1/31/2013 Nguyễn Quang TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆ ĐỒNG NAI CÔNG NGHỆ SINH HỌC THỰC PHẨM Giảng viên: Nguyễn Quang SĐT: 01689 034 127 Email: quang.nguyen.3487@gmail.com Chương 5: Một số phương pháp phân tích vi sinh vật thực phẩm 5.1 Phương pháp lai phân tử 5.2 Phương pháp PCR 5.3 Phương pháp ELISA Nguyễn Quang Phương pháp lai phân tử Hai mạch đơn phân tử DNA gắn với nhờ liên kết hydro Khi đun nóng DNA từ từ, vượt nhiệt độ nóng chảy, liên kết hydro hai mạch bị phá vỡ, hai mạch tách rời Nếu nhiệt độ phản ứng hạ xuống đột ngột bắt cặp không xảy Lúc phân tử DNA tồn môi trường dạng mạch đơn cấu hình vô trật tự Ngược lại, sau hai mạch tách rời, nhiệt độ làm giảm từ từ cộng với điều kiện thích hợp, chúng bắt cặp trở lại Hiện tượng gọi lai phân tử (molecular hybridization) Nguyễn Quang Ứng dụng Dùng phương pháp lai phân tử để kiểm tra thực phẩm biến đổi gen DNA chiết xuất từ mô, sau trình xử lý đem lai với mẫu dò có đánh dấu phóng xạ Các tín hiệu thông tin kết lai DNA, phản ánh DNA microarry (một cảm biến sinh học) Từ kết thu DNA microarry cho phép xác định đột biến gen mẫu thực phẩm Nguyễn Quang Phương pháp PCR PCR (Polymerase Chain Reaction): Phản ứng chuỗi trùng hợp PCR kỹ thuật phổ biến sinh học phân tử nhằm khuyếch đại (tạo nhiều sao) đoạn DNA mà không cần sử dụng sinh vật sống E coli hay nấm men Nguyễn Quang Ứng dụng PCR sử dụng nghiên cứu sinh học y học phục vụ nhiều mục đích khác nhau, phát bệnh di truyền, nhận dạng vân tay DNA, chuẩn đoán bệnh nhiễm trùng, tách dòng gene xác định huyết thống 1/31/2013 Nguyễn Quang Phương pháp ELISA Phương pháp ELISA ELISA ( Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay): Xét nghiệm hấp thu miễn dịch liên kết với enzyme Dựa kết hợp kháng nguyên kháng thể đặc hiệu, phản ứng tạo sản phẩm có màu hay phát sáng Trong tính chất họat hóa enzyme độ đặc hiệu kháng thể không đổi Ưu điểm: Ưu điểm quan trọng phương pháp ELISA độ nhạy cao, phát phức hợp nhỏ, cho phép phát sớm tác nhân gây bệnh giai đoạn sớm mầm bệnh xâm nhiễm Nhanh,thao tác đơn giản Rẻ tiền, tốn sinh phẩm, hóa chất, số lượng mẫu lớn, thích hợp với việc phân tích nguyên liệu thô Nhược điểm: độ xác không cao Nguyễn Quang Phân loại Phương pháp ELISA gián tiếp (indirect ELISA): dùng để phát kháng thể chuyên biệt huyết Phương pháp ELISA trực tiếp (direct ELISA): dùng để phát kháng nguyên mẫu xét nghiệm Nguyễn Quang Ứng dụng Phương pháp Elisa phát định lượng vi sinh thực phẩm thời gian vài sau tăng sinh Phát độc tố tảo Phát vi khuẩn E.coli, Salmonella, Staphylococcus aureus,sán gan… thực phẩm Phát chất chloramphenicol (chất không phép có tôm, cá sản phẩm thuỷ sản khác) Kiểm tra dư lượng kháng sinh thực phẩm,tàn dư thuốc diệt cỏ,thuốc trừ sâu… Câu hỏi ôn tập Trình bày hiểu biết em lai phân tử? Hãy cho biết ứng dụng lai phân tử Trình bày hiểu biết em PCR? Hãy cho biết ứng dụng PCR Trình bày hiểu biết em ELISA? Hãy cho biết ứng dụng ELISA ... ELISA): dùng để phát kháng nguyên mẫu xét nghiệm Nguyễn Quang Ứng dụng Phương pháp Elisa phát định lượng vi sinh thực phẩm thời gian vài sau tăng sinh Phát độc tố tảo Phát vi khuẩn E.coli,... Salmonella, Staphylococcus aureus,sán gan… thực phẩm Phát chất chloramphenicol (chất không phép có tôm, cá sản phẩm thuỷ sản khác) Kiểm tra dư lượng kháng sinh thực phẩm, tàn dư thuốc diệt cỏ,thuốc trừ... Nhanh,thao tác đơn giản Rẻ tiền, tốn sinh phẩm, hóa chất, số lượng mẫu lớn, thích hợp với việc phân tích nguyên liệu thô Nhược điểm: độ xác không cao Nguyễn Quang Phân loại Phương pháp ELISA