Nghiên cứu thành phần hóa học và tìm hiểu nguồn gốc của dược liệu nến đất

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI HỒ THỊ DUNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÌM HIỂU NGUỒN GỐC CỦA DƢỢC LIỆU “NẾN ĐẤT” LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC HÀ NỘI - 2015 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI HỒ THỊ DUNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÌM HIỂU NGUỒN GỐC CỦA DƢỢC LIỆU “NẾN ĐẤT” LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC HỌC CỔ TRUYỀN MÃ SỐ: 60720406 Người hướng dẫn khoa học: TS Nguyễn Quỳnh Chi HÀ NỘI - 2015 LỜI CẢM ƠN Trong trình nghiên cứu hoàn thành luận văn này, nhận nhiều giúp đỡ quý báu thầy cô giáo, chuyên gia nhiều lĩnh vực đồng nghiệp, bạn bè gia đình Trước hết, xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, phòng Sau Đại học, thầy cô giáo, kỹ thuật viên Bộ môn Dược liệu, Dược học cổ truyền Thực vật Dược - Trường Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập nghiên cứu Với ngưỡng mộ, lòng kính trọng, biết ơn sâu sắc, xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Nguyễn Quỳnh Chi, người thầy tận tình hướng dẫn, hết lòng bảo, luôn bên cạnh quan tâm, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt trình học tập nghiên cứu Tôi xin gửi lời biết ơn sâu sắc tới PGS.TS Nguyễn Viết Thân, người thầy cho lời khuyên chân thành, hỗ trợ nhiều ý tưởng, kinh nghiệm quý báu để giúp hoàn thành luận văn Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới ThS Lê Thanh Bình, người nhiệt tình hướng dẫn, bảo nhiều kinh nghiệm quý báu để giúp hoàn thành luận văn Tôi muốn gửi lời cảm ơn tới em Dương Thị Thanh Mai, sinh viên K65trường đại học Dược Hà Nội, người em trải qua vui buồn, khó khăn trình làm thực nghiệm để hoàn thành luận văn Cuối lời cảm ơn sâu sắc nhất, muốn gửi tới gia đình, bạn bè, người ủng hộ động viên học tập sống Một lần nữa, xin cảm ơn tất giúp đỡ quý báu đó! Hà Nội, tháng năm 2015 Hồ Thị Dung MỤC LỤC Trang DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ ĐẶT VẤN ĐỀ……………………………………………………………… Chƣơng TỔNG QUAN………………………………………………… 1.1 Tổng quan dƣợc liệu “Nến đất”………………………………… 1.1.1 Tên gọi, nguồn gốc……………………………………………… 1.1.2 Sử dụng ―Nến đất‖ Việt Nam………………………………… 1.2 Tổng quan nhựa………………………………………………… 1.2.1 Các khái niệm bản…………………………………………… 1.2.2 Thành phần hóa học nhựa……… ……………………… 1.2.2.1 Nhựa diterpenoid………………………………………… 1.2.2.2 Nhựa triterpenoid………………………………………… 1.3 Tổng quan nhựa dammar……………………………………… 1.3.1 Thuận ngữ ―dammar‖ nguồn gốc thực vật…………………… 1.3.2 Nhựa dammar lấy từ họ Dầu…………………………… 10 1.3.2.1 Thành phần sesquiterpen………………………………… 12 1.3.2.2 Thành phần triterpenoid…………………………………… 13 1.3.3 Nhựa dammar lấy từ họ Trám…… 16 1.3.3.1 Thành phần sesquiterpen………………………………… 16 1.3.3.2 Thành phần triterpenoid…………………………………… 16 1.3.4 Ứng dụng dammar………………………………………… 16 1.3.4.1 Sử dụng y học……………………………………… 16 1.3.4.2 Công dụng khác…………………………………………… 19 Chƣơng NGUYÊN VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU…………………………………………………… 21 2.1 Nguyên vật liệu, trang thiết bị………………………………… 21 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu……………………………………… 21 2.1.2 Phương tiện nghiên cứu………………………………………… 22 2.1.2.1 Máy móc thiết bị nghiên cứu……………………………… 22 2.1.2.2 Hóa chất, dung môi…………………………………………… 23 2.2 Nội dung nghiên cứu……………………………………………… 23 2.2.1 Xác định thành phần hóa học dược liệu ―Nến đất‖…………… 23 2.2.1.1 Nghiên cứu thành phần tinh dầu mẫu ―Nến đất‖ 23 2.2.1.2 Nghiên cứu thành phần hóa học mẫu ―Nến đất‖sau cất tinh dầu………………………………………………………… 23 2.2.2 Tìm hiểu nguồn gốc dược liệu ―Nến đất‖………………… 23 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu………………………………………… 24 2.3.1 Xác định thành phần hóa học dược liệu ―Nến đất‖…………… 24 2.3.1.1 Nghiên cứu thành phần tinh dầu mẫu ―Nến đất‖… 24 2.3.1.2 Nghiên cứu thành phần hóa học ―Nến đất‖ sau cất tinh dầu………………………………………………………………… 25 2.3.2 Tìm hiểu nguồn gốc dược liệu ―Nến đất‖……………………… 26 2.3.2.1 So sánh thành phần hóa học tinh dầu ―Nến đất‖ tinh dầu mẫu nhựa (nhựa Thông, nhựa Dầu rái, nhựa Trám) 26 2.3.2.2 So sánh thành phần hóa học ―Nến đất‖ mẫu nhựa sau cất tinh dầu……………………………………………… 26 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU……………………………………… 27 3.1 Xác định thành phần hóa học dƣợc liệu “Nến đất”………… 27 3.1.1 Nghiên cứu thành phần tinh dầu mẫu ―Nến đất‖……… 27 3.1.1.1 Xác định hàm lượng tinh dầu mẫu ―Nến đất‖……… 27 3.1.1.2 Phân tích thành phần tinh dầu thu được……………………… 28 3.1.2 Nghiên cứu thành phần hóa học ―Nến đất‖ sau cất tinh dầu……………………………………………………………………… 33 3.1.2.1 Định tính phần ―Nến đất‖ lại sau cất tinh dầu……… 33 3.1.2.2 Phân đoạn dịch chiết ―Nến đất‖ phương pháp sắc ký cột 35 3.1.2.3 Phân lập xác định cấu trúc số chất mẫu ―Nến đất‖ sau cất tinh dầu…………………………………………………… 40 3.2 Tìm hiểu nguồn gốc dƣợc liệu “Nến đất”………………… 45 3.2.1 So sánh thành phần hóa học tinh dầu ―Nến đất‖ tinh dầu mẫu nhựa……………………………………………………… 45 3.2.1.1 Chiết xuất tinh dầu mẫu nhựa…………………………… 45 3.2.1.2 Phân tích thành phần tinh dầu thu được…………………… 46 3.2.2 So sánh thành phần hóa học ―Nến đất‖ mẫu nhựa sau cất tinh dầu …………………………………………………… 49 3.2.2.1 Định tính mẫu nhựa sau cất tinh dầu phản ứng hóa học……………………………………………………………… 49 3.2.2.2 Phân đoạn dịch chiết mẫu nhựa phương pháp sắc ký cột ………………………………………………………………………… 50 Chƣơng BÀN LUẬN……………………………………………………… 56 4.1 Về thành phần hóa học dƣợc liệu “Nến đất”………………… 56 4.1.1 Thành phần tinh dầu mẫu ―Nến đất‖…………………… 56 4.1.2 Thành phần mẫu ―Nến đất‖ sau cất tinh dầu……………… 58 4.2 Về nguồn gốc dƣợc liệu “Nến đất”………………………… KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ……………………………………………… TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 60 65 DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT CL1 Mẫu nhựa Thông Can Lộc (thu huyện Can Lộc, Hà Tĩnh) CL2 Mẫu nhựa Thông Can Lộc (thu huyện Can Lộc, Hà Tĩnh) DCM dicloromethan DR Mẫu nhựa Dầu rái thu thập huyện Đại Lộc, tỉnh Quảng Nam GC-MS Sắc ký khí kết hợp khối phổ H Mẫu ―Nến đất‖ Huế (thu thành phố Huế) HL Mẫu nhựa Thông Hồng Lĩnh (thu huyện Hồng Lĩnh, Hà Tĩnh) HT1 Mẫu ―Nến đất‖ Hà Tĩnh loại (thu Hà Tĩnh) HT2 Mẫu ―Nến đất‖ Hà Tĩnh loại (thu Hà Tĩnh) HT3 Mẫu ―Nến đất‖ Hà Tĩnh loại (thu Hà Tĩnh) n-H n-hexan QP Mẫu ―Nến đất‖ Quế Phong (thu huyện Quế Phong, Nghệ An) SKLM Sắc ký lớp mỏng Tr Thời gian lưu Tr Mẫu nhựa Trám đen thu thập huyện Thanh Chương, Nghệ An V Mẫu ―Nến đất‖ Vinh (thu thành phố Vinh, Nghệ An) DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Bảng 1.1 Một số loại dammar phổ biến thu thập từ loài khác khu vực Đông Nam Á Bảng 1.2 Các hợp chất triterpenoid có nhựa dammar thuộc chi Shorea Roxb ex C F Gaertn Bảng 1.3 Các hợp chất triterpenoid có nhựa dammar thuộc chi Dipterocarpus C F Gaertn Bảng 1.4 Một số hợp chất terpenoid với tác dụng sinh học thường gặp nhựa dammar Trang 13 15 18 Bảng 3.1 Hàm lượng tinh dầu mẫu ―Nến đất‖ 27 Bảng 3.2 Kết phân tích GC-MS mẫu tinh dầu ―Nến đất‖ 30 Bảng 3.3 Kết phân tích GC-MS phân đoạn n-H mẫu ―Nến đất‖ Bảng 3.4 Kết phân tích GC-MS phân đoạn n-H-DCM mẫu ―Nến đất‖ Bảng 3.5 Kết phân tích GC-MS NĐV1A 10 Bảng 3.6 Hàm lượng tinh dầu mẫu nhựa nghiên cứu 11 12 13 Bảng 3.7 Kết phân tích GC-MS mẫu tinh dầu ―Nến đất‖, tinh dầu Dầu rái, tinh dầu Thông Bảng 3.8 Kết phân tích GC-MS phân đoạn n-H mẫu ―Nến đất‖ V, Dầu rái, colophan, Trám Bảng 3.9 Kết phân tích GC-MS phân đoạn n-H-DCM mẫu ―Nến đất‖ V, Dầu rái, colophan, Trám 37 38 43 45 47 51 53 DANH MỤC CÁC HÌNH STT Tên hình Hình 1.1 Phân nhóm họ thực vật theo thành phần hóa học nhựa Hình 1.2 Một số khung diterpenoid phổ biến nhựa hạt trần Trang Hình 1.3 Một số khung triterpenoid phổ biến nhựa họ Dầu (Dipterocarpaceae), họ Trám (Burseraceae) họ Đào lộn hột (Anacardiaceae) Hình 2.1 Các mẫu ―Nến đất‖ thu mua địa điểm khác 21 Hình 2.2 Bộ dụng cụ định lượng tinh dầu theo Dược điển Mỹ 24 Hình 3.1 Sắc ký đồ mẫu tinh dầu ―Nến đất‖ quan sát ánh sáng tử ngoại bước sóng 254 nm (A), 366 nm (B) sau phun 29 thuốc thử màu (C) 10 Hình 3.2 Sắc ký đồ dịch chiết mẫu ―Nến đất‖ sau cất tinh dầu sau phun thuốc thử màu Hình 3.3 Sắc ký đồ phân đoạn n-H-DCM DCM mẫu ―Nến đất‖ sau phun thuốc thử màu Hình 3.4 Công thức hóa học hợp chất triterpenoid phân 34 36 40 đoạn n-H-DCM Hình 3.5 Sắc kí đồ NĐV1A NĐV2 khai triển với hệ dung môi I, II, III, IV sau màu TT vanillin/ H2SO4 42 11 Hình 3.6 Sắc ký đồ GC-MS NĐV1A 43 12 Hình 3.7 Sắc ký đồ GC-MS NĐV2 44 13 Hình 3.8 Phổ 1H-NMR (500 MHz, CDCl3) chất NĐV2 44 14 15 Hình 3.9 Sắc ký đồ tinh dầu ―Nến đất‖ V , tinh dầu Dầu rái, tinh dầu Thông, dịch chiết nhựa Trám sau phun thuốc thử màu Hình 3.10 Sắc ký đồ phân đoạn dịch n-H-DCM DCM mẫu nhựa sau phun thuốc thử màu 46 50 ĐẶT VẤN ĐỀ Trong trình đấu tranh với thiên nhiên bệnh tật để bảo vệ sống, người biết dùng cỏ quanh để làm thuốc Những kinh nghiệm dùng thuốc lưu truyền nhân dân, cha truyền nối từ đời sang đời khác hình thành nên y học dân tộc Dược liệu ―Nến đất‖ từ lâu người dân Trung Bộ sử dụng để xông sát trùng cho phụ nữ sau sinh, trẻ sơ sinh có biểu đầy hơi, quấy khóc dùng để xông tránh gió cho mẹ trẻ lúc thời tiết thay đổi Đây dược liệu sử dụng phổ biến khu vực Trung Bộ thực có hiệu từ xưa đến Mặc dù sử dụng rộng rãi vùng Trung Bộ chưa có nguồn thông tin xác thực nguồn gốc dược liệu ―Nến đất‖ Có ý kiến cho nguồn gốc ―Nến đất‖ từ nhựa Thông Mặt khác có nguồn thông tin khẳng định ―Nến đất‖ nhựa Trám, nhựa dầu Rái, nhựa Chai Tuy nhiên nay, chưa có nghiên cứu cụ thể nguồn gốc, thành phần hóa học tác dụng sinh học ―Nến đất‖ để chứng minh sở khoa học cho việc sử dụng dược liệu Với mục tiêu: bổ sung sở liệu cho “Nến đất” để nâng cao công dụng giá trị ứng dụng dược liệu, tiến hành đề tài: ―Nghiên cứu thành phần hóa học tìm hiểu nguồn gốc dƣợc liệu “Nến đất” ‖ với hai nội dung chính: - Xác định thành phần hóa học dược liệu ―Nến đất‖ - Tìm hiểu nguồn gốc dược liệu ―Nến đất‖ [...]... lập và xác định cấu trúc một số chất của mẫu Nến đất sau khi cất tinh dầu 2.2.2 Tìm hiểu nguồn gốc của dƣợc liệu Nến đất - So sánh thành phần hóa học của tinh dầu Nến đất và tinh dầu trong các mẫu nhựa đã biết rõ nguồn gốc (Thông, Trám, Dầu Rái) 23 - So sánh thành phần hóa học của Nến đất và các mẫu nhựa sau khi cất tinh dầu 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 2.3.1 Xác định thành phần hóa học của dƣợc liệu. .. dung nghiên cứu 2.2.1 Xác định thành phần hóa học của dƣợc liệu Nến đất 2.2.1.1 Nghiên cứu thành phần tinh dầu trong các mẫu Nến đất - Xác định hàm lượng tinh dầu trong các mẫu Nến đất - Phân tích thành phần tinh dầu thu được 2.2.1.2 Nghiên cứu thành phần hóa học của các mẫu Nến đất sau khi cất tinh dầu - Định tính phần Nến đất còn lại sau khi cất tinh dầu - Phân đoạn dịch chiết Nến đất ... Tuy nhiên theo những thông tin truyền miệng của người dân Nến đất có nguồn gốc từ nhựa Thông hay nhựa Trám hoặc là nhựa Dầu rái…Vì vậy, chúng tôi tiến hành so sánh thành phần hóa học của Nến đất với các mẫu nhựa đã biết rõ nguồn gốc để bước đầu có những luận cứ khoa học về nguồn gốc của Nến đất 2.3.2.1 So sánh thành phần hóa học của tinh dầu Nến đất và tinh dầu trong các mẫu nhựa (nhựa Thông,... theo Dược điển Mỹ - Phân tích thành phần hóa học của tinh dầu thu được trong các mẫu nhựa bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng và phương pháp sắc ký khí kết hợp khối phổ, so sánh với thành phần hóa học của tinh dầu trong Nến đất 2.3.2.2 So sánh thành phần hóa học của Nến đất và các mẫu nhựa sau khi cất tinh dầu Phần còn lại của các mẫu nhựa sau khi cất tinh dầu được xử lý tương tự các mẫu Nến đất ... 2.3.1.2) So sánh thành phần hóa học từng phân đoạn dịch chiết của các mẫu bằng phương pháp sắc ký lớp mỏng và phương pháp sắc ký khí kết hợp khối phổ 26 Chƣơng 3 KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 3.1 Xác định thành phần hóa học của dƣợc liệu Nến đất 3.1.1 Nghiên cứu thành phần tinh dầu trong các mẫu Nến đất 3.1.1.1 Xác định hàm lƣợng tinh dầu trong các mẫu Nến đất Tinh dầu được tách ra khỏi dược liệu bằng phương... cột HP-5MS (30m 0,25μm) Xác định các thành phần hóa học trong các mẫu tinh dầu bằng cách so sánh các dữ liệu phổ MS của chúng với phổ chuẩn trong thư viện phổ Wiley (mức độ phù hợp so với thư viện phổ là trên 90%) Xác định tỷ lệ % các chất theo diện tích pic trên sắc ký đồ 2.3.1.2 Nghiên cứu thành phần hóa học của Nến đất sau khi cất tinh dầu  Định tính phần Nến đất còn lại sau khi cất tinh dầu -... quan về dƣợc liệu Nến đất 1.1.1 Tên gọi, nguồn gốc Nến đất có hình dạng khá đặc biệt: dạng như đá, khối rắn, mặt ngoài màu vàng nhạt đến sẫm, mặt trong có màu nâu nhạt hoặc vàng nâu, thể chất cứng, khá giòn, khi đốt tạo khói có mùi thơm đặc trưng Tên gọi Nến đất xuất phát từ cách sử dụng của dược liệu từ xa xưa là dùng làm nến thắp sáng và được thu nhặt trên mặt đất hoặc trong lòng đất Theo thông... (Dipterocarpaceae), họ Trám (Burseraceae) và họ Đào lộn hột (Anacardiaceae) 7 Bên cạnh thành phần không bay hơi, phần bay hơi của các loại nhựa này có thành phần chủ yếu là các hợp chất sesquiterpen Đối với nhựa cây họ Trám, phần bay hơi được chiếm tỷ lệ cao hơn rất nhiều so với nhựa cây họ Dầu [34] Tùy theo loài, thành phần hóa học của nhựa ngoài phụ thuộc vào nguồn gốc thực vật còn thay đổi theo vị trí... làm hệ điều trị qua da [43], [44] 20 Chƣơng 2 NGUYÊN VẬT LIỆU, TRANG THIẾT BỊ VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Nguyên vật liệu, trang thiết bị 2.1.1 Nguyên liệu nghiên cứu Mẫu nghiên cứu là Nến đất được thu mua tại các địa điểm khác nhau của khu vực Trung Bộ, Việt Nam vào tháng 8/2014, bao gồm (hình 2.1): HT1 HT2 V QP HT3 H Hình 2.1 Các mẫu Nến đất thu mua tại các địa điểm khác nhau - Mẫu thu mua tại... nghiên cứu 2.3.1 Xác định thành phần hóa học của dƣợc liệu Nến đất 2.3.1.1 Nghiên cứu thành phần tinh dầu trong các mẫu Nến đất  Xác định hàm lượng tinh dầu trong các mẫu Nến đất Định lượng tinh dầu trong Nến đất : tinh dầu trong các mẫu nghiên cứu được định lượng bằng phương pháp cất kéo hơi nước sử dụng bộ dụng cụ định lượng tinh dầu theo dược điển Mỹ (USP 32) (hình 2.2), mỗi mẫu được tiến hành ... Nghiên cứu thành phần hóa học tìm hiểu nguồn gốc dƣợc liệu Nến đất ‖ với hai nội dung chính: - Xác định thành phần hóa học dược liệu Nến đất - Tìm hiểu nguồn gốc dược liệu Nến đất Chƣơng... 2.2.2 Tìm hiểu nguồn gốc dược liệu Nến đất ………………… 23 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu ……………………………………… 24 2.3.1 Xác định thành phần hóa học dược liệu Nến đất …………… 24 2.3.1.1 Nghiên cứu thành phần. .. GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƢỜNG ĐẠI HỌC DƢỢC HÀ NỘI HỒ THỊ DUNG NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ TÌM HIỂU NGUỒN GỐC CỦA DƢỢC LIỆU “NẾN ĐẤT” LUẬN VĂN THẠC SĨ DƢỢC HỌC CHUYÊN NGÀNH: DƯỢC HỌC CỔ