DƯỢC LIỆU CHỨA Alkaloid

• Bộ phận dùng: Herba* / Radix Ephedrae Phần trên mặt đất thân + nhánh nhỏ của các loài: Ephedra sinica Stapff.. • Trước 2004: ephedrin thường phối hợp với cafein trong công thức của nh

khung Dược liệu Hoạt chất

protoalkaloid 1 Ma hoàng ephedrin

khung Dược liệu Hoạt chất quinolin 11 Canhkina quinin, cinchonin

4

Buổi 7/10 Buổi 8/10 Buổi 9/10 Buổi 10/10

Thuốc lá Bình vôi Cựa kh.mạch Ô đầu

Belladon, Coca Vàng đắng Cà phê Kiểm tra (I)

PHẦN II : CÁC DƯỢC LIỆU CHỨA ALKALOID

6

• Bộ phận dùng: Herba* / Radix Ephedrae

Phần trên mặt đất (thân + nhánh nhỏ) của các loài: Ephedra sinica Stapff (Thảo MH, Xuyên MH) Ephedra equisetina Bunge (Mộc tặc MH, Sơn MH)

E intermedia Schrenk et Mayer (Trung gian MH)

• Thu hái :

Đã xuất hiện trong Thần nông bản thảo (28th BC)

8

• Phân bố

- Trung quốc, Trung Á và Liên xô cũ, Ấn độ, Pakistan

- còn được trồng ở Châu Âu, Phi, Mỹ (rất ít hoạt chất)

loài alkaloid ∑ ephedrin

E equisetina 1,0-1,3% 55-75%

E intermedia 0,25-0,9% 40-46% ψ-ephedrin

Hàm lượng thay đổi theo loài / địa lý / mùa thu hái

Phần rễ (Ma hoàng căn, Radix Ephedrae):

CH3

+

NHCH3OH

CH3

NHCH3OH

CH3

+

NHCH3OH

R1 R2 dãy L dãy D

H H L-norephedrin D-norpseudoephedrin

Me H L-ephedrin D-pseudoephedrin

CH CH

CH3

HO N

R1

R2

CH CH

Hadrenalin

 

1 2

3

• Dịch cồn 80 → + NH4OH / CHCl3 → kết tinh / HCl 0,1N

• MH + (NH4OH, Na2CO3) / C6H6 → kết tinh / HCl 0,1N

• MH + HCl 0,1% → OH– / lôi cuốn hơi nước

• MH + OH– → vi thăng hoa → tinh thể ephedrin

Chiết xuất alkaloid

(-) ephedrin (+) pseudoephedrin

Tách ephedrin

Định tính (1)

1 Vi thăng hoa  tinh thể hình kim / hạt

2 Soi vi phẫu / UV  mặt cắt  màu nâu

4 Sắc ký lớp mỏng

- Bản mỏng : Silica gel (G hoặc F254)

- Dịch chấm : alkaloid base (Et2O + EtOH / NH4OH)

- Dung môi : BAW (8 : 2 : 1)

- Hiện màu : TT Ninhydrin / aceton; sấy  màu tím

- Thực hiện // với ephedrin chuẩn

Định tính (3)

18

Định lượng

- Chiết : Dùng cồn + ether / NH4OH  alkaloid base

- Tinh chế : alkaloid base  alk HCl  alk base

- Hoà cắn / H2SO4 0,02 N  định lượng = NaOH 0,02 N

Tác dụng dược lý

Tác dụng cường giao cảm gián tiếp kiểu adrenalin:

- Giãn phế quản, giãn đồng tử, giảm nhu động ruột

- Tăng huyết áp do co mạch ngoại vi Lợi tiểu, ra mồ hôi

Trên thần kinh trung ương

- Ức chế MAO  giảm phân hủy amin nội sinh

 tăng dẫn truyền thần kinh

- Kích thích TKTW  tăng hưng phấn

- Kích thích vỏ não  giảm mệt mỏi, buồn ngủ

20

Công dụng

• Chiết xuất ephedrin  ephedrin.H2SO4, ephedrin.HCl

Trị sung huyết mũi; dị ứng, viêm tai mũi họng

Trị hen suyễn, suy tim mạch (nay ít dùng)

Hạ sốt, trị viêm phế quản, phổi, suyễn, ho đàm

• Chống chỉ định

Cao huyết áp, xơ cứng động mạch, lao phổi

• Chú ý

Ma hoàng căn: hạ HA,  tiết mồ hôi, giãn mạch ngoại vi

Ephedrin → methamphetamin: kích thích TKTW, nghiện

• Trước 2004: ephedrin thường phối hợp với cafein trong

công thức của nhiều “thực phẩm chức năng” giảm béo

• 2/2004 : FDA khuyến cáo không sử dụng ephedrin và các alkaloid của Ma hoàng trong các TPCN

• 4/2004: Ngừng sử dụng ephedrin & Δ’ trong nhóm TPCN

Ghi chú

24

• Thành phần hoá học của hạt

- alkaloid # 1,2% (> 20 chất), colchicin chiếm 1/2 (0,6%)

- alkaloid khác: demecolcin, colchicosid,

- dầu béo (17%), acid benzoic, phytosterol, tannin, đường

• Thành phần hóa học của giò

- alkaloid (< 0,2%); chủ yếu là demecolcin

MeO MeO

O OMe

1 Phương pháp cân

Chiết cồn 95%  dịch cồn  cắn

Hòa cắn vào Na2SO4 20%, lắc với ether để loại tạp

Lắc với CHCl3, thu dịch CHCl3, b’hơi d.môi đến khô

Cân và tính kết quả

2 Phương pháp so màu

Chiết như trên Đun với HCl đđ

O NHAc

H +

H +

Tác dụng dược lý, công dụng

Colchicin

• Rất độc với động vật máu nóng (ăn thịt > ăn cỏ)

• LD50 trên người = 10 mg (# 5 g hạt)

• Ngăn cản tích lũy acid uric trong khớp

→ Trị goute (thống phong), đặc biệt goute cấp tính

Liều: 0,5 mg x 4 lần / ngày, một đợt ≤ 3 ngày

• Còn dùng / bệnh bạch cầu, lympho bào ác tính, khối u

• Có tác dụng thông tiểu, chống viêm

Ở Ấn Độ, Việt Nam còn có cây Ngọt nghẹo (Gloriosa

superba L., Melanthiaceae), hạt chứa nhiều colchicin

32

Ngọt nghẹo, Ngót nghẻo, Ngắc nghẻo (họ Tỏi độc)

- Thuốc lá : Nicotiana tabacum L.,

- Thuốc lào : Nicotiana rustica L., Solanaceae

• Bộ phận dùng : Lá (Folium Nicotianae)

• TPHH chính : alkaloid (nicotin)

- Thuốc lá : khoảng 10% nicotin

- Thuốc lào : khoảng 16% nicotin

• Các alkaloid khác : nor-nicotin, nicotelin, nicotyrin

Nicotin ở thể lỏng, có tính kiềm khá mạnh, có thể cất kéo

N H

N

N Me

N

N

N H

N

N Me

N Me

36

Nicotin và Lá

- Liều nhỏ : kích thích TKTW, TK thực vật

- Liều cao : ức chế, gây liệt TKTW

- Dùng lâu: gây nghiện

• Sử dụng chủ yếu :

- nicotin : bán tổng hợp acid nicotinic, nicotiamid

- lá : công nghiệp thuốc lá, làm thuốc BVTV

• Thường tập trung trong các chi / họ Solanaceae

Atropa, Datura, Hyoscyamus, Scopolia

Solandra, Duboisia, Mandragora,

• Ngoài ra còn có trong họ

Erythroxylaceae, Dioscoreaceae, Convolvulaceae

• Các cây đáng chú ý: Cà độc dược, Belladon, Coca

39

atropin dl - tropic + tropanol

hyoscyamin l - tropic + tropanol

scopolamin = hyoscin l - tropic + scopanol

aposcopolamin acid tropic + tropanol

cocain methyl ecgonin + acid benzoic

cinnamoylcocain methyl ecgonin + acid cinnamic

N

acid tropic

41

N

OH H

COOH N

OH H

N

OH

H O

tropanol = tropin scopanol = scopin ecgonin

OH ax.: tropanol (tropin)

OH eq.: ψ-tropanol (ψ-tropin)

scopolamin = hyoscin cocain

hyoscyamin

atropin

• ở Solanaceae: acid (d, l và dl)-tropic, acid atropic,

acid tiglic, isobutyric, isovalerianic

Các acid hữu cơ (thường tạo ester với các alcol tropic)

43

4 CÀ ÐỘC DƯỢC

Datura metel L Solanaceae

• Đặc điểm thực vật

- Datura metel L forma alba : thân xanh, hoa trắng

- Datura metel L forma violacea : thân tím, hoa đốm tím

- Dạng lai giữa 2 dạng trên

- Còn có loài Datura fastuosa hoa có tràng kép

• Phân bố

Mọc hoang và trồng / châu Á Ở Việt Nam: phổ biến

• Bộ phận dùng : Chủ yếu là lá (Folium Daturae metelis)

còn dùng hoa (Flos) và hạt (Semen)

Datura metel

tràng đơn tràng kép

Datura fastuosa

45 Datura metel L Solanaceae

47

Thành phần hóa học

• Alkaloid

Có trong hầu hết các bộ phận của cây

Chất chính là scopolamin (hyoscin), hyoscyamin

• Hàm lượng alkaloid toàn phần

Chú ý :

Hyoscyamin, scopolamin không bền / acid, kiềm, nhiệt :

- dễ bị thủy phân

hyoscyamin → tropanol scopolamin → scopanol → oscin

- dễ bị racemic hóa (khi chiết xuất)

hyoscyamin → dl-hyoscyamin (atropin) scopolamin → dl-scopolamin (atroscin)

• Các thành phần khác

Cắn alkaloid + HNO3 đđ, BM → khô,

+ 1 ml aceton + KOH / cồn tuyệt đối

→ màu tím hoa cà kém bền

- Chuẩn: scopolamin và atropin

- Phát hiện: thuốc thử Dragendorff





51

Định lượng alkaloid

1 Phương pháp acid-base (DÐVN)

Lá CĐD phải chứa  0,12% alk tính theo hyoscyamin

2 Phương pháp môi trường khan

- Chiết alkaloid, tinh chế, làm khan, bay hơi dung môi

- Hòa vào AcOH băng, chuẩn độ bằng HClO4 0,02 N

- Chỉ thị tím gentian: màu tím → xanh nước biển

H2SO4 5% lắc với

chính xác, thừa

Định lượng alkaloid trong Cà độc dược (acid-base)

53

Tác dụng dược lý và công dụng

• Cà độc dược dùng để

- Chiết alkaloid toàn phần hay chiết atropin, scopolamin

- Chiết cao cồn hay cao nước Thay thế cho Belladon

• Atropin (liệt đối giao cảm) dùng để

- Giảm tiết dịch: dịch vị, dịch ruột, nước miếng, mồ hôi

- Giảm co thắt cơ trơn ruột, dạ dày, bàng quang, phế quản

- Giãn đồng tử, làm tăng nhãn áp (nhãn áp cao không dùng)

• Scopolamin (tương tự như atropin)

- ức chế TKTW rõ; dùng / tiền mê, chữa động kinh, liệt rung

Tác dụng dược lý và công dụng

• Công dụng

- trị ho, hen suyễn,

- chống say sóng, say tàu xe

- giảm đau trong loét dạ dày, tá tràng,

- giảm cơn đau quặn ruột

• Dạng dùng

- hoa hay lá : hút trước khi lên cơn hen

- cao / hoạt chất ∑ : làm thuốc viên

• Chú ý

Ở VN còn có 2 loài “Cà độc dược” di thực từ châu Âu

Datura innoxia Mill Datura stramonium L

57

Atropa belladonna L., Solanaceae

Belladon có nguồn gốc châu Âu

Hiện được trồng nhiều ở châu Âu, Hoa kỳ, Ấn độ

Việt Nam không có cây này

• Bộ phận dùng

Lá, rễ, thân rễ, quả và hạt Thành phần hóa học chính : alkaloid tropanic

59

• Alkaloid chính : (–) hyoscyamin

Khi chiết xuất, hyoscyamin  atropin (racemic)

• Các alkaloid phụ : scopolamin, scopin, atropamin, tropin belladonin, cuscohygrin cùng vài “chất kiềm bay hơi”

• Ngoài ra còn coumarin (scopolin = 7-O-glc-scopoletin)

Phân biệt với Datura, Hyoscyamus : scopolin (±);

• # 15% khoáng (dễ hút ẩm ! khó bảo quản cao belladon)

6

7

scopolin

1 Trên vi phẫu: Phần biểu bì & quanh libe xuất hiện tủa

với TT Bouchardat, với TT phosphomolybdic

2 Phản ứng Vitali-Morin: (+) khi có phần acid tropic

- alk base + HNO3 đđ., BM đến khô

- để nguội, hòa cắn vào KOH / EtOH

-  màu tím Thêm aceton  màu tím sậm hơn

CO

CH2OH

OH

61

3 Định tính scopolin (nhóm coumarin)

- thủy phân dịch chiết cồn của Belladon ( scopoletin)

- chiết scopoletin bằng Et2O hay CHCl3

- làm thử nghiệm huỳnh quang trên giấy lọc

(sau khi + kiềm  huỳnh quang xanh mạnh hơn)

Datura, Hyoscyamus  vàng, vàng lục (do Flavonoid)

Nên phối hợp với SKLM (Si-gel / Bz – EtOAc; 9:1)

(5)

(3) (2)

HCl 1%

lắc với

chính xác, thừa

63

• Phương pháp so màu sau phản ứng Vitali-Morin

(màu tím rất kém bền, ít được áp dụng)

• Phương pháp so màu sau phản ứng với muối Reinecke

(hòa tan tủa màu / aceton, đo quang ở 525 nm)

• Định lượng hóa học không phân biệt được 2 đồng phân ( ̶ ) hyoscyamin** và (±) atropin*

• DĐVN III (2002) không còn chuyên luận về Belladon

Lưu ý

• Của atropin (tác dụng liệt đối giao cảm)

- giảm tiết dịch vị, nước bọt, mồ hôi

- giảm co thắt cơ trơn (ruột, dạ dày, phế quản)

- liều nhỏ kích thích TKTW, liều cao: gây liệt

- giãn đồng tử (soi đáy mắt)

- chống nôn, chữa Parkinson

- chống chỉ định : glaucome, u tuyến tiền liệt

Có 2 loài chủ yếu, đều có nguồn gốc từ Nam Mỹ

• Erythroxylum coca Lam., Erythroxylaceae (Nam Mỹ trồng)

• E novogratanense (Moris) Hieron (Indonesia, VN trồng)

Ở VN, được coi là loài cây cảnh nguy hiểm, cấm trồng

Cây Coca không có chuyên luận trong DĐVN III (2002)

Tránh nhầm lẫn với 2 cây họ Sterculiaceae

- cây Cacao (Theobroma cacao, có theobromin)

- cây Cola (Cola acuminata, có cafein)

Erythroxylum coca E novogratanense

dạng lá lá lớn, mũi lá nhọn; lá nhỏ, mũi lá tù;

cocain 3/4 alkaloid Σ 1/4 alkaloid Σ

trồng ở Nam Mỹ (Peru, Bolivia) châu Á (VN, Indonesia)

hoa vàng

Erythroxylum coca E novogratanense

hoa trắng

cocain (nhiều / loài E coca)

COOMe O

COOMe O

cinnamoyl-cocain (E novogratanense)

ecgonin

N

COOH OH

COOH O

benzoyl-ecgonin

Cocain được xếp vào nhóm thuốc gây ảo giác, ma túy;

cần hết sức cẩn thận khi định tính

• Định tính bằng TT Cobalt thiocyanat (không đặc hiệu)

• Định tính sơ bộ (SKLM // chuẩn cocain)

dung môi 1: CHCl3 – Me2CO – DEA (5 : 4 : 1) dung môi 2: c-hexan – CHCl3 – DEA (5 : 4 : 1) Phát hiện : Dragendorff

• Định tính xác nhận (GC-MS, LC-MS)

71

• Định lượng sơ bộ (ph pháp acid – base)

- chiết bằng Et2O / NH4OH

- chuyển qua dạng muối HCl

- chuyển lại dạng alk base bằng Na2CO3

- chiết bằng CHCl3, cô cắn, hòa nước

- chuẩn độ trực tiếp với HCl 0,1 N / đỏ methyl

• Định lượng khẳng định : LC-MS, GC-MS

• Cocain gây tê niêm mạc, co mạch máu

- dùng làm thuốc gây tê / phẫu thuật TMH, RHM

- làm mất cảm giác đói, khát

• Cocain kích thích TKTW, gây ảo giác

• Lá Coca không được sử dụng thô trong y học

Nam Mỹ thường dùng (nhai) với mục đích “tăng lực”

• Lá Coca (hợp pháp) chỉ được dùng để chiết cocain.HCl

73

• Crack = Là 1 dạng cocain base

Chế bằng cách đun nóng cocain.HCl / dd NaHCO3

Dùng bằng cách hút (với thuốc lá) hay hít bột (mũi)

• Snow = Là cocain.HCl

Crack và Snow thường pha cafein, mannitol, glucose

Đôi khi thêm ketamin, lignocain, procain (base hay HCl)

Trên thực tế, Cocain bất hợp pháp chủ yếu được sản xuất

và tiêu thụ dưới dạng Crack, Snow

76

Cinchona succirubra (đỏ) Cinchona calisaya (vàng)

Đặc điểm thực vật

• Mô tả cây Cinchona

- Cây gỗ, cao 15–20 m

- Lá mọc đối, 2 lá kèm rụng sớm, phiến nguyên, trứng

- Hoa mẫu 5, xim hoặc chùm xim, trắng hoặc hồng,

mùi thơm, tràng hình ống, bầu hạ 2 ô

- Quả nang nứt 2 mảnh dính lại trên đầu, hạt có cánh

78

Đặc điểm thực vật

• Phân bố cây Cinchona

- Nguồn gốc: Nam Mỹ: Peru, Columbia, Bolivia, Ecuador

- Hiện trồng ở Guatemala, Bolivia, Mehico, Tanzania,

Cameroon, Congo, Kenia, Ấn độ, Indonesia, Srilanka

- Việt nam: Di linh (Lâm đồng) và một số ít ở núi Ba vì

- Các nước cung cấp chính: Indonesia và Congo

Quả và hoa Cinchona succirubra

Bộ phận dùng

Vỏ thân, vỏ cành, vỏ rễ (Cortex Cinchonae)

Thu từ những cây 5-10 năm tuổi

Alkaloid cao nhất trong vỏ khi cây 5 năm tuổi

Thu hoạch cả vỏ rễ (1/2 đến 1/3 vỏ thân, cành)

Bột vỏ Cinchona

- sợi có vách dày

Hàm lượng alkaloid trong vỏ thân các loài Cinchona

1 Các alkaloid (DĐVN III : alk Σ ≥ 6%)

Thành phần hóa học (1)

R1.1 alkaloid quinolin*

Thành phần hóa học (2)

1 Các alkaloid

exo-methylen

86

1.2 Alkaloid Indol (ít quan trọng)

- cincholamin, quinamin, cinchophyllin

2 Các thành phần khác

• acid quinic* 

• saponin triterpen: nhóm ursan và olean gồm:

- quinovin (acid quinovic-3-quinovosid) (ursan)

- acid cinchonic-3-quinovosid (olean)

• tanin catechic, acid quinotanic (3–5% trong vỏ thân)

khi oxy hoá sẽ tạo ra phlobaphen (đỏ tanin)

OH OH

COOH

Thành phần hóa học (3)

Chiết xuất

- Bột vỏ Canhkina + (nước vôi + NaOH 5%)*, ủ 12 h**

- Loại bỏ nước thừa (BM đến tơi thành bột)

- Chiết bằng benzen***  thu dịch alkaloid base

- + H2SO4 5% / 60ºC  thu dịch alkaloid acid

- + NH4OH (pH 6,5), cô  quinin sulfat , để nguội, lạnh

- Tinh chế: hòa / nước sôi + C*, lọc  kết tinh lại / nước

88

1 Thử nghiệm Grahé *

Đốt bột Canhkina → khói nâu tím → giọt tím

Hoà / cồn 70% → UV → huỳnh quang xanh (cinchonin)

2 Thử nghiệm phát huỳnh quang*

Muối của quinin / quinidin + oxy-acid → h.quang xanh + acid halogenic  mất huỳnh quang xanh

(HCl, nước brom, nước clor)

Định tính (1)

3 Phản ứng thaleoquinin*

a Dịch chiết canhkina / H2SO4 10% + nước Br2

→ hết huỳnh quang xanh (dd có màu vàng nhạt)

b + NH4OH đđ → lục

4 Phản ứng erythroquinin*

a Dịch chiết canhkina / H2SO4 10% + nước Br2

→ hết huỳnh quang xanh, lắc thêm 20 giây,

Định tính (2)

90

5 Định tính bằng ph.pháp sắc ký

• SKLM

- Chất hấp phụ: silica gel (F 254, Merck)

- Dung môi: DCM – Cf – Et2O – DEA (7 : 4 : 3 : 1)

• SK giấy (xưa)

- Pha tĩnh: formamid Pha động: CHCl3-Toluen (6:4)

- Chấm // chất chuẩn, hiện màu: Dragendorff

Định tính (3)

1 Phương pháp Acid-base (1a)

- Đun d.liệu với acid loãng (thủy phân tanat alkaloid)

- Kiềm hóa = NaOH 30%

- Chiết = (Et2O + CHCl3) + 5 g gôm Tragacan

- bay hơi → cắn Hòa cắn / cồn 96% + nước

- Ðịnh lượng = d.dịch HCl 0,1 N / đỏ methyl

- Tính kết quả; M trung bình của Quinin và Cinchonin

- Vỏ Canhkina phải có  6% alkaloid toàn phần

Định lượng (1a)