HƯỚNG DẪN PHA CHẾ VÀ KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNG MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY VI SINH VẬT

Các thuật ngữ  Lô môi trường: là đơn vị đồng nhất, có thể truy nguyên đầy đủ số lượng từ nguyên liệu, bán thành phẩm, thành phẩm mà sản phẩm này được sản xuất trong điều kiện được kiểm

HƯỚNG DẪN PHA CHẾ VÀ KIỂM SOÁT CHẤT LƯỢNG MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY

VI SINH VẬT

ISO/ST 11133 -1&2: Microbiology of food and

animal feeding stuffs – Guidelines on preparation

and production of culture madia

Hướng dẫn pha chế và đảm bảo chất lượng môi trường nuôi cấy vi sinh

vật dùng cho phòng thí nghiệm

Các thuật ngữ

 Lô môi trường: là đơn vị đồng nhất, có thể truy nguyên đầy đủ số lượng từ nguyên liệu, bán thành phẩm, thành phẩm mà sản phẩm này được sản xuất trong điều kiện được

kiểm soát và đạt chất lượng

Thuật ngữ

 Môi trường sẵn sàng sử dụng (ready to use)

– Môi trường hoàn chỉnh sẵn sàng sử dụng

– Môi trường hoàn chỉnh phải đun tan, đổ đĩa hay phân phối vào đơn vị sử dụng

– Đun tan, bổ sung các một vài thành phần khác

Kiểm soát chất lượng môi trường

 Hồ sơ lưu trữ tại PTN

– Hồ sơ từ nhà sản xuất

của nhà sản xuất

Lưu trữ

 Khi sử dụng môi trường thương mại phải tuân thủ theo hướng dẫn của nhà sản xuất về

– Điều kiện lưu trữ

– Ngày hết hạn sử dụng

– Hướng dẫn sử dụng

Môi trường tổng hợp dạng bột khô

 Tuân thủ nguyên tắc “vào trước ra trước” (first in - first out)

 Kiểm tra trước khi mở hộp

 Sự biến đổi chất lượng sau khi mở hộp

Bảo quản môi trường sau pha chế

 Bảo quản tránh sự biến đổi chất lượng

– Tránh ánh sáng

– Bảo quản trong tủ mát 2-8oC

 Môi trường có chất không bền: sử dung

trong ngày

 Đánh giá thời hạn bảo quản thông qua việc kiểm soát chất lượng

Pha chế môi trường tại PTN

 Pha chế môi trường đúng là bước đầu quan trọng trong việc cho kết quả phân tích chính xác

 Tuân thủ theo hướng dẫn đảm bảo chất lượng của PTN và của nhà sản xuất

 Lưu hồ sơ tất cả các dữ liệu liên quan:khối

lượng/thể tích, pH, ngày, điều kiện thanh trùng

 Môi trường pha chế từ các thành phần riêng lẻ: thực hiện chính xác theo công thức, lưu HS tất cả các dữ liệu liên quan, đánh số xác nhận

Pha chế tại PTN

– Hòa tan càn nhanh càn tốt

– Môi trường agar: ngâm trước khi đun tan

– Chỉnh pH trước khi thanh trùng

– Đo kiểm tra sau khi thanh trùng và hòan chỉnh môi trường

– Đo pH sau khi làm nguội đến 25oC

– Chỉnh pH bằng NaOH 1N (40g/lít); hoặc HCl 1N (36,5g/l)

– Không chứa quá 80% thể bình chứa

Khử trùng môi trường

 Lọc khử trùng

Kiểm tra sau khi hoàn chỉnh

 Môi trường sau khi pha chế hòan chỉnh phải kiểm tra

Chuẩn bị chất bổ sung

 Chất bổ sung thường là các chất có độc tính cao

 Còn họat tính khi trong hạn sử dụng

 Không tái đông lạnh nhiều lần

Đun chảy môi trường

 Đun chảy môi trường agar bằng cách đun

cách thủy

 Ngừng đun ngay khi môi trường đã tan chảy

 Làm nguội ngay trong bể điều nhiệt 45-50oC

 Những môi trường đổ trực tiếp vào mẫu phải được giữ ở 44-47oC

tan chảy

Khử không khí trong môi trường

 Đun cách thủy trong nước sôi khoảng 15

phút, nới lỏng nắp ống

 Vặn chặt nắp và làm lạnh nhanh đến nhiệt độ

sử dụng

Thêm chất bổ sung

 Chỉ thêm chất bổ sung khi môi trường nguội đến 45-50oC

trước khi cho vào môi trường

 Thao tác nhanh để tránh MT agar vón cục

Chuẩn bị và bảo quản môi trường trên đĩa Petri

 Độ dày môi trường: ít nhất 3mm

 Phải đổ dày hơn nếu đĩa được nuôi ủ ≥ 48h hay ≥

40 o C

 Dán nhãn và ghi tên MT, ngày pha chế/hết hạn

thành phần môi trường thay đổi, ảnh hưởng đến sự phát triển của VSV Các yếu tố ảnh hưởng đến độ ẩm môi

trường như: loại tủ ấm, độ ẩm không khí, áp suất trong tủ,

Bảo quản đĩa môi trường

 Bảo quản trong tủ mát 2-8oC

 Tránh ánh sáng

 Bảo quản trong các túi nylon sẽ lâu hơn

 Không làm khô mặt đĩa trước khi bảo quản trong tủ lạnh

Thời hạn bảo quản môi trường sau

Thời hạn bảo quản môi trường sau

pha chế

Môi trường rắn: Chai Tủ lạnh 2 – 8 0 c 6 tháng

Ống nghiệm Tủ lạnh 2 – 8 0 c 2 tháng

Đĩa Tủ lạnh 2 – 8 0 c 1 tuần hay thứ hai đầu

tuần sau Môi trường lỏng

và dung dịch

phaloãng:

Chai 400ml Tủ lạnh 2 – 8 0 c 2 tháng Chai 1000ml Nhiệt độ phòng 1 tháng Ống nghiệm Tủ lạnh 2 – 8 0 c 1 tuần

Chủng VSV trong kiểm soát chất

lượng môi trường

 Mỗi môi trường phải sử dụng các chủng VSV sau

Kiểm soát chất lượng môi trường

 Theo yêu cầu ISO 11133

– Môi trường ready to use:

– Pha chế từ MT khô tổng hợp

lượng hay bán định lượng

Kiểm soát chất lượng môi trường

 Pha chế từ MT khô tổng hợp (tt)

– MT không chứa chất chỉ thị hay nhân tố chọn lọc:

sử dụng 1 chủng VSV dương tính

– MT chứa chất chỉ thị hay nhân tố chọn lọc: sử

dụng ít nhất 1 chủng có biểu hiện dương tính và 1 chủng có biểu hiện âm tính

Một số biểu hiện bất thường của MT

Một số biểu hiện bất thường của MT

Kết tủa - Quá nhiệt

MT bị ức chế/VSV

phát triển kém

Tính chọn lọc kém - Quá nhiệt

Một số biểu hiện bất thường của MT

Bị nhiễm VSV Khử trùng không đúng

cách

Kỹ thuật khử trùng không đạt yêu cầu

Chất bổ sung bị nhiễm