Các loài thuộc chi Leea, họ Gối hạc được báo cáo có tác dụng chống viêm, chống oxy hóa, giảm đau, kháng khuẩn, được sử dụng để điều trị đau nhức xương khớp, phong thấp, các bệnh về tiêu hóa, ung thư. Mục tiêu: Nghiên cứu đặc điểm thực vật và hoạt tính ức chế enzyme Acetylcholinesterase của hai loài thuộc chi Leea.
Tạp chí Y Dược học - Trường Đại học Y Dược Huế - Tập 9, số - tháng 7/2019 NGHIÊN CỨU ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ HOẠT TÍNH ỨC CHẾ ENZYME ACETYLCHOLINESTERASE CỦA HAI LOÀI LEEA SP - HỌ GỐI HẠC (LEEACEAE) Lê Thị Bích Hiền, Lê Thị Minh Quý Khoa Dược, Trường Đại học Y Dược, Đại học Huế Tóm tắt Đặt vấn đề: Các lồi thuộc chi Leea, họ Gối hạc báo cáo có tác dụng chống viêm, chống oxy hóa, giảm đau, kháng khuẩn, sử dụng để điều trị đau nhức xương khớp, phong thấp, bệnh tiêu hóa, ung thư Mục tiêu: Nghiên cứu đặc điểm thực vật hoạt tính ức chế enzyme Acetylcholinesterase hai loài thuộc chi Leea Đối tượng phương pháp nghiên cứu: Hai loài Leea rubra Blume ex Spreng Leea curtisii King., họ Gối hạc xác định đặc điểm soi bột, đặc điểm vi phẫu phương pháp nhuộm kép, xác định hoạt tính ức chế enzyme Acetylcholinesterase theo phương pháp Ellman Kết quả: Đã xác định đặc điểm vi phẫu, soi bột loài nghiên cứu; dịch chiết toàn phần dịch chiết phân đoạn lồi nghiên cứu có tác dụng ức chế enzyme Acetylcholinesterase mức độ trung bình với giá trị IC50 khoảng 42,44 - 97,96 µg/ml Kết luận: Đề tài góp phần tiêu chuẩn hóa dược liệu mặt vi học xác định hoạt tính ức chế enzyme Acetylcholinesterase hai lồi thuộc chi Leea Từ khóa: Acetylcholinesterase, Leea rubra, Leea curtisii, vi phẫu, soi bột Abstract STUDY ON BOTANICAL CHARACTERISTICS AND ACETYLCHOLINESTERASE INHIBITORY ACTIVITY OF TWO SPECIES LEEA SP - LEEACEAE Le Thi Bich Hien, Le Thi Minh Quy Faculty of Pharmacy, Hue University of Medicine and Pharmacy, Hue University Background: The species belonging to the genus Leea, Leeaceae are reported to have anti-inflammatory, antioxidant, analgesic, antibacterial effects, and have been used to treat osteoarthritis pain, rheumatism, digestive and cancer diseases The project aims to study botanical characteristics and Acetylcholinesterase inhibitory activity of two species of genus Leea Materials and method: Two species Leea rubra Blume ex Spreng and Leea curtisii King., Leeaceae were identified the powder characteristics, microsurgical characteristics by double dyeing method, determined Acetylcholinesterase inhibitory activity by the method of Ellman Results: Identified characteristics of microsurgery and powder of studied species; total extracts and fractional extracts of studied species shown the average Acetylcholinesterase inhibitory activities with the IC50 values in the range of 42.44 to 97.96 µg/ml Conclusion: The project contributed to standardize microbiological characteristics and determined Acetylcholinesterase inhibitory activity of two species belonging to the genus Leea Key words: Acetylcholinesterase, Leea rubra, Leea curtisii, microsurgery, powder characteristics ĐẶT VẤN ĐỀ VÀ MỤC TIÊU Chi Leea D Royen ex L thuộc họ Gối hạc phân bố rộng khắp khu vực Nam Á, Đông Nam Á, Australia khu vực nhiệt đới châu Phi Hiện Việt Nam chi có khoảng 7-12 lồi Các loài thuộc chi Leea sử dụng làm thuốc y học cổ truyền nhiều quốc gia để điều trị bệnh đau nhức xương khớp, phong thấp, bệnh tiêu hóa, ung thư [1], [5] Các kết nghiên cứu dược lý cho thấy loài chi có tác dụng chống viêm, chống oxy hóa, giảm đau, kháng khuẩn, kháng nấm ức chế tế bào ung thư [5], [6] Điển rễ loài Gối hạc Leea rubra sử dụng phổ biến dân gian để điều trị đau nhức xương khớp, tê thấp, sưng tấy Các dịch chiết phân đoạn Gối hạc chứng minh có tác dụng kháng khuẩn, chống oxi hoá in vitro, tác dụng giảm đau chống viêm in vivo [2], [7] Đối với loài Củ rối bẹ Leea curtisii King., kinh nghiệm dân gian sử dụng loài để trị rắn cắn, dịch chiết Địa liên hệ: Lê Thị Bích Hiền, email: bichhien1987@gmail.com Ngày nhận bài: 7/4/2019, Ngày đồng ý đăng: 12/6/2019; Ngày xuất bản: 1/7/2019 22 DOI: 10.34071/jmp.2019.4.3 Tạp chí Y Dược học - Trường Đại học Y Dược Huế - Tập 9, số - tháng 7/2019 báo cáo có tác dụng ức chế tế bào ung thư HL60 [8] Theo giả thuyết cholinergic, chất ức chế enzyme Acetylcholinesterase (AChE) làm tăng nồng độ thời gian hoạt động chất dẫn truyền thần kinh Acetylcholine não, có khả ngăn chặn tiến triển bệnh Alzheimer Vì vậy, nay, hướng chủ yếu điều trị bệnh Alzheimer sử dụng chất ức chế AChE Theo khảo sát sơ nhóm nghiên cứu, dịch chiết methanol thân rễ lồi Gối hạc có khả ức chế AChE tốt Đề tài “Nghiên cứu đặc điểm thực vật hoạt tính ức chế enzyme Acetylcholinesterase hai loài Leea sp – Họ Gối hạc (Leeaceae)” thực hai loài Gối hạc (Leea rubra Blume ex Spreng.) Củ rối bẹ (Leea curtisii King.) với mục tiêu nghiên cứu đặc điểm soi bột vi phẫu lồi góp phần nhận biết, tiêu chuẩn hóa dược liệu đồng thời xác định hoạt tính ức chế AChE lồi dược liệu ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu thân loài: Gối hạc Leea rubra Blume ex Spreng thu hái huyện Đakrông, tỉnh Quảng Trị Củ rối bẹ Leea curtisii King thu hái huyện Nam Đông, tỉnh Thừa Thiên Huế Các mẫu định danh tên khoa học TS Vũ Tiến Chính, Bảo tàng thiên nhiên Việt Nam, Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam Các mẫu tươi sau thu hái rửa sạch, sấy khô, xay thành bột thô 2.2 Phương pháp nghiên cứu 2.2.1 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm thực vật 2.2.1.1 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm soi bột Bột dược liệu xay đến kích thước phù hợp, sau tiến hành làm tiêu theo dõi đặc điểm kính hiển vi, chụp ảnh mơ tả đặc điểm đặc trưng 2.2.1.2 Phương pháp nghiên cứu đặc điểm vi phẫu Tiêu vi phẫu thực phương pháp nhuộm kép, theo dõi đặc điểm kính hiển vi, chụp ảnh mơ tả đặc điểm đặc trưng 2.2.2 Phương pháp nghiên cứu hoạt tính ức chế enzyme Acetylcholinesterase 2.2.2.1 Phương pháp chiết xuất Phương pháp chiết xuất dịch chiết toàn phần: dược liệu chiết siêu âm khoảng nhiệt độ phịng dung mơi methanol, sau lọc thu lấy dịch chiết, đem cô chân không thu cao toàn phần Phương pháp chiết xuất phân đoạn lỏng - lỏng: cao toàn phần phân tán vào nước tiến hành chiết phân đoạn với dung mơi: n-hexane, chloroform ethyl acetate Sau đó, dịch chiết phân đoạn cất thu hồi dung môi thu cắn phân đoạn n-hexane, chloroform, ethyl acetate nước 2.2.2.2 Phương pháp nghiên cứu hoạt tính ức chế enzyme Acetylcholinesterase Xác định hoạt tính ức chế AChE phương pháp đo quang dựa nguyên tắc Ellman [4] Nguyên tắc phương pháp: Cơ chất Acetylthiocholine iodide (ATCI) bị thủy phân nhờ xúc tác AChE tạo Thiocholine Thiocholine phản ứng với thuốc thử 5,5’-dithiobis-nitrobenzoic acid (DTNB) giải phóng hợp chất 5-thio-2-nitrobenzoic acid màu vàng Tiến hành đo độ hấp thụ dung dịch tạo thành bước sóng 405 nm để xác định hoạt tính ức chế AChE Chất đối chứng dương sử dụng Galantamine (Sigma) Quy trình phương pháp thử nghiệm: thêm dung dịch đệm phosphate pH 8, mẫu thử dung dịch enzym AChE 0,25 IU/ml vào giếng đĩa 96 giếng Hỗn hợp trộn ủ 15 phút nhiệt độ phịng Sau đó, dung dịch thuốc thử DTNB 2,4 mM dung dịch chất ATCI 2,4 mM thêm vào hỗn hợp trộn Tiếp tục ủ hỗn hợp 24 phút nhiệt độ phịng, sau dung dịch đo độ hấp thụ bước sóng 405 nm Mỗi mẫu thử tiến hành lặp lại lần Hoạt tính ức chế AChE mẫu thử tính theo cơng thức: A -A I%= (1- t tr/t ) x 100% Ađc- Atr/đc I%: phần trăm hoạt tính AChE bị ức chế At Atr/t độ hấp thụ mẫu thử mẫu trắng mẫu thử Ađc Atr/đc độ hấp thụ mẫu đối chứng mẫu trắng mẫu đối chứng Giá trị IC50 (nồng độ ức chế 50% AChE) xác định từ phương trình hồi quy tuyến tính phần trăm ức chế AChE logarit nồng độ mẫu thử KẾT QUẢ, BÀN LUẬN 3.1 Kết nghiên cứu đặc điểm thực vật 3.1.1 Loài Gối hạc Leea rubra Blume ex Spreng 3.1.1.1 Đặc điểm vi phẫu - Đặc điểm vi phẫu thân Vi phẫn thân cắt ngang hình trịn, gồm - cạnh lồi khơng nhau, từ ngồi vào gồm: Vùng vỏ: Biểu bì gồm hàng tế bào tương đối đồng đều, lớp cutin dày Hạ bì gồm 4-6 lớp tế bào hình đa giác hình bầu dục, xếp chừa khuyết nhỏ Mơ dày gồm - lớp tế bào có vách dày góc, xếp xít thành cung trịn cạnh lồi Mô mềm vỏ gồm - lớp tế bào hình trịn hay hình bầu dục, xếp chừa khuyết nhỏ Tinh thể calci oxalate cầu 23 Tạp chí Y Dược học - Trường Đại học Y Dược Huế - Tập 9, số - tháng 7/2019 gai nằm rải rác hạ bì mơ mềm vỏ Tế bào chứa chất nhầy nằm nhiều hạ bì, đơi gặp mô mềm vỏ Vùng trung trụ: Cụm mô cứng tập trung từ - cụm chỗ lồi thân, tế bào mơ cứng hình đa giác, xếp xít nhau, ứng với cụm mơ cứng bó libe gỗ nằm phía Libe gỗ hợp thành bó rời, kích thước khơng đồng đều, bó to tập trung góc lồi thân Mơ mềm ruột kích thước khơng đều, vào tế bào to, hình đa giác Các tế bào cứng mang bó tinh thể calci oxalate hình kim rải rác mơ mềm ruột Hình Vi phẫu thân Leea rubra Blume ex Spreng a Biểu bì b Hạ bì c Mơ dày d Mô mềm vỏ e Mô cứng f Libe g Gỗ h Mơ mềm ruột i Tinh thể calci oxalate hình cầu gai k Tinh thể calci oxalate hình kim mô mềm ruột - Đặc điểm vi phẫu nằm phía bó libe gỗ Mơ mềm gồm tế + Gân lá: Mặt có chóp nhọn kéo dài bào hình trịn hay đa giác có kích thước lớn, khơng Mặt lồi hình chữ V Từ xuống bao đều, vào lớn Mơ dày gồm 3-4 gồm: Biểu bì gồm tế bào hình chữ nhật, lỗ khí lớp tế bào dày góc Các tinh thể calci oxalate hình nhỏ gặp Lơng che chở rải rác, thường cầu gai rải rác khắp mô dày biểu bì lơng đơn bào + Phiến lá: Biểu bì tế bào khơng đều, hình chữ Cụm mơ dày góc gồm tế bào thành dày xếp nhật, lỗ khí nhỏ Mơ giậu lớp tế bào hình chữ nhật sít nhau, bắt màu hồng sáng; sau bó libe thn dài, xếp khít thẳng góc với biểu bì gỗ nằm mơ mềm, phía bó libe gỗ cụm Mơ khuyết tế bào hình gần trịn, xếp lộn xộn mơ cứng Tinh thể calci oxalate hình cầu gai rải rác lớp Bó libe gỗ nằm riêng biệt so với 5-6 bó libe gỗ tiếp giáp mơ khuyết biểu bì Nằm rải rác vị trí khoảng gân 5-6 bó libe gỗ gân mơ khuyết cứng chứa bó tinh thể khơng đều, xếp thành hình cung, cụm mơ cứng calci oxalate hình kim Hình Đặc điểm vi phẫu loài Leea rubra Blume ex Spreng Gân (*): a Biểu bì b Mơ dày c Mơ mềm d Gỗ e Libe f Mô cứng g Mô dày h Biểu bì i Lơng che chở k Tinh thể calci oxalate Phiến (**): l Biểu bì m Mô giậu n Mô khuyết p Tế bào cứng mang bó tinh thể calci oxalate hình kim q Biều bì r Tinh thể calci oxalate cầu gai 24 Tạp chí Y Dược học - Trường Đại học Y Dược Huế - Tập 9, số - tháng 7/2019 3.1.1.2 Đặc điểm soi bột - Đặc điểm bột thân: Bột màu lục xám, vị đắng, mùi thơm nhẹ Soi kính hiển vi thấy chi tiết: Mảnh bần tế bào vàng đậm ngả sang nâu Mảnh mô mềm tế bào thành mỏng Các hạt tinh bột hình trịn nhỏ, có rốn Mảnh mơ mang tinh thể calci oxalate Bó sợi Mảnh mạch xoắn Mảnh mạch vạch Các tinh thể calci oxalate hình cầu gai - Đặc điểm bột lá: Bột màu lục, vị đắng, mùi thơm nhẹ Quan sát kính hiển vi thấy chi tiết: Mảnh mô mang tinh thể calci oxalate hình cầu gai Mảnh biểu bì mang lỗ khí Mảnh mạch điểm Mảnh mạch vạch Mảnh mạch xoắn Tinh thể calci oxalate hình cầu gai rải rác bột Bó sợi Các tế bào cứng mang bó tinh thể calci oxalate hình kim Hình Đặc điểm bột thân Gối hạc Leea rubra Blume ex Spreng a Mảnh bần b Mảnh mô mềm c Tinh bột d Mảnh mô mang tinh thể calci oxalate e Mảnh mạch xoắn f Bó sợi g Mảnh mạch vạch h Tinh thể calci oxalate hình cầu gai Hình Đặc điểm bột Gối hạc Leea rubra Blume ex Spreng a Mảnh mô mang tinh thể cầu gai b Mảnh biểu bì mang lỗ khí c Mảnh mạch xoắn d Mảnh mạch điểm e Mảnh mạch vạch f Bó sợi g Tinh thể calci oxalate hình cầu gai h Tế bào cứng mang bó tinh thể calci oxalate hình kim 3.1.2 Loài Củ rối bẹ Leea curtisii King 3.1.2.1 Đặc điểm vi phẫu - Đặc điểm vi phẫu thân Vi phẫu cắt ngang hình trịn với - cạnh lồi khơng nhau, từ ngồi vào gồm: Vùng vỏ: Biểu bì gồm lớp tế bào, lớp cutin dày Hạ bì có khoảng - lớp tế bào hình đa giác hay hình bầu dục có kích thước khơng nhau, sâu vào kích thước lớn, xếp chừa khuyết nhỏ Mô dày - lớp tế bào thành dày, xếp xít thành cung trịn vị trí cạnh lồi Mơ mềm vỏ gồm - lớp tế bào hình trịn hay hình bầu dục, xếp chừa khuyết nhỏ Tinh thể calci oxalate hình cầu gai nằm rải rác hạ bì mơ mềm vỏ Tế bào chứa chất nhầy nằm nhiều hạ bì Vùng trung trụ: Cụm mô cứng tập trung từ 4-6 cụm chỗ lồi thân, tế bào mơ cứng hình đa giác, thành dày, xếp xít nhau, ứng với cụm mơ cứng bó libe gỗ nằm phía Libe gỗ hợp thành bó rời, kích thước khơng đồng đều, bó to tập 25 Tạp chí Y Dược học - Trường Đại học Y Dược Huế - Tập 9, số - tháng 7/2019 trung góc lồi thân Mơ mềm ruột kích thước không đều, vào tế bào to, hình đa giác hình trứng Các tế bào cứng mang bó tinh thể calci oxalat hình kim nằm rải rác mô mềm ruột Các tinh thể calci oxalate hình khối rải rác mơ mềm ruột Hình Đặc điểm vi phẫu thân loài Leea curtisii King a Biểu bì b Hạ bì c Mơ dày d Mơ mềm vỏ e Mô cứng f Libe g Gỗ h Mô mềm ruột i Tinh thể hình khối k Tinh thể calci oxalate hình cầu gai - Đặc điểm vi phẫu + Gân lá: Mặt lồi Mặt lồi nhiều hình vịng cung Biểu bì gồm tế bào hình chữ nhật, lỗ khí nhỏ gặp Lông che chở rải rác, thường lông đơn bào Mơ dày góc gồm tế bào thành dày xếp sít nhau, tập trung thành cụm Giữa gân gồm - bó libe gỗ khơng xếp thành vịng, bên ngồi bó libe gỗ có cụm mô cứng thành dày Mô mềm ruột gồm tế bào hình trịn hay đa giác có kích thước lớn, không đều, vào lớn Mô dày gồm - lớp tế bào dày góc Các tinh thể calci oxalate hình cầu gai rải rác khắp mô mềm mô dày + Phiến lá: Biểu bì tế bào khơng đều, hình chữ nhật Mơ giậu lớp tế bào hình chữ nhật thn dài, xếp khít thẳng góc với biểu bì Mơ khuyết tế bào hình gần trịn, xếp lộn xộn Tinh thể calci oxalate hình cầu gai rải rác lớp tiếp giáp mơ khuyết biểu bì Các tế bào cứng chứa bó tinh thể calci oxalate hình kim gặp thường xuyên, đặc biệt phần mơ khuyết Hình Đặc điểm vi phẫu Leea curtisii King a Biểu bì b Mơ dày c Mô mềm d Gỗ e Mô cứng f Libe g Mơ dày h Biểu bì i Mơ giậu k.Tế bào cứng mang bó tinh thể calci oxalate hình kim l Mô khuyết m.Tinh thể calci oxalate cầu gai n Lơng che chở 26 Tạp chí Y Dược học - Trường Đại học Y Dược Huế - Tập 9, số - tháng 7/2019 3.1.2.2 Đặc điểm soi bột - Đặc điểm bột thân: Bột màu lục xám, vị đắng, mùi thơm nhẹ Quan sát kính hiển vi thấy chi tiết: Mảnh bần tế bào vàng đậm ngả sang nâu Mảnh mô mềm tế bào thành mỏng Bó sợi Mảnh mạch xoắn Mảnh mạch vạch Các tinh thể calci oxalate hình cầu gai Tế bào cứng có hình chữ nhật, thành dày - Đặc điểm bột lá: Bột màu lục, vị đắng, mùi thơm nhẹ Quan sát kính hiển vi thấy chi tiết: Mảnh bần Sợi Mảnh biểu bì mang lỗ khí Mảnh mạch điểm Mảnh mạch xoắn Tế bào cứng mang bó tinh thể calci oxalate hình kim Tinh thể calci oxalate cầu gai Tinh thể calci oxalate hình kim gặp phổ biến Mảnh mơ mềm Hình Đặc điểm bột thân loài Leea curtisii King a Mảnh bần b.Sợi c Mảnh mô mềm d Tinh thể calci oxalate cầu gai e Mảnh mạch xoắn f Mảnh mạch vạch g Tế bào cứng Hình Đặc điểm bột loài Leea curtisii King a Mảnh bần b Sợi c Mảnh biểu bì mang lỗ khí d Mảnh mạch điểm e Mảnh mạch xoắn f Tế bào cứng mang bó tinh thể calci oxalate hình kim g Tinh thể calci oxalate cầu gai h Tinh thể calci oxalate hình kim i Mảnh mô mềm Kết nghiên cứu báo cáo mô tả đặc điểm vi phẫu soi bột thân loài Leea curtisii King Các đặc điểm vi phẫu soi bột loài Leea rubra Blume ex Spreng mô tả đề tài phù hợp với nghiên cứu tương tự Nguyễn Thị Phương vào năm 2014 mẫu loài thu hái huyện Thanh Trì, Hà Nội [3] Các kết đặc điểm vi học loài nghiên cứu sở quan trọng giúp góp phần nhận biết, tiêu chuẩn hoá dược liệu, tạo sở khoa học cho trình thu mẫu kiểm nghiệm dược liệu Nghiên cứu góp phần đặc điểm đặc trưng vi phẫu soi bột giúp nhận biết loài dược liệu thuộc chi Leea này, bao gồm: Các tế bào cứng mang tinh thể calci oxalate hình kim đặc trưng xuất thường xuyên phiến rải rác mô mềm ruột thân, tế bào cứng tìm thấy nguyên vẹn tiêu soi bột lồi nghiên cứu; Tương ứng với bó libe-gỗ cụm mơ cứng phía trên, kể bó libe-gỗ thân gân lá; Các tinh thể calci oxalate hình cầu gai nằm rải rác hạ bì mơ 27 Tạp chí Y Dược học - Trường Đại học Y Dược Huế - Tập 9, số - tháng 7/2019 mềm vỏ thân, mô dày gân lớp tiếp giáp lồi Gối hạc; lồi Gối hạc có vi phẫu cắt ngang thân mơ khuyết biểu bì phiến lá; Hạ bì gồm - cạnh lồi khơng nhau, lồi mơ mềm vỏ thân xếp chừa khuyết nhỏ Củ rối bẹ gồm - cạnh lồi không Ngoài ra, đặc điểm vi học khác biệt bật 3.2 Kết nghiên cứu hoạt tính ức chế enzyme giúp phân biệt lồi nghiên cứu Acetylcholinesterase sau: Về hình dạng gân lá: lồi Gối hạc mặt gân Hoạt tính ức chế AChE dịch chiết tồn phần có chóp nhọn kéo dài đặc trưng, mặt dịch chiết phân đoạn lồi nghiên cứu lồi hình chữ V loài Củ rối bẹ mặt gân đánh giá nồng độ 100 µg/ml Sau đó, dịch chiết lồi, mặt lồi hình vịng cung; phiến tồn phần dịch chiết phân đoạn có hoạt tính ức lá, số lượng tế bào cứng mang tinh thể calci oxalate chế enzyme AChE mạnh lồi tiếp hình kim xuất lồi Củ rối bẹ nhiều so với tục xác định giá trị IC50 Bảng Hoạt tính ức chế AChE dịch chiết toàn phần dịch chiết phân đoạn loài Leea rubra Blume ex Spreng Leea curtisii King Leea rubra Blume ex Spreng STT Lá Thân - Rễ Mẫu nghiên cứu Leea curtisii King % Ức chế (%) IC50 ± SD (µg/ml) Mẫu nghiên cứu % Ức chế (%) IC50 ± SD (µg/ml) Methanol 53,88 92,47 ± 0,66 11 Methanol 64,52 68,95 ± 1,91 n-hexane 24,98 - 12 n-hexane 29,44 - Chloroform 44,23 - 13 Chloroform 42,13 - EA 56,21 84,96 ± 2,56 14 EA 73,31 42,44 ± 1,21 Nước - - 15 Nước 48,00 - Methanol 65,58 63,32 ± 2,18 16 Methanol 52,41 97,96 ± 0,81 n-hexane 26,17 - 17 n-hexane - - Chloroform 15,88 - 18 Chloroform 44,42 - EA 66,83 58,28 ± 1,05 19 EA 53,25 94,30 ± 1,28 10 Nước 37,31 - 20 Nước - - 21 Galantamine Chú thích: EA: ethyl acetate (-): khơng xác định Dịch chiết tồn phần dịch chiết phân đoạn lồi nghiên cứu có tác dụng ức chế AChE mức độ trung bình với giá trị IC50 từ 42,44 đến 97,96 µg/ml Đáng ý, phân đoạn có hoạt tính tốt lồi nghiên cứu phân đoạn ethyl acetate Trong đó, loài L rubra, dịch chiết ethyl acetate từ thân rễ có hoạt tính mạnh tất phân đoạn với giá trị IC50 58,28 ± 1,05 µg/ml Đối với lồi L curtisii, dịch chiết phân đoạn ethyl acetate từ thể hoạt tính mạnh với giá trị IC50 42,44 ± 1,21 µg/ml Chất đối chứng dương Galantamine cho giá trị IC50 0,33 ± 0,01 µg/ml Các kết góp phần định hướng cho nghiên cứu để chiết xuất phân lập hợp chất có hoạt tính ức chế AChE từ phân đoạn có tiềm 28 STT Lá Thân Rễ 0,33 ± 0,01 KẾT LUẬN Nghiên cứu mô tả đặc điểm vi phẫu soi bột loài Leea rubra Blume ex Spreng Leea curtisii King., thuộc chi Leea D Royen ex L., họ Leeaceae, đặc điểm vi học đặc trưng giúp nhận biết so sánh đặc điểm vi học khác lồi dược liệu Về hoạt tính sinh học, dịch chiết toàn phần dịch chiết phân đoạn lồi nghiên cứu có tác dụng ức chế enzyme Acetylcholinesterase mức độ trung bình với giá trị IC50 khoảng 42,44 - 97,96 µg/ml Trong đó, phân đoạn thể hoạt tính tốt phân đoạn ethyl acetate từ loài Leea curtisii King phân đoạn ethyl acetate từ thân rễ loài Leea rubra Blume ex Spreng với giá trị IC50 tương ứng 42,44 ± 1,21 µg/ml 58,28 ± 1,05 µg/ml Lời cảm ơn: Kết nghiên cứu tài trợ đề tài KHCN cấp Trường Đaị học Y Dược Huế, mã số: 09/18 Tạp chí Y Dược học - Trường Đại học Y Dược Huế - Tập 9, số - tháng 7/2019 TÀI LIỆU THAM KHẢO Võ Văn Chi (2018), Từ điển thuốc Việt Nam, tập 1, Nhà xuất Y học, tr 1046-1049 Nguyễn Thị Phương, Nguyễn Thuỳ Dương, Đậu Thị Giang, Nguyễn Minh Khởi, Phương Thiện Phương (2016), “Nghiên cứu tác dụng giảm đau chống viêm Gối hạc”, Tạp chí Dược học, 481, tr 34-37,44 Nguyễn Thị Phương, Trịnh Thị Nga, Ngô Quốc Luật, Nguyễn Minh Khởi, Phương Thiện Phương (2013), “Nghiên cứu đặc điểm thực vật Gối hạc”, Tạp chí Dược liệu, 18, tr 118-123 Ellman G L., Courtney K D., Andres V Jr., FeatherStone R M (1961), “A new and rapid colorimetric determination of acetylcholinesterase activity”, Biochem Pharmacol, 7, pp 88-95 Houghton P J., Ren Y., Howes M J (2006), “Acetylcholinesterase inhibitors from plants and fungi”, Nat Prod Rep, 23(2), pp 181-199 Neji P.A., Ushie O.A., Neji H.A., Opara I.J., Ojong O.O (2017), “Phytochemical screening and antimicrobial activity of extracts of Leea guineensis stem bark”, International Journal of Modern Chemistry, 9, pp 1-9 Sarinya K., Panee S., Siriwoot S., Suntara E., Sunee C (2014), “Antibacterial and Antioxidant Activities of Various Fraction of Leea rubra (Leeaceae)”, Journal of Natural Sciences Research, 4, pp 2224-3186 Tan Pei Jean, Ong Cheng Yi, Danial Asma, Yusof Hirzun Mohd, Neoh Bee Keat, Lee Hong Boon (2011), “Cyclic tetrapyrrolic photosensitisers from the leaves of Phaeanthus ophthalmicus”, Chemistry Central journal, 5, pp 32-32 29 ... nhóm nghiên cứu, dịch chiết methanol thân rễ lồi Gối hạc có khả ức chế AChE tốt Đề tài ? ?Nghiên cứu đặc điểm thực vật hoạt tính ức chế enzyme Acetylcholinesterase hai loài Leea sp – Họ Gối hạc (Leeaceae)? ??... dược liệu đồng thời xác định hoạt tính ức chế AChE loài dược liệu ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Đối tượng nghiên cứu Đối tượng nghiên cứu thân loài: Gối hạc Leea rubra Blume ex Spreng... gồm - cạnh lồi khơng Ngồi ra, đặc điểm vi học khác biệt bật 3.2 Kết nghiên cứu hoạt tính ức chế enzyme giúp phân biệt lồi nghiên cứu Acetylcholinesterase sau: Về hình dạng gân lá: lồi Gối hạc