Nghiên cứu đặc điểm thực vật thành phần hóa học của một loài nưa thu hái tại hương sơn, hà tĩnh

ĐẶT VẤN ĐỀ Việt Nam có nguồn tài nguyên di truyền cây có củ rất phong phú. Và đây cũng là nguồn lương thực quan trọng đứng hàng thứ hai sau cây lúa ở nước ta. Cây có củ ngoài sử dụng làm lương thực còn được sử dụng làm thức ăn chăn nuôi, gia vị, nhuộm vải và đặc biệt còn là nguyên liệu làm thuốc. Họ Ráy (Araceae) là một họ thực vật một lá mầm, có đặc điểm hình thái rất đa dạng và thành phần phong phú. Nơi sống thích hợp của các loài trong họ Ráy là các vùng nhiệt đới ẩm. Theo PGS.TS thực vật học Phạm Hoàng Hộ, Việt Nam có khoảng 30 chi, 135 loài Ráy 10. Cây Khoai nưa thuộc chi Khoai nưa (Amorphophalus), họ Ráy (Araceae) là một loài cây khá phổ biến, mọc rất nhiều ở các tỉnh miền núi nước ta từ Lạng Sơn, Quảng Ninh, Bắc Giang đổ vào tới Nghệ An, Hà Tĩnh, Thừa Thiên Huế. Được người dân sử dụng nhiều trong ăn uống hàng ngày và trong các bài thuốc dân gian để chữa các bệnh như: tiêu hóa, các bệnh về khớp, tiểu đường... Tuy nhiên ở Việt Nam hiện nay có rất ít công trình nghiên cứu về các loài thuộc chi Khoai nưa. Nhằm góp phần nâng cao giá trị sử dụng của loài Nưa, cũng như mong muốn đóng góp vào công tác nghiên cứu và kiểm nghiệm, đề tài “Nghiên cứu đặc điểm thực vật, thành phần hóa học của một loài Nưa thu hái tại Hương Sơn, Hà Tĩnh’’ với mục tiêu: Tạo cơ sở dữ liệu về thực vật, hiển vi, hóa học nhằm từng bước xây dựng các chỉ tiêu kiểm nghiệm dược liệu.

Trang 1

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SỸ

HÀ NỘI – 2013

Trang 2

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ

Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Viết Thân Nơi thực hiện: Bộ môn Dược liệu

(Trường Đại học Dược Hà Nội)

Trang 3

HÀ NỘI – 2013

L ỜI CẢM ƠN

Trong thời gian nỗ lực nghiên cứu hoàn thành khóa luận này, tôi đã nhận được rất nhiều sự quan tâm, ủng hộ, hướng dẫn của thầy cô, bạn bè và gia đình

Với tất cả lòng kính trọng và biết ơn sâu sắc, tôi xin được bày tỏ lời cảm

ơn chân thành nhất tới PGS.TS Nguyễn Viết Thân, người đã hết lòng tận

tình chỉ bảo, hướng dẫn và động viên tôi trong suốt thời gian làm khóa luận Tôi xin trân trọng cảm ơn ThS Lê Thanh Bình cùng các thầy cô giáo

và các anh chị kỹ thuật viên trong Bộ môn Dược liệu đã hướng dẫn, tạo

điều kiện thuận lợi để tôi hoàn thành khóa luận

Tôi xin cảm ơn Ban giám hiệu, các Bộ môn và toàn thể thầy cô giáo trường Đại học Dược Hà Nội đã nhiệt tình dạy bảo tôi trong suốt 5 năm học vừa qua

Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới cha mẹ, anh em, bạn bè trong thời gian qua đã luôn ở bên động viên, giúp đỡ giúp tôi vượt qua khó khăn

Sinh viên

Mai Thị Hải

Trang 4

MỤC LỤC

DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT

DANH MỤC HÌNH VẼ VÀ BẢNG BIỂU

ĐẶT VẤN ĐỀ 1

CHƯƠNG I TỔNG QUAN 3

1.1 TỔNG QUAN VỀ HỌ RÁY (ARACEAE) 3

1.1.1 Vị trí phân loại họ Ráy (Aracee) 3

1.1.2 Đặc điểm chung của họ Ráy (Araceae) 3

1.2.TỔNG QUAN VỀ CHI AMORPHOPHALUS 4

1.2.1.Đặc điểm thực vật và phân bố của chi Amorphophalus 4

1.2.2 Một số loài Nưa thuộc chi Amorphophalus 5

CHƯƠNG II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU. 15

2.1 NGUYÊN LIỆU VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU 15

2.1.1 Nguyên vật liệu 15

2.1.2 Thiết bị nghiên cứu 15

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15

2.2.1 Nghiên cứu về mặt cảm quan 15

2.2.2 Nghiên cứu về mặt vi học 16

2.2.3 Nghiên cứu về mặt hóa học 16

Chương III THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QỦA 17

3.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT 17

3.1.1 Đặc điểm hình thái 17

3.1.2 Đặc điểm dược liệu củ Khoai nưa 17

3.1.3 Đặc điểm vi học bột củ Khoai nưa 19

3.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC 20

3.2.1 Định tính sơ bộ các nhóm chất có trong củ Khoai nưa bằng phản ứng hóa học 20

3.2.2 Định tính dịch chiết củ Khoai nưa bằng sắc ký lớp mỏng 31

Trang 5

BÀN LUẬN 42

Chương IV KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 45

4.1 KẾT LUẬN 45

4.2 ĐỀ XUẤT 45

TÀI LIỆU THAM KHẢO

Trang 7

4 Hình 3.3.Một số đặc điểm bột củ Khoai nưa 20

5 Hình 3.4 Hình ảnh sắc ký đồ dịch chiết củ Khoai nưa trong

MeOH triển khai hệ dung môi Toluen - Ethyl acetat - Acid

formic (5:4:1)

32

CHCl 3 triển khai hệ dung môi Toluen - Ethyl acetat- Acid

formic (6:2:0,5)

35

CHCl3triển khai hệ dung môi Toluen - Ethyl acetat (7:3) 35

CHCl3triển khai hệ dung môi Chloroform - Methanol (9:1) 36

CHCl3triển khai hệ dung môi Chloroform - Aceton (9:1) 36

MeOH triển khai hệ Toluen - Ethy acetat - Acid formic

(5:4:1) ở bước sóng 254 nm

37

MeOH triển khai hệ Toluen - Ethy acetat - Acid formic

(5:4:1) ở bước sóng 366nm

38

MeOH triển khai hệ Toluen - Ethy acetat -Acid formic

(5:4:1) ở ánh sáng thường sau khi phun TT

39

Trang 8

CHCl3 triển khai hệ Toluen - Ethy acetat (7:3) ở bước sóng

254 nm

40

CHCl3triển khai hệ Toluen - Ethy acetat (7:3) ở bước sóng

366nm

41

CHCl3triển khai hệ Toluen - Ethy acetat (7:3) ở ánh sáng

thường sau khi phun TT

42

Trang 9

ĐẶT VẤN ĐỀ

Việt Nam có nguồn tài nguyên di truyền cây có củ rất phong phú Và đây cũng là nguồn lương thực quan trọng đứng hàng thứ hai sau cây lúa ở nước ta Cây có củ ngoài sử dụng làm lương thực còn được sử dụng làm thức ăn chăn nuôi, gia vị, nhuộm vải và đặc biệt còn là nguyên liệu làm thuốc

Họ Ráy (Araceae) là một họ thực vật một lá mầm, có đặc điểm hình thái rất

đa dạng và thành phần phong phú Nơi sống thích hợp của các loài trong họ Ráy

là các vùng nhiệt đới ẩm Theo PGS.TS thực vật học Phạm Hoàng Hộ, Việt Nam

có khoảng 30 chi, 135 loài Ráy [10]

Cây Khoai nưa thuộc chi Khoai nưa (Amorphophalus), họ Ráy (Araceae) là

một loài cây khá phổ biến, mọc rất nhiều ở các tỉnh miền núi nước ta từ Lạng Sơn, Quảng Ninh, Bắc Giang đổ vào tới Nghệ An, Hà Tĩnh, Thừa Thiên Huế Được người dân sử dụng nhiều trong ăn uống hàng ngày và trong các bài thuốc dân gian để chữa các bệnh như: tiêu hóa, các bệnh về khớp, tiểu đường Tuy nhiên ở Việt Nam hiện nay có rất ít công trình nghiên cứu về các loài thuộc chi Khoai nưa

Nhằm góp phần nâng cao giá trị sử dụng của loài Nưa, cũng như mong

muốn đóng góp vào công tác nghiên cứu và kiểm nghiệm, đề tài “Nghiên cứu

đặc điểm thực vật, thành phần hóa học của một loài Nưa thu hái tại Hương Sơn, Hà Tĩnh’’ với mục tiêu:

Tạo cơ sở dữ liệu về thực vật, hiển vi, hóa học nhằm từng bước xây dựng các chỉ tiêu kiểm nghiệm dược liệu

Trang 10

Để thực hiện những mục tiêu trên, đề tài được tiến hành với những nội dung sau:

1 Nghiên cứu về thực vật:

- Mô tả đặc điểm hình thái của mẫu nghiên cứu

- Mô tả đặc điểm bột của củ Khoai nưa

2 Nghiên cứu về hóa học:

- Định tính các nhóm chất trong củ Khoai nưa bằng phản ứng hóa học

- Tiến hành sắc ký lớp mỏng dịch chiết methanol, chloroform của củ Khoai nưa

Trang 11

CHƯƠNG I TỔNG QUAN 1.1 T ỔNG QUAN VỀ HỌ RÁY (ARACEAE)

1.1.1 V ị trí phân loại họ Ráy (Aracee)

Theo Từ điển cây thuốc Việt Nam và các tài liệu phân loại thực vật khác, vị trí phân loại của họ Ráy trong giới thực vật như sau [6], [7], [21]:

1.1.2 Đặc điểm chung của họ Ráy (Araceae)

Cây cỏ, mọc ở nơi ẩm, sống dai nhờ thân rễ Thân nạc hoặc thân leo, mang nhiều dễ khí sinh thõng xuống [6], [21], [29]

Cây có lá quanh năm, chồi để sinh sản sinh dưỡng thường nằm ở 1 cành non Lá mọc so le hoặc mọc dưới đáy Lá có hay không có cuống, bẹ lá phát triển Lá đơn, gân lông chim, chân vịt hay song song Phiến lá to, nguyên hay sẻ xâu thành thùy hình lông chim hoặc hình chân vịt [6], [21], [29]

Cụm hoa bông mo nạc (thường phát triển sớm), mọc đối với lá bắc, không phân nhánh, mang nhiều hoa Mo thường to, có màu sắc sặc sỡ, một số có mùi thối Trục cụm hoa có thể mang hoa khắp bề mặt hay kết thúc bởi một phần không mang hoa, thường hoa cái ở dưới, hoa đực ở trên [6], [21]

Hoa nhỏ, không cuống hoặc không có cuống rõ rệt, đơn tính, lưỡng tính hay tạp tính Hoa lưỡng tính thường có 2 vòng bao hoa, mỗi vòng 3 bộ phận; hoa đơn tính có bao hoa tiêu giảm hay trần Bộ nhị gồm 2 vòng, mỗi vòng 3 nhị,

có khi chỉ có 1 nhị ở hoa đơn tính Bộ nhụy gồm 2-3 lá noãn, có khi chỉ có 1 lá noãn ở hoa đơn tính, chứa 1- nhiều noãn đảo, cong hay thẳng [6], [21]

Trang 12

Qủa mọng, đựng 1- nhiều hạt Hạt có nội nhũ nạc, thường có màu đỏ, xanh

lá, trắng, vàng, hiếm khi xanh lục [6], [21]

Họ Ráy phân bố ở vùng nhiệt đới, cận nhiệt đới và một số ở ôn đới Trên thế giới có khoảng 110 chi và hơn 3500 loài Ở Việt Nam, có khoảng 30 chi và

135 loài, mọc hoang và được trồng làm lương thực (Khoai sọ, Khoai nưa), rau

ăn (các loại Môn, Sọ), cây cảnh (Vạn niên thanh, Lân tơ uyn ) và nhiều loài được dùng làm thuốc (Bán hạ, Thạch xương bồ, Thủy xương bồ, Thiên niên kiện) [6]

1.2.TỔNG QUAN VỀ CHI AMORPHOPHALUS

1.2.1.Đặc điểm thực vật và phân bố của chi Amorphophalus

Cây thảo, có thân rễ ở củ Cây ưa ẩm, chịu bóng, thường mọc dưới tán rừng

ẩm trên núi đất và núi đá vôi, đất xốp nhiều mùn, từ trung bình đến hơi kiềm Cây ra hoa quả hàng năm, tái sinh chủ yếu bằng hạt Cây mọc từ hạt sau 2-3 năm mới có hoa Phần trên mặt đất tàn lụi hàng năm vào mùa đông Lá có dạng lược, có phiến chia ra nhiều hay ít Cụm hoa gồm một bông mo, không có hoa bất thụ, ở đỉnh của bông có một phần hình nón, tất cả được bao trong một cái mo dạng sừng, lốm đốm nâu và trắng [8], [15]

Chi Amorphophalus có khoảng 170 loài trên thế giới, phân bố chủ yếu ở vùng nhiệt đới châu Á, châu Phi Ở Việt Nam có tới 25 loài, trong đó có một số loài thân củ (củ) to có nhiều tinh bột, ăn được [15]

Theo Từ điển thực vật thông dụng, chi Amorphophalus có khoảng 90 loài

phân bố ở các vùng nhiệt đới Ở nước ta có khoảng 17 loài, trong đó có 2 loài

thông dụng là: Amorphophalus konijac K Koch syn A riverii Dur và

Amorphophalus paeoniifolius Nic syn A.campanulatus Blu

Trang 13

1.2.2 Một số loài Nưa thuộc chi Amorphophalus

1.2.2.1 Amorphophalus konijac K Koch – Khoai nưa

Tên khác: Khoai ngái, Nưa konijac

Đặc điểm thực vật và phân bố

Cây sống lâu năm, có củ tròn hơi bẹp, to 10-25 cm Mỗi lá chia làm 3 nhánh, các nhánh lại chia đốt, phiến lá xẻ thùy sâu hình lông chim, các thùy cuối hình quả trám thuôn, nhọn đầu; cuống lá thon dài 40-80 cm, nhẵn màu lục nâu,

có điểm các chấm trắng Cụm hoa có mo lớn, phần bao mo màu lục nhạt, điểm các vết lục xám, ở phía mép màu hung tím, mặt trong màu đỏ thẫm Trục hoa dài gấp đôi mo Qủa mọng [8], [10]

Mùa hoa: mùa hạ và thu [11]

Loài này được trồng ở Việt Nam và các nước Đông Nam Á Ở nước ta, cây thường trồng ở vùng núi các tỉnh Lạng Sơn, Quảng Ninh, Bắc Giang [8]

Bộ phận dùng

Thân cây Khoai nưa thu hoạch vào mùa Đông, cạo sạch vỏ ngoài, phơi khô hay sấy khô Khi dùng nấu chín nhừ, thái mỏng, ngâm nước vo gạo 24 giờ, sau ngâm nước phèn chua 12 giờ, phơi khô nấu với gừng (1kg Khoai nưa cho 100g gừng) rồi sao thơm [12]

Thành phần hóa học

Theo tài liệu [11], trong củ Khoai nưa có tinh bột và một chất ngứa chưa xác định được Tinh bột có thành phần chủ yếu là konijac-mannan (hàm lượng tới 50%) khi thủy phân sẽ được laevidulin (laevidulinoza)

Trang 14

Tác dụng dược lý

 Tác dụng kháng khuẩn

Dịch chiết cồn từ củ Khoai nưa trên môi trường nuôi cấy có tác dụng ức

chế Baciluus diphtheria, Baciluus typhi, Streptococus hemolyticus, nồng độ tối

thiểu ức chế 3 chủng vi khuẩn trên là 62,5g/l và 5, 25g/l [15]

 Tác dụng chống viêm

Dịch chiết cồn từ củ Khoai nưa thí nghiệm trên chuột cống trắng, cho thẳng vào dạ dày với liều 15g/kg, dùng 7 ngày liên tiếp, có tác dụng ức chế phù bàn chân do albumin gây nên [15]

 Tác dụng đối với tim mạch

Dịch chiết cồn từ củ Khoai nưa (1:1) trên mô hình tai thỏ cô lập với liều 2 ml/lần cho vào dịch truyền có tác dụng gây giãn mạch Tác dụng này có liên quan đên thụ thể β2 bị kích thích Trên tim ếch cô lập, dịch chiết với nồng độ 1:2 đến 1:16 có tác dụng ức chế sự co bóp cơ tim.Trên thỏ gây mê với liều 15g/kg cho vào dạ dày hoặc tiêm phúc mạc đều có tác dụng hạ huyết áp [15]

 Tác dụng hạ lipid máu

Thí nghiệm trên chuột cống trắng có nồng độ lipid máu cao, củ Khoai nưa trộn vào thức ăn hàng ngày của chuột với tỷ lệ 2,5:5,0 có tác dụng giảm cholesterol huyết thanh Dịch chiết cồn cũng có tác dụng làm giảm lipid máu [15]

 Tác dụng khác

Dịch chiết cồn củ Khoai nưa dùng bằng đường uống với liều 15g/kg có tác dụng làm giảm độ nhớt của máu toàn phần ở chuột thí nghiệm Ngoài ra, củ Khoai nưa còn có tác dụng đối kháng với tình trạng thiếu oxy ở súc vật, kéo dài thời gian sống [15]

Trang 15

Bài thuốc [12]

 Chữa liệt nửa người (sau tai biến mạch máu não, chấn thương nặng vùng thắt lưng): củ Khoai nưa sống 10g, ô đầu 1g, phụ tử 1g, nước 600ml sắc còn 100ml, chia uống nhiều lần trong ngày, uống sau khi

ăn no (thuốc có độc, cẩn thận khi dùng)

 Chữa mụn nhọt, sưng tấy, rắn cắn: củ Khoai nưa tươi giã nát, đắp lên mụn nhọt vết thương

 Chữa sốt rét, ăn chậm tiêu: củ Khoai nưa phơi khô 4-12g sắc uống

 Chữa ho, nhiều đờm: củ Khoai nưa, Trần bì, Bán hạ nam mỗi thứ 40g, sao thơm, tán mịn, dùng nước cốt gừng quấy hồ làm viên bằng hạt ngô, mỗi lần dùng 30 viên Trẻ em 10 tuổi trở lên, mỗi lần dùng 10-15 viên

1.2.2.2.Amorphophalus paeoniifolius Nic – Nưa chuông

Tên khác: Khoai na, Khoai nưa hoa chuông

Đặc điểm thực vật và phân bố

Cây thảo cao 2m Thân củ hình cầu, cỡ 20×30 cm, nâu đậm, sẹo rễ rõ, có chồi mầm dạng thân rễ dài 10cm Lá mọc từ củ, thường đơn độc, phiến lá rộng 3m, xẻ 3 thùy, thùy xẻ lông chim 2-3 lần; phiến nhỏ hình trứng ngược tới mác,

cỡ 3-35 × 2-12 cm, mặt trên xanh lục, nhạt hơn ở mặt dưới; cuống lá mập, dài

Trang 16

tới 150 cm, bề mặt khi bị tác sần sùi, dạng gai mềm thường chầy, nhớt động Bông mo lớn, cuống dài 3-20 cm, rộng 1-8 cm, thường nhẵn hơn cuống lá Mo hình chuông, mở ra rộng, cỡ 40-60 × 30-60 cm; phần ống ngắn màu xanh nhạt,

có đốm sáng ở ngoài, đỏ nâu ở trong; phần phiến mở hết khi hoa thụ phấn Bông nạc dài tới 70cm, phần cái hình trụ, cỡ 15-17×6-7 cm, phần đực hình nón ngược, dài 8-12×4 cm ở gốc, 7-8 cm ở đỉnh; phần phụ hình nón, cao 20-22 cm, màu nâu đậm Bầu hình cầu dẹt, rộng tới 4mm, núm nhụy 3 thùy, rộng bằng hoặc hơn bầu, vàng nhạt; vòi nhụy dài 1-2 mm, màu hồng Quả mọng, chín, màu đỏ [8],[10],[30]

Nưa chuông là cây sinh trưởng theo mùa (cây rụng lá) Cây ra hoa vào tháng 3-4 hàng năm, quả vào tháng 5-6 Sau thời kỳ quả, cây bắt đầu trổ lá non Các lá này chỉ tồn tại trong vòng 3-4 tháng và tàn úa vào tháng 10-11 Nưa tái sinh bằng hạt rất mạnh Quả mọng của cây chín thường có màu đỏ rất hấp dẫn với một số loại chim như vẹt, khiếu, sáo Chim tha quả và nhả hạt làm cho cây phát tán khá rộng Hạt của Khoai nưa có tỷ lệ nẩy mầm khá cao (60%) [30] Loài nưa này phân bố ở Ấn Độ, Mianma, Trung Quốc, Việt Nam, Campuchia, Thái Lan, Indonexia và Philipin Ở nước ta, được mọc hoang và trồng phổ biến ở các tỉnh Lạng Sơn, Quảng Ninh, Hòa Bình, Hà Tây, Nghệ An,

Hà Tĩnh vào tới Quảng Trị, Thừa Thiên Huế [8]

Bộ phận dùng

Củ, thu hoạch khi tàn cây, cạo sạch vỏ ngoài, thái miếng, phơi hay sấy khô [12]

Thành phần hóa học

Theo tài liệu Cây thuốc Việt Nam và những bài thuốc thường dùng, trong

củ Nưa chuông có chứa tinh bột (thành phần chủ yếu glucomanan), chất gây ngứa, steroid, alcaloid, tannin, saponin, flavonoid [12], [25]

Trang 17

Glucomamnan [12]

Acid 3, 4, 5 – trihydroxybenzoic

Acid galiic [18]

(E)-5-(4-hydroxystyryl) benzene-1,3-diol

Resveratrol [18]

Trang 18

2-(3, 4-dihydroxyphenyl)-3,5,7-trihydroxy-4H-chromen-4-one Quercetin [18]

Amblyone [20]

Trang 19

Tác dụng dược lý

 Tác dụng chống oxy hóa và thu thập các gốc tự do

Nghiên cứu về tính ức chế sự peroxyd hóa lipid của dịch chiết EtOH củ

Amorphophalus paeoniifolius Nic trên các chất phản ứng với acid thiobarbituric (TBARS) cho thấy mức độ peroxyd giảm khoảng 4,3% xuống 67.2 % và phụ

thuộc liều Hơn thế nữa, củ Amorphophalus paeoniifolius Nic được nghiên cứu

về khả năng thu dọn các gốc tự do dựa trên thử nghiệm với picrylhydrazyl-2 (DPPH) và khả năng ức chế các tác nhân oxy hóa 2,2-azinobis-(3-ethyl) benzo- thiozoline-6-sulfonate (ABTS+ H2O2) Dịch chiết củ Nưa chuông đã làm giảm tối đa 68,6 % DPPH và ức chế tối đa 67,2 % đến 74% ABTS vàH2O2 Hiệu quả chống oxy hóa và ức chế tác nhân oxy hóa của dịch chiết củ Nưa chuông phụ thuộc liều (đã được nghiên cứu ở nồng độ 1-50 µg/ ml) Sắc ký lớp mỏng hiệu nâng cao, đã phát hiện ra một số polyphenol như: acid gallic, resveratrol, quercetin và 2 chất chưa được xác định khác [18]

1,1-dipheney-2-Kết quả này đã cho thấy, dịch chiết ethanol của củ Nưa chuông có hoạt tính oxy hóa mạnh trong thử nghiệm in vitro và có thể sử dụng với tác dụng chống oxy hóa an toàn và hiệu quả [18]

Còn theo các nhà nghiên cứu thuộc M G University, Kottayam, Kerala,

India Đánh giá khả năng chống oxy hóa của củ Amorphophalus paeoniifolius

Nic trong ống nghiệm với chiết xuất n- hexan (ACHE) và methanol (ACME) được đánh giá trong sử dụng các gốc DPPH, hydroxyl Việc thu thập gốc tự do DPPH của dịch chiết phụ thuộc vào nồng độ Gía trị IC50 của acid ascorbic, ACME, ACHE tương ứng là 4,2 g/ml; 52,4 g/ml và 470,5 g/ml ACME có hoạt động thu thập gốc tự do hydroxyl tốt hơn dịch chiết ACHE Dịch chiết củ Nưa chuông và quercetin - chất chống oxy hóa chuẩn, việc thu thập các gốc hydroxyl trong một nồng độ phụ thuộc vào bản chất của từng chất và ước tính giá trị IC50

Trang 20

của ACHE, ACME và quercetin tương ứng là 29,2 g/ml; 23,4 g/ml và 20,8 g/ml [25]

 Tác dụng kháng nấm, kháng khuẩn và gây độc tế bào

Để đánh giá tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm và gây độc tế bào trong ống

nghiệm của ambylone một triterpenoid phân lập từ Amorphophalus

paeoniifolius Nic Kỹ thuật khuếch tán đĩa được sử dụng để sàng lọc trong ống nghiệm thử tác dụng kháng khuẩn và kháng nấm lâm sàng Độc tính tế bào được xác định đối với ấu trùng tôm Ngoài ra, nồng độ ức chế tối thiểu (MIC) được xác định sử dụng kỹ thuật pha loãng nối tiếp để xác định hiệu lực kháng khuẩn [20]

Khu vực lớn của sự ức chế đã được quan sát trong đĩa khuếch tán sàng lọc

kháng khuẩn chống lại bốn vi khuẩn Gram dương (Bacillus subtilis, Bacillus

megaterium, Staphylococus aureus và Streptococus pyogenes) và sáu vi khuẩn

Gram âm (Escherichia coli, Shigella dysenteriae, Shigella sonnei, Shigella

flexneri, Pseudomonas aeruginosa và Salmonella typhi) Các giá trị MIC ức chế các vi khuẩn trong khoảng 8-64 mg/ml Trong sàng lọc kháng nấm, hợp chất này

cho thấy sự ức chế vùng nhỏ đối với Aspergillus flavus, Aspergillus niger và

Rhizopus aryzae, còn Candida albicans kháng lại hợp chất này Trong việc xác định khả năng gây độc, LC50 của các hợp chất ức chế ấu trùng tôm là 13,25 mg/ml Những kết quả này cho thấy rằng hợp chất amblyone có hoạt tính kháng khuẩn tốt chống lại các vi khuẩn thử nghiệm, gây độc tế bào trên ấu trùng tôm

và hoạt tính kháng nấm không đáng kể so với nấm thử nghiệm [20]

 Tác dụng trên thần kinh trung ương

Tác dụng trên hệ thần kinh trung ương của dịch chiết ether dầu hỏa của

Amorphophalus paeoniifolius Nic đã được kiểm tra trên chuột khỏe mạnh, cho

ăn điều kiện bình thường Dịch chiết này với liều lượng 100 mg/kg, 300 và 1000 mg/kg cho thấy tác dụng quan trọng trên hệ thần kinh trung ương ở chuột [22]

Trang 21

Năm 2011, Yadu Nandan Dey và các cộng sự cũng chỉ ra, dịch chiết này có tác dụng hiệp đồng mạnh với Diazepam và hiệp đồng ít với Phenobarbital [27]

 Tác dụng giảm đau

Tháng 3/ 2003, củ Amorphophalus paeoniifolius Nic được thu thập từ

Khulna, xác định bởi cơ quan Bảo tàng tiêu bản Lâm nghiệp, Khulna, Đại học Khulna, Bangladesh Dịch chiết methanol từ bột khô củ Nưa chuông thu được bằng cách ngâm qua đêm Sàng lọc các chất trong cây thấy sự hiện diện của steroid và flavonoid Dùng đường uống ở liều 250 mg/kg và 500 mg/kg cho thấy hoạt động giảm đau đáng kể ở chuột [16]

Loại thảo dược này được dùng để điều trị các bệnh: đau tai, đau dây thần kinh liên sườn, sốt hậu sản và sưng cổ họng [19]

 Tác dụng khác

Dịch chiết methanol và dịch chiết nước của Amorphophalus paeoniifolius

Nic cũng có tác dụng giảm độc do paracetamol gây ra ở gan chuột nhắt [23] Ngoài ra, củ còn được dùng để chữa bệnh trĩ, lách to, khối u bụng, hen suyễn, đau bụng, mụn nhọt và đặc biệt là bệnh thấp khớp cấp tính [28]

Củ Nưa chuông được báo cáo là có hoạt tính chống lại enzyme protease [24]

Công dụng

Củ Nưa chuông được sử dụng làm thuốc trong điều trị các bệnh về phổi và mật, các bệnh về đường tiêu hoá như bụng đầy, ăn uống không tiêu, kiết lỵ Nếu dùng tươi, nó có tác dụng như chất kích thích làm long đờm và trị thấp khớp Củ nưa chuông nấu với hành và cây me chua có tác dụng tẩy chai ở gan bàn chân Còn dùng để trị sốt rét, trục thai chết, chữa các bệnh mụn nhọt Nước ép từ củ

nưa chuông trộn lẫn với mủ cao su dùng để tẩm tên độc Lá non của nưa chuông

cũng được sử dụng làm rau ăn Ở tỉnh Bắc Kạn, người dân thường dùng lá non của nưa chuông làm rau Lá có thể ăn được là lá non chưa kịp xoè tán, tước hết

Trang 22

vỏ, luộc qua rồi xào cùng với tỏi là món ăn ngon Dọc Nưa chuông cũng ăn được, nhưng phải ngâm vào nước vo gạo cho hết ngứa [12]

Bài thuốc

Dùng làm thức ăn phụ cho người bị bệnh tiểu đường: thân củ Nưa chuông thu hoạch sau khi tàn cây, cạo sạch vỏ ngoài, phơi hay sấy khô Khi dùng, nấu chín nhừ để ăn [12]

Trang 23

CHƯƠNG II ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 NGUYÊN LI ỆU VÀ THIẾT BỊ NGHIÊN CỨU

2.1.1 Nguyên v ật liệu

Nguyên liệu là củ Khoai nưa được thu hái tại Sơn Quang - Hương Sơn - Hà Tĩnh, vào tháng 01/ 2013 Dược liệu sau khi thu hái về, một phần đem trồng tại Cúc Phương - Nho Quan - Ninh Bình để tiến hành theo dõi giám định tên khoa học của loài Một phần đem cạo vỏ, rửa sạch, sấy khô để tiến hành nghiên cứu

2.1.2 Thi ết bị nghiên cứu

2.1.2.1 Thuốc thử, dung môi, hóa chất dùng trong định tính sơ bộ các nhóm chất hóa học và chiết xuất phân đoạn, sắc ký lớp mỏng

- Thuốc thử: Alcaloid (Mayer, Dragendorff, Bouchardat), TT diazo mới pha, FeCl35%, Gelatin 1%, Chì acetat 10%, Đồng acetat 10%

- Hóa chất: NaOH, HCl, Ethanol, Amoniac, H2SO4, Anhydrid acetic, Acid formic…

- Dung môi: Methanol, Cloroform, Ethyl acetat, Toluen, Aceton

- Bản mỏng Silicagel GF254 (Merck), độ dày 0,2mm, hoạt hóa trong tủ sấy

110 0C trong 60 phút

2.1.2.2 Dụng cụ, phương tiện và máy móc

- Dụng cụ thủy tinh (cốc có mỏ, pipet, bình gạn, bình nón, ống nghiệm…)

- Kính hiển vi chụp ảnh LECIA, máy ảnh kỹ thuật số CANON

- Tủ sấy SHELLAB, cân phân tích PRECISA 220A

- Nồi cách thủy, bếp điện

2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.2.1 Nghiên c ứu về mặt cảm quan

Quan sát, mô tả dược liệu về đặc điểm thực vật, hình dạng, màu sắc, mùi

vị, kích thước bằng mắt thường và chụp ảnh [3]

Trang 24

2.2.2 Nghiên c ứu về mặt vi học

Nghiên cứu đặc điểm bột: Sấy khô dược liệu, đem tán thành bột mịn bằng thuyền tán, rây qua rây mịn Soi tìm đặc điểm qua kính hiển vi có gắn máy ảnh

kỹ thuật số và chụp lại đặc điểm bột [1], [13]

2.2.3 Nghiên c ứu về mặt hóa học

Định tính các nhóm chất trong dược liệu củ Khoai nưa bằng phản ứng hóa học theo các tài liệu [2], [4], [5]

Nghiên cứu thành phần dịch chiết toàn phần bằng sắc ký lớp mỏng theo tài liệu [9]

Mục đích

- Phát hiện sự có mặt của các thành phần hóa học có trong dược liệu ở trong dịch chiết toàn phần và dịch chiết chloroform, dựa vào sắc ký đồ dưới ánh sáng ở các bước sóng khác nhau là 254 nm, 366nm, ánh sáng thường khi phun thuốc thử hiện màu

- Xây dựng và phân tích sắc ký đồ tạo cơ sở cho quá trình nghiên cứu và kiểm nghiệm dược liệu sau này

Các bước tiến hành

- Bản mỏng được tráng sẵn Silicagel GF254 (Merck), đã hoạt hóa ở 110o

C trong 1 giờ, bảo quản trong bình hút ẩm

- Dịch chấm sắc ký: chuẩn bị theo sơ đồ chiết xuất

- Thuốc thử hiện màu: TT vanillin/ Ethanol 90%/ Acid sulphuric 10%

- Bình sắc ký được bão hòa dung môi, khai triển theo chiều từ dưới lên trên

Trang 25

Chương III THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QỦA 3.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT

3.1.1 Đặc điểm hình thái

Cây thảo cao 2m, sống hằng năm có thân củ nằm trong đất, củ hình thoi, rộng đến 20cm, màu nâu đậm, mặt dưới lồi mang một số rễ phụ và có những nốt như củ Khoai tây chung quanh có 3-5 mấu lồi; vỏ củ màu nâu, thịt trắng vàng Thân sần sùi, dạng gai mềm, thường chầy, nhớt khi bị tác động Lá mọc từ củ, màu xanh sẫm, phiến chia làm ba nom tựa lá đu đủ, phiến nhỏ hình trứng

Tại thời điểm thu hái dược liệu, cây chưa ra hoa nên chưa xác định được chính xác tên khoa học của loài

3.1.2 Đặc điểm dược liệu củ Khoai nưa

Dược liệu là rễ củ của cây Khoai nưa, hình thoi, dài 11 cm, rộng 3-4 cm

Vỏ ngoài màu nâu,

có nhiều rễ con và có những nốt như củ Khoai tây chung quanh có 3-5 mấu lồi Bên trong thịt màu trắng vàng

Trang 27

3.1.3 Đặc điểm vi học bột củ Khoai nưa

- Đặc điểm bột: Bột màu trắng, không mùi, không vị

- Soi kính hiển vi thấy các đặc điểm sau:

Tinh bột xếp riêng lẻ hay thành đám Có tinh bột đơn và tinh bột kép (1), (2) Tinh bột có hình cầu, kích thước từ 0,004 mm đến 0,017 mm Mảnh mô mềm mang tinh bột (3), (4) Có nhiều tinh thể Canxi oxalat hình kim đứng riêng

rẽ hoặc thành đám (5), (6) Sợi và các mảnh mạch (7), (8),(9)

Trang 28

Hình 3.3 Một số đặc điểm bột củ Khoai nưa

Định dạng
Số trang	56
Dung lượng	2,16 MB