Môi trường nuôi cấy tế bào động vật

Môi trường nuôi cấy tế bào động vật Nhu cầu dinh dưỡng tế bào động vật có vú lớn vi sinh vật do, không giống vi sinh vật, động vật không trao đổi chất nitrogen vô Vì thế, nhiều amino acid vitamin cần phải bổ sung vào môi trường Môi trường đặc trưng dùng nuôi cấy tế bào động vật bao gồm amino acid, vitamin, hormone, nhân tố sinh trưởng, muối khoáng glucose Ngoài ra, môi trường cần cung cấp từ 2-20% (theo thể tích) huyết tương động vật có vú Mặc dù huyết có thành phần chưa xác định đầy đủ, nhiều nghiên cứu cho thấy cần thiết cho phát triển tồn tế bào nuôi cấy Môi trường Eagle (Eagle 1959), môi trường sử dụng phổ biến nuôi cấy tế bào động vật Huyết dùng môi trường nuôi cấy không đắt tiền mà nguồn nhiễm bẩn virus mycoplasma Do chất hóa học huyết chưa xác định đầy đủ nên số trường hợp ảnh hưởng xấu đến kết nuôi cấy Sự diện nhiều protein khác huyết làm phức tạp trình phân tách tinh đầu Vì lý đó, nhiều nghiên cứu thực để xây dựng công thức môi trường huyết Những công thức chứa hormone nhân tố sinh trưởng tinh để thay cho huyết Trước đây, huyết thai bò (fetal bovine serum-FBS), bổ sung nồng độ 1-20%, cần thiết cho sinh sản tế bào động vật có vú Nhưng ngày nay, nhiều trình nuôi cấy tế bào quy mô lớn bắt đầu thực môi trường huyết Thành phần môi trường Eagle (1959) Tế bào động vật Các tế bào động vật tế bào eukaryote, chúng liên kết với nguyên liệu gian bào để tạo thành mô Mô động vật thường phân chia theo bốn nhóm: biểu mô (epithelium), mô liên kết (connective tissue), mô (muscle) mô thần kinh (nerve) Biểu mô tạo thành lớp phủ lớp lót bề mặt tự thể, bên bên Ở mô liên kết, tế bào thường bao bọc thể gian bào rộng (kéo dài), chất lỏng, rắn rắn Các tế bào mô thường thon dài gắn với thành phiến bó mô liên kết Mô chịu trách nhiệm cho hầu hết chuyển động động vật bậc cao Các tế bào mô thần kinh gồm có thân bào chứa nhân nhiều phần mở rộng dài mảnh gọi sợi Các tế bào thần kinh kích thích dễ dàng truyền xung động nhanh Các tế bào dịch huyền phù Tế bào hồng cầu bạch huyết mô liên kết không điển hình dạng thể lỏng Các tế bào máu dịch bạch huyết tế bào dịch huyền phù (suspension cells), không dính bám chúng sinh trưởng nuôi cấy in vitro Các tế bào không dính bám không đòi hỏi bề mặt để sinh trưởng Chẳng hạn, tế bào bạch huyết (lymphocytes) bắt nguồn từ mô bạch huyết tế bào không dính bám có hình cầu đường kính từ 10-20 µm Chúng nuôi cấy môi trường dịch lỏng theo phương thức tương tự vi khuẩn Các tế bào dính bám Hầu hết tế bào động vật bình thường tế bào dính bám, chúng cần có bề mặt để gắn vào sinh trưởng Trong ứng dụng, người ta sử dụng rộng rãi loại tế bào dính bám tế bào biểu mô nguyên bào sợi (fibroblast) (Hình 6.1b c) Các tế bào dính bám cần có bề mặt ẩm để sinh trưởng thủy tinh plastic Đĩa petri chai trục lăn loại sử dụng rộng rãi Các chai đặt nằm trục lăn quay tròn chậm tủ ấm Chai có dung tích L chứa khoảng 100 mL môi trường thích hợp cho tế bào vừa sinh trưởng thành chai vừa tiếp xúc với môi trường không khí Tuy nhiên, chai trục lăn dùng cho quy mô phòng thí nghiệm diện tích bề mặt đơn vị thể tích chai nuôi cấy nhỏ (500 cm2/L) Các tế bào động vật thường sử dụng nuôi cấy (a) tế bào bạch huyết, (b) tế bào biểu mô, (c) nguyên bào sợi Tỷ lệ diện tích/thể tích tăng lên tế bào sinh trưởng giá thể polymer bọt biển (spongy), thể gốm (ceramic), sợi rỗng, bao vi thể (microcapsule), hạt nhỏ có kích thước hiển vi gọi microcarrier  ... sinh sản tế bào động vật có vú Nhưng ngày nay, nhiều trình nuôi cấy tế bào quy mô lớn bắt đầu thực môi trường huyết Thành phần môi trường Eagle (1959) Tế bào động vật Các tế bào động vật tế bào eukaryote,... thể tích chai nuôi cấy nhỏ (500 cm2/L) Các tế bào động vật thường sử dụng nuôi cấy (a) tế bào bạch huyết, (b) tế bào biểu mô, (c) nguyên bào sợi Tỷ lệ diện tích/thể tích tăng lên tế bào sinh trưởng... khuẩn Các tế bào dính bám Hầu hết tế bào động vật bình thường tế bào dính bám, chúng cần có bề mặt để gắn vào sinh trưởng Trong ứng dụng, người ta sử dụng rộng rãi loại tế bào dính bám tế bào biểu