ã Nghiên cúu tác dụng giảm đau phân đoạn alcaloid từ củ ô đầu (Aconừum carmichaelì Debx.) trồng tỉnh Hà Giang Vũ Đức Lợi', Nguyễn Tiến Vững^ Nguyễn Thượng Dong^ Phạm Thị Vân Anh“ 'Khoa YDược, Đại HọcQuốcGiaHàNội, ^ViệnPhápy Quốcgiơ, ^ViệnDượcliệu, ^TrườngĐại học YHàNội SUMMARY An alkaloid fraction was isolated from daughter root ofAconitum carmichaeli Debx by column chromatography The fraction is to evaluate analgesic effect by methods: Koster, tail-flick, hot plate The results show that oral administrations o f fraction at dose 12.5 mg, 25 mg and 50 mg/kg bodyweight o f mice/day for days had significantly analgesic effect Từ khóa: A carmichaeli, alcaloid, giảm đau, phụ tử Đặt Vấn đề Cây ô đẩu (Aconitum carmichaeli Debx.) trổng tỉnh Hà Giang tổng số 300 loài thuộc chi Aconitum phân bố giới Theo kinh nghiệm dân gian, củ ô đẩu thường dùng để chữa đau nhức xương khớp Theo Bùi Hồng Cường, dịch chiết nước phụ tử chế có tác dụng giảm đau phương pháp nghiên cứu mâm nóng gây quặn đau acid acetic [1] Tuy nhiên, đến nước nhưtrên giới, chưa có công bố vể nghiên cứu tác dụng giảm đau phân đoạn alcaloid từ loài thuộc chi Aconìtum Do tiến hành nghiên cứu tác dụng giảm đau alcaloid từ củ ô đầu nhằm tìm phân đoạn alcaloid có tác dụng giảm đau tốt, sử dụng điểu trị bệnh Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu - Phân đoạn alcaloid từ phụ tử (củ ô đẩu): Bột phụ tử (2,8 kg) xay thô, sấy khô ngâm chiết ethanol Dịch chiết tổng loại cặn cách lọc qua giấy lọc sau đem cất thu hổi dung môi áp suất giảm thu cao chiết ethanol (300,8 g) Chiết lại lẩn cao chiết ethanol n-hexan, cất thu hổi dung môi áp suất giảm thu cao chiết n-hexan (100,6 g) Cao chiết n-hexan triển khai phân tách sắc ký cột Silicagel với hệ dung môi rửa giải n-hexan: EtOAc (10:90) thu phân đoạn alcaloid (4,2 g) Phân đoạn định tính phản ứng với thuốc thử Mayer, Dragendorff, Bouchardat đểu cho kết dương tính - Động vật thí nghiệm: Chuột nhắt trắng dòng Swiss trưởng thành khỏe mạnh, giống, trọng lượng 20 ± g Viện Vệ sinh Dịch tễ Trung ương cung cấp Hóa chất, thiết bị - Aspirin (Aspégic) gói bột 100 mg hãng Sa Nguyên liệu nofi Aventis, Pháp Cây ô đẩu thu hái vào tháng 10 năm 2012 - Codein phosphat Viện Kiểm nghiệm thuốc huyện Quản Bạ, tinh Hà Giang Tên khoa học Trung ương cung cấp là: Aconitum carmichaeli Debx - Dung dịch acid acetic 1% - Máy hot plate model - DS37 hãng Ugo - Basile(Ý) - Máy đo phản ứng đau tail-flick (series 16881), sản xuất Ugo - Basile, Ý Phương pháp nghiên cứu Nghiên cứu tác dụng giảm đau phân đoạn alcaloid Phụ tử phương pháp mâm nóng" (hot plate)[2ị Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên thành lô, lô 10 con: - Lô (chứng): uống nước cất liểu 0,2 ml/IOg/ ngày ngày - Lô 2: uống codein phosphat 20 mg/kg lần trước đo lần thứ hai - Lô 3: uống phân đoạn alcaloid Phụ tử liều 12.5 mg/kg/ngày ngày - Lô 4: uống phân đoạn alcaloid Phụ tử liểu 25 mg/kg/ngày ngày - Lô 5: uống phân đoạn alcaloid Phụ tử liều 50 mg/kg/ngày ngày Chuột lô 1, 3, uống nước cất thuốc thử ngày lẩn vào buổi sáng ngày liên tục Đo thời gian phản ứng với nhiệt độ chuột trước uống thuốc sau uống thuốc lẩn cuối Phương pháp đo sau: Đặt chuột lên mâm nóng (máy hot plate), trì nhiệt độ 56°c hệ thống ổn nhiệt Thời gian phản ứng với kích thích nhiệt tính từ lúc đặt chuột lên mâm nóng đến chuột có phản xạ liếm chân sau So sánh thời gian phản ứng với kích thích nhiệt trước sau uống thuốc thử so sánh lô chuột với Nghiên cứu tác dụng giảm đau phân đoạn alcaloid Phụ tử bàng máy tail-flick [5] Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên thành lô, lô 10 - Lô (chứng): uống nước cất liều 0,2 ml/10 g/ ngày - Lô 2: uống codein phosphat 20 mg/kg lẩn trước đo lẩn thứ hai - Lô 3: uống phân đoạn alcaloid Phụ tử liểu 12.5 mg/kg/ngày ngày - Lô 4: uống phân đoạn alcaloid Phụ tử liều 25 mg/kg/ngày ngày - Lô 5: uống phân đoạn alcaloid Phụ tử liểu 50 mg/kg/ngày ngày Chuột lô 1, 3, uống nước cất thuốc thử ngày lẩn vào buổi sáng ngày liên tục Đánh giá phản ứng chuột trước uống thuốc sau uống thuốc lẩn cuối - Phương pháp gây đau máy tail-flick đuôi chuột nhắt trắng thực sau: + Tác dụng lực tăng dẩn lên đuôi chuột + Khi đạt ngưỡng gây đau, chuột phản ứng lại cách quay lại liếm vào đuôi vị trí gây đau rút đuôi khỏi kim gây đau - Đo số trước cho uống thuốc - Sau ngày, sau uống liều thuốc cuối giờ, đo lại lẩn lẩn (trước uống thuốc) Nghiên cứu tác dụng giảm đau phân đoạn alcaloid Phụ tử phương pháp gây quặn đau bàng acid acetic[2] Chuột nhắt trắng chia ngẫu nhiên thành lô, lô 10 con: - Lô (chứng); uống nước cất liều 0,2 ml/10 g/ ngày ngày - Lô 2: uống aspirin 150 mg/kg lẩn trước đo lẩn thứ hai - Lô 3: uống phân đoạn alcaloid Phụ tử liều 12,5 mg/kg/ngày ngày - Lô 4: uống phân đoạn alcaloid Phụ tử liểu 25 mg/kg/ngày ngày - Lô 5: uống phân đoạn alcaloid Phụ tử liểu 50 mg/kg/ngày ngày Chuột lô 1, 3, uống nước cất thuốc thử ngày lẩn vào buổi sáng ngày liên tục Ngày thứ 3, sau uống thuốc giờ, tiêm vào ổ bụng chuột 0,2 ml dung dịch acid acetic 1%.Đếm số quặn đau chuột phút hết phút thứ 30 sau tiêm acid acetic Kết nghiên cứu Tác dụng giảm đau phân đoạn alcaloid Phụ tử phương pháp mâm nóng Kết bảng cho thấy: Lô chuột Thời gian phản ứng với nhiệt độ n Trước Sdu ptrước-sau Lô (chứng) 10 24,60 ±8,26 23,87 ±7,11 >0,05 Lô (Codein phosphat liều 20 mg/kg) 10 23,60 ±6,02 41,68 ±8,52 0,05 < 0.001 23,04 ±8,50 32,00 ±9,33 P3-1 >0,05 0,05 0,05 < P5 P4-2 Lô (Phân đoạn alcaloỉd 50 mg/kg/ngàỵ) >0,05 0,05 0,05 < 0.001 10 13,00 ± 3 0,05 7,95 ±2,02 11,80 ±3,29 >0,05 0,05 0,05 >0,05 >0,05 >0,05 p trước-sau >0,05 -2 phút > -2 phút > -3 phút Lô (chứng) 10 7,90 ±3,25 19,40 ± 4,38 19,00 ± 3,86 16,80 ± 3,74 12,20 ±5,33 10,60 ± 2,88 Lô (Aspirin liều 150 mg/kg) 10 2,20 ± 2,49 9,90 ±2,23 11,00 ±2,83 9,40 ± 2,37 6,70 ± 2,36 4,80 ± 2,39 < 0,001 < 0,001 ... liểu thử tác dụng giảm đau phân đoạn alcaloid Tác dụng giảm đau phân đoạn alcaloid chiết từ Phụ tử đánh giá mô hình Phương pháp mâm nóng dùng tác nhân gây đau nhiệt độ, máy tail-flick dùng tác nhân...