Môi trường nuôi cấy vi sinh vật

Môi trường nuôi cấy vi sinh vật Sự sinh trưởng của quần thể vi khuẩn trong môi trường dinh dưỡng nhân tạo được gọi là nuôi cấy cultivation.. - Khử trùng môi trường để loại bỏ tất cả các

Môi trường nuôi cấy

vi sinh vật

Sự sinh trưởng của quần thể vi khuẩn trong môi trường dinh dưỡng nhân tạo được gọi là nuôi cấy (cultivation) Một kiểu nuôi cấy chỉ chứa một loại vi sinh vật được gọi là nuôi cấy thuần khiết (pure culture) Nuôi cấy hỗn hợp (mixed culture) là một loại nuôi cấy chứa nhiều hơn một loại vi sinh vật Các bước cần thiết cho nuôi cấy vi sinh vật là như sau:

- Chuẩn bị môi trường nuôi cấy cho phép vi sinh vật có thể sinh trưởng tốt nhất

- Khử trùng môi trường để loại bỏ tất cả các cơ thể sống có trong bình nuôi cấy

- Cấy vi sinh vật vào trong môi trường đã chuẩn bị

Để nuôi cấy vi sinh vật, môi trường nuôi cấy phải được chuẩn bị trong những loại bình nuôi được sử dụng phổ biến nhất, chẳng hạn ống nghiệm, bình tam

trường tự nhiên (dựa trên kinh nghiệm) và môi trường tổng hợp (thành phần hóa học xác định) Nói chung, các môi trường dinh dưỡng rất khác nhau về hình thái (dạng rắn hoặc lỏng) và thành phần, tùy thuộc vào loại vi sinh vật được nuôi cấy và mục đích nuôi cấy

1 Môi trường tự nhiên

Là những loại môi trường dựa trên cơ sở của kinh nghiệm, mà không dựa trên

sự hiểu biết chính xác về thành phần các chất dinh dưỡng và tác động của chúng Môi trường tự nhiên thường chứa peptone, dịch chiết thịt bò, hoặc dịch chiết nấm men Khi sử dụng môi trường rắn, có thể bổ sung các tác nhân làm rắn vào môi trường như gelatin hoặc agar Ví dụ về môi trường rắn và môi trường lỏng dùng cho sinh trưởng của nhiều loại vi sinh vật dị dưỡng là tương đối đơn giản, phổ biến là canh dinh dưỡng (nutrient broth) và agar dinh dưỡng (nutrient agar) Thành phần của chúng như sau:

- Canh dinh dưỡng: 3 g nước chiết thịt bò, 5 g peptone, 5 g dịch chiết nấm men và nước bổ sung tới 1 L

- Agar dinh dưỡng: cùng thành phần như canh dinh dưỡng nhưng có thêm 15

g agar và nước bổ sung tới 1 L

2 Môi trường tổng hợp

Môi trường chứa các dung dịch pha loãng của hóa chất tinh khiết, được biết

là các hợp chất hữu cơ và/hoặc vô cơ Chúng thường được sử dụng cho các mục đích nghiên cứu hơn là để sản xuất Môi trường có thể đơn giản như là muối ammonium vô cơ cộng với các muối khoáng và đường, hoặc phức tạp như là casein tinh sạch được bổ sung thêm các vitamin, muối khoáng và đường

3 Khử trùng

Môi trường dinh dưỡng thích hợp được chọn để nuôi cấy một loại vi sinh vật đặc biệt sẽ được rót vào các bình nuôi cấy Nếu sử dụng các ống nghiệm hoặc bình tam giác, thì chúng phải được úp bằng một nắp đậy thích hợp cho phép

có sự trao đổi khí với khí quyển nhưng vẫn ngăn cản các cơ thể ngoại lai rơi vào môi trường Các loại nắp khác nhau được dùng trong phòng thí nghiệm bao gồm: nút bông, bọt plastic, nắp vặn, nắp kim loại và giấy nhôm

Môi trường sau đó phải được khử trùng để loại bỏ tất cả các cơ thể sống trong bình chứa môi trường Phương pháp khử trùng phổ biến nhất là khử trùng bằng hơi nước dưới áp suất cao trong nồi khử trùng (autoclave) Nói chung, autoclave hoạt động ở áp suất 15 psi ở 121oC Thời gian khử trùng tùy thuộc vào bản chất của nguyên liệu, loại bình chứa và thể tích của môi trường Ví

dụ, đối với ống nghiệm chứa môi trường lỏng có thể khử trùng từ 15-20 phút

ở 121oC

4 Nuôi cấy

Nuôi cấy là sự tiếp mẫu (vi sinh vật) vào bình chứa môi trường dinh dưỡng

vô trùng Sự tiếp mẫu khi nuôi cấy trên môi trường rắn có agar được thực hiện bằng que cấy có vòng kim loại ở đầu (metal wire hoặc loop) được khử trùng nhanh trước khi sử dụng bằng cách đốt nóng trên đèn cồn

Cấy chuyển trong nuôi cấy lỏng thường được thực hiện bằng Pasteur pipette

Sự tiếp mẫu thường được tiến hành trong tủ cấy vô trùng (laminar flow cabinet) để giảm thiểu nguy cơ nhiễm bẩn Điều quan trọng là phải nắm vững các kỹ thuật hút pipette thích hợp cho việc tiếp mẫu và lấy mẫu trong quá trình nuôi cấy