Nghiên cứu đặc điểm thực vật và tác dụng dược lý của dược liệu lõi tiền trên cơ trơn tử cung cô lập của súc vật thí nghiệm

Trong đề tài này chúng tôi tiếp tục nghiên cứu đặc điểm giải phẫu, đặc điểm bột dược liệu và tác dụng dược lý của dược liệu lõi tiền trên cơ trơn tử cung cô lập. Kết quả nghiên cứu: đã mô tả, chụp ảnh được các đặc điểm cấu tạo vi phẫu thân, lá và các đặc điểm vi học bột dược liệu, góp phần tiêu chuẩn hóa dược liệu lõi tiền.

Phạm Thị Tuyết Nhung Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ 89(01/2): 319 – 324 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ TÁC DỤNG DƯỢC LÝ CỦA DƯỢC LIỆU LÕI TIỀN TRÊN CƠ TRƠN TỬ CUNG CÔ LẬP CỦA SÚC VẬT THÍ NGHIỆM Phạm Thị Tuyết Nhung, Nguyễn Tiến Phượng, Nguyễn Thị Tâm Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên TÓM TẮT Lõi tiền thuốc mọc tự nhiên, phổ biến vùng miền núi từ lâu người dân miền núi phía Bắc (Hòa Bình, Sơn La, Thái Ngun…) dùng tồn để chữa tiêu hóa kém, xương khớp sưng đau, bệnh da trường hợp hành kinh bị đau bụng vào trước ngày đầu kỳ kinh, kinh nguyệt ít, có cục Đến nay, có cơng bố nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật, độc tính cấp tác dụng giảm đau lõi tiền Trong đề tài tiếp tục nghiên cứu đặc điểm giải phẫu, đặc điểm bột dược liệu tác dụng dược lý dược liệu lõi tiền trơn tử cung cô lập Kết nghiên cứu: mô tả, chụp ảnh đặc điểm cấu tạo vi phẫu thân, đặc điểm vi học bột dược liệu, góp phần tiêu chuẩn hóa dược liệu lõi tiền Tác dụng dược lý cao lỏng dược liệu tử cung chuột lang cô lập cho kết quả: nồng độ 0,3125 – 0,625 g dược liệu/ 100 ml 100 % mẫu tử cung nghiên cứu xuất co bóp, mức liều tương đương với liều ngoại suy người 11 - 20 g dược liệu Theo kinh nghiệm dân gian, liều thường dùng chữa đau bụng kinh 12 - 16 g/ dược liệu khô/ ngày Điều chứng tỏ kinh nghiệm dân gian dùng vị thuốc để chữa đau bụng kinh huyết ứ có sở khoa học liều lượng sử dụng phù hợp Từ khóa: Lõi tiền; vi phẫu thân, lá; vi học bột; tác dụng tử cung cô lập ĐẶT VẤN ĐỀ* Lõi tiền thuốc mọc tự nhiên, phổ biến vùng miền núi Việt nam từ lâu người dân miền núi phía Bắc (Hòa Bình, Sơn La, Thái Ngun…) dùng tồn để chữa tiêu hóa kém, xương khớp sưng đau, bệnh da trường hợp hành kinh bị đau bụng vào trước ngày đầu kỳ kinh, kinh nguyệt ít, có cục Đến nay, có số cơng bố nghiên cứu đặc điểm hình thái thực vật, độc tính cấp tác dụng giảm đau lõi tiền Để nâng cao giá trị sử dụng thuốc, tiến hành đề tài với mục tiêu sau: Nghiên cứu đặc điểm thực vật lõi tiền Đánh giá tác dụng dược lý cao lỏng dược liệu lõi tiền tử cung động vật thí nghiệm ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu * Mẫu nghiên cứu thu hái từ tháng - 4/ 2011 vườn thuốc, Trường Đại Học Y Dược Thái Nguyên bao gồm: - Mẫu cành tươi mang hoa để xác định tên khoa học - Mẫu thân cây, tươi để nghiên cứu đặc điểm giải phẫu - Mẫu mang rễ, thân, đem sấy khô để nghiên cứu đặc điểm vi học bột dược liệu - Mẫu có thân, rửa sạch, phơi khô, bào chế dạng cao lỏng 5:1; cao lỏng 1:1 để thử tác dụng dược lý Phương tiện nghiên cứu Động vật Chuột lang trưởng thành, khỏe mạnh, trọng lượng từ 200-250g, đạt tiêu chuẩn thí nghiệm viện Vệ sinh dịch tễ trung ương cung cấp, chuột nuôi ổn định tuần trước thử nghiệm Thiết bị, máy móc - Máy cắt vi phẫu cầm tay Kính hiển vi Leica – Nhật Bản Máy ảnh Canon IXUS 105 - Hệ thống thiết bị thử tác dụng dược lý tử cung động vật thí nghiệm 319 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Phạm Thị Tuyết Nhung Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ Thuốc thử, hóa chất - Hóa chất làm tiêu bản, pha dung dịch Tyrode nuôi tử cung đạt tiêu chuẩn phân tích - Thuốc đối chứng: + Papaverin hydrochlorid 40 mg/ml, dạng ống ml + Oxytocin UI, dạng ống ml Thời gian địa điểm nghiên cứu - Bộ môn Dược liệu – Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên: tháng - 4/ 2011 - Khoa Dược lý – sinh hóa, Viện Dược liệu trung ương: tháng 5/ 2011 Chỉ tiêu nghiên cứu - Mô tả đặc điểm hình thái rễ, thân, lá, hoa - Chụp ảnh, mô tả đặc điểm giải phẫu thân, đặc điểm vi học bột dược liệu - % mẫu tử cung xuất đáp ứng với thuốc nghiên cứu - Biên độ co bóp trung bình tử cung lập - Thời gian tử cung cô lập bắt đầu xuất đáp ứng - Thời gian tử cung cô lập có đáp ứng tối đa Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu thực vật - Nghiên cứu đặc điểm hình thái phương pháp phân tích, mơ tả đối chiếu tài liệu [3], [4], [6] - Nghiên cứu đặc điểm giải phẫu thân, đặc điểm vi học bột dược liệu phương pháp thực nghiệm mô tả Nghiên cứu tác dụng dược lý: Thử tác dụng dược lý cao lỏng dược liệu tử cung chuột lang cô lập phương pháp thực nghiệm so sánh theo mơ hình Magnus [7], [8] Xử lý số liệu: theo phương pháp thống kê sinh học sử dụng t–test Student KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Nghiên cứu thực vật Mô tả đặc điểm thực vật Quan sát thực địa qua phân tích mẫu có hoa cho kết quả: Lõi tiền thuộc loại dây leo, bò ngang mặt đất quấn lên gỗ bên cạnh, thân mềm, không 89(01/2): 319 – 324 lông, nhẵn, dài - m trở lên, phần thân lúc non có màu xanh, phần thân già màu nâu nhạt Rễ dài, có nhiều rễ phụ, mọc bò ngang Lá mọc so le, hình lọng dài - cm, rộng cm, mặt có màu xanh lục sẫm, mặt có màu xanh nhạt hơn, cuống đính vào khoảng 1/ - 1/ phiến lá, gốc có - 11 gân tỏa hình chân vịt, gân rõ mặt Cụm hoa mọc thành tán hình cầu kẽ lá, cuống chung dài 2,5 - cm, cụm hoa chia thành - cuống nhỏ, mang hoa màu vàng lục Hoa nở vào tháng - Mẫu chúng tơi nghiên cứu hồn toàn giống với mẫu lõi tiền ghi tài liệu [3], [4], [6] có tên khoa học là: Stephania longa Lour – Menispermaceae Đặc điểm giải phẫu thân, Đặc điểm cấu tạo vi phẫu thân Mặt cắt ngang thân hình gần tròn Từ ngồi vào có: Biểu bì gồm lớp tế bào có hình chữ nhật Trên bề mặt biểu bì phủ lớp cutin tạo thành “nhú” nhô lên Sát với lớp biểu bì lớp mơ dày cấu tạo tế bào thành dày xếp sát Dưới lớp mô dày mô mềm vỏ gồm - hàng tế bào có hình trứng, thành mỏng cellulose Vòng mơ cứng gồm 10 - 11 cung xếp liên tục tạo thành vòng uốn lượn: tế bào có thành dày hóa gỗ hồn tồn, kích thước tế bào khơng Đám mơ mềm bên cung mơ cứng: gồm tế bào có màng mỏng cellulose, hình đa giác, khơng nhau, có kích thước lớn tế bào mơ mềm vỏ phía ngồi Hệ thống dẫn gồm 10-11 bó chồng kép libe – gỗ, gồm libe cấp phía ngồi gỗ cấp phía với mạch gỗ có kích thước to, nhỏ khác Tầng phát sinh libe – gỗ gồm - hàng tế bào có kích thuốc nhỏ Tia ruột gồm - hàng tế bào có màng mỏng cellulose nằm xen kẽ bó libe – gỗ Trong mô mềm ruột với tế bào hình tròn to, có màng mỏng cellulose, kích thước không Đặc điểm vi học bột dược liệu Bột dược liệu có màu vàng nhạt, vị thơm nhẹ Dưới kính hiển vi quang học quan sát đặc điểm sau: 320 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Phạm Thị Tuyết Nhung Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ Mảnh bần Mảnh phiến Mảnh mô giậu BB mang lỗ khí 5.Mảnh mạch vạch Mảnh mạch xoắn Mảnh mạch điểm Mảnh mô cứng Thể cứng 10 Sợi mang tinh thể 11 Tế bào mô cứng 12 TT calcioxalat Đặc điểm cấu tạo vi phẫu - Phần gân giữa: lồi lên mặt dưới, mặt phẳng Biểu bì biểu bì cấu tạo hàng tế bào Sát với lớp biểu bì lớp mô mềm dự trữ cấu tạo tế bào có hình tròn, hình đa giác, kích thước khơng nhau, màng mỏng cellulose Trong phần mô mềm có số tế bào hóa gỗ Hệ thống dẫn bó libe – gỗ hình cung nằm vị trí trung tâm gân Cung gỗ gồm mạch gỗ không xen kẽ với mô mềm gỗ nằm phía cung libe Cung libe gồm tế bào có thành cellulose - Phần phiến lá: biểu bì cấu tạo hàng tế bào, khơng có lỗ khí Biểu bì khác với biểu bì có lỗ khí, bề mặt biểu bì phủ lớp cutin tạo thành “nhú” nhô lên Phần thịt nằm lớp biểu bì có cấu tạo dị thể bất đối xứng, sát lớp biểu bì lớp mơ giậu gồm tầng tế bào 89(01/2): 319 – 324 Mô khuyết cấu tạo tế bào không nhau, để hở khoảng trống chứa đầy khí Nghiên cứu tác dụng dược lý Đánh giá khả co bóp tử cung chuột lang cô lập nồng độ thuốc khác Kết đánh giá thể qua % mẫu tử cung xuất đáp ứng biên độ co bóp trung bình tử cung chuột lang cô lập nồng độ khác (Bảng 3.1) P3-2: P so sánh biên độ co bóp trung bình tử cung chuột lang cô lập nồng độ 0,3125 g DL/ 100 ml 0,0625 g DL/ 100 ml P4-3: P so sánh biên độ co bóp trung bình tử cung chuột lang lập nồng độ 0,625 g DL/ 100 ml 0,3125 g DL/ 100 ml Nhận xét: - Biên độ co bóp tử cung chuột lang cô lập phụ thuộc vào nồng độ thuốc - Nồng độ thuốc cao thời gian bắt đầu xuất đáp ứng thời gian có đáp ứng tối đa giảm Thăm dò tác dụng cao lỏng Lõi tiền tử cung chuột lang cô lập so với oxytocin papaverin Ghi chú: BT: bình thường; T: thuốc; Pa: 100 µl Papaverin 40 mg/ ml; oxytocin: µl oxytocin UI/ ml Nhận xét: Trên đồ thị ghi lại biên độ co bóp tử cung chuột lang cô lập nồng độ thuốc so với oxytocin thuốc đối kháng papaverin nhận thấy: Đồ thị biên độ co bóp tử cung thuốc nghiên cứu có dạng gần giống với đồ thị biên độ co bóp oxytocin Đồng thời hình ảnh biên độ co bóp tử cung cao thuốc 5:1 mức liều 50 µl (tương đương 0,625 g dược liệu/ 100 ml) xấp xỉ biên độ co bóp tử cung oxytocin liều 0,075 UI/100ml Khi cho vào dịch ni 100 µl papaverin (tương đương 10 mg/ 100 ml), sau thêm 25 µl cao thuốc 5:1 (tương đương 0,3125 g dược liệu/ 100 ml) thấy tử cung không bị giãn, chứng tỏ cao dược liệu liều 0,3125 g/ 100 ml có khả ức chế tác dụng papaverin liều 10 mg/ 100 ml 321 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Phạm Thị Tuyết Nhung Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ 89(01/2): 319 – 324 Bảng 3.1 Khả co bóp tử cung chuột lang cô lập nồng độ thuốc khác P so sánh nồng độ Biên độ co bóp trung bình (cm) Thời gian đáp ứng tối đa (phút) Thời gian bắt đầu xuất đáp ứng (phút) % mẫu TCNC đáp ứng với thuốc (%) Nồng độ thuốc NC (g DL/ 100ml) STT 0 0,49±0,38 8,50±1,50 6,25±0,75 22,2 0,0625 P3-2< 0,05 3,12±0,21 3,22±0,43 1,39±0,32 100 0,3125 P4-3< 0,05 3,67±0,25 1,72±0,25 0,39±0,14 100 0,6250 Hình 3.1: Đồ thị biểu thị co bóp tử cung nồng độ thuốc khác so với thuốc đối chứng BÀN LUẬN VỀ KẾT QUẢ Về thực vật - Qua kết nghiên cứu đặc điểm hình thái mẫu thực địa, đối chiếu với tài liệu [3], [4], [6] kết luận mẫu nghiên cứu có tên khoa học là: Stephania longa Lour - họ Tiết dê (Menispermaceae) Việc xác định tên khoa học mẫu giúp cho việc nghiên cứu giải phẫu, vi học tác dụng dược lý có giá trị - Theo tài liệu [3], [4], [5], [6], chưa có nghiên cứu đề cập đến đặc điểm cấu tạo giải phẫu đặc điểm vi học bột dược liệu, kết nghiên cứu đặc điểm cấu tạo giải phẫu thân, đặc điểm vi học bột dược liệu góp phần tiêu chuẩn hóa vị dược liệu Lõi tiền, nâng cao giá trị khoa học thuốc Về tác dụng dược lý Trong “Những thuốc vị thuốc Việt Nam” “Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam” khơng nói đến cơng dụng chữa đau bụng kinh vị thuốc Lõi tiền, đồng thời chưa có nghiên cứu đánh giá tác dụng dược lý dược liệu tử cung động vật thí nghiệm Việc sử dụng vị dược liệu lõi tiền chữa đau bụng kinh nhân dân số tỉnh miền núi phía Bắc đến kinh nghiệm dân gian Nghiên cứu thử nghiệm đề cập đến tác dụng tử cung chuột lang cô lập Theo Y học cổ truyền, nguyên nhân gây thống kinh huyết ứ với biểu hiện: đau trước hành kinh, bụng đau gò, ấn vào có cục, kinh ít, màu đen, có huyết cục Khi kinh đỡ đau [1] Như vậy, kinh nghiệm sử dụng phần mặt đất Lõi tiền để điều trị đau bụng kinh đồng bào dân tộc Sơn La, Hòa Bình, Thái Ngun… tương ứng với tượng thống kinh huyết ứ YHCT Kết nghiên cứu cho thấy: cao lỏng dược liệu làm tăng co bóp tử cung phù hợp với chế pháp điều trị thống kinh huyết ứ theo YHCT Kết thực nghiệm cho thấy: - Khi tử cung chuột lang nuôi dung dịch ni có nồng độ 0,3125 - 0,625 g dược liệu/ 100 ml 100 % mẫu nghiên cứu xuất co bóp, mức liều tương đương với liều ngoại suy người 11 - 20 g dược liệu/ ngày [2] Theo kinh nghiệm dân gian, liều thường dùng chữa đau bụng kinh 12 16 g/ dược liệu khô/ ngày Như vậy, mức liều mà nhân dân sử dụng hợp lý 322 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Phạm Thị Tuyết Nhung Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CÔNG NGHỆ - Khi tăng nồng độ thuốc nghiên cứu biên độ co bóp tử cung tăng, thời gian tử cung bắt đầu xuất đáp ứng thời gian tử cung có đáp ứng tối đa giảm Điều này, cho thấy cần thận trọng phụ nữ có thai sử dụng dược liệu để chữa số bệnh như: ỉa chảy, tiêu hóa kém, đau nhức xương khớp, tiểu tiện buốt rắt… KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Qua thời gian thực đề tài, thu kết sau: - Đã mô tả đặc điểm thực vật, chụp ảnh cành mang hoa, làm tiêu thực vật lưu mẫu môn Dược liệu – Trường Đại học Y Dược Thái Nguyên, xác định mẫu nghiên cứu là: Stephania longa Lour – họ Tiết dê (Menispermaceae) - Đã mô tả, chụp ảnh đặc điểm cấu tạo vi phẫu thân, đặc điểm vi học bột dược liệu, góp phần tiêu chuẩn hóa dược liệu lõi tiền - Đã thử tác dụng dược lý cao lỏng dược liệu tử cung chuột lang cô lập cho kết quả: nồng độ 0,3125 – 0,625 g dược liệu/ 100 ml 100 % mẫu tử cung nghiên cứu xuất co bóp, mức liều tương đương với liều ngoại suy người 11 - 20 g dược liệu Theo kinh nghiệm dân gian, liều thường dùng chữa đau bụng kinh 12 - 16 g/ dược liệu khô/ ngày Điều chứng tỏ kinh nghiệm dân gian dùng vị thuốc để chữa đau bụng kinh huyết ứ có sở khoa học liều lượng sử dụng phù hợp 89(01/2): 319 – 324 Đề nghị - Nghiên cứu thêm thành phần hóa học dược liệu, xác định hoạt chất có tác dụng làm tăng co bóp tử cung liều làm tử cung co bóp mạnh - Dựa định hướng kết nghiên cứu tác dụng dược lý đề tài, nên nghiên cứu thêm tác dụng thúc đẻ dược liệu mơ hình thực nghiệm, từ tiếp tục thử nghiệm lâm sàng để ứng dụng rộng rãi cộng đồng TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Bộ môn Y học cổ truyền dân tộc (1993), Y học cổ truyền, Trường Đại học Y Hà Nội, tr 655 [2] Đỗ Trung Đàm (2002), “Phương pháp ngoại suy liều có hiệu tương đương người động vật thí nghiệm”, Tạp chí Dược học, số 2, tr - [3] Phạm Hoàng Hộ (2000), Cây cỏ Việt nam, tập I, Nhà xuất Trẻ, tr 329 - 335 [4] Đỗ Tất Lợi (2004), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, Tập I, II, Nhà xuất Y học, tr 161, 547, 215 [5] Trần Công Khánh, Nguyễn Thị Sinh (1997), Thực vật dược, Trường Đại học Dược Hà Nội, tr 55 [6] Viện dược liệu (2004), “Lõi tiền”, Cây thuốc động vật làm thuốc Việt Nam, tập II, Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Hà Nội, tr 161 - 162 [7] H Gerhard Vogel (E.d) (2008), Drug Discovery and Evaluation: pharmacological assay, Springer - Germany, tr 18 [8] Robert A Turner (1976), Screening methods in pharmacology, Academic Press, NewYork and London, tr 163 323 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn Phạm Thị Tuyết Nhung Đtg Tạp chí KHOA HỌC & CƠNG NGHỆ 89(01/2): 319 – 324 SUMMARY STUDYING CHARACTERISTICS OF PLANT AND PHARMACOLOGICAL EFFECTS OF LOI TIEN ON ISOLATED UTERUS OF ANIMALS Pham Thi Tuyet Nhung*, Nguyen Tien Phuong, Nguyen Thi Tam Thai Nguyen University of Medicine and Pharmacy Loi tien is a medicinal plant which grows naturally, quite common in mountainous areas and has been used the whole plant by people at the northern mountainous regions (Hoa Binh, Son La, Thai Nguyen ) for a long time to treat poor digestion, painful swelling at bones and joints, skin diseases and cases of having abdominal pain below belly button before and early days of menstruation period, less menstrual, having masses Nowadays there have been published studies on morphological characteristics of plant, acute toxicity and analgesic effects of loi tien In this topic we further studied the anatomical features and characteristics of pharmaceutical powders and pharmacological effects of loi tien on isolated uterus of animals Research results: were described, photographed the structural characteristics microsurgery of stems, leaves and micro-characteristics of pharmaceutical plant powders, contributing to standardize the loi tien pharmaceutical plant Pharmacological effects of medicinal concentrated extracts on isolated guinea pig’s uterus gave results: at concentrations from 0,3125g to 0,625g pharmaceutical materials/100 ml, then 100% of the researched samples appeared contractions, this dose was equivalent to extrapolated dose in humans is 11 to 20g of pharmaceutical materials According to popular experience, the dose commonly used to treat dysmenorrhea is 12 to 16 g/dry herbal /day This matter demonstrates the experiences of using of folk medicine to treat dysmenorrhea due to blood stasis is based on scientific basis and amount of using is appropriate Key words: loi tien; structural characteristics microsurgery of stems, leaves; microcharacteristics of pharmaceutical plant powders; pharmacological effects on isolated uterus * 324 Số hóa Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.lrc-tnu.edu.vn ... phẫu thân, đặc điểm vi học bột dược liệu phương pháp thực nghiệm mô tả Nghiên cứu tác dụng dược lý: Thử tác dụng dược lý cao lỏng dược liệu tử cung chuột lang cô lập phương pháp thực nghiệm so... dụng chữa đau bụng kinh vị thuốc Lõi tiền, đồng thời chưa có nghiên cứu đánh giá tác dụng dược lý dược liệu tử cung động vật thí nghiệm Việc sử dụng vị dược liệu lõi tiền chữa đau bụng kinh nhân... ảnh, mô tả đặc điểm giải phẫu thân, đặc điểm vi học bột dược liệu - % mẫu tử cung xuất đáp ứng với thuốc nghiên cứu - Biên độ co bóp trung bình tử cung cô lập - Thời gian tử cung cô lập bắt đầu