Nghiên cứu đã tiến hành mô tả, phân tích đặc điểm hình thái, đặc điểm vi học, thành phần hóa học của hai loài Nưa thu hái ở nhiều địa phương khác nhau ở Việt Nam. Các đặc điểm này đã được so sánh với các đặc điểm tương ứng của loài A. paeoniifolius (Dennst.) Nicolson.
Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên Bản tin Y Dược học miền núi số năm 2016 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT, THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA HAI LOÀI NƢA THU HÁI Ở VIỆT NAM Nguyễn Thị Thu Huyền Trường đại học Y Dược Thái Nguyên TÓM TẮT Nghiên cứu tiến hành mơ tả, phân tích đặc điểm hình thái, đặc điểm vi học, thành phần hóa học hai loài Nưa thu hái nhiều địa phương khác Việt Nam Các đặc điểm so sánh với đặc điểm tương ứng lồi A paeoniifolius (Dennst.) Nicolson Có thể phân biệt ba lồi dạng tươi, khơ đặc điểm hình thái, đặc điểm vi học bột củ thành phần hóa học củ Các đặc điểm tập hợp thành liệu làm sở để xây dựng chuyên luận kiểm nghiệm dược liệu Từ khóa: A paeoniifolius, nưa việt nam, đặc điểm thực vật, thành phần hóa học Đặt vấn đề Nưa tên gọi chung nhiều loài thực vật thuộc chi Amorphophallus, họ Ráy (Araceae) Việt Nam Củ số loài Nưa từ lâu nhân dân ta sử dụng thuốc thực phẩm [3],[4] Ngày glucomannan (một hợp chất chiết từ hai loài Nưa A.konjac k.kock, A paeoniifolius (Dennst.) Nicolson) sử dụng nhiều thực phẩm y dược (giảm mỡ máu, giảm cholesterol LDL, làm tá dược, màng bao thuốc…) [1] Với mục đích tìm nguồn ngun liệu làm thuốc mới, đề tài nghiên cứu với mục tiêu: Mô tả đặc điểm thực vật hai loài Nưa Việt Nam Nghiên cứu thành phần hóa học hai lồi Nưa Việt Nam So sánh đặc điểm với đặc điểm tương ứng loài Nưa A paeoniifolius (Dennst.) Nicolson Đối tƣợng phƣơng pháp nghiên cứu Nguyên liệu nghiên cứu: Hai mẫu Nưa thu hái nhiều địa phương khác nhau: Mẫu 1: huyện Ba Vì, thành phố Hà Nội vào tháng – 4/2015 Mẫu 2: huyện Đan Phượng, thành phố Hà Nội vào tháng – 4/2015 Mẫu A paeoniifolius (Dennst.) Nicolson: Nho Quan - Ninh Bình vào tháng 10/2014 Đại điểm nghiên cứu: Bộ môn Dược liệu – Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên Phƣơng tiện nghiên cứu: Mô tả thực vật: Thước kẻ, máy ảnh, kính hiển vi Nghiên cứu hóa học: dụng cụ phòng thí nghiệm, mỏng tráng sẵn silicagel GF254 Merc, máy chấm sắc ký CAMAG LINOMAT 5, máy chụp ảnh sắc ký CAMAG REPROSTAR 3, hóa chất thuốc thử đạt tiêu chuẩn phân tích theo Dược Điển Việt Nam IV [2] Phƣơng pháp nghiên cứu Mô tả đặc điểm thực vật - Nghiên cứu đặc điểm hình thái: Quan sát, đo, mơ tả chụp hình - Phương pháp kính hiển vi: tiến hành theo Dược Việt Nam IV [2] Nghiên cứu thành phần hóa học Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên Bản tin Y Dược học miền núi số năm 2016 - Sơ xác định thành phần hóa học củ hai lồi nghiên cứu phản ứng hóa học thường quy - Sắc ký lớp mỏng + Chuẩn bị dịch chiết: Ngâm 10g bột củ Nưa 20 ml methanol 24h nhiệt độ phòng, lọc qua giấy lọc, bốc dịch lọc đến khoảng 0,5 ml để lấy dịch chấm sắc ký + Tiến hành: dịch chiết triển khai mỏng Silicagel 60F254 tráng sẵn Merck, với hệ dung mơi thích hợp Hiện vết bước sóng 254nm 366nm, phun thuốc thử màu Vanilin 1%/ H2SO4 Kết nghiên cứu Đặc điểm hình thái Hình 1: Đặc điểm hình thái ba mẫu nƣa nghiên cứu A Mẫu B Mẫu C Mẫu A paeoniifolius (Dennst.) Nicolson Lá 2,3 Thân củ Bề mặt cuống Mẫu 1: Cây cỏ cao 1-1,5m, sống hàng năm có thân củ Củ hình cầu có mặt lõm phần gốc mầm, mặt lồi, thân củ có nhiều nốt sần củ khoai tây Có nhiều rễ con, mọc tập trung xung quanh phần gốc mầm củ Củ có kích thước 6-10x10-15cm, màu nâu sậm có màu cam, phần thịt củ màu vàng nhạt màu hồng Củ gây ngứa mạnh Thường có mọc từ thân củ Cuống mọng nước, kích thước 2-4x100-140cm, bề mặt sần ,có nhiều đốm trắng nhiều chấm đen nhỏ xanh đậm Phiến có màu xanh đậm, xòe rộng 50-100cm, xẻ thùy 3, thùy xẻ lơng chim nhiều lần (Hình 1A) Mẫu 2: Cây cỏ sống hàng năm có thân củ, cao 1,5-2m Củ hình cầu có mặt lõm phần gốc mầm, mặt lồi, xung quanh có nhiều rễ con, thân củ có nhiều nốt sần củ khoai tây Củ có kích thước 15-18x20-25cm Củ có màu nâu sậm, củ non có thịt trắng, củ già có thịt màu trắng vàng Củ gây ngứa nhẹ Thời gian nảy mầm khoảng tháng -5 Khi mọc, mầm ôm bẹ to màu xanh đậm Thường có mọc từ thân củ Cuống mọng nước, kích thước 6-8x140-180cm, bề mặt cuống nhẵn, có nhiều đốm trắng xanh nhạt Càng gốc cuống màu xanh đậm, phần cuối gốc có màu hồng Phiến có màu xanh nhạt, xòe rộng 60-120cm, xẻ thùy 3, thùy xẻ lơng chim nhiều lần (Hình 1B) Mẫu A paeoniifolius (Dennst.) Nicolson: Cây cỏ, cao 100-150cm, sống hàng năm có thân củ Củ hình cầu có mặt lõm phần gốc mầm, mặt lồi, xung quanh có nhiều rễ con, thân củ có nhiều nốt sần củ khoai tây Củ có kích thước 15x2025cm, bên ngồi màu nâu sậm, củ non phần thịt củ có màu hồng nhạt, củ già có màu vàng nhạt Thời gian nảy mầm hoa vào tháng 4-5 Hoa thường mọc trước Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên Bản tin Y Dược học miền núi số năm 2016 Thường có mọc từ thân củ Cuống mọng nước, có kích thước 56x100-150cm Bề mặt cuống có nhiều đốm trắng hình bầu dục xanh nhạt, gốc vết đốm lớn có nhiều nốt sần dạng gai mềm mụn cơm Phiến có màu xanh nhạt, kích thước 150-300cm, chẻ thùy 3, thùy xẻ lơng chim nhiều lần Mép phiến men theo cuống khơng (Hình 1C) Mẫu A aeoniifolius (Dennst.) Nicolson xác định tên tiêu loài lưu Phòng tiêu – Bộ mơn Thực vật, trường Đại học Dược Hà Nội với mã số tiêu HNIP/18083/14 Nhận xét: Trong trình nghiên cứu, chúng tơi chưa lấy mẫu hoa hai lồi nghiên cứu nên chưa xác định tên khoa học chúng Kết nghiên cứu cho thấy đặc điểm hình thái củ, mẫu nghiên cứu tương tự giống với mẫu A paeoniifolius (Dennst.) Nicolson Ta phân biệt lồi Nưa dựa vào bề mặt cuống lá: Mẫu 1: Cuống có bề mặt sần, có nhiều đốm trắng nhiều chấm đen nhỏ xanh đậm Mẫu 2: Bề mặt cuống nhẵn, có nhiều đốm trắng xanh nhạt Mẫu A paeoniifolius (Dennst.) Nicolson: Bề mặt cuống có nhiều đốm trắng hình bầu dục xanh nhạt, gốc vết đốm lớn có nhiều nốt sần dạng gai mềm mụn cơm Đặc điểm vi học bột củ Mẫu 1: Bột màu trắng, không mùi, khơng vị Soi kính hiển vi thấy đặc điểm sau: Tinh bột xếp riêng lẻ hay thành đám Có tinh bột đơn tinh bột kép đơi, kép ba Tinh bột có hình bầu dục, rốn hình chữ thập, kích thước 0,056-0,075mm (2) Mảnh mơ mềm có thành mỏng chứa tinh bột (1) Có loại tinh thể canxi oxalat hình kim Loại có kích thước 0,056mm thường tập trung thành bó (4) Loại có kích thước 0,164mm thường đứng riêng rẽ (6) Tinh thể canxi oxalat hình cầu gai kích thước 0,056mm (5) Có nhiều mảnh mạch (3) (Hình 2A) Mẫu 2: Bột màu trắng vàng, khơng mùi, khơng vị Soi kính hiển vi thấy đặc điểm sau: Tinh bột xếp riêng lẻ hay thành đám (2) Có tinh bột đơn tinh bột kép hai, ba nhiều lần Tinh bột đơn hình tròn hình đa giác, rốn hạt dạng vạch phân nhánh khơng, kích thước từ 0,020mm đến 0,024mm Mảnh mơ mềm có thành mỏng chứa tinh bột (1), nhiều mảnh mạch (3) Có nhiều tinh thể canxi oxalat hình kim đứng riêng rẽ thành đám, kích thước 0,16mm (6) có tinh thể canxi oxalat hình cầu gai kích thước 0,04mm (4) (Hình 2B) Mẫu A paeoniifolius (Dennst.) Nicolson: Bột màu trắng nâu, khơng mùi, vị nhạt, tê đầu lưỡi Soi kính hiển vi thấy đặc điểm sau: Tinh bột xếp riêng lẻ hay thành đám Có tinh bột đơn tinh bột kép bội Tinh bột đơn hình tròn hình đa giác, kích thước từ 0,008mm đến 0,024mm (2) Mảnh mơ mềm có thành mỏng chứa tinh bột (1) Có loại tinh thể canxi oxalat: Loại hình cầu gai kích thước 0,04mm (4) loại hình kim đứng riêng rẽ thành đám Loại hình kim có kích thước 0,048mm (4) Loại HK có kích thước 0,148mm (6) Có nhiều loại mảnh mạch (3) (Hình 2C) Nhận xét: Đặc điểm vi học củ hai loài nghiên cứu A paeoniifolius (Dennst.) Nicolson tương tự Từ đặc điểm vi học bột phân biệt ba loài Nưa dựa vào: Mẫu 1: Tinh bột đơn có hình bầu dục, rốn hình chữ thập, kích thước 0,056-0,075mm Có hai loại tinh thể calci oxalat hình kim 10 Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên Bản tin Y Dược học miền núi số năm 2016 Mẫu 2: Tinh bột đơn hình tròn hình đa giác, rốn hạt dạng vạch phân nhánh khơng, kích thước từ 0,020mm đến 0,024mm Chỉ có loại tinh thể calci oxalat hình kim Mẫu A paeoniifolius (Dennst.) Nicolson: Tinh bột đơn hình tròn hình đa giác, kích thước từ 0,008mm đến 0,024mm Có hai loại tinh thể calci oxalat hình kim Hình Đặc điểm bột dƣợc liệu A Mẫu B Mẫu C Mẫu A paeoniifolius (Dennst.) Nicolson Mảnh mô mềm mang hạt tinh bột Tinh bột Mảnh mạch 4,6 Tinh thể Ca oxalat hình kim Tinh thể Ca oxalat hình cầu gai Nghiên cứu hóa học Định tính sơ thành phần hóa học mẫu nưa: Bằng phản ứng hóa học thường quy xác định thành phần hóa học củ mẫu nghiên cứu chứa: saponin steroid, acid hữu cơ, đường khử, acid amin, polysaccharid, sterol Định tính sắc ký lớp mỏng: Sắc ký đồ khai triển dịch chiết methanol mẫu với hệ Cloroform - Methanol - Nước (85:15:1) trình bày hình Nhận xét: Sau khai triển dịch chiết methanol, ta thấy phân biệt ba mẫu Nưa dựa vào hình ảnh sắc ký đồ Trong mẫu nưa nghiên cứu, sắc ký đồ mẫu có số vết Rf tương tự với mẫu A paeoniifolius (Dennst.) Nicolson Hình 3: Hình ảnh sắc ký đồ dịch chiết cloroform mẫu nƣa nghiên cứu với hệ dung môi Cloroform - Methanol - Nƣớc (85:15:1) A Bước sóng 254nm B Bước sóng 366nm 11 Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên Bản tin Y Dược học miền núi số năm 2016 C Ánh sáng thường sau phu thuốc thử N1: Mẫu N2: Mẫu A.P: Mẫu A paeoniifolius (Dennst.) Nicolson Bàn luận Đây nguồn nguyên liệu dồi dào, dễ kiếm giá hợp lý hai lồi nghiên cứu dễ sống, phù hợp với điều kiện tự nhiên nước ta Có thể phân biệt loài Nưa nghiên cứu loài A paeoniifolius (Dennst.) Nicolson dựa đặc điểm thân củ, Điều giúp sàng lọc nhanh nguyên liệu đầu vào cho trình sản xuất tương lai Kết nghiên cứu hiển vi, nghiên cứu hóa học sở để xây dựng số tiêu chuẩn kiểm nghiệm mặt thực vật, hóa học cho hai lồi nghiên cứu Kết phân tích thành phần hóa học phương pháp sắc ký lớp mỏng cho thấy mẫu nguồn nguyên liệu để làm dược liệu chiết xuất glucomannan thay loài A paeoniifolius (Dennst.) Nicolson Kết luận: Đề tài mơ tả, phân tích đặc điểm hình thái, đặc điểm vi học bột củ hai loài nghiên cứu, xác định thành phần hóa học củ hai lồi phản ứng hóa học thường quy phương pháp sắc ký lớp mỏng Các đặc điểm so sánh với đặc điểm tương ứng loài A paeoniifolius (Dennst.) Nicolson Đề xuất: Từ kết đạt được, chúng tơi có số kiến nghị sau: - Tiếp tục nghiên cứu hàm lượng glucomannan hai loài nghiên cứu - Lấy mẫu hoa, quả, hạt loài nưa nghiên cứu để xác định tên khoa học chúng TÀI LIỆU THAM KHẢO Nguyễn Tiến An (2012), Nghiên cứu thành phần hố học, quy trình tách chiết, biến tính hố học khả ứng dụng Glucomannan từ củ số loài nưa (Amrphophallus SP Araceae) Việt Nam: Luận án Tiến sĩ Hóa học, Viện Hóa học, Hà Nội Bộ Y tế, Dược điển Việt Nam IV, Phụ lục 9.8 Đỗ Tất Lợi (1999), Những thuốc vị thuốc Việt Nam: Nxb Y học tr 136 Nguyễn Viết Thân (2013), Cây thuốc Việt Nam thuốc thường dùng, Vol tập Nxb Thế giới tr 46,48 STUDYING ON BOTANICAL CHARACTERISTICS, CHEMICAL COMPOSITION OF TWO “NUA SPECIES” COLLECTED IN VIETNAM SUMMARY Based on the analysis of botanical studies, chemical composition studies of the samples “Nua species” collected from different distribution places in Vietnam, the morphology, microscopy and chemical composition of them have been described, systematized and compared with Amorphophallus paeoniifolius (Dennst.) Nicolson Microscopy method and TLC alanysis can distinguish them in the form of raw materials as well as in powder form These features have been assembled into the data as a basis to build the testing medicinal treatises Keywords: Nua species, A paeoniifolius, botanical chacteristic, chemical composition 12 ... xuất tương lai Kết nghiên cứu hiển vi, nghiên cứu hóa học sở để xây dựng số tiêu chuẩn kiểm nghiệm mặt thực vật, hóa học cho hai lồi nghiên cứu Kết phân tích thành phần hóa học phương pháp sắc... loài A paeoniifolius (Dennst.) Nicolson Kết luận: Đề tài mơ tả, phân tích đặc điểm hình thái, đặc điểm vi học bột củ hai loài nghiên cứu, xác định thành phần hóa học củ hai lồi phản ứng hóa học. .. Tinh thể Ca oxalat hình cầu gai Nghiên cứu hóa học Định tính sơ thành phần hóa học mẫu nưa: Bằng phản ứng hóa học thường quy xác định thành phần hóa học củ mẫu nghiên cứu chứa: saponin steroid, acid