Nuôi cấy tế bào cây nghệ đen trong hệ lên men FERMENTER

Bäü Giạo dủc v Âo tảo Âải hc Hú Trỉåìng Âải hc Khoa Hc NI CÁÚY TÃÚ BO CÁY NGHÃÛ ÂEN TRONG HÃÛ LÃN MEN (FERMENTER) Lûn vàn Thảc s Chun ngnh: Hoạ sinh- SLTV Khọa 10 (2002-2005) Ngỉåìi hỉåïng dáùn khoa hc: Hc viãn thỉûc hiãûn: Hú, 2005 PGS-TS Nguùn Hong Läüc Tráưn Thë Triãu H MÅÍ ÂÁƯU ÂÄÚI TỈÅÜNG V PHỈÅNG PHẠP KÃÚT QU NGHIÃN CỈÏU KÃÚT LÛN V ÂÃƯ NGHË MÅÍ ÂÁƯU Nghãû âen (Curcuma zedoaria) l mäüt nhỉỵng loải cáy dỉåüc liãûu qu Nhỉỵng cháút tạch chiãút tỉì c nghãû âen sesquiterpenoid, curcuminoid cọ kh nàng chỉỵa bãûnh ung thỉ, bãûnh vãư tim mảch, dả dy, chäúng viãm nhiãùm, Tuy nhiãn, sn lỉåüng c nghãû thu hoảch hản chãú nhiãưu ngun nhán khạc Sỉû phạt triãøn ca k thût ni cáúy tãú bo thỉûc váût nhỉỵng nàm gáưn âáy våïi cạc k thût ni cáúy hãû lãn men, ni cáúy hai pha, cạc biãûn phạp k thût häù tråü cung cáúp âiãưu kiãûn sinh trỉåíng täúi ỉu cho tãú bo â måí triãøn vng ỉïng dủng k thût ny âãø ni sinh khäúi låïn cọ kh nàng täøng håüp cạc håüp cháút thỉï cáúp Våïi nhỉỵng l âọ, chụng täi thỉûc hiãûn âãư ti ”NI CÁÚY TÃÚ BO CÁY NGHÃÛ ÂEN TRONG HÃÛ THÄÚNG LÃN MEN ” nhàòm bỉåïc âáưu xạc âënh mäüt säú âiãưu kiãûn täúc âäü khúy, khäúi lỉåüng máùu âỉa vo ban âáưu, täúc âäü dng khê thêch håüp cho sỉû sinh trỉåíng ca tãú bo nghãû âen ni cáúy in vitro ÂÄÚI TỈÅÜNG V PHỈÅNG PHẠP NGHIÃN CỈÏU 2.1 Âäúi tỉåüng nghiãn cỉïu Curcuma zedoaria Roscoe 2.2 Phỉång phạp nghiãn cỉïu - Mäi trỉåìng ni cáúy - Så âäư bäú trê thê nghiãûm SÅ ÂÄƯ THÊ NGHIÃÛM Dëch ni cáúy Ni cáúy tảo callus Ni cáúy bçnh tam giạc cọ làõc Hãû lãn men Khỉí trng mäi trỉåìng Phiãún lạ, bẻ lạ, gäúc lạ ca cáy nghãû in vitro Pha chãú mäi trỉåìng Chøn bë mäi trỉåìng Phán tạch tãú bo Thu sinh khäúi - Xạc âënh sinh trỉåíng tãú bo Sinh trỉåíng tãú bo âỉåüc xạc âënh thäng qua thäng qua sinh khäúi ca tãú bo bàòng viãûc xạc âënh trng lỉåüng tỉåi v trng lỉåüng khä hai ngy mäüt láưn âãø láûp âỉåìng cong sinh trỉåíng ca tãú bo * Trng lỉåüng tỉåi * Trng lỉåüng khä KÃÚT QU NGHIÃN CỈÏU trng lỉåüng khä (g) 28 24 20 150 rpm 16 200 rpm 12 250 rpm 300 rpm thåìi gian (ngy ) 16 Hçnh 4b Sinh trỉåíng ca tãú bo nghãû âen ni cáúy hãû lãn men åí cạc täúc âäü khúy khạc våïi lỉåüng máùu cáúy ban âáưu l 50g trnglỉåüng tỉåi (g) 200 175 150 rpm 150 200 rpm 125 250 rpm 300 rpm 100 16 thåìi gian (ngy) Hçnh 5b Sinh trỉåíng ca tãú bo nghãû âen ni cáúy hãû lãn men åí cạc täúc âäü khúy khạc våïi lỉåüng máùu cáúy ban âáưu l 100g 25 trng lỉåüng tỉåi (g) 22 19 150 rpm 16 200 rpm 13 250 rpm 300 rpm 10 thåìi gian (ngy) 16 Hçnh 5b: sinh trỉåíng ca tãú bo nghãû âen ni cáúy hãû lãn men åí cạc täúc âäü khúy khạc våïi lỉåüng máùu cáúy ban âáưu l 100g NI CÁÚY TÃÚ BO NGHÃÛ ÂEN TRONG HÃÛ THÄÚNG FERMENTER Bng 4: sinh trỉåíng ca tãú bo nghãû âen ni cáúy hãû lãn men Ra X0 Δx= (Xo – Xmax) X max Tmax L/m TLT TLK 1,5 50 5,07 TLT TLK 273,82a 27,40a 223,82 22,33 16 16 2,0 50 5,01 307,22b 29,62b 257,22 24,61 14 14 2,5 50 4,96 338,15c 33,85c 288,15 28,89 14 14 3,0 50 5,02 261,45d 26,33ad 211,45 21,31 12 12 TLT TLK TLT TLK trng lỉåüng tỉåi (g) 300 250 200 1.5 L/phụt 150 2.0 L/phụt 2.5 L/phụt 100 3.0 L/phụt 50 thåìi gian (ngy) 16 Hçnh 6a Sinh trỉåíng ca tãú bo nghãû âen ni cáúy dëch huưn ph åí cạc täúc âäü dng khê khạc våïi lỉåüng máùu cáúy ban âáưu l 50g, täúc âäü khúy l 150 vng/phụt trng lỉåüng khä (g) 34 29 24 19 1.5 L/phụt 14 2.0 L/phụt 2.5 L/phụt 3.0 L/phụt thåìi gian (ngy ) 16 Hçnh 6b Sinh trỉåíng ca tãú bo nghãû âen ni cáúy dëch huưn ph åí cạc täúc âäü dng khê khạc våïi lỉåüng máùu cáúy ban âáưu l 50g, täúc âäü khúy l 150 vng/phụt KÃÚT LÛN V ÂÃƯ NGHË KÃÚT LÛN Trãn cå såí cạc kãút qu thỉûc nghiãûm, chụng täi bỉåïc âáưu rụt mäüt säú kãút lûn sau: 1.1 Callus ca tãú bo nghãû âen âỉåüc hçnh thnh täút nháút tỉì gäúc lạ (leaf base) ca cáy nghãû in vitro 1.2 Mäi trỉåìng cå bn MS bäø sung saccharose 20g/L, agar 8g/L, BAP 3mg/L v 2,4-D 3mg/L thêch håüp nháút cho sỉû tảo thnh calllus ca nghãû âen 1.3 Ni cáúy tãú bo nghãû âen bçnh tam giạc 250 mL chỉïa 50 mL dung dëch mäi trỉåìng våïi g máùu khåíi âáưu cho kãút qu täút nháút 1.4 Sinh trỉåíng tãú bo nghãû âen hãû lãn men âảt kãút qu täút nháút ni cáúy 50 g máùu L mäi trỉåìng, täúc âäü khúy l 150 vng/phụt, täúc âäü dng khê l 2,5 L/phụt ÂÃƯ NGHË Chụng täi cọ mäüt säú âãư nghë nghiãn cỉïu cáy nghãû âen sau: 2.1 Tiãúp tủc nghiãn cỉïu nh hỉåíng ca cạc thäng säú k thût täúc âäü khúy, täúc âäü khê, thnh pháưn mäi trỉåìng dinh dỉåỵng lãn kh nàng sinh trỉåíng v phạt triãøn ca tãú bo nghãû âen ni cáúy hãû lãn men cng kh nàng têch ly cạc håüp cháút thỉï cáúp cọ giạ trë cao (sesquiterpenoid, curcuninoid ) cạc tãú bo âọ 2.2 Tiãún hnh tạch chiãút tinh dáưu ca tãú bo nghãû ni cáúy hãû lãn men, lm cå såí cho nghiãn cỉïu sn xút cạc håüp cháút thỉï cáúp cọ giạ trë nh Cáy nghãû âen in vitro nh Ni cáúy callus nghãû âen trãn mäi trỉåìng âàûc nh Ni cáúy dëch huưn ph tãú bo nghãû âen bçnh tam giạc 250 mL nh Ni cáúy tãú bo nghãû âen hãû lãn men XIN CHÁN THNH CẠM ÅN QU THÁƯY CÄ V CẠC ANH CHË Â QUAN TÁM THEO DI ! [...]... nghãû âen ni cáúy trong hãû lãn men åí cạc täúc âäü khúy khạc nhau våïi lỉåüng máùu cáúy ban âáưu l 100g 25 trng lỉåüng tỉåi (g) 22 19 150 rpm 16 200 rpm 13 250 rpm 300 rpm 10 0 8 thåìi gian (ngy) 16 Hçnh 5b: sinh trỉåíng ca tãú bo nghãû âen ni cáúy trong hãû lãn men åí cạc täúc âäü khúy khạc nhau våïi lỉåüng máùu cáúy ban âáưu l 100g 3 NI CÁÚY TÃÚ BO NGHÃÛ ÂEN TRONG HÃÛ THÄÚNG FERMENTER Bng 4: sinh... tãú bo nghãû âen trong ni cáúy dëch huưn ph åí cạc thãø têch mäi trỉåìng khạc nhau våïi lỉåüng máùu cáúy ban âáưu l 3g trng lỉåüng khä (g) 0.8 0.6 30 mL 0.4 40 mL 50 mL 0.2 0 8 16 thåìi gian (ngy) Hçnh 3b Sinh trỉåíng ca tãú bo nghãû âen trong ni cáúy dëch huưn ph åí cạc thãø têch mäi trỉåìng khạc nhau våïi lỉåüng máùu cáúy ban âáưu l 3g 3 NI CÁÚY TÃÚ BO NGHÃÛ ÂEN TRONG HÃÛ THÄÚNG FERMENTER 3.1 nh hỉåíng... âen 1.3 Ni cáúy tãú bo nghãû âen trong bçnh tam giạc 250 mL chỉïa 50 mL dung dëch mäi trỉåìng våïi 3 g máùu khåíi âáưu cho kãút qu täút nháút 1.4 Sinh trỉåíng tãú bo nghãû âen trong hãû lãn men âảt kãút qu täút nháút khi ni cáúy 50 g máùu trong 5 L mäi trỉåìng, täúc âäü khúy l 150 vng/phụt, täúc âäü dng khê l 2,5 L/phụt 2 ÂÃƯ NGHË Chụng täi cọ mäüt säú âãư nghë trong nghiãn cỉïu cáy nghãû âen nhỉ... pháưn mäi trỉåìng dinh dỉåỵng lãn kh nàng sinh trỉåíng v phạt triãøn ca tãú bo nghãû âen ni cáúy trong hãû lãn men cng nhỉ kh nàng têch ly cạc håüp cháút thỉï cáúp cọ giạ trë cao (sesquiterpenoid, curcuninoid ) trong cạc tãú bo âọ 2.2 Tiãún hnh tạch chiãút tinh dáưu ca tãú bo nghãû ni cáúy trong hãû lãn men, lm cå såí cho nghiãn cỉïu sn xút cạc håüp cháút thỉï cáúp cọ giạ trë nh 1 Cáy nghãû âen in... rpm 50 0 8 thåìi gian (ngy ) 16 Hçnh 4a Sinh trỉåíng ca tãú bo nghãû âen ni cáúy trong hãû lãn men åí cạc täúc âäü khúy khạc nhau våïi lỉåüng máùu cáúy ban âáưu l 50g trng lỉåüng khä (g) 28 24 20 150 rpm 16 200 rpm 12 250 rpm 8 300 rpm 4 0 8 thåìi gian (ngy ) 16 Hçnh 4b Sinh trỉåíng ca tãú bo nghãû âen ni cáúy trong hãû lãn men åí cạc täúc âäü khúy khạc nhau våïi lỉåüng máùu cáúy ban âáưu l 50g trnglỉåüng... NGHÃÛ ÂEN TRONG HÃÛ THÄÚNG FERMENTER 3.1 nh hỉåíng ca khäúi lỉåüng máùu ban âáưu v täúc âäü khúy âãún sỉû sinh trỉåíng v phạt triãøn ca tãú bo nghãû âen khi ni cáúy trong hãû lãn men Bng 4 Sinh trỉåíng ca tãú bo nghãû âen ni cáúy trong hãû lãn men Ra V/p 150 200 250 300 150 200 250 300 X0 TLT 50 50 50 50 100 100 100 100 Δx= (Xo – Xmax) X max TLK TLT TLK TLT TLK 5,07 4,97 4,98 5,04 10,06 10,10 10,08 10,06... sn xút cạc håüp cháút thỉï cáúp cọ giạ trë nh 1 Cáy nghãû âen in vitro nh 2 Ni cáúy callus nghãû âen trãn mäi trỉåìng âàûc nh 3 Ni cáúy dëch huưn ph tãú bo nghãû âen trong bçnh tam giạc 250 mL nh 4 Ni cáúy tãú bo nghãû âen trong hãû lãn men XIN CHÁN THNH CẠM ÅN QU THÁƯY CÄ V CẠC ANH CHË Â QUAN TÁM THEO DI ! ... cáúy trong hãû lãn men åí cạc täúc âäü khúy khạc nhau våïi lỉåüng máùu cáúy ban âáưu l 100g 3 NI CÁÚY TÃÚ BO NGHÃÛ ÂEN TRONG HÃÛ THÄÚNG FERMENTER Bng 4: sinh trỉåíng ca tãú bo nghãû âen ni cáúy trong hãû lãn men Ra X0 Δx= (Xo – Xmax) X max Tmax L/m TLT TLK 1,5 50 5,07 TLT TLK 273,82a 27,40a 223,82 22,33 16 16 2,0 50 5,01 307,22b 29,62b 257,22 24,61 14 14 2,5 50 4,96 338,15c 33,85c 288,15 28,89 14 14... thåìi gian (ngy) 16 Hçnh 6a Sinh trỉåíng ca tãú bo nghãû âen trong ni cáúy dëch huưn ph åí cạc täúc âäü dng khê khạc nhau våïi lỉåüng máùu cáúy ban âáưu l 50g, täúc âäü khúy l 150 vng/phụt trng lỉåüng khä (g) 34 29 24 19 1.5 L/phụt 14 2.0 L/phụt 2.5 L/phụt 9 3.0 L/phụt 4 0 8 thåìi gian (ngy ) 16 Hçnh 6b Sinh trỉåíng ca tãú bo nghãû âen trong ni cáúy dëch huưn ph åí cạc täúc âäü dng khê khạc nhau våïi... 30 mL 2 40 mL 50 mL 1 0 8 thåìi gian (ngy) 16 Hçnh 1a sinh trỉåíng ca tãú bo nghãû âen trong ni cáúy dëch huưn ph åí cạc thãø têch mäi trỉåìng khạc nhau våïi lỉåüng máùu cáúy ban âáưu l 1g 0.5 trng lỉåüng khä (g) 0.4 0.3 30 mL 0.2 40 mL 0.1 50 mL 0 0 8 16 thåìi gian (ngy) Hçnh 1b Sinh trỉåíng ca tãú bo nghãû âen trong ni cáúy dëch huưn ph åí cạc thãø têch mäi trỉåìng khạc nhau våïi lỉåüng máùu cáúy ... hãû lãn men åí cạc täúc âäü khúy khạc våïi lỉåüng máùu cáúy ban âáưu l 100g NI CÁÚY TÃÚ BO NGHÃÛ ÂEN TRONG HÃÛ THÄÚNG FERMENTER Bng 4: sinh trỉåíng ca tãú bo nghãû âen ni cáúy hãû lãn men Ra X0... TÃÚ BO NGHÃÛ ÂEN TRONG HÃÛ THÄÚNG FERMENTER 3.1 nh hỉåíng ca khäúi lỉåüng máùu ban âáưu v täúc âäü khúy âãún sỉû sinh trỉåíng v phạt triãøn ca tãú bo nghãû âen ni cáúy hãû lãn men Bng Sinh trỉåíng... thỉï cáúp Våïi nhỉỵng l âọ, chụng täi thỉûc hiãûn âãư ti ”NI CÁÚY TÃÚ BO CÁY NGHÃÛ ÂEN TRONG HÃÛ THÄÚNG LÃN MEN ” nhàòm bỉåïc âáưu xạc âënh mäüt säú âiãưu kiãûn täúc âäü khúy, khäúi lỉåüng máùu