN: b) Nhận xét nội dung LVTN (đề nghị ghi chi tiết đầy đủ):  Đánh giá nội dung thực đề tài:  Những vấn đề hạn chế: c) Nhận xét sinh viên tham gia thực đề tài (ghi rõ nội dung sinh viên chịu trách nhiệm thực có): d) Kết luận, đề nghị điểm: Cần Thơ, ngày… tháng… năm 2015 Cán phản biện iv Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ TÓM TẮT Đề tài: “Khảo sát khả kháng oxy hóa cao phân đoạn Ô Rô (Acanthus ilicifolius L.) in vitro” đƣợc thực nhằm đánh giá kháng oxy hóa Ô Rô Khả kháng oxy hóa đƣợc xác định dựa vào phƣơng pháp TAS (Total Atioxidant Status) Cao methanol Ô Rô đƣợc tách phân đoạn thành cao hexane, cao chloroform cao ethyl acetate Kết khảo sát cho thấy ba loại cao phân đoạn có khả kháng oxy hóa nhƣng mức độ khác Cao ethyl acetate cho hiệu loại bỏ gốc tự cao 80,00 ± 0,57% nồng độ mg/mL, cao chloroform cao hexane cho hiệu loại bỏ gốc tự lần lƣợt 56,22 ± 3,23% 37,31 ± 2,56% nồng độ Giá trị EC50 cao hexane 4,89 mg/mL, cao chloroform 2,84 mg/mL cao ethyl acetate 0,64 mg/mL cho thấy hiệu loại bỏ gốc tự cao phân đoạn Ô Rô cao chất kháng oxy hóa chuẩn vitamin C (EC50 = 66,34 mg/mL) nhiều lần nhƣng lại thấp so với cao methanol (EC50 = 0,094 mg/mL) Khả kháng oxy hóa cao hexane, chloroform ethyl acetae cao vitamin C lần lƣợt 14,23 104 lần Từ khóa: Cây Ô Rô (Acanthus ilicifolius L.), TAS, lão hóa, gốc tự do, chất kháng oxy hóa v Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ MỤC LỤC CHƢƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Nội dung nghiên cứu CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Tổng quan gốc tự 2.1.1 Nguồn gốc gốc tự 2.1.2 Tác hại gốc tự 2.2 Chất kháng oxy hóa 2.2.1 Khái niệm chất kháng oxy hóa 2.2.2 Các chất kháng oxy hóa đƣợc nghiên cứu 2.3 Đại cƣơng số bệnh liên quan đến lão hóa gốc tự 2.3.1 Các bệnh lý não 2.3.2 Bệnh ung thƣ 10 2.3.3 Bệnh xơ vữa động mạch 11 2.4 Đại cƣơng Ô Rô 12 2.4.1 Khóa phân loại 12 2.4.2 Đặc điểm hình thái 13 2.4.3 Đặc điểm phân bố sinh thái Ô Rô 13 2.4.4 Thành phần hóa học công dụng 14 2.5 Các nghiên cứu Ô Rô 15 2.5.1 Nghiên cứu nƣớc 15 2.5.2 Nghiên cứu nƣớc 15 CHƢƠNG PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 Thời gian địa điểm thực 16 3.2 Phƣơng tiện 16 3.2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 16 3.2.2 Hóa chất 16 vi Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ 3.2.3 Dụng cụ thiết bị 16 3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 17 3.3.1 Phƣơng pháp tách phân đoạn cao methanol Ô Rô 17 3.3.2 Khảo sát khả kháng oxy hóa tổng số (Total Antioxidant Statsus (TAS) essay) in vitro cao phân đoạn Ô Rô 18 3.3.3 Cách xác định giá trị EC50 18 3.3.4 Thống kê phân tích số liệu 18 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 19 4.1 Khảo sát khả kháng oxy hóa tổng số (Total Antioxidant Status (TAS) assay) in vitro 19 4.2 Khảo sát khả kháng oxy hóa tổng số (TAS) loại cao phân đoạn Ô Rô in vitro 20 4.2.1 Khả kháng oxy hóa cao phân đoạn hexane 20 4.2.2 Khả kháng oxy hóa cao phân đoạn chloroform 22 4.2.3 Khả kháng oxy hóa cao phân đoạn ethyl acetate 23 4.3 Đánh giá khả kháng oxy hóa hàm lƣợng chất kháng oxy hóa có cao hexane, chloroform, ethyl acetate 26 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 29 5.1 Kết luận 29 5.2 Kiến nghị 29 TÀI LIỆU THAM KHẢO 30 PHỤ LỤC 34 vii Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH BẢNG Bảng 4.1: Khả kháng oxy hóa tổng số cao hexane Ô Rô 20 Bảng 4.2: Khả kháng oxy hóa tổng số cao chloroform Ô Rô 22 Bảng 4.3: Khả kháng oxy hóa tổng số cao ethyl acetate Ô Rô 24 Bảng 4.4: Hàm lƣợng chất kháng oxy hóa có loại cao phân đoạn Ô Rô 26 Bảng 4.6: Phƣơng trình hồi quy giá trị EC50 loại cao phân đoạn Ô Rô 27 viii Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ 45 Semba, R.D., Blaum, C., Guralnik, J.M., 2003 Carotenoid and vitamin E status are associated with indicators of sarcopenia among older women living in the community Aging Clin Exp Res, 15(6): 482–7 46 Sinclair, A.J., 1998 Altered plasma antioxidant status in subjects with Alzheimer’s disease and vascular dementia 47 Singh, A., Sanjiv, D and Ashish, S., 2009 Acanthus icilifolius Linn Lesser Known Medicinal Plant with Significant Pharmacological Activities Ethnobotanical Leaflets, 13: 431-436 48 Singh, D., Vidhu, A., 2011 Phytochemical and pharmacological potential of Acantus ilicifolius Journal of Pharmacy and Bioallied Sciences, 5(1): 17-20 49 Steinberd, D and Lewis, A., 1997 Oxidativee modification of LDL and atherogenesis, 1062-1071 50 Thirunavukkarasu, P., Ramanathan, T and Ramkuma, L., 2011.Hemolitic and antimicrobial effect in the leaves of Acanthus icilifolius Journal of Pharmacology and Toxicology, 6(2): 196-200 51 Upritchard, J.E., 2003 Spread suppplemented with moderate doses of vitamin E and carotenoids redues lipid peroxidationin health, nonsmoking adults, 78: 985-992 52 WHO, 2003 The World Health Report 2003, Shaping the future, World Health Organization, Geneva, Switzerland 53 WHO, 2012 Dementia: a public health priority, World Health Organization, Geneva, Switzerland 54 Witztum, J.L., 1994 The oxidation hypothesis of atherosclerosis, 793-797 55 Wu, J., Zhang, S., Xiao, Q., Li, Q., Huang, J., Long, L., Huang, L., 2003 Phenylethanoid and aliphatic alcohol glycosides from Acanthus ilicifolius Phytochemistry, 63: 491-495 56 Zhang, W., Li, Q., Huang, J., Xiao, Z., Long, L., 2004 Two New Cyclolignan Glucosides from Acanthus ilicifolius Zeitschrift fur Naturforschung, 59b: 341-344 57 Zin, Z.M., Abdul-Hamid, A., and Osman A., 2002 Antioxidative activity of extracts from Mengkudu (Morinda citrifolia L.) root Fruit and leaf Food Chemistry, 78: 227-231  Trang Wed http://doisong.vnexpress.net/tin-tuc/suc-khoe/canh-giac-voi-dot-quy-nao3154790.htm http://otiv.com.vn/kien-thuc-benh-hoc/he-tim-mach-va-stress-oxi-hoa685.html http://www.chemistryviews.org/details/ezine/5808971/Vitamin_C_Deficie ncy Part_3.html http://www.dieutri.vn/benhhocnoi/8-10-2012/S2646/Benh-hoc-xo-vuadong-mach.htm http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2685276/#b118-cia-2-377 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3120274/ http://www.westcottresearchandconsulting.com/antioxidants.htm 33 Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ PHỤ LỤC A Bảng Đƣờng chuẩn TAS tính theo mg/mL vitamin C Nồng độ vitamin C (mg/mL) Giá trị OD Hiệu suất kháng oxy hóa vitamin C (%) 1,2095a ± 0,0152 Không xác định 10 1,0763b ± 0,0445 11,013g ± 3,464 20 0,9058c ± 0,0597 25,076f ± 5,399 40 0,7187d ± 0,0113 40,575e ± 1,104 60 0,6047e ± 0,0115 50,002d ± 1,507 80 0,4922f ± 0,0169 59,302c ± 1,507 100 0,3842g ± 0,0154 68,323b ± 1,367 120 0,2843h ± 0,0070 76,491a ± 0,519 Ghi chú: Các giá trị có chữ theo sau cột khác khác biệt có ý nghĩa thống kê mức 5% 34 Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ PHỤ LỤC B: SỐ LIỆU Đƣờng chuấn TAS tính theo mg/mL vitamin C Nồng độ vitamin C Giá trị OD (mg/mL) 1,212 1,232 1,218 1,086 10 1,073 1,087 0,834 20 0,867 0,926 0,698 40 0,732 0,719 0,594 60 0,603 0,609 0,478 80 0,485 0,495 0,378 100 0,363 0,406 0,283 120 0,287 0,296 Giá trị OD cao hexane Nồng độ cao hexane (mg/mL) 0,5 1,209 1,189 1,197 1,104 0,991 1,117 0,911 0,889 1,008 0,720 0,724 0,719 0,615 0,589 0,618 0,509 0,472 0,514 0,397 0,377 0,384 0,275 0,281 0,284 Giá trị OD 1,221 1,186 1,215 1,124 1,129 1,139 1,058 1,044 1,071 0,934 0,877 0,854 35 1,192 1,204 1,232 1,085 1,111 1,112 1,024 1,040 1,097 0,945 0,881 0,850 Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ 10 12 0,741 0,760 0,722 0,669 0,654 0,673 0,583 0,619 0,597 0,512 0,510 0,550 0,453 0,451 0,463 0,419 0,410 0,424 0,393 0,387 0,394 0,749 0,803 0,769 0,642 0,673 0,686 0,613 0,629 0,593 0,506 0,523 0,536 0,470 0,462 0,448 0,413 0,410 0,415 0,406 0,376 0,403 Giá trị OD cao chloroform Nồng độ cao chloroform (mg/mL) 0,5 1,5 2,5 Giá trị OD 1,210 1,219 1,213 1,059 1,045 1,057 0,954 0,934 0,970 0,851 0,848 0,842 0,744 0,768 0,718 0,610 0,627 0,606 36 1,181 1,196 1,203 1,048 1,054 1,057 0,976 0,993 0,980 0,853 0,848 0,856 0,766 0,756 0,755 0,625 0,626 0,635 Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ 3,5 0,566 0,480 0,541 0,399 0,433 0,440 0,356 0,343 0,362 0,319 0,311 0,321 0,272 0,302 0,276 0,271 0,295 0,272 0,542 0,479 0,553 0,423 0,407 0,437 0,332 0,352 0,384 0,322 0,317 0,325 0,288 0,284 0,276 0,268 0,287 0,256 Giá trị OD cao ethyl acetate Nồng độ cao ethyl acetate (mg/mL) 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 Giá trị OD 1,201 1,225 1,174 1,115 1,119 1,135 0,999 1,058 1,018 0,864 0,933 0,951 0,765 0,792 0,804 0,653 0,693 0,636 0,612 0,578 0,616 37 1,221 1,185 1,229 1,100 1,126 1,112 1,003 1,021 1,035 0,866 0,949 0,925 0,776 0,773 0,827 0,653 0,678 0,625 0,579 0,567 0,566 Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ 0,8 0,496 0,462 0,452 0,319 0,322 0,330 0,253 0,261 0,253 0,239 0,250 0,246 38 0,497 0,447 0,467 0,314 0,341 0,339 0,255 0,279 0,252 0,239 0,231 0,242 Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ PHỤ LỤC C: CÁC BẢNG THỐNG KÊ ANOVA Anova đường chuẩn TAS theo mg/mL vitamin C Source Nồng độ Error Total DF 40 47 S = 0.02875 Level 10 20 40 60 80 100 120 N 6 6 6 6 SS 4.608179 0.033053 4.641232 MS 0.658311 0.000826 R-Sq = 99.29% Mean 1.2095 1.0763 0.9058 0.7187 0.6047 0.4922 0.3842 0.2843 F 796.67 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.16% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ (*) (*) (*) (*) (*) (*) (*) (*) + -+ -+ -+ 0.25 0.50 0.75 1.00 StDev 0.0152 0.0445 0.0597 0.0113 0.0115 0.0169 0.0154 0.0070 Pooled StDev = 0.0287 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 10 20 40 60 80 100 120 N 6 6 6 6 Mean 1.20950 1.07633 0.90583 0.71867 0.60467 0.49217 0.38417 0.28433 Grouping A B C D E F G H Anova hiệu suất loại bỏ gốc tự vitamin C Source Nồng độ Error Total DF 35 41 S = 2.616 Level 10 20 40 60 80 100 120 N 6 6 6 SS 19784.74 239.59 20024.33 MS 3297.46 6.85 R-Sq = 98.80% Mean 11.013 25.076 40.575 50.002 59.302 68.232 76.491 StDev 3.464 5.399 1.104 1.069 1.507 1.367 0.519 F 481.71 P 0.000 R-Sq(adj) = 98.60% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ (-*) (-*) (*) (*) (*) (*) (*) + -+ -+ -+ 20 40 60 80 Pooled StDev = 2.616 Grouping Information Using Fisher Method 39 Luận văn tốt nghiệp Nồng độ 120 100 80 60 40 20 10 N 6 6 6 Trường Đại học Cần Thơ Mean 76.491 68.232 59.302 50.002 40.575 25.076 11.013 Grouping A B C D E F G Anova OD cao hexane Source Nồng độ Error Total DF 10 55 65 S = 0.02084 Level 0.0 0.5 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 8.0 10.0 12.0 N 6 6 6 6 6 SS 5.157358 0.023898 5.181255 MS 0.515736 0.000435 R-Sq = 99.54% Mean 1.2083 1.1167 1.0557 0.8902 0.7573 0.6662 0.6057 0.5228 0.4578 0.4152 0.3932 StDev 0.0176 0.0188 0.0258 0.0403 0.0276 0.0157 0.0175 0.0172 0.0085 0.0055 0.0109 F 1186.96 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.45% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -*) (* *) (* *) (* *) (*) *) (* (* -+ -+ -+ -+ -0.50 0.75 1.00 1.25 Pooled StDev = 0.0208 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 0.0 0.5 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 8.0 10.0 12.0 N 6 6 6 6 6 Mean 1.20833 1.11667 1.05567 0.89017 0.75733 0.66617 0.60567 0.52283 0.45783 0.41517 0.39317 Grouping A B C D E F G H I J J Anova OD cao chloroform Source Nồng độ Error Total DF 11 60 71 S = 0.01709 Level 0.0 N SS 6.944136 0.017531 6.961668 MS 0.631285 0.000292 R-Sq = 99.75% Mean 1.2037 StDev 0.0137 F 2160.54 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.70% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ *) 40 Luận văn tốt nghiệp 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 5.0 6.0 8.0 6 6 6 6 6 1.0533 0.9678 0.8497 0.7512 0.6215 0.5268 0.4232 0.3548 0.3192 0.2830 0.2748 Trường Đại học Cần Thơ 0.0056 0.0209 0.0048 0.0184 0.0111 0.0378 0.0168 0.0177 0.0048 0.0110 0.0140 *) (* (*) (*) (* *) (* *) (* *) (*) + -+ -+ -+ 0.25 0.50 0.75 1.00 Pooled StDev = 0.0171 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 0.0 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 5.0 6.0 8.0 N 6 6 6 6 6 6 Mean 1.20367 1.05333 0.96783 0.84967 0.75117 0.62150 0.52683 0.42317 0.35483 0.31917 0.28300 0.27483 Grouping A B C D E F G H I J K K Anova OD cao ethyl acetate Source Nồng độ Error Total DF 10 55 65 S = 0.02159 Level 0.0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.8 1.0 2.0 3.0 N 6 6 6 6 6 SS 7.193492 0.025627 7.219119 MS 0.719349 0.000466 R-Sq = 99.65% Mean 1.2058 1.1178 1.0223 0.9147 0.7895 0.6563 0.5863 0.4702 0.3275 0.2588 0.2412 StDev 0.0228 0.0120 0.0218 0.0397 0.0231 0.0254 0.0221 0.0216 0.0110 0.0104 0.0066 F 1543.88 R-Sq(adj) = 99.58% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ -*) (* (*) (* (* *) *) (*) (*) *) (* -+ -+ -+ -+ -0.25 0.50 0.75 1.00 Pooled StDev = 0.0216 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 0.0 0.1 N 6 Mean 1.20583 1.11783 P 0.000 Grouping A B 41 Luận văn tốt nghiệp 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.8 1.0 2.0 3.0 6 6 6 6 Trường Đại học Cần Thơ 1.02233 0.91467 0.78950 0.65633 0.58633 0.47017 0.32750 0.25883 0.24117 C D E F G H I J J Anova tương đương mg/mL vitamin C với nồng độ cao hexane Source Nồng độ Error Total DF 45 53 S = 2.890 SS 44855.41 375.95 45231.36 Level 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 8.0 10.0 12.0 MS 5606.93 8.35 N 6 6 6 6 R-Sq = 99.17% Mean 7.072 29.437 47.387 59.707 67.883 79.077 87.860 93.626 96.599 StDev 3.489 5.441 3.732 2.117 2.360 2.322 1.145 0.742 1.474 F 671.13 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.02% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+(*) (*) (*) (*) (*) (*) (*) (*) (*) + -+ -+ -+25 50 75 100 Pooled StDev = 2.890 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 12.0 10.0 8.0 6.0 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 N 6 6 6 6 Mean 96.599 93.626 87.860 79.077 67.883 59.707 47.387 29.437 7.072 Grouping A A B C D E F G H Anova tương đương mg/mL vitamin C với nồng độ cao chloroform Source Nồng độ Error Total DF 10 55 65 S = 2.347 Level 0.5 1.0 1.5 2.0 N 6 6 SS 88258.49 303.07 88561.56 MS 8825.85 5.51 R-Sq = 99.66% Mean 7.39 18.94 34.91 48.22 StDev 0.76 2.83 0.65 2.49 F 1601.69 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.60% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+*) *) (* (*) 42 Luận văn tốt nghiệp 2.5 3.0 3.5 4.0 5.0 6.0 8.0 6 6 6 65.74 78.54 92.55 101.78 106.60 111.49 112.59 Trường Đại học Cần Thơ 1.50 5.10 2.27 2.40 0.65 1.49 1.89 (*) *) (* (*) (* *) (* + -+ -+ -+30 60 90 120 Pooled StDev = 2.35 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 8.0 6.0 5.0 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 N 6 6 6 6 6 Mean 112.59 111.49 106.60 101.78 92.55 78.54 65.74 48.22 34.91 18.94 7.39 Grouping A A B C D E F G H I J Anova tương đương mg/mL vitamin C với nồng độ cao ethyl acetate Source Nồng độ Error Total DF 45 53 S = 3.008 Level 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.8 1.0 2.0 3.0 SS 71323.92 407.21 71731.13 MS 8915.49 9.05 N 6 6 6 6 R-Sq = 99.43% Mean 11.58 26.13 43.04 61.04 70.50 86.19 105.47 114.75 117.14 StDev 2.94 5.36 3.13 3.44 2.99 2.92 1.49 1.41 0.89 F 985.23 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.33% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+-(*) (*) *) *) *) (*) (*) (*) (*) -+ -+ -+ -+-30 60 90 120 Pooled StDev = 3.01 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 3.0 2.0 1.0 0.8 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 N 6 6 6 6 Mean 117.14 114.75 105.47 86.19 70.50 61.04 43.04 26.13 11.58 Grouping A A B C D E F G H 43 Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ Anova hiệu suất loại bỏ gốc tự cao hexane Source Nồng độ Error Total DF 50 59 S = 1.857 Level 0.5 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 6.0 8.0 10.0 12.0 SS 25067.59 172.41 25240.00 MS 2785.29 3.45 N 6 6 6 6 6 R-Sq = 99.32% Mean 7.574 12.641 26.304 37.310 44.873 49.854 56.734 62.100 65.638 66.954 StDev 1.801 1.223 3.823 2.559 0.734 2.052 1.150 1.060 0.440 1.094 F 807.76 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.19% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ (*) (*) (*) (*) (*) (*) *) (*) (*) (*) + -+ -+ -+ 16 32 48 64 Pooled StDev = 1.857 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 12.0 10.0 8.0 6.0 5.0 4.0 3.0 2.0 1.0 0.5 N 6 6 6 6 6 Mean 66.954 65.638 62.100 56.734 49.854 44.873 37.310 26.304 12.641 7.574 Grouping A A B C D E F G H I Anova hiệu suất loại bỏ gốc tự cao chloroform Source Nồng độ Error Total DF 10 55 65 S = 1.653 Level 0.5 1.0 1.5 2.0 2.5 3.0 3.5 4.0 5.0 6.0 8.0 N 6 6 6 6 6 SS 33373.67 150.26 33523.93 MS 3337.37 2.73 R-Sq = 99.55% Mean 12.481 19.573 29.401 37.581 48.358 56.222 64.843 70.522 73.479 76.487 77.168 StDev 1.033 2.447 1.058 1.914 1.250 3.231 1.357 1.398 0.607 0.916 1.097 F 1221.56 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.47% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+ *) (* (* (* *) (*) *) *) (* *) (* + -+ -+ -+ 20 40 60 80 44 Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ Pooled StDev = 1.653 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 8.0 6.0 5.0 4.0 3.5 3.0 2.5 2.0 1.5 1.0 0.5 N 6 6 6 6 6 Mean 77.168 76.487 73.479 70.522 64.843 56.222 48.358 37.581 29.401 19.573 12.481 Grouping A A B C D E F G H I J Anova hiệu suất loại bỏ gốc tự cao ethyl acetate Source Nồng độ Error Total DF 50 59 S = 2.197 Level 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.8 1.0 2.0 3.0 SS 37425.17 241.25 37666.42 MS 4158.35 4.83 N 6 6 6 6 6 R-Sq = 99.36% Mean 7.257 15.203 24.103 34.515 45.556 51.344 61.010 72.828 78.524 79.997 StDev 2.638 1.896 4.110 1.997 2.285 2.489 1.596 1.175 1.075 0.569 F 861.83 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.24% Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+-(*) (*) (*) (*) (*) (*) (* *) (*) (*) -+ -+ -+ -+-20 40 60 80 Pooled StDev = 2.197 Grouping Information Using Fisher Method Nồng độ 3.0 2.0 1.0 0.8 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 N 6 6 6 6 6 Mean 79.997 78.524 72.828 61.010 51.344 45.556 34.515 24.103 15.203 7.257 Grouping A A B C D E F G H I 45 Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ Anova tương đương mg/mL vitamin C nồng độ 0,5 mg/mL cao Source Cao Error Total DF 10 11 S = 2.488 SS 8634.53 61.88 8696.41 MS 8634.53 6.19 R-Sq = 99.29% Level Cloroform Ethyl acetate N 6 Mean 7.387 61.036 F 1395.32 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.22% StDev 0.758 3.435 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+-(-*) (-*) -+ -+ -+ -+-15 30 45 60 Pooled StDev = 2.488 Grouping Information Using Fisher Method Cao Ethyl acetate Cloroform N 6 Mean 61.036 7.387 Grouping A B Anova tương đương mg/mL vitamin C nồng độ mg/mL cao Source Cao Error Total DF 15 17 S = 2.731 SS 34622.65 111.90 34734.55 MS 17311.33 7.46 R-Sq = 99.68% Level Cloroform Ethyl acetate Hexane N 6 Mean 18.94 105.47 7.07 F 2320.54 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.63% StDev 2.83 1.49 3.49 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+*) (*) *) + -+ -+ -+30 60 90 120 Pooled StDev = 2.73 Grouping Information Using Fisher Method Cao Ethyl acetate Cloroform Hexane N 6 Mean 105.47 18.94 7.07 Grouping A B C Anova tương đương mg/mL vitamin C nồng độ mg/mL cao Source Cao Error Total DF 15 17 S = 3.548 SS 24116.0 188.8 24304.8 MS 12058.0 12.6 R-Sq = 99.22% F 957.83 P 0.000 R-Sq(adj) = 99.12% 46 Luận văn tốt nghiệp Level Cloroform Ethyl acetate Hexane N 6 Trường Đại học Cần Thơ Mean 48.22 114.75 29.44 StDev 2.49 1.41 5.44 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev -+ -+ -+ -+ (*-) (*) (*) -+ -+ -+ -+ 50 75 100 125 Pooled StDev = 3.55 Grouping Information Using Fisher Method Cao Ethyl acetate Cloroform Hexane N 6 Mean 114.752 48.221 29.437 Grouping A B C Anova tương đương mg/mL vitamin C nồng độ mg/mL cao Source Cao Error Total DF 15 17 S = 3.686 SS 14651.7 203.8 14855.5 MS 7325.9 13.6 R-Sq = 98.63% Level Cloroform Ethyl acetate Hexane N 6 Mean 78.54 117.14 47.39 F 539.25 P 0.000 R-Sq(adj) = 98.45% StDev 5.10 0.89 3.73 Individual 95% CIs For Mean Based on Pooled StDev + -+ -+ -+(*-) (-*) (-*) + -+ -+ -+60 80 100 120 Pooled StDev = 3.69 Grouping Information Using Fisher Method Cao Ethyl acetate Cloroform Hexane N 6 Mean 117.140 78.536 47.387 Grouping A B C 47 [...]... thấy, cây Ô Rô chứa nhiều hợp chất kháng oxy hóa nhƣ alkaloids, lignans, triterpenoid, các hợp chất phenolic… (Singh et al., 201 1) có khả năng sử dụng trong phòng ngừa và điều trị các bệnh do gốc tự do gây ra Do đó, đề tài Khảo sát khả năng kháng oxy hóa của cao phân đoạn l cây Ô Rô (Acanthus ilicifolius L. ) in vitro đƣợc thực hiện nhằm đánh giá khả năng kháng oxy hóa của cao phân đoạn l Ô Rô và... Thơ 4.2 Khảo sát khả năng kháng oxy hóa tổng số (TAS) của các loại cao phân đoạn l cây Ô Rô in vitro 4.2.1 Khả năng kháng oxy hóa của cao phân đoạn hexane Cao methanol l cây Ô Rô đƣợc tách phân đoạn l n l ợt qua các dung môi hexane, chloroform và ethyl acetate Mục đích của việc tách phân đoạn cao methanol l phân tách các chất có trong cao thành những nhóm chất khác nhau dựa theo độ phân cực của các... bệnh liên quan tới gốc tự do 1.2 Mục tiêu nghiên cứu Mục tiêu của đề tài l đánh giá khả năng kháng oxy hóa của các loại cao phân đoạn l cây Ô Rô Khả năng kháng oxy hóa của các loại cao phân đoạn đƣợc đánh giá in vitro bằng phƣơng pháp TAS (Total Antioxidant Status) 1.3 Nội dung nghiên cứu Tách phân đoạn cao hexane, chloroform và ethyl acetate từ cao methanol l cây Ô Rô Sử dụng phƣơng pháp TAS để khảo. .. dung môi Cao ethyl acetate Hình 3.1: Quy trình tách phân đoạn cao methanol l cây Ô Rô 17 Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ 3.3.2 Khảo sát khả năng kháng oxy hóa tổng số (Total Antioxidant Statsus (TAS) essay) in vitro của cao phân đoạn l Ô Rô TAS đƣợc xác định theo phƣơng pháp của Koracevic et al., (200 0) có hiệu chỉnh nhƣ sau: 10 L cao phân đoạn đƣợc pha loãng trong 490 L dung dịch đệm... chloroform l cao đƣợc tách phân đoạn thứ hai sau cao hexane và dung môi chloroform có độ phân cực cao hơn dung môi hexane Khả năng kháng oxy hóa tổng số của cao chloroform đƣợc tính theo nồng độ vitamin C dựa vào phƣơng trình đƣờng chuẩn Kết quả khảo sát đƣợc trình bày trong Bảng 4.2 Bảng 4.2: Khả năng kháng oxy hóa tổng số của cao chloroform l cây Ô Rô Nồng độ cao chloroform (mg/mL) Hàm l ợng chất kháng oxy. .. hạt trôi nổi vào bờ mới có thể nảy mầm đƣợc Ô Rô có khả năng tái sinh cây chồi khỏe sau khi chặt 2.4.4 Thành phần hóa học và công dụng Một số chất hóa học đã đƣợc xác định có ở cây Ô Rô (Acanthus ilicifolius L. ) nhƣ: hai glycoside cyclolignan mới l ( +)- lyoniresinol 3a-O-βD-galactobyranosyl-(1→ 6)- β-D-glucopyranoside và ( +)- lyoniresinol 2a-O-βD-galactobyranosyl-3a-O-β-D-glucopyranoside (Zhang et al.,... Reactive oxygen species) (Prakash et al., 200 0) Ban đầu oxygen nhận một điện tử tạo ra gốc superoxide (•O2 ), đây l gốc tự do quan trọng nhất của tế bào Từ superoxide nhiều gốc tự do và các phân tử khác của oxy có khả năng phản ứng cao đƣợc tạo ra nhƣ hydroxyl (OH ), hydroperoxyl (HO2 ), peroxyl (ROO ), alkoxyl (RO ), lipid peroxyl (LOO ), H2O2 (Halliwell, 199 1) Các ROS này do có năng l ợng cao, kém... bệnh hợp l 2.4 Đại cƣơng về cây Ô Rô 2.4.1 Khóa phân loại Ngành: Ngọc Lan (Magnoliophyta) L p: Ngọc Lan (Magnoliopsida) Bộ: Húng (Lamiales) Họ: Ô rô (Acanthaceae) Chi: Acanthus Loài: Acanthus ilicifolous L (Phạm Hoàng Hộ, 200 3) 12 Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ 2.4.2 Đặc điểm hình thái Cây Ô Rô (Acanthus ilicifolous L. ) thuộc loại thực vật tiểu mộc, có khi trƣờn, cao từ 0,5–3 m Thân cây tròn,... đến cây Ô Rô đƣợc thực hiện đã chứng minh hoạt động dƣợc l quan trọng của Ô Rô (Singh et al., 200 9) Hợp chất lignan glucosides từ cây Ô Rô (A ilicifolius L. ) đã đƣợc xác định (Kanchanapoom et al., 200 1) Hoạt tính kháng vi khuẩn gây nhiễm trùng da của cây Ô Rô cũng đã đƣợc chứng minh (Chinnavenkataraman et al., 2008; Thirunavukkarasu et al., 201 1) Hoạt động kháng ung thƣ, l m giảm ung bƣớu, loại bỏ... suất l 19,57 ± 2,45% và khi ở nồng độ cao hơn l 8 mg/mL thì cao chloroform cũng chỉ cho hiệu suất cao nhất l 77,17 ± 1,10% 4.2.3 Khả năng kháng oxy hóa của cao phân đoạn ethyl acetate Cao ethyl acetate l cao đƣợc tách phân đoạn thứ ba và dung môi ethyl acetate có độ phân cực cao hơn dung môi hexane và chloroform Khả năng kháng oxy hóa tổng số của cao ethyl acetate cũng đƣợc tính theo nồng độ vitamin ... (TAS) loại cao phân đoạn Ô Rô in vitro 20 4.2.1 Khả kháng oxy hóa cao phân đoạn hexane 20 4.2.2 Khả kháng oxy hóa cao phân đoạn chloroform 22 4.2.3 Khả kháng oxy hóa cao phân đoạn. .. NHIÊN BỘ MÔN SINH HỌC - - L THỊ NGỌC HÀ KHẢO SÁT KHẢ NĂNG KHÁNG OXY HÓA CỦA CAO PHÂN ĐOẠN L CÂY Ô RÔ (Acanthus ilicifolius L. ) IN VITRO LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH: SINH HỌC CÁN... iv Luận văn tốt nghiệp Trường Đại học Cần Thơ TÓM TẮT Đề tài: Khảo sát khả kháng oxy hóa cao phân đoạn Ô Rô (Acanthus ilicifolius L. ) in vitro đƣợc thực nhằm đánh giá kháng oxy hóa Ô Rô Khả kháng