- Phản ứng mở, dóng vồng LaetoR: Lấy 2 ống nghiệm, mỗi ống
3.2.227Định tính Poỉysaccharid
Láy Imỉ dịch chĩẽí cồn Irên vào ống nghiệm, giỏ vào dỏ l giọt dung dịch Iođ xuất hiện mầu xanh đen. Chúng tỏi sơ bộ kcì luận trong mẫu Linh chi nghiên cứu có Polysaccharid.
3.2.2.8 Định tính Acid amin: Lấy Ig bợt dược liệu mịn vào bình nón
dung tích lOOml co nút mài, thêm vào đó 30ml cồn ctylic 70°, đế lạnh qua đèm. lọc lấy dịch lọc cho vào ống nghiệm. Criỏ từ từ vào dó thuốc thừ Ninhydrin pha trong aceton. quan sát thấy xuất hiện mầu nâu đen. Chúng tôi sơ bộ kết luận có acid amin.
Kết quả định tính các nhóm chất thấy trong thành phần cua nấm lãnh chi cỏ 6 nhóm chất chính: Saponin, Flavonoiđ, Sterol. Alcaloid,
3.2.2 Chiết xuất, phán lập một sỏ chất chính,
3.2.3.1 So đồ quy trình chiết xuất, phân lập nhóm chát trong dưực
- Kicm hoá
- Chiết bằng Oiloroĩonn tronp Soxhlet
-f = 60T.
Hình 3.20: Sư đổ quy trình chiết xuất, phân lập nhóm chất trọng dược liệu.
* Tiến hành:
Bộl dược liệu khô được chiết bằng Ether dầu hoả trong Soxhlet (thời
gian 16 giờ) thu được dịch chiết Ether dầu hoả (Dịch chỉết A).
Dược liệu sau khi đả chiết bằng Ether dẩu được làm khô, thấm ẩm bằng ammoniac 10% tiếp tục chiết trong Soxhlet bằng Qoroíbrm, thu được dịch chiết Cloroíbrm (DÉch chiết B).
Dược liệu sau khi dã chiết bằng Cloroíorm được làm khô, tiếp tục ngâm chiết trong Bình ngâm chiết bằng Ethanol 90°, thu được dịch chiết
Etiianol (Dịch chiết C).
Chụp ở bước sổng 254 nm Chụp ở hước sóng 366 nm Hình 3.21: Ảnh sác ký lớp mỏng các dịch chiết A, B, c
Từ dịch chiết A, kiểm tra trên sác ký lớp mỏng với hệ dung môi Cloroíorm : Methanol (19: 1) chúng tôi quan sát thấy có rất 5 vết khác
* Tim dung mối kếi linh cán A,
Hoà tan nóng với lượng tối thiểu khoảng lOmg cắn A| trong 15- 30ml các dung môi khác nhau tờ không phán cực đến phân cực: Elhcr dầu hoẳ. Diclomethan. Toluen, Cloroíorm, Ethyl acetal. Aceton, Mcthanol và đc bay hơi Lự nhiên. Quan sát bằng kính hiển vi xuất hiện một sổ loại tinh thể thớ trong Elhyl acetate (cắn AI).
A. Phàn lạp cắc thành phan trong cẩn Aị báng sac ky cột.
* ChuaII bị cột theo phương pháp nhồi cột ướt (chất hấp phụ là Silĩcagen)
Cột có đường kính cp = 3 em, dài 50 cm, dược láp cố dính vào giá, đáy cột có lót một lớp hông. Chất nhồi cột (chất hấp phụ) là bột Silicagcn cỡ hạt 60um (đã được hoạt hoá ớ 110 '0 trong I giờ) được trộn đều với cloroíorm thành một hỗn dịch. Mở khoá ớ cột, rốt hỏn dịch trên vào cột, cho dung môi chảv dể chất hấp phụ lẳng tự nhiên xuống đáy cột. Tiếp tục dùng dung mồi hứng được, rót lên CỘI và cho chảy liên tục một thời gian cho đốn khi chất hấp phụ hoàn toàn ổn định (Thời gian ổn định tối thiểu 4 tiếng). Tỷ lệ Silicagen và chất cần tách là kháng [50:11.
* Chuẩn bị cắn: Haà tan cấn cần tách trong một lượng tối thiểu Ethylacelat. trộn với một lượng Silicagen, sau đó bốc hoi dung môi dể hỗn dịch thành bỏt lơi. khỏ (Bột silicagen và cắn Â,).
Hình 3.22; Ảnh sắc ký cột
* Rửa giải cột bằng hệ dung mồi Clorotorm: Meihanol với tỷ lê thay
đổi từ 1100: (>j, [98: 1], [19: 1] đến [9: 1]. Hứng vào 130 ống, mỗi ống
tương đương 2ml. Kiổm tra bằng sấc ký lớp mỏng với hệ dung môi: Toluen: Ethylacetat: Acid formic [5: ố: 1,5], các ống có số vết với Rf tương tự nhau được gộp lại thành 6 phân đoạn:
Từ ống 01 đến 30 -> phân đoạn 1. Từ ống 35 đến 42 phân đoạn 2. Từ ống 47 đến 60 "ỳ phân đoạn 3. Từ ống 65 đến 89 phân đoạn 4. Tờ Ống 93 đến 103 -> phân đoạn 5.
18 đốn 34 có hai vết chất, gộp các ống này lại. để dung mồi bốc hơi tụ
nhiên tliấv kết tinh được tinh thể tráng hình phiến dài (phân đoạn A2). Từ (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
phân đoạn A2, kiem tra bằng sắc ký lớp mỏng với 3 hệ dung mỏi khác
nhau đều chí) hai vết dậm. béo RfT?= 0,7 và RfT3=0,8 (Ký hiệu T2 và 'rọ.