SERMINA NUÔI CẤY TẾ BÀO UNG THƯ

ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LỚP CÔNG NGHỆ SINH HỌC K29 SERMINA NUÔI CẤY TẾ BÀO UNG THƯ Sinh viên thực hiện: Lê Minh Thông Nguyễn Hồng Phong Trần Thị Anh Thảo Phạm Hoàng Thái Lê Minh Dũng Nguyễn Ngọc Thanh Thảo Cao Thị Thanh Loan Nguyễn Thị Thu Ngân Nguyễn Phúc Sơn Nguyễn Thị Minh Thư Nguyễn Thị Ngọc Hà 6/2006 Giáo viên hướng dẩn Ths Trần Thị Bích Liên MỤC LỤC I GIỚI THIỆU II TỔNG QUAN III LỊCH SỬ PHÁT HIỆN IV SỰ HÌNH THÀNH TẾ BÀO UNG THƯ V NUÔI CẤY TẾ BÀO UNG THƯ 11 VI ỨNG DỤNG CỦA VIỆC NUÔI CẤY TẾ BÀO UNG THƯ 13 VII TÀI LIỆU THAM KHẢO 16 TẾ BÀO UNG THƯ I GIỚI THIỆU Ung thư (cancer) nhóm bệnh liên quan đến việc phân chia tế bào cách vô tổ chức tế bào có khả xâm lấn mô khác bành trướng đến vị trí mà bình thường tế bào (di căn) Nguyên nhân gây ung thư sai hỏng DNA, tạo nên đột biến gene thiết yếu điều khiển trình phân bào chế quan trọng khác Một nhiều đột biến tích lũy lại gây tăng sinh không kiểm soát tạo thành khối u Khối u (tiếng Latin: tumor) nghĩa nhóm tế bào (mô) dị thường nào, khối u u ác tính (malignant) u lành (benign) Chỉ khối u ác tính xâm nhiễm vào mô khác di Ung thư gây nhiều triệu chứng khác phụ thuộc vào vị trí, đặc điểm khả di khối u Để chẩn đoán xác ung thư thường đòi hỏi phải lấy sinh thiết quan sát kính hiển vi Người bị ung thư chữa trị phẫu thuật, hóa trị liệu (chemotherpy) xạ trị (radiotherapy) Nếu không chữa trị sớm, hầu hết loại ung thư gây tử vong, nguyên nhân gây tử vong nước phát triển Hầu hết bệnh ung thư chữa trị nhiều bệnh chữa lành, phát điều trị sớm II TỔNG QUAN Khi tế bào bình thường bị tổn thương lão hóa chúng thường bị apoptosis kiếm chế tế bào; nhiên, tế bào ung thư cách tránh đường tăng sinh kiểm soát Tế bào lành : Tự sinh sản cách xác, Ngừng trình sinh sản thời điểm thích hợp, Gắn kết với vị trí thích hợp, Tự phân hủy chúng bị tổn thương, Trở nên chuyên biệt hay hoàn thiện, Tế bào ung thư : Không tuân theo tín hiệu từ tế bào bên cạnh, Không gắn kết lẫn nhau, Không biệt hóa, trạng thái non Không chết mà chúng di dến nơi khác thể Tế bào ung thư sinh sản vô hạn định Không tế bào thường, tế bào ung thư không ngừng trình sinh sản sau chúng tự nhân đội 50-60 lần Điều có nghĩa tế bào ung thư tiếp tục nhân đôi mãi Vì từ tế bào thành 2; 4; 8; 16 Hướng phát triển : Dựa khả sinh sản lâu dài phân chia liên tục người ta sử dụng tế bào ung thư dể tạo vaccin , kháng thể đơn dòng phương pháp nuôi cấy tế bào III LỊCH SỬ PHÁT HIỆN • Hình dạng xa xưa tế bào ung htư tìm thấy tài liệu người Ai Cập viết vào khoảng 3000 đến 1500 năm trước công nguyên , hình dạng khối u vú • Mẫu nghiên cứu cổ xưa ung thư tìm thấy thi hài phụ nữ thời đồng thiếc ( 1500-1600 trước công nguyên ) Cách 2400 năm người ta phát khối u ác tính thi hài người Peru Icas Ngoài tìm thấy vết tích ung thư mẫu xương hoá thạch tài liệu thảo người Ai Cập • Một phát sớm bệnh ung thư ung thư xương xương Xacôm • 1932 : Louis Leakey tìm thấy khối u ác tính, khối u thể Lymphoma Burkitt • Hipporates người nhận khác biệt u lành u ác tính • Vào năm 1761 , Giovanni Morgagni người thưc giải phẫu tử thi để gắn kết bệnh với bệnh lý người nhằm tìm nguyên nhân gây tử vong Hiện bệnh ung thư phát sau chết • Vào kỉ 19 , đời khoa học ung thư với việc sử dụng kính hiển vi đại Rudolf Vichow có khám phá cung cấp tảng cho việc nghiên cứu bệnh lý ung thư , đặt tảng cho việc phát triển giải phẫu ung thư Ngày mô thể cắt bỏ nhờ phẫu thuật xem phương phát xác • Vào thời điểm bác sĩ người Anh Stephen Paget nêu thuyết phát triển ung thư “ hạt giống vùng đất” Ông cho tế bào ung thư di hạt giống phân bố khắp nơi thể thông qua dòng chảy máu Nó phát triển quan “vùng đất” thích hợp Điều đặt móng cho hiểu đắn di • Vào năm 1896 , giáo sư vật lý người Đức Wilhelm Conrad Roentgen sử dụng giới hạn “ X-ray” diễn thuyết mà ông nêu ( X biểu tượng đại số cho ẩn số ) , “ X-ray” sử dụng cho việc chuẩn đoán Ông nhận giải Nobel vật lý cho đóng góp ông • Một hiểu biết bệnh ung thư tập trung dư thừa mật đen nhiều vị trí thể thuyết phổ biến xuyên suốt thời trung đại Vào thời điểm khám nghiệm tử thi bị cấm Vào năm 1700 người ta tin ung thư lên men thoái hoá bạch huyết Vào cuối năm 1800 đầu năm 1900 có nhiều thuyết nguyên nhân bệnh bao gồm chấn thương , tổn thương kéo dài , gây virus • Những năm gần người ta phát dung nạp gen bcr/abl bệnh ung thư bạch cầu ( leukemia) nguồn gốc tuỷ xương trạng thái mãn tính • 1989 : tìm gen p.53 gen chống ung thư • 1990 : chứng minh trực tiếp (ex vivo ) khả chống ung thư gen RB IV SỰ HÌNH THÀNH TẾ BÀO UNG THƯ IV.1 Tác nhân Những tác nhân coi nguyên nhân gây ung thư có nhiều loại chia thành loại lớn : loại tự nhiên (nature) loại hậu thành (epigene) Ngoài người ta phân biệt thành loại nguyên nhân theo kiểu khác : Nguyên nhân sinh học : nhiễm ký sinh trùng , nhiễm khuẩn helicobacter – pylori , nhiễm khuẩn mạn tính , nhiễm virus viêm gan B , nhiễm virus papiloma nguời , nhiễm virus Epstein Barr (EB) , nhiễm virus loại RNA – gây bệnh viêm gan C, sán Schistosoma haematolium gây ung thư bàng quang Nguyên nhân vật lý : phóng xạ ion , tia cực tím , sóng có tần số radio sóng tần số cực thấp Nguyên nhân hoá học : thuốc , rượu , thức ăn bảo quản mưóihoặc thức ăn ngấm muối , thức ăn có nấm phát triển , thức ăn mỡ , thức ăn thịt đo3 , chế phẩm nội tiết tố dược phẩm điều trị số bệnh , chất sinh từ nghề nghiệp nhiễm bẩn , thuốc trừ sâu diệt cỏ , nước uống nhiễm bẩn Nguyên nhân lỗi gen di truyền IV.2 Cơ chế chuyển từ tế bào lành sang tế bào ung thư IV.2.1.Cơ chế chung Bản chất ung thư hoạt động vô kiểm sóat oncogen Các oncogen họat hóa tổng hợp protein sai lệch với lượng vượt ngưỡng điều hòa protein c-oncogen tổng hợp tế bào lành Các protêin sai lệch dẫn đến sai lêch kiểu hình tế bào như: Không có khả kiểm sóat phân bào Không có khả liên kết tế bào,lên kết mô Mất khả biệt hóa(khong tạo tế bào giống tế bào mô chủ) Không chiệu kiểm soát nội tiết tố thần kinh Do dó, Chúng không giúp ích cho thể mà gia tăng sử đụng nguồn dinh dưỡng mô chủ Tiếp tục di xâm lấn phá hủy mô quan sở tạI gây rốI lọan họat động sinh lý gây chết cho thể Một dạng ung thư tác động cộng gộp nhiều gen Ví dụ :ung thư kết tràng ung thư trực tràng ngườI tác động gen Gen 1:trong nhiễm sắc thể số gây u lành bé lớp biểu mô Gen 2: NTS sô12 Gen 3:NST số 18 Gen họat hóa làm cho khốI u lớn dần lên u lành Gen 4: NST số 17 Và tế bào mang gen u lành biến thành u ác tính bắt đầu di IV.2.2 Cơ chế phát sinh gen ung thư(oncogen) a C-oncogen Trong tế bà bình thường oncogen có vai trò điều chỉnh tăng trưởng phân chia tế bào ,chúng gọI c-oncogen hay protooncogen(gen tiền ung thư) Chúng kiểm sóat bởI số gen khác gọI gen ức chế ung thư (antioncogen) theo chế điều hòa úc chế tế bào thể Bình thường antioncogen họat hóa sản sinh protein đóng vai trò quan trọng trình phân bào ,biệt hóa tế bào, chết tế bào ,sữa chữa AND,… Chính pro-oncogen họat hóa cho lượng protein (enzayme )nhất định ,cần thiết tham gia vào trình phân chia tế bào lành vớ nhịp độ ổn định Do tác động tác nhân gây ung thư làm biến đổI gen ức chế ung thư gây khởI động proto-oncogen làm pro-oncogen trở thành gen ung thư gây ung thư Như antioncogen RB mã hóa cho protein pRB bị đột biến gây ung thư võng mạc Trong thể ngườI có khỏang dướI 100 proto-oncogen 50.000 gen thể b v-oncogen: _Như biết virut xâm nhập vào tế bào số dùng vật chất di truyền chúng vật liệu tế bào chủ đểtổng hợp mớio thành phần chúng Sau phá vỡ tế bào chủ để phóng thích -Nhưng có số virut xân nhập vào tế bào chủ theo chế vật chất di truyền chúng tích hợp vớI vật chất di truyền tế bào chủ.Các virut gọI retrovirus +Bộ gen retropvirus phân tử ARN có khoảng 8000 đến 10000Nu +Sau vào tế bào ArN gen chép ngược thành AND nhờ enzyme mã ngược revertase +AND virus tích hợp vào AND thể nhiễm sắc tế bào chủ theo chế biến nạp Retrovirus khong mang oncogen: Gen retrovirus mang đoạn LTR(long terminal repeats ,những chuỗi chứa đoạn dài tận nhắc lại) Những chuỗI LTR chứa chuỗI điều hòa việc biểu gen cần thiết cho việc nhân bộI virus: Gag: mã hóa cho protein cấu trúc bên Pol :mã hóa cho enzyme chép ngược enV mã hóa cho glycorotein virus Cũng bao gồm chuỗI tăng cường mạnh mẽ,khuếch đại trình chép Do đó,retrovirus gây tiền ung thư thời gian dài có khả hoạt hóa c-oncogen hoạt động mạnh gây ung thư Retrovirus mang oncogen(v-oncogen) cấu trúc oncogen virus sai khác so với c-oncogen tế bào chủ v-oncogen hình thành trình biến đổi vật chất truyền virus v-oncogen thường tích hợp vào đầu 5’ gen gag nằm LTR v-oncogen trình hoạt động đồng thời làm khởi động tăng hoạt v-oncogen làm gia tăng tốc độ tăng sinh (nhân đôi )không thể kiểm sóat tế bào chủ tạo thành khối u ác gây ung thư khởi phát Các virus gây ung thư virút AND SV40, polio;Epstein-Bar,…… Các virus ARN virus B,C gây ung thư gan ,virus Papilloma gây ung thư cổ tử cung ,… c.oncogen hình thành trình đột biến tác nhân gây ung thư gây biến đổI vật chất di truyền tế bào dẫn dến gen bình thường bị biến đổI thành oncogen gây ung thư Oncogen xuất đột biến gen xảy trình tái gen mà không sửa chữa sinh oncogen Do rối loạn chế điều chỉnh nên gen không sữa chữa nên tạo thành oncogen Như oncogen xuất hiện tượng chuyển đoạn NST(nst 14 18)gây ung thư lympho nang biến hình ung thư phức tạp trải qua nhiều giai đoạn , tập trung thay đổi gen liên quan tới tăng trưởng , sinh sản , biệt hoá chết tế bào Các giai đoạn sinh ung thư : Giai đoạn I : ( tiền khởi ) bị tác nhân gây ung thư tác động vào thể Giai đoạn II : (khởi phát ) tập hợp biến dị dẫn đến biến hình ung thư Giai đoạn III : ( tiến triển ) xảy di 10 V NUÔI CẤY TẾ BÀO UNG THƯ Dưới ví dụ nuôi cấy tế bào ung thư dùng để phân tích DNA dòng tế bào liên tục dòng tế bào ung thư người “ Flow Cytometric DNA Analysis Of Human Cancer Cell Lines” V.1 Chuẩn bị dung dịch cần thiết Citrate Storage Buffer: Thêm 85.5 g sucrose, S7903, (250 mM) 11.76 g trisodium citrate dihydrate, C5920, H2O (40mM) vào cốc nước cất với 50 mL dimethyl sulfoxide (DMSO), D2650 Sau điều chỉnh pH 7.6, đong đầy L giữ °C Dung dịch buffer sử dụng để bảo quản mẫu điều kiện lạnh 2.Stock Solution: Hoà tan g trisodium citrate dihydrate, C5920, (3.4 mM), ml Igepal® CA-630, I3021, (0.1% v/v), 1044 mg spermine tetrahyrdrochloride, S2876, (1.5 mM) and 121 mg Sigma 7-9, T1378, (0.5 mM) L nước cất sau điều chỉnh pH 7.6 "Stock Solution" sử dụng để tạo thành dung dịch buffer phân huỷ / nhuộm 3.Solution A: 15 mg Trypsin, T0303, 500 ml of Stock Solution (điều chỉnh pH 7.6) 4.Solution B: 250 mg chất gây ức chế Trypsin , T9253, 50 mg RNase A, R4875, 500 ml of Stock Solution ( pH 7.6) 5.Solution C: 11 208 mg Propidium iodide, 81845, 580 mg spermine tetrahydrochloride, S1141, tạo thành 500 ml of Stock Solution, pH 7.6 Dung dịch phải bảo vệ tránh ánh sáng Tất dung dịch chứa 20 ml phần mẫu đại diện -70 °C V.2 nuôi cấy tế bào Chọn dòng tế bào thích hợp , ví dụ tế bào MCR-7 ung thư vú PE01 ung thư buồng trứng RPMI/PS/10% FCS: thêm 500 ml môi trường nuôi cấy RPMI 1640 , R8758, với ml penicillin/streptomycin (PS), P4333, nồng độ cuối 100 U/ml and 100 µg/ml, thêm 55 ml (10%) fetal calf serum, F6178 Dulbecco’s phosphate buffered saline (PBS), D8662 1X Trypsin-EDTA, T3924 chọn bình nuôi cấy 75-cm2 150-cm2 , (Corning® Plasticware) Ống tiêm 10-ml (syringes) kim tiêm 21G (needles) Ống nghiệm FACS( tubes) Back to top V.3 Chuẩn bị mẫu phân tích DNA Nước chưng cất hỗn hợp vortex , Z258415 Enzyme RNase, R4875 V.4 Thu nhận Flow Cytometric DNA Histograms FACSCalibur™ flow cytometer (Becton Dickinson) (see Note 4) V.5 Phân tích Flow Cytometric DNA Histogram Phần mềm phân tích chu trình tế bào , ModFit LT™ (Verity Software House) ☼Phương pháp nuôi cấy : 12 cho 0.5 x 106 huyền phù tế bào ung thư vú MCF-7 ung thư buồng trứng PÉO RPMI/PS/10%FCS chuyển vào bình flask nuôi cấy mô Đặt tủ ấm có 5% CO2 37 °C Cho phép tế bào phát triển thành đám , nuôi cấy lần tuần cách rút môi trường cạn , rửa với 20 ml PBS , sau thêm 25 ml moi trương nuôi cấy Khi tế bào trở thành đám , rút bỏ môi trường nuôi cấy cạn chất dinh dưỡng rửa tế bào 10 ml PBS Loại bỏ PBS dư thừa Thêm 5ml Trysin/EDTA vào bình flask đặt tủ ấm tế bào trở nên không xúc cảm Chuyển huyền phù tế bào vào bình chứa Universal vô trùng cách sử dụng pipet vô trùng , đong 20 ml RPMI/PS/10% FCS (để loại hoạt hoá Trypsin ) vào bình flask để rửa sau nhóm với huyền phù tế bào bình chứa Universal ( tổng thể tích 25 ml) Li tâm 600 vòng/5 phút Đổ bỏ môi trường tái tạo huyền phù viên vê nhỏ ml RPMI/PS/10% FCS.Tiêm lần với kim tiêm 21G để phân chia viên tế bào , sau tạo thành 25 ml với RPMI/PS/10% FCS Đếm tổng tế bào cách sử dụng hemocytometer Chuyển phần mẫu đại diện x 106 tế bào vào ống nghiệm FACS ( không kể tới thể tích ) sau li tâm 600vòng/5 phút 10 Tái huyền phù iên tế bào 100 µl citrate buffer , đậy ống nghiệm , bảo quản –40°C trước phân tích VI ỨNG DỤNG CỦA VIỆC NUÔI CẤY TẾ BÀO UNG THƯ VI.1 Một ứng dụng điển hình tế bào ung thư kỹ thuật lai tế bào (hydridoma) tạo vaccin Lai tế bào nuôi cấy dung hợp tế bào có khả tái liên tục với tế bào kháng thể 13 Do tình trạng tế bào bình thường dễ tiếp xúc , nên tế bào phân chia số lần sau không tiếp tục Người ta phát khả tăng sinh (proliferation) tế bào ung thư thể sống liên quan đến khả sinh sản lâu dài , phân chia liên tục tế bào ung thư nuôi cấy Vì người ta lai tế bào sinh kháng thể với tế bào ung thư để tạo kháng thể Sơ đồ lai tế bào lách chuột với tế bào ung thư tạo kháng thể đơn dòng Người ta lai tế bào lách chuột nhắt miễn dịch chống kháng nguyên chọn lựa ( tạo kháng thể ) với tế bào ung thư “myeloma” tuỷ xương Tế bào lai tạo có khả phân chia bình thường , liên tục , tạo loại kháng thể , đặc trưng cho dòng tế bào gọi kháng thể đơn dòng ( monoclonal antibody) Kháng thể tinh khiết kháng thể thu đươc qua thể cừu ngựa thỏ Monoclonal antibody thay phương pháp miễn dịch huyết học thông thường xét nghiệm : • Xác định mức hormon để đánh giá chức tuyến nội tiết • Phát số protein có ý nghĩa để chuẩn đoán khối u số điều kiện đặc biệt trước sinh đẻ • Xác định vi khuẩn virus gây bệnh • phát thuốc bị cấm máu ,kiểm tra nồng độ thuốc máu tổ chức đảm bảo liều thuốc không vượt ngưỡng gây độc Nó dùng để : • Ức chế phản ứng loại thải ghép quan ( ghép thận , ghép tuỷ ) • Miễn dịch hoá thụ động chống lại kháng nguyên tham gia vào sinh sản ( chống thụ thai phương pháp miễn dịch ) • Định vị khối u với kháng thể đặc hiệu 14 VI.2 Phát triển trình tái tạo tế bào phân nhánh lấy từ tế bào bạch cầu đơn nhân trương thành phù hợp cho ứng dụng chuyên khoa Mục tiêu liệu pháp chữa trị miễn dịch đặc hiệu khối u nên biết tính trái ngược phản ứng không miễn dịch ung thư Tế bào phân nhánh Dendritic cell (DC) đại diện phổ biến cho tế bào miễn dịch hoàn thành mục tiêu , số bệnh nhân DC kích thích tế bào T thành công khối u tiết vài yếu tố ngăn chặn biệt hoá cuối DC Những vấn đề tránh cách nuôi cấy rung động in vitro DC Điều kiện tối ưu phương pháp chọn lựa cẩn thận nguồn kháng nguyên Phương pháp mở rộng phạm vi từ việc rung động (pulsing) với peptide , protein , dịch tan tế bào thông qua việc chuẩn bị với tế bào tự hoại , dung hợp với tế bào khối u , RNa, chuyển với vector virus Mỗi phương pháp có thuận lợi chưa rõ cách thu nhận nhiều thành phần hệ thống miễn dịch để loại trừ khối u hiệu 15 VII TÀI LIỆU THAM KHẢO : Di truyền học động vật – Phan Cự Nhân – Nhà xuất Khoa Học Kỹ Thuật- Hà Nội-2001 Miễn dịch học sở - Đỗ Ngọc Liên – Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội Công nghệ sinh học trồng vật nuôi & bảo vệ môi trường – Nhà xuất nông nghiệp Google/Cancer Cell/ Flow Cytometry Protocol.htm Google/Research and Teaching/ IBT-2-Cell Culture Tech.htm Research Products for angiogenesis, Antitumor agents, Cancer Marker, Carcinogens, and Chemopreventive Agents.htm 16 [...]... huyền phù iên tế bào trong 100 µl citrate buffer , đậy ống nghiệm , và bảo quản ở –40°C trước khi phân tích VI ỨNG DỤNG CỦA VIỆC NUÔI CẤY TẾ BÀO UNG THƯ VI.1 Một ứng dụng điển hình của tế bào ung thư là kỹ thuật lai tế bào (hydridoma) tạo ra vaccin Lai tế bào trong nuôi cấy là sự dung hợp giữa tế bào có khả năng tái bản liên tục với một tế bào kháng thể 13 Do tình trạng các tế bào bình thư ng dễ tiếp... nên các tế bào chỉ phân chia một số lần sau đó thì không còn tiếp tục được nữa Người ta đã phát hiện khả năng tăng sinh (proliferation) của tế bào ung thư trong cơ thể sống liên quan đến khả năng sinh sản lâu dài , phân chia liên tục của tế bào ung thư trong nuôi cấy Vì vậy người ta lai giữa tế bào sinh kháng thể với tế bào ung thư để tạo ra kháng thể Sơ đồ lai tế bào lách chuột với tế bào ung thư tạo...V NUÔI CẤY TẾ BÀO UNG THƯ Dưới đây là một ví dụ về nuôi cấy tế bào ung thư dùng để phân tích DNA dòng tế bào liên tục của dòng tế bào ung thư người “ Flow Cytometric DNA Analysis Of Human Cancer Cell Lines” V.1 Chuẩn bị dung dịch cần thiết 1 Citrate Storage Buffer: Thêm 85.5 g sucrose, S7903, (250 mM) và 11.76... tetrahydrochloride, S1141, tạo thành 500 ml of Stock Solution, pH 7.6 Dung dịch này phải được bảo vệ tránh ánh sáng 6 Tất cả những dung dịch này được chứa trong 20 ml phần mẫu đại diện ở -70 °C V.2 nuôi cấy tế bào 1 Chọn dòng tế bào thích hợp , ví dụ như những tế bào MCR-7 ung thư vú hoặc PE01 ung thư buồng trứng 2 RPMI/PS/10% FCS: thêm 500 ml môi trường nuôi cấy RPMI 1640 , R8758, với 5 ml penicillin/streptomycin... Cytometric DNA Histogram 1 Phần mềm phân tích chu trình tế bào , ModFit LT™ (Verity Software House) ☼Phương pháp nuôi cấy : 12 1 cho 0.5 x 106 huyền phù tế bào ung thư vú MCF-7 hoặc ung thư buồng trứng PÉO trong RPMI/PS/10%FCS và chuyển vào bình flask nuôi cấy mô Đặt trong một tủ ấm có 5% CO2 ở 37 °C 2 Cho phép những tế bào phát triển thành đám , nuôi cấy 2 lần mỗi tuần bằng cách rút ra môi trường đã cạn... trường đã cạn , rửa sạch với 20 ml PBS , và sau đó thêm 25 ml moi trương nuôi cấy mới 3 Khi tế bào trở thành đám , rút bỏ môi trường nuôi cấy cạn chất dinh dưỡng và rửa tế bào trong 10 ml PBS Loại bỏ PBS dư thừa 4 Thêm 5ml Trysin/EDTA vào mỗi bình flask và đặt trong tủ ấm cho đến khi tế bào trở nên không xúc cảm 5 Chuyển huyền phù tế bào vào bình chứa Universal vô trùng bằng cách sử dụng pipet vô trùng... bào lách chuột với tế bào ung thư tạo ra kháng thể đơn dòng Người ta lai tế bào lách của chuột nhắt đã miễn dịch chống kháng nguyên chọn lựa ( tạo được kháng thể ) với tế bào ung thư “myeloma” của tuỷ xương Tế bào lai tạo ra có khả năng phân chia bình thư ng , liên tục , tạo ra một loại kháng thể , đặc trưng cho một dòng tế bào gọi là kháng thể đơn dòng ( monoclonal antibody) Kháng thể này tinh khiết... thể đặc hiệu 14 VI.2 Phát triển quá trình tái tạo tế bào phân nhánh lấy từ tế bào bạch cầu đơn nhân trương thành phù hợp cho ứng dụng chuyên khoa Mục tiêu đầu tiên liệu pháp chữa trị miễn dịch đặc hiệu khối u là nên biết tính trái ngược của phản ứng không miễn dịch đối với ung thư Tế bào phân nhánh Dendritic cell (DC) chỉ đại diện phổ biến cho những tế bào miễn dịch và nó có thể hoàn thành mục tiêu trên... những tế bào T thành công vì những khối u tiết ra một vài yếu tố ngăn chặn sự biệt hoá cuối cùng của DC Những vấn đề này có thể được tránh bằng cách nuôi cấy rung động in vitro những DC Điều kiện tối ưu nhất của phương pháp này là chọn lựa cẩn thận nguồn kháng nguyên Phương pháp này mở rộng phạm vi từ việc rung động (pulsing) với peptide , protein , dịch tan tế bào thông qua việc chuẩn bị với những tế. .. sau đó nhóm với huyền phù tế bào trong bình chứa Universal ( tổng thể tích 25 ml) 6 Li tâm 600 vòng/5 phút 7 Đổ bỏ môi trường và tái tạo huyền phù viên vê nhỏ trong 5 ml RPMI/PS/10% FCS.Tiêm 3 lần với kim tiêm 21G để phân chia viên tế bào , và sau đó tạo thành 25 ml với RPMI/PS/10% FCS 8 Đếm tổng tế bào bằng cách sử dụng hemocytometer 9 Chuyển phần mẫu đại diện 1 x 106 tế bào vào ống nghiệm FACS ( ... HÌNH THÀNH TẾ BÀO UNG THƯ V NUÔI CẤY TẾ BÀO UNG THƯ 11 VI ỨNG DỤNG CỦA VIỆC NUÔI CẤY TẾ BÀO UNG THƯ 13 VII TÀI LIỆU THAM KHẢO 16 TẾ BÀO UNG THƯ I GIỚI THIỆU Ung thư (cancer)... CỦA VIỆC NUÔI CẤY TẾ BÀO UNG THƯ VI.1 Một ứng dụng điển hình tế bào ung thư kỹ thuật lai tế bào (hydridoma) tạo vaccin Lai tế bào nuôi cấy dung hợp tế bào có khả tái liên tục với tế bào kháng... tục tế bào ung thư nuôi cấy Vì người ta lai tế bào sinh kháng thể với tế bào ung thư để tạo kháng thể Sơ đồ lai tế bào lách chuột với tế bào ung thư tạo kháng thể đơn dòng Người ta lai tế bào