Bước đầư NGHIÊN cút đặc điêm HÌNH THÁI, THẢNH PHÂN HOÁ học và một số tác DỤNG SINH học của một LOÀI LINH CHI (GANODERMA SP ) họ GANODERMATACEAE mọc HOANG ỏ lào

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dươc HÀ NÔI Trang trình học tập nghiên cứu hoàn thiện luận vãn này, luôn quan tàm hướng dẫn tận tinh giáo viên hướng dẩn, sir động viên giúp đõ Loàn Ihc bạn bò nghiệp THIPTHAVIPHONE SOULINHO Để bày tó lòng kính trọng lồng biết ơn sâu sác mình, tồi xin chán thành cảm ơn; TSKH, VãnPHÂN ThanhHOÁ HỌC ước ĐẦƯ NGHIÊN cút ĐẶC ĐIÊM HÌNH THÁI,Trán THẢNH Nguyễn VÀ MỘT SỐ TÁC DỤNGTS SINH HỌC Viết CỦAThân MỘT LOÀI LINH CHI (GANODERMA SP.)* HỌ GANODERMATACEAE MỌC HOANG Ỏ LÀO Là người thầy soi sáng, trực tiếp hướng dần chi bảo tận Chuyên ngành : Dược liệu - Dược học cá truyền tình cho tỏi suốt thời gian học tập nẹhiên cứu Mã số : 60.73.10 Tôi xin chân thành cảm ơnỉ tới: LCẬN VÃN HẠC SỸ DƯỢC HỌC Khoá (2002-2004) Ban Giám hiệu, cán phòng Đào tạo sau dại học, hộ môn phòng ban khác trường Đai học Dược Hà Nội thầy giáo, cỏ giáo, kỹ thuật viên Bộdân môn Dược dãTRAN hướngVAN dẫn THANH giúp dờ vằ Hướng khoa học:Liệu TSKH tạo diều kiện thuận lơi cho Lôi trình lập nghit '11 cứll TS, học NGUYỄN VIẾT THẢN PGS TS Chu Đình kính người thầy giúp đỡ việc đo phổ đổ xác đinh cấu trúc chất Iighiên cứu Tôi xin gửi lơi cảm ơn tới phòng Dược lý-viện Dược liệu, Viện nghiên cứu phát triổn Phương Đông toàn thể bè bạn dồng nghiệp giúp đỡ tói trình thực hiôn luận văn HÀ NỘI 2004 Đạc biệt xin bày tỏ lòng biết ơn vỏ tận tới bố mẹ hốt lòng MỤC LỤC Trang ĐẶT VÂN ĐỂ PHẦN 1: TỔNG QUAN 1.1 Vài nét lịch sử vé hệ thòng học họ Linh chi (Ganơdermataceae DonkJ 1.2 Đặc điểm hình thái họ Gariodermataceae Donk 1.3 Thành phần hoá học nám Linh chi 1.4 Cóng dụng trị liệu nấm Linh chi 11 PHẨN 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN cút 16 2.1 Nguyên liệu 16 2.2 Phương pháp nghiên cứu: 16 2.2.1 Về đạc diêm thực vật 2.2.2 thành phần hoá học 2.2.3 dụng sinh học PHẨN 3: THỤC NGHIỆM VÀ KẾT QUÀ 3.1 Nghiên cứu vế đặc điểm thực vật tủa nấm Lỉnh thu 16 Vé 16 Về tác 17 19 DANH MỤC BẢNG BẢNG CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC HỈNH 3.2.3 g Chiết xuất, phân Lập số chát 37 3.3 Thử tác dụng sinh hoc 48 3.3.1 Thủ' tác dụng chống OXY huấ caư chict DL/kgTT Gram dược liệu Kilỏgrain thc trọng nước nám IR Inphra Red Spcctroscopy Linh tren mô hình gày viêm gan cáp CC14 3.3.2 48 Xác định độc tính cấp LDS0 cao chiẻt nấm Linh chi 51 PHẦN 4: BÀN LUẬN 3.3 3.12 54 4.1 Về đặc điểm thực vật 54 4.2 Về thành phần hoá học 54 4.3 vể tác dỉụng sinh hạc GỈả trị K( XỈOÔ cua T3 trền cấc hệ cỉung mỗỉ cắc hước sóng khác PHU LUC Ảnlì sui bao tử mẫu nấm nghiền cứu dưci kính hiển vi 23 43 56 3.13 3.15 Sác ký lớp mỏng dịch chiết mầu nghiên cứu dưứi ánh 25 sấng thường 3.16 Sắc ký lớp mỏng dịch chiết mẫu AI ỏ bước sóng 26 254nm 319 Sắc ký lớp mòng dịch chiết mẫu nghiên cứu bước 27 sóng 366nm 3.20 Sơ dồ quy trình chiết xuất, phản lập nhóm chất 37 dược liệu 3.23 Ảnh sắc ký lớp mỏng dịch chiết A chất l bước sóng 254nm 42 ĐẶT VẤN ĐỂ Linh chi mộr vị Ihuốc dược dùng phổ biến ỏ' Việt Nam nhiêu nước giới Trung Quốc, Nhật Bán An Độ, Hàn Quốc, Colombia Có nhiều tài liệu viết tác dụng linh thiêng, huyền bí Linh chi việc điều trị loại bệnh nan y Trong công trình nghiềíì eứu G§ Đỗ Tất Lợi vầ cộng gự nam 1994 đẫ gọi Linh chi “siêu dược liệu” Nhãn sâm (Panơx ginsenỊỜ [8] Các sách y dược học cổ viết Linh chi với lẽn “Cỏ thần liên’', “Nấm trương thọ” Hiện nhiều tài liệu khoa học công bò tác dụng da dạng dưực liệu này; chống gia tăng CholesteroL tàng tuần hoàn máu, chổng xơ cứng động mạch, điều chỉnh huyết áp, nâng cao hoạt động gan, chống viêm gan mạn tính, nâng cao tính miễn dịch thể, giảm mỏi tinh thân, táng sảng khoái thôm minh mản, [20] Nhièu cổng trình khoa học dã đẽ cập đến khả chống oxy hoấ, chốmỉ ung thu, ức chế giải phóng histamin, ức chế kết dính tiểu cầu, trự tim, thị phóng xạ môi trường, nấm Linh chi Trong kho tàng kiến thức chữa bệnh Y học cổ truyền cấc cộng đồng dân tộc Nước Cộng hoà dãn chủ nhân dán Lào có sử dụng nhiêu loài nấm làm thuốc Trong có loai Linh chi Các loài nấm chủ yếu thu hái hoang dại, chưa có nghiên cứu bán vẻ nguồn nguy Ồn liệu, thành phần hoá học chế tác dụng Để góp phổn đưa Linh chi vào việc sứ dụng phònc chữa bệnh ỏ Cộng hoà dán chù nhân dân Lào sở khoa học thực đề tài “ Bước dầu Mục díclì dể tài dẻ góp phần nâng cao tính khoa học việc chữa bệnh nấm Linh chi cộng dán tộc nước Cộng hoà dân chủ Iihân dân Lào với nội dung đề tài: > Nghiên cứu vổ hình thái thực vật số mẫu Linh chi thu hái ỡ Cộng hoà Dân Nhân dân I ào, chọn lấy số mẫu đổ nghicn cứu PHẨN 1: TỔNG QUAN LI Vài nct lịch sử vc hộ thông học họ Lình chi (Ganodermaiaceae Donk) Nấm Linh chi sử dụng từ lâu, song nghiôn cứu vè chúng thực cuối kỷ XVIII Năm 1781, w Curtis mỏ tả máu nấm đáu tiên đặt nén móng cho nghiên cứụ vệ nấm Linh chi sau này.[9, 10, 14] Năm (188 ĩ) nhà nấm học người Phần Lan - Karst tách từ họ Nấm Lỗ PoỉypoKtceưe nhóm mới, xây dựng độc lập Gcmoclcnna Karst Nhờ việc phân loại nấm Linh chi tiến hước quan trọng [10, 16, 14, 15] Song song với chi Ganoderma Karst., vào năm 1905, Murrill lại phát nhóm nấm Poỉypore ông dề nghị xác lập chi mói Amaurơdenna Murr loài cùa chi có dộ dồng cao cấu trúc bào tử đảm tương tự loài chi Ganoderma Karst [ 10,14] Nhà nấm học người Hà Lan - Donk - nghiên cứu trình phân hoa cưa hai loai Ganoderma Karst VƠI Ámauroderma Murr thay mối quan hẹ chặt chẽ chúng Nảm 1948, ông xây dựng nẽn họ Linh chi Gcmotievnuuaceae Duuk tách từ họ nấm Lỏ ('Pvlyporaceae} với hai chi lởn Ganoderma Karst Amaurođermơ Murr Đảy bước quan trọng Ganodennataceae [ 101 lịch sử phân loại hệ thống họ thống phân loại cưa họ Linh chi Năm 1971 Ainsvvorlh G c dựa vào đặc điểm hình thái thể quá* cấu trúc bào tử đấm* dưa hệ thống phân loại cách hoàn chỉnh Cho đến nav hệ thống phân loại dang dược nhiều nha khoa học giới sử dụng [14] Chính vậy, nấm Linh chi (Gatìodenna sp,) thuộc chi Ganoderma, họ Linh chi (Ganơeỉermaỉaceae), nấm lỗ (Aphyỉìophoruỉes), lớp nấm đảm {ỉỉãsiđiômỹcêíêsị, ĩĩgaĩĩh nam dam {Bãsidịõmvcõíỉnã} va thuộc giối nẳĩĩĩ (Mỵcetaìỉữ) Nhữna năm gần dãy trẽn thị trường đỏ ne dược, nấm Linh chi chế phẩm dược lưu hành tiêu thụ cách rộng rãi, chủ yếu Ganodermơ luàdum Ganoderma ịaponicum, hái loại dã dùng làm thuốc từ lâu dời dược nghiên cứu tương dối dầy dú Trên thực tế, kết thống kê cho thấy chung loại Linh chi phong phú ưốc tính toàn giới có 104 loài Linh chi Riêng Trung Quốc cổ 84 loài* chi có 12 loài dược dùng làm thuốc Xích chi, Tử linh chi, Hác linh chi (G ơtmm), Bạc thụ chi (G capéỉnxê), Mật vãn bạc chi (G ĩemie), Tùng sam linh chi [G ỉsiigae) Loài Ganoderma appĩanatum (Pers) Pat Cũng thường dược dùng với tên Gổ Linh chi, tên liếng Anh ỉầ Anàetỉỉ Lingĩhi, Bốc Mỹ gọi Artist’ conk Đây loại nấm phá gỗ mạnh, sống nhiều năm, năm lớp thụ tầng mọc bên lớp lhụ tầng cũ cùa năm trước nỗn trồng chất lổn nhau, gọi nấm đa niên nhiều tầng Quá thể cua Ganoderma appìanatum Pat (tức nấm, cợ quan sinh sản hữu tính nấm) thường có quạt hay nứa hình tròn, dường kính từ 6-100 cm, dày từ 3-8 cm, vỏ bóng trẽn mạt mũ Lồi gổ ghẻ trôn mật mũ nấm, hoá gỗ, hoá sùng, sấn sùi lạo nên vỏ cĩi kỹ Nấm đa niên mọc gần mặt đất thân cây, có dặc tính vừa ký sinh vừa hoại sinh Hàng năm vào mùa thích hợp, tiếp tục tăng trướng rộng ra, Lớp thụ tầng dược tạo thành nằm lớp thụ tầng cũ, đồng hướng khổng Theo số tài liệu bô dọc từ mặt trẽn xuống dếm lớp thụ tầng biết tuổi nấm Các loại Linh chi da niên nhỉểư lắng G npplanmm cồn cớ G ỉormnmi G sưhtornaỉnm, G.ỷnỉveìhtm Việt Nam, nấm Linh chi phân bố chủ yếu Cao nguyên Lâm Đổng rnột sỏ vùng thuộc khí hậu nhiệt đới Theo nghiên cứu nhà ktioa học (Trịnh Tam Kiệt, Lê Xuân Thám, Đàm Nhận, Phạm Quang Thu, Trán Văn Mão) Việt Nam cố trôn 40 loài Linh chi chiếm im tluĩờng gặp nấm Linh chi (Ganơdevmu applanatum PaL) 1.2 Đậc điểm hình thái họ Ganodennataceae Donk Nấm Linh chi loài thực vật bậc thấp thuộc ngành Nấm (Btísidiomyívim) nén cố đặc điểm chung ngành lầ dược cấu lạo tế bào có nhăn thật diệp Lục, nhận thức ăn từ môi trường bên cách hấp thu (sống dị dưỡng) [27], Ngoài có đặc điểm riông [3, 9, 13, 10, 19, 18]: + Sợi nấm gồm nhicu đoạn ngăn cách với vách ngăn + Cuống thể biến dị lớn: Các loại da niên thường không cuông cuống ngán, cốc loài có cuống phong phu: Từ loài có cuống ngán (0,5cm), mảnh (0,2cm) dài cỡ hàng - LOcm rái dài (20 - 25cm) to mập (đường kính có thẻ tới 3,3cin) [3] Cuống nấm phán nhánh hoạc không, màu sắc thay đổi khác tuỳ loài Cuống thường đính bôn, đính gần tâm trình liên tắn ĩiìầ Ihầnh + Mũ nấm: Dạng thận, gần tròn đổi xoè thành hình quạt nhiều dị dạna Trên mật 111Ũ có vân gựn dồng tâm cỏ tia rãnh phóng xạ, màu sắc từ vàng nâu - vàng cam - dỏ nâu - đỏ tím - nâu đen nhắn, bóng, lang nhu' veeni sẫm màu dần già Lớp vỏ lang phủ suốt mặt mũ chạy dài theo cuống nấm Kích thước tán bi ch động lừ 30em, dày 0,8-2,5cm tuv loài Phan đính vói cuống gồ lên lốm xuồng + Thịt nấm dày tír 0,4 - l,8cm màu vàng kem - nâu nhạt - trắng Nấm mềm dai tươi, khò chắc, cứng nhẹ Nệ sợi kiểu trimitic, đầu tận lớp sợi phình hình chuỳ, màng dày, đan kết vào tạo thành lớp vó láng phú mặt mũ + Bào tầng lớp ống dày từ 0,2 - 17cm, gồm ống nhỏ tháng, miẹng tròn, tráng - vung ánh xanh + Sợi đơn bào mang dảm đơn bào cổ bào tứ đám hình trứng - trứng cụt đính P1ĨỤ LỤC II Sơ Đồ Cơ CHẾ PIIÁ MẢNH PIIỔ KIIỐI ĐỐI VỚI MỘT số MẢNII fnỉĩ 282 96 £ zy uj TO E z ,ưi ' 86 É 3, ũ PHỤ I ỰC III TĨ-CDCX3-CĨ3CPD &DEPT DEPT90 ' I ■ ■ ■ 1 ' I r I I ■ ' -r — — r — — I ■ " ' ĩ”™! ■ ■ ' ■ I ■ ■ ■ ■ I ' — ' I ' ■ ’ ■ I 11—I ’ ' ■ I ■ ■ ' ■ ■ ỈĨS 135 Ì3Ô 125 ỈỈ8 ÌỈ5 ìì6 ÌẼ3 Ì6E 3Ỉ 38 Ỉ5 18 75 78 SE Ế8 55 iĩ8 TT"—["■" I " " ■■I'• -' jfS ỈE Ỉ6 ỈB ĩỉ PHỤ LỤC IV: 5.149 5.141 4.128 4.114 3.724 3.71C 3.614 6c4 601 3.592 3.503 3.579 3.570 2.043 2.C25 2.022 2.017 2.009 2.003 1.992 1.934 1,97B 1.370 1.357 1.045 1.930 1.031 3.03 " l.Bĩồ T B 09 1.795 11.793 C 1.789 1.780 D 1.775 C 1.767 1.761 L 1.754 L.747 0■1 i.ooj: ĩ.740 1.734 1.732 1.727 1.721 1.712 L.7Ọ0 1.704 L 700 1.693 1.686 1.673 1.665 1.659 1.653 1.646 1.634 1.608 1.600 1.595 3.02; 8oSíaS[8aí KS8xj Ì88o8Ìĩ§Bẵ0tóiiỉii!íEgicSỈI 01/Nc*J2004 10:09:2« ACD/CNMH »B (v.6 1Z| PHỤ LỤC V PHỤ LỤC V.A: Hỉổ MỔ PHỎNG ACD/Ỉ3C-NMR CỦA T, PHỤ LỤC V.B: PHỐ MÔ PHỎNG ACD/‘H-NMR CỦA T, PHỤ LỤC v.a: Phổ mồ phòng ACD/I3C-NMR Tj PH Ụ LỤ C v.b : Ph ổ mồ ph ỏn g A C D/' HN M R cử aT PHỤ LỤC VI PHỔ HỒNG NGOẠI CỦA T, [...]... Nam Lào, lương đồng với Đà Lạt, Sapa, Tam Đáo, Tày Nguycn ớ Việt nam 114,36,371 1.3 Thành phản hoá học của nấm Linh chi Trong khi ớ Tây Âu, các nhà khoa học hần như chỉ đi sâu vào n chi én cứu họ thống học, đicu tra cơ bản và các dặc diem sinh học của các nấm Linh chi thì ở các nước châu Ả, các nhà khoa học lại dẫn đầu vé nghiên cứu thành phần hoá học, trồng và bào chế các loại thuốc từ nấm Linh chi. .. PHẦN 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHẢP NGHIÊN cứu 2.1 Nguyên liệu Nấm I inh chi Ganodenna sp thu hái à một số địa phương thuộc vùng cao neuvên nước Cộng hoà Dán chủ Nhân dân Lào Một số mẫu nấm Linh chi “cổ” hoang dại thu hái được ỏ một số Linh ỏ Việt Nam (Ninh Thuận, lloà Bình, Hà Tĩnh ) Một sô' mẫu nấm và nấm Linh chi chuẩn Ganodenna applanamm Pat.đơực cung cấp từ viện nghiên cứu và phát triển Phương... 11 Nhỏm Alcaloid có hàm lượng rát đáng kể trong thể quả của Gduckium, Aìcaìoid \'A Gỉucosỉd' 1,82 - 3,06% [14] 1.4, Còng dung trị liệu cơ bán của nấm Linh chi Đại đa số nhân đán Lao ít biết tới tác dụng quan trọng cúa loài nấm Linh chi Chỉ có một số vùng dân tộc thiểu số, nằm trong vùng có nấm này mọc thì mới biếl sử dụng chúng vào việc ehăiĩi sốc sức khoe và điểu trị một số bệnh cơ bản như: hạ sốt,... bệnh nhân nhiễm virus H1V vẫn sống tới 15 Tuy nhiên trong điều trị cung nhu Nhản sám, tác dụng của tổ hợp saponin có trong Linh chi có hiệu quả hơn so với saponin riêng rẽ Do vậy cho đến nay hầu hết các chế phẩm có chúa Linh chi đéu sở dụng ở dạng dịch chi t toàn phần Sau đây là một số chê phẩm có chứa Linh chi dang lưu hành trên thị trường: Hình 1.2: Một số chế phẩm của Linh chi lưu hành trẽn thị trường... chi; Hoàng chi; Bạch chi; Hắc chi và Tử chi) có hàm lượng nguyên tố Germanium cao Chính nguyên tố Germaniiim có trong Linh chi đó đã làm cho Linh chi trớ thành một VI thuốc ức chế dược virus Mà căn nguyên cua một sô bệnh ung Lhư đại đa số trường hợp là do virus gây ra Nên Linh chi có thể kìm hãm được một số bẹnh ung thư đó Cơ chế của tác dụng này được giải thích: Khi Gemnanium vào cơ thế kích thích... c và H [22] Bên cạnh dó, các tài liệu tham khảo cho thấy nhiều acid béo tạo nên thành tố chính của nấm Linh chi đã được định danh trong dịch chi t elher Nhữnn acid nàv có đặc tính bảo vệ hồng cầu và ngừa được ung loét [5] Như đã trình bày trong phấn 2.3 Viện nghiên cứu Lình chi hoang dại Trung Quóe đã phát hiện: trong hỗn hợp dịch chi t toàn phân của 6 loại nấm Linh chi (Thanh chi; Hổng chi; Hoàng chi; ... dược và Đông dược Thực tế mội sớ Lite giả đa quan tâm phán tích thành phần cấu tạo lớp vỏ láng ớ các loài Ganodenna và Amaurơdcrma vào thập niên 20 đã phái hiện các crgoslcrol và các enzym phenoloxydase, peroxydase ớ G ìucidiưn (Krebs G., 1911; Subramanian s 196 1) [ 10] Đãc biệt, trong khoảng 20 năm gần dây nhiều cơ sở nghiên cứu của một số nước dã xác định thành phần và cấu trúc hoá học của nấm Linh chi. .. các hoạt chất của nấm Linh chi đã chứng tỏ có tác dụng kìm hãm sinh tổng hợp choỉesterol ơ Việt Nam, Bùi Chí Hiếu và cộng sự (năm 199 3) đã cố cuộc thí nghiệm trên chuột và kết quá cho tliấv lượng Cholesterol giám lới 50% khi áp dụng liền lượng 0,4g Linh chi trôn một kilổgram thổ trọng trong 30 ngàv Trôn invitro, hiệu quá kìm hãm quá trình kết dính tiểu cấu bói dịch chi t nưốc của nấm Linh chi được chứng... định giá trị của nấm Linh chi - vị thuốc trường sinh của người già [21] - Hiệu qua chống ung thư của nấm Linh chi đã được chứng minh từ 13 được kết hợp với trị liệu bằng Linh chi đã kco dài dược thời gian sống cho bệnh nhân, tý lệ người sống trên 5 năm cao hơn nhỏm không sử dụng kết hợp Linh chi Hiệu quá chống ung thư cùng thể hiện rõ với các tế hào ưng thư khoang miệng, ung thư gan, đặc hiệt kết hợp... NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ dưới mũ nấm dưới kính lứp) 3.1 Nghiên cứu vẻ đặc điểm thực vật của nám Linh chi thu hái ổ CHDCND Lào Trong quá trình điểu tra, thu mẫu nấm Linh chi hoang dại ỏ Hình 3.5: Ảnh mặt cắt dọc Hìnhnhiều 3.6: Ảnh cắt dọc phần CHDCND Lào chúng tòi phần thu dược mẫu mặt có hình dạng, kích thước điíối mẫu hẵm đươi kính lốp trên mẫu nấm ổữcri kíiìh lưp khác nhau Trong phạm vi đc tài chung tôi chi nghiên ... nối đỏi C2 2) Điều này, bước đầu gốp phần chứng minh cho mẫu Linh chi nghiên cứu có số thành phần hoá học tươiiE đồng với thành phần hoá học nấm Linh chi khác cồng bố 56 4.3 Vể tấc dụng sinh học. .. 1.1 Vài nét lịch sử vé hệ thòng học họ Linh chi (Ganơdermataceae DonkJ 1.2 Đặc điểm hình thái họ Gariodermataceae Donk 1.3 Thành phần hoá học nám Linh chi 1.4 Cóng dụng trị liệu nấm Linh chi. .. dùng làm thuốc Xích chi, Tử linh chi, Hác linh chi (G ơtmm), Bạc thụ chi (G capéỉnx ), Mật vãn bạc chi (G ĩemie), Tùng sam linh chi [G ỉsiigae) Loài Ganoderma appĩanatum (Pers) Pat Cũng thường