BƯỚC đằu NGHIÊN cứu vị THUÓC tía tô và ĐỊNH HƯỚNG sử DỤNG TRONG điềư TRỊ

Tác dụng chống dị ứng của luteolin có trong các loài Perilla được nghiên cứu trên các mô hình dị ứng thực nghiệm trên động vật gậm nhấm.. - Dịch chiết nước của Periỉỉaỷrutescens có tác d

: Bịĩ môn Dttợc hoe Cữ truyền

- Trường Đợi học Dược Hà Nội Việỉì Dirợc Liệu I 8/2008 - 5/20Ỡ9

LỜI CẢM ƠN

Trong cả quá trinh dài làm đề tài, tôi đã nhận được sự giúp đờ tận tình của các thẩy cô giáo, các anh chị, bạn bè vả gia đình về rất nhiều mặt, không chi là về vật chất mà còn là sự động viên to lớn về tinh thần

Tôi xin được bảy tỏ lòng biết cm sâu sắc tới PGS.TS Phùng Hòa Bình, người đã trực tiếp hướng đẫn và tâm huyết với tôi, tạo điều kiện cho tôi được học hỏi, sảng tạo Thầy đã dạy tôi nhiều điều quý giá vượt ngoài những kiến thức thuộc phạm trù sách vợ, tỏi vô cùng trân trọng khoảng thời gian được làm việc với thầy

Tôi xin chân thành cảm ơn :

PGS.TS Vủ Xuân Phương — Viện Sinh Thái và Tài Nguyên Sinh Vật DS Nguyễn Kim Phượng - Vỉện Dược liệu TS Nguyền Bích Thu - Viện Dược liệu TS Vù Đặng Hoàng - Bộ môn Hóa phân tích và kiểm nghiệm Th.s Phạm Hà Thanh Tùng - Bộ môn Thực vật Các anh chị kỹ thuật viẽn bộ môn Dược học cổ truyền, bộ môn Thực vật đã tạo diều kiện và giúp đờ tôi rất nhĩệt tình để tôi có thể hoàn thành đề tài này

Xin chân thành cảm ơn

Hà Nội, ngày 15 tháng 5 năm 2009 Sinh viên Trần Thị Phương Liê

TDLTT ; Tinh dầu lá tía tô

Thòi gian thực hiện

SD : độ lệch chuẩnSKLM ; Sắc ký lóp mỏng

%T : phần trăm tăngt° : Nhiệt độ

X : Giá trị trung bìn

hMỤC LỤC

TÀI LIỆU THAM KHÁOPHỤ LỤC

íĐẶT VÁN ĐÈ

Tía tô là cây có sức sống mãnh liệt, mọc hoang dại và được trồng rộng rãi ở Việt Nam nói riêng, cùng như ở châu Á nói chung Tía tô có giá trị sử dụng cao Trước hết nó là một cây gia vị phổ biến được sử dựng hàng ngày, do đó tính an toàn của tía tỏ một phần được kiểm chứng qua kinh nghiệm dân gian Hơn nữa, tía tô còn là một VỊ thuốc quý, được nền y học cổ truyền khai thác ở nhiều công dụng, điển hình là ; phát tán phong hàn, chừa động thai, chữa ngộ độc thức ãn

Hiện nay thị trường thuốc đang khan hiếm chế phẩm đông y có tác dụng hạ sốt hiệu quả trong khi nhu cầu sử dụng rất lớn Nhu cầu đó hoàn toàn có thể đáp ủng nhò thế mạnh của y học cồ truyền

vì có rất nhiều phương thuốc hạ sốt hiệu lực tốt

Dựa trên kinh nghiệm và lý luận của y học cổ truyền, chủng tôi phỏng đoán rang cỏ thể sử dụng tía tô nhu một vị thuốc hạ sốt an toàn, hiệu lực Tuy nhiên, các công trình nghiên cứu đã công

bố trên Việt Nam và trên thế giới chưa đề cập đến bằng chứng khoa học của tác đụng này mà chủ yếu tập trung vào tác đụng chống dị ứng, chống ung thư Do vậy chủng tôi tiến hành đề tài “Bướe đầu nghiên cứu vị thuốc tía tỏ và định hướng sừ dụng trong điều trí” để góp phần tìm hiểu giá trị sứ dụng của tía tô và có những nghiên cửu đầy đủ hơn Nộỉ dung đề tài gồm ;

1. về hóa học : nghiên cứu thăm dò thành phần hóa học của lá tía tô, tinh dầu tía tỏ

2. về tác dụng dược lý : nghiên cứu thăm dò tác dụng hạ sốt; tác dụng kháng histamin và ảnh hưởng trên cơ trơn tử cung

PHẦN 1 TỐNG QUAN1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT [11]

1.1.1 Đặc điếm thực vật chi Perilla

- Cỏ một năm, mọc đứng, có tinh dầu thơm

- Thân vuông, cỏ lông đơn bào và lông đa bào

- Lá mọc đối, mép xẻ răng cưa

5

5

- Cụm hoa dạng chùm, ở đỉnh càtih, mỗi đốt mang 2 hoa mọc đối Lá bắc hình trứng hay gần tròn, tồn tại Hoa có cuổng Đài hình chuồng, có 10 gân dọc, 2 môi : môi trên 3 thùy; môi dưới 2 thùy nhọn Tràng hơi thò khỏi đài, 2 môi : môi trên 2 thùy xẻ nông; môi dưới 3 thùy giừa lớn hơn

2 thùy bên Nhị 4, hướng thăng; 2 nhị dưới dài hơn 2 nhị trẽn; bao phấn 2 ồ song song

- Quả gần hình cầu, có gân mạng lưới

1.1.2 Đặc điếm thực vật loài Perilla friitescens L.

- Cỏ mọc đứng, cao 50-150 cm

- Thân vuông, màu xanh hay tím nhạt, có lỏng đa bào dài và dày

- Lá hình trứng rộng hay gần tròn, ca 5-ĩ 5 X 3-10 cm, chóp ĩá nhọn, £ốc tù, tròn hay hình nêm, mép xẻ răng cua to và sâu, 2 mặt màu xanh hay tím nhạt, có lông đa bào dày; gân bẽn 7-8 đôi; cuống lá dài 2-5 cm

- Cụm hoa dạng chùm ở đỉnh cành, dài 5-20 cm, mỗi đốt 2 hoa mọc đốỉ Lá bắc hình trứng, dài hơn hoa? có lông đa bào dài Hoa có cuống dài 1-3 inm Đài hình chuông, cỡ 3-4 X 2-2.5 mm, có lông đa bào và điểm tuyến ở phía ngoài, có vòng lông ở họng, 2 môi : môi trên 3 thùy ngẳn; môi dưới 2 thủy nhọn vả dải hơn môi trên, đài quả đồng trưởng cỡ 7-10 X 3,5-4.5 mm Tràng màu tím nhạt, dài 5-6 mm, có lông ở phía ngoài, có vòng lông ở họng, 2 inôi : môi trên 2 thụy xẻ nông; môi dưới 3 thùy với tlìùy giữa lợn

6

6

không có khuyết ở đỉnh, Nhị 4, thụt trong ống tràng, 2 nhị dưới dài hơn 2 nhị trên; bao phấn 2 ô song song Bầu nhãn; vòi nhụy xẻ 2 thùy ở đĩnh Đĩa mật có thùy trước cao hơn các thùy khác.

- Quá gần hình cầu, đường kính 1-1.5 mm, có gân mạng lưới, màu nâu đậm

Hinh 1.2 ; Quả

Perilla

fruiescens[26]

Hỉnh 1.1: Perillafrutescen L.[27]

1.1.3 Đậc điểm thực vật các thử cùa loài Perilla frutescens L.

♦> P frutescens var acuta (Tía tô nhọn)

Khác thứ chuẩn bởi thân cỏ lông tơ và lông đa bào thưa hơn; lá có kích thước nhỏ hơn (4-7 X 2.5-5 cm), mép xẻ răng cưa nông và đài quả có kích thước nhỏ hcrn (cờ 4-5 mm)

♦> p, frutescerrs var crispa (Tía tô rúm)

Khác thứ chuân bởi thân gần như nhãn hay chỉ có lông rải rác ở phần non; ỉá màu tím, xẻ

răng cưa sâu, rúm và thường biến thái hơn; đài quả cũng có kích thước nhỏ hợn,

7

7

Hình 1.3: p

frutescens \&v.acuta[2%] Hình 1.4: p frutescem Vâr.crỉspaị29]

1.2PHÂN Bó, SINH THÁI [10],[ 11]

- Chi Perilla L có một loài ở châu Á Nguồn gốc có thể từ vùng núi của Án Độ và Trung Quốc,

sau được nhân trồng khắp nơi ở châu lục Cây cũng được trọng à vùng có khí hậu ôn hòa của châu

Âu ở Mỹ vá Ukrain còn thấy cây mọc hoang dại

- Tía tô lả cây ua sáng và ưa ấm; thích nghi với những vủng khí hậu ôn hòa, nhiệt độ trung bình năm từ 18 đến 23°c ở những vùng có khí hậu nhiệt đới điển hình nhu ở các tỉnh phía nam, cây thường chỉ trồng được vào mùa mua Tía tô ra hoa kết quả nhiều Sau khi quả già, cây tàn lụi, hạt giống phát tán ra xung quanh, đến mùa mua ẩm năm sau mởi nảy mầm Tuy nhiện, dọ nhu cầu sử dụng rau gia vị nhiều, nên ở vùng ngoại thành Hà Nội, người ta có thể trồng tía tô gần như quanh nãm Ờ Hàn Quốc, Nhật Bản và Trung Quốc, tía tô được trồng đến hàng chực ngán hecta để thu hoạch hạt cất tinh dầu

1.3Bộ PHẬN DÙNG [4],[ 10]

8

8

- Lá (tô diệp), thân (tô ngạnh) và quả (tô tử)

9

9

" Các bộ phận được thu hái về, phơi trong râm mát hay sấy nhẹ cho khô để giữ nguyên mùi vị

+ Shao Shuping, Zhu Shasyi đã phân tích thành phần tinh dầu trong một sô loại (type) tía tô như sau :

• Loại hoa trắng, thân xanh có thành phần chủ yểu là perillaceton (pẹrillạcetọn type)

• Loại hoa đỏ và cây đô có thành phần chủ yếu là perillaldehyd (periílaldehyd type)

• Loại hoa đỏ hồng, lá mặt trước màu xanh, mặt sau mảu đỏ, xanh hoặc lá xanh cành đỏ xanh có thành phần chủ yếu là dillapiol hoặc myristicỉn (phenylpropanoid type)

= Flavonoid: apigenin và luteolin [22]

OH

- Saponin: gồm 9 acid triterpenic trong đó

10

10

ŨH

6 acid thuộc nhóm ursan là acid ursolic, acid pomolic, acid 3-epicorosolic, acid tormentic, acid hyptadienic và 3 acid thuộc nhóm olean là acid oleanolic, acid augustic, acid 3-epimaslinic [15].1.4.2 Hạt [10]

Hạt Perỉlỉa frutescens chứa:

- Nước (6.3%), Nitơ (10.28%), sợi (10.28%), tro (4,64%), acid nicotinic

- Protein (23.12%) gồm : arginirì, histidin, leucin, isoleucỉn, lysine, methionin, phenylalanine, threonin, valin

- Dầu béo (45.07%) gồm :acid béo chưa no 3.5-7.6%, oleic 3.9-13.8%, linoleic 33.6-59.4%, acid linoleic 23.3-49%, Các đặc trưng của dầu hạt tía tô thường là : tỷ trọng 15° c là 0.930 - 0.937 ; chỉ số acid 1 - 6 ; chỉ số xà phòng 189 - 197 ; chĩ số iod 193 - 208 ; vả phần không xà phòng hóa 0.6 -

1.3%

11

11

- Các chất có hoạt tính chong ôxi hóa

1.5TÁC DUNG Dươc LÝ

1.5.1 Tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm [10]

~ Tinh dầu tía tô có tác dụng kháng khuẩn in vitro đổi với cácvi sinh vật

sau đây theo thử tự hoạt tính giảin: tp cầu vảng( Staphylococcus aureus ),

trực khuẩn lỵ Flexner, trực khuẩn lao (Mycobacterium tuberculosis), Bacillus mycoides, Bacillus subtilis, liên cầu tan máu, trực khuẩn lỵ Shiga, SalmoneLla typhi, Proteus vuỉgaris, Candida albicans, trực khuân coli, phê cầu Đồng thời, nó có tác dụng diệt amip lỵ vói nồng độ ức chế thấp nhất là 1/1.280

- Dịch chiết methanol có tác dụng kháng nấm Candida ablieans Một hoạt chất kháng khuẳn và kháng nấm là perillalđehyd citral

1.5.2 Tác dụng chống di ứng.

- Tác dụng chống dị ứng của tía tỏ là nhờ sự có mặt của các hoạt chất: luteolin[l 0],[13],[17],[22], apigenin [22], acid rosmarỉnic [12], [17],

[21],[24]

- Tía tô có tác dụng ức chế co thắt cơ trơn ruột gây bởỉ histamin và acetylcholin [10]

- Dầu hạt tía tô làm giảm các triệu chứng hen [22]

12

12

Dịch chiết tía tỏ có tác dụng phòng ngừa và điều trị dị ứng theo mùa [12],[18],[21].

13

13

Tác dụng chống dị ứng của luteolin có trong các loài Perilla được nghiên cứu trên các mô hình dị ứng thực nghiệm trên động vật gậm nhấm Luteolin ức chế phản ứng da gồm 2 giai đoạn ( giai đoạn phản ửng tức thì, và giai đoạn phản ứng chậm ), trung gian bởi kháng thế IgE ở chuột nhắt trắng Tuy vậy, luteolin không ảnh hưởng đến phản ứng da gây bởi yếu tố hoạt hóa tiểu cầu Trong một nghiên cứu in vitro, luteolin ứcr-ehế sự giải phóng histamỉn trung gian bởi IgE từ dưỡng bảo tủy xương và dưỡng bào phúc mạc chuột cống trắng nuôi cấy Luteolin cũng ức chế sự sản sinh TNF-a ( yếu tố hoại tử u-a)

và IL 6 (interleukin- 6) từ dường bào tủy xương chuột cống trắng nuôi cấy [ 10]

- Dịch chiết nước của Periỉỉaỷrutescens có tác dụng ngăn chặn phản ứng mất màu dâ Hoạt chất

được xác định ỉà acid rosmarinic và một phần do các họp chất cao phân tử Nghiên cứu tác đụng ngăn chặn phản ứng mất màu da gây ra trẽn tai chuột của dịch chiết nước Perilla ữuteseens thấy ở các ỉiều 125, 250, 500, 1000 mg/kg đều có tác dụng, Liều cỏ tác dụng tốt nhất là 500 mg/kg, ở liều này dịch chiết Perilla írutescens tác dụng tốt hơn tranilast ] 50 mg/kg (một loại thuốc chống

Bảng 1.1: Tác dụng ức chế TPA- gây viêm của các họp chất 1-9 và các chất tham chiếu trên chuột.f

Hợp chât

Tác dụng ức chê viê

m

s

ID50 (mg/chuột) I.R (%)

3 Acid 3-epicorosolic

1.5.4 Tác dụng ức chế sự phát triến của tế bào ung thư,

- Acid tormentic, một trong số 9 acid triterpenic được phân lập và xác định từ dịch chiết cồn của Perilla frutescens , có tác dụng ức chế mạnh sự phát triển ung thư trong một thử nghiệm in vivo trẽn chuột dùng 7,12- dimethylbenz(tf) anthracene (DMBA) là chất gây ung thư và TPA là

Gíĩỉ chú :

1.5*5 Các tác dụng khác.

- Tía tô có tác dụng gây trấn tĩnh, hạ nhiệt, lảm toát mồ hôi [10],

- Dịch chiết nước lá tía tô giảm đáng kể tình trạng protein niệu và sự láng đọng IgA ở cầu thận [19]

- Dịch

chiết nirởc lá tía tô có tác dụng chống HIV [23],

-Dầu hạt tía tô phòng ngừa tãng huyết áp [25].

- Dịch

chiết nưóc của lá tía tò có tác dụng trên đường huyết Khi nghiên

cứu tác dụng của dịch chiết nước lá Perilla trên chuyển hóaglucose ở

chuột bình thường và chuột sơ sinh bị gây bệnh đái tháo đường bởi streptozocin ( neonatal streptozocỉrL-ĩnduced diabetic - NSZ ), động vật thí nghiệm điển hình cho đái tháo đường typ 2,

thay rang : dịch chiết nước lá Periỉla làm giảm nồng độ glueose trong máu ở cả chuột bình thường

và chuột NSZ sau khi cho chuột uống glucose trong test dung nạp glucose sau khi ăn (oral glucose toỉerance test - OGTT ) Nồng độ insuiin ở cả 2 loại chuột trên đều không thay đổi trong OGTT Bcết quả này thể hiện dịch chiết nước của lá Perilla cải thiện khả năng dung nạp glucose, nguyên nhân một phần do giảm hấp thu glucose tại ruột non [20]

1.6.1 Tính vị : vị cay, tính ấm

1.6.2 Quy kinh : phế và tỳ

1.6.3 Công năng : phát tán phong hàn,hành khí, hóa trung

1.6.4 Công dung

- Lá tía tô đuợÇ dùng chữa cảm mạo, không có mồ hôi, phong hàn, ho nhiều đờm, ngạt mũi, nhức đầu, tiêu hóa kém, nôn mửa, đau bụng, động thai, ngộ độc Cành tía tỏ có tác dụng như lá nhung kém hơn Hạt tía tô chữa ho có đờm, hen suyễn, tê thấp Kiêng kị : ho khan, ho ra máu không đùng.

- Theo y học cổ truyền của Trung Quốc, lá tía tô có tác dụng làm toát mồ hôi và trừ hàn, điều hòa chức năng dạ dày, chữa cảm hàn vói ho và nôn, nôn do thai nghén, tiêu chảy, ngộ độc cua cá, Liều 5 — 9g

- Thân tía tô điều hòa lưu thông khí, làm giảm rốĩ loạn chức năng dạ dày, giảm đau, phòng ngừa sẩy thai Chủ trị : tức thở ở ngực và đau vùng thượng vị với cảm giác nóng, nôn, đe dọa sấy thai* Liêu 5 - 9g

- Quả tía tô íàm giảm khó thở và giảm ho, trừ đờm, làm thư giãn ruột Chu trị : ho và khó thở do

ứ trệ đờin, Táo bón Liều 3 - 9g

- Ở Án Độ, tía tò được coi như có tác dụng an thần, chống co thát, làm toát mồ hỏi, chữa nhức đầu và rối loạn hoạt động tử cung, ơ Nhật Bản, tía tô cũng được dùng ỉàm thuốc ra mồ hôi, giải biểu, hành khí, giải độc tôm cá

1.6.5 Bài thuốc có tía tồ.

o

Chữa cảm sốt, nhức đầu, ngạt mui, nhức mỏi

o Viên cảm Hương tô : trong 1 viên có tía tô 0.263g, hương phụ 0.187g, bạch chỉ 0.150g, trần

bì 0.075g, cam thảo 0.075g> o Tía tô 15g ; kinh giới, hương nhu, VÖ quýt, cúc tần, mỗi vị 10g ; gừng tươi 3 miếng, sắc uống Neu nhức đầu, thêm mạn kinh tử 12g, bạch chỉ 8g

o Tía tỏ 20g, bạc hà 40g; cối xay, lá tre, kinh giới, mỗi vị 20g Dạng thuốc bột hoặc viên Ngày 2-3

lần, mỗi lần 3 — 4g.o Tía tô, sinh địa, mỗi vị 12g ; khương hoạt 8g? xuyên khung óg ; độc hoạt, hương phụ, phòng phong, mỗi vị 4g ; thăng ma, cát căn mỗi vị 3g; cam thảo 2g, gừng sống 3 lát, hành trắng một túm sắc uống

Chữa trúng độc do ăn cua cá, trưởng đầy

o Lá tía tô 1 Og sắc uống nóng, hoăc lá tươi giã vắt lấy nước uống, o Lá tía tồ lOg, sinh khương 8g, sinh cam thảo 4g, nước 600 mí sắc còn 200 ml, chia 3 lần uống lúc nóng

Chữa phụ nữ có thai đau bụng7 động thai, o Cành tía tô, cát căn,

mỗi vị 12g sắc uống

o Tía tô 8g, đảng sâm 16g, bạch truật 12g, đại phúc bì, đương quy, mỗi vị 8g, xuyẽn khung 6g; cam thảo, thông bạchy mỗi vị 4g sác uống trong ngày

o Lá tía tô, sẳc uổng với thuốc bột : hương phụ, sa nhân (lượng bằng nhau) mỗi lần 4 — 8g

Chữa dị ứng, mẩn ngửa, mày đay

0 TÔ diệp 16g, kinh giới lOg, gừng tươi 8g, cam thảo 6g sắc khoảng 15 phút, uống lúc nóng,

o Lá tía tô 1 nắm giã vắt lấy nước cốt uống? bã xát vào chỗ ngứa Kiêng dầm nước và ra gió.Chữa viẽm cầu thận cấp tính

Lá tía tô !2g ; cam thảo đất, bông mã đề, mỗi vị 20g ; cát căn, hành tăm, mỗi vị 12g ; lá chanh 1 Og, lả tre

&g, gừng tươi 2g sắc uống ngày một thang

- Tủ sấy Memmert, cân xác định độ ẩm Precisa XM 120, cân phản tích.

- Bộ dụng cụ đỉnh lượng tinh dầu, bộ dụng cụ đo hàm ẩm bằng phương pháp đung môi, bình gạn, phễu lọc, ống nghiệm

> Hóa chất

20

20

- Các dung môi : methanol, hexan, ethylacetat, acid formic tiêu chuẩn phân tích.

- Các dung môi dùng trong sắc ký khí khối phổ (Merk)

- Các thuôc thử dùng trong phân tích

PHƯƠNG PHÁP NGHIỀN cứu

2.1.3.1 Xác đinh ten khoa hoe của dưoc liêu

- Định tính các nhóm chất bằng thuốc thử chung vả bằng SKLM [3].

- Đinh lượng tinh dầu trong lá tía tô bằng phương pháp cất kéo hơi nước [21

- Định lượng các thành phần trong tinh dầu lá tía tô bàng phương pháp sắc ký khí khối phổ

GC/MS [2],[Tị.

2.1.3.3 Nghiên cứu tác dụng dược lý

•>■ Tác dụng hạ sốt

- Mầu nghiên cứu :

+ Dịch chiết nước phương thuốc HTAGG tỷ lệ 2:1 + Dịch chiết

nước lá tía tô (LTT) tỷ lệ 2:1 + Tinh dầu lá tía tô (TDLTT)

- Phương pháp : phương pháp của Harnbourger, dùng dung dịch pyrogen tiêm theo đường tĩnh mạch tai thỏ để gây sốt

- Chỉ tiêu theo dõi : Nhiệt độ thỏ ở các thời điểm 60, 90, 120 phút sau khi tiêm pyrogen.Chỉ tiêu đánh giá : So sánh giữa lô thử thuốc vả lô chửng trấng về phần trăm tăng nhiệt độ

ở các thời điểm 60, 90, 120 phút sau khi gây sốt Sờ với nhiệt độ ban đàu

•t* Tác dụng kháng histamin

- Mầu nghiên cứu :

+ Dịch chiết nưức phương thuốc HTAGG tỷ lệ 2:1 + Dịch chiết

nước LTT tỷ lệ 2:1

- Phương pháp :

+ Chuột được gây mê, thở hoàn toàn bằng máy hô hấp nhản tạo Đo sự co thắt của khí quản bàng cách : lirợng khí thừa thải ra qua bộ chuyển đổi rồi ghi lại bằng máy ghỉ

Sự co thắt khí quản tỷ lệ thuận với biên độ của bản ghi,

+ Gây co thắt khí quản bằng dung địch histamin, đường tiêm tĩnh mạch

- Chi tiếu theo dõi : biên độ bản ghi thể hiện sự co thắt khí quản do histamin trước và sau khi dùng thuốc

- Chỉ tiêu đánh giá : So sánh phần trăm tăng co thắt do histamỉn trước và sau khi tiêm thuốc

•t* Ảnh hưởng trên cơ trơn tử cung

22

22

- Mau nghiên cứu :

+ Dịch chiết nước phương thuốc HTAGG tỷ ỉệ 2:1 + Dịch chiết

nước cành tía tô (CTT) tỷ lệ 2:1

- Phương pháp : Phương pháp của Magnus

+ Tử cung chuột lang được nuôi trong dung dịch nuôi Tyrode, nhiệt độ hằng định 37°c> bão hòa không khí

+ Gắn cố định ỉ đầu tử cung ờ đáy bể nuôi, i đầu nối với cần của máy ghi qua biến nãng đẳng trương

+ Mức độ co bóp của tử cung tỷ lệ thuận với biên độ của bản ghi

- Chi tiêu theo dõi: biên độ bản ghi thể hiện mứcđộ co bóp của tử cung

- Chi tiêu đánh giá : phần trăm cá thế xuất hiện co bóp ở các nồng độkhác nhau

*> Xử lý số liệu

23

23

Các kết quả nghiên cứu được xử lý bằng thuật toán thống kê sinh học test T-Student, sử dụng phần mềm Microsoft Excel 2003 Với độ tin cậy 95%,

* 9 9 sự khác biệt có ý nghĩa thông kê nêu p<0.05 và

không có ý nghĩa thông kẽ

nếu p>0.05 [8],[9]

2.2.1 Xác định tên khoa học của duọc liệu

Tiêu bản cảy tía tô được gửi tới phòng thực vật - Viện Sinh Thái và Tài

Nguyên Sinh Vật và được xác định tên khoa học là : Perillafrutescens vai\ crispa (Thunb.) Deane ex Bailey thuộc họ Bạc hà - Lamiàceae

2.2.2 Nghiên cứu thành phần hóa học Mau

nghiên cửu : lá tía tô

2.2.2.1 Định tính các nhóm chất bàng phản ứng hóa học.

*> Định tính Saponin

^ Quan sát hiện tượng tạo bọt

Cho vào ống nghiệm o.lg bột dl, thêm 5ml nước cất Lắc mạnh trong 5 phút Đẻ yên

và quan sát thấy xuất hiện cột bọt bền vững sau 30 phút => Phản ứng dương tính

> Phản ứng Salkowski

24

24

Cho vào ống nghiệm 3ml dịch chiết cồn 95° bốc hơi cách thủy đến cắn, thêm lml chloroform, cho từ từ lml H2SO4 đặc theo thành ốngnghiệm Quan sát thấy có màu xanh lơ lả xuất hiện ở mặt phân cách

Phản ứng cỵanidin

Cho vào ống nghiệm 2ml dịch chiết, thêm một ít bột Mg kim loại Nhỏ từ từ vài giọt acid HC1 đậm đặc, lắc nhẹ, đun cách thủy Sau vài phút dung dịch xuất hiện màu hồng => Phản ứng dương tính

> Phản ứng với dung dịch FeCl3

Cho dich chiết vào ống nghiệm, thêm vài giọt dd FeCỈ3 5%, lắcthấy

xuất hiện màu xanh đen => Phân ứng dương tính

> Phản ứng với hơi amoniac (NH3)

Giỏ vài giọt dịch chiết lên miếng giấy lọc, để khỏ rồi ha lên miệng lọ amoniac đặc, thấy màu vàng tăng lên => Phản ứng dương tính

> Phản ứng với dung dịch kiềm loãng

Cho lml dịch chiết vảo ống nghiệm, thêm 3 giọt ddNaOH 10%, lắcnhẹ thấy màu dịch chiết chuyển từ xanh sang vàng => Phản ứng dương tính

Hòa tan cắn alcaloid base bằng 2-3ml dung dịch H2SO4 IN, chia vảo 3 ống nghiệm :

• Ống 1 : cho 1-2 giọt thuốc thử Mayer, khòng thấy xuất hiện két tủa => Phản ứng âm tính

• Ống 2 : CÍ10 1-2 giọt thuốc thử Bouehardat, không thấy xuất hiện kết tủa => Phản ứng âm tính

• Ống 3 ; cho 1-2 giọt thuốc thử Dragendorff, không thấy xuất hiên kết tủa => Phản ứng

26

26

- Đun câ 2 Ống trong 2 phút, để nguộỉ, quan sát thấy : ống 1 cỏ tủa đục, ống 2 trong.

- Thêm vảo cả 2 ổng linl nước cất, lắc đều, quan sát thấy : ống 1 vẫn còn tủa, ống 2 có

Phản ứng âm tính Nhận xét: Sơ bộ đánh giá LTT không có anthranoĩd

không thấy sủi bọt khí => Phản ứng âm tính.

Nhân xét: Sơ bộ đánh giá LTT không có acid hữu cơ ♦í* Định tính

đường khử

Cho vào ống nghiệm to khoảng 2g bột đl3 thêm vào 6ml nước cất Đun sôi, Gạn dịch chiết ra một ống nghiệm Thêm lml dung dịch Fehling A vả lml dung dich Fehling B Đun cách thủy 5 phút Quan sát : xuất hiện kết tủa màu đỏ gạch => Phản ứng dương tính

Nhận xét: Sơ bộ đánh giá LTT có đường khử,

Định tính chất béo

Cho vào ống nghiệm 5 ml dịch chiết ether dầu hỏa, bốc hơi cách thủy đển khi còn khoảng

1 ml, nhỏ 1 giọt ỉên giấy lọc, để khô Quan sát thấy có vết mờ trên giấy lọc => Phản ứng dương tính

Nhận xét: Sơ bộ đánh giá LTT có chât béo.

❖ Định tính acid am in

Cho 2g bột dl vào ống nghiệm to Thêm nước cất đến

ngậpdl.Đuncách thủy 5 phút Gạn lấy dịch chiết cho vào ống nghiệm con

Thêmvàođỏ2-3 giọt dung dịch ninhydrin 3% Đun cách thủy 10 phút Quan sát không thấy dung địch chuyên

sang màu tím => Phản ứng âm tính Nhận xét: Sơ bộ đánh giá LTT không có acid ainin.

♦> Định tính Steroỉ

Cho lml dịch chiết ether dầu hỏa vào ống nghiệm, cô cách thủy tới cắn Thêm vào ống nghiệm linl anhydrid acetic, lắc kỹ cho tan hết cắn, Đẻ ổng nghiệm nghiêng 45(>, thêm từ từ lml H2SO4 đặc theo thảnh ống nghiệm Quan sát thấy inặt phân cách giữa 2 lớp chất lỏng có màu đỏ

=> Phản ứng dương tính

Nhận xét: Sơ bộ đánh giá LTT có sterol.

29

29

♦> Định tính glycosid tim

Chuẩn bị dịch chiết : cân khoảng lOg dl, cho vào bình nón dung tích 250ml có nút mài, thêm 50ml nước, ngâm trong 24h Gạn* lọc dịch chiết vào cốc có mỏ Thêm khoảng 3ml chì acetat 30%, khuấy đều Lọc qua giấy lọc gấp nếp Giỏ vài giọt dịch lọc đầu tỉên vào 1 ống nghiệm, thêm 1 giọt chì acetat Nếu xuất hiện tủa thì ngừng lọc, thêm khoảng lml chì acetat 30% vào dịch chiết, khuấy đều, lọc lại và tiếp tục thử đến khi dịch lọc không còn tủa với chì acetat Cho toàn bộ dịch lọc vào bình gạn, lắc kỹ 2 lần với CHCI3., mỗi

lần 5ml Gạn lấy lớp CHCI3, chia vào 4 ống nghiêm khô, bốc hơi cách thủy, cán được dùng để tiến hành các phản ứng :

• Phản ứng Liebermann (Phản ứng của khung Steroid)

Cho vào ong nghiệm chứa cắn lml anhydrid acetic, lắc đều cho tan hết cắn Nghiêng ống 45ơ Cho từ từ theo thành ống 0.5mỉ acid sulphuric đặc, tránh xáo trộn chất lỏng trong ống Ớ mặt tiếp xúc giữa 2 lớp chất lỏng thấy xuất hiện một vòng màu tím đỏ => Phản ứng dương tính

• Phản ứng Baijet ( Phản ứng của vòng lacton 5 cạnh)

Pha thuốc thử Baijet : Cho vào ống nghiệm to 1 phần dd acid picric 1% và 9 phần dung dịch NaOH 10% Lắc đều

Cho vào ống nghiệm chứa cắn 0.5ml ethanol 90° Lắc đều cho tan hết cắn Giỏ từng giọt thuốc thử Baijet mới pha vào ống nghiệm, không thấy xuất hiện màu đỏ cam => Phản ứng âm tính

• Phản ứng Legal ( Phản ứng của vòng lacton 5 cạnh)

Cho vào ống nghỉệm chứa cắn 0.5mỉ ethanol 90(> Lắc đều cho tan hết cắn Giữ 1

30

30