Nghiên cứu hóa học dịch chiết nước cây chiết cánh (mallotus glabriusculus)

TRNG I HC S PHM H NI KHOA HểA HC *****&&&***** HONG TH ANH TH NGHIấN CU HO HC DCH CHIT NC CY CHIT CNH (MALLOTUS GLABRIUSCULUS) KHểA LUN TT NGHIP I HC Chuyờn ngnh: Hoỏ hu c Ngi hng dn khoa hc LC QUANG TN H NI - 2011 Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th LI CM N Khoỏ lun tt nghip ny c hoàn thành ti phũng Dược liệu biển Vin Hoá Sinh Biển - Vin Khoa hc v Cụng ngh Vit Nam Trc tiờn, em xin by t lũng bit n chõn thnh v sõu sc ti thy giỏo Lc Quang Tn ó nhit tỡnh, tn tõm hng dn em sut quỏ trỡnh thc hin khúa lun ny Em xin trõn trng cm n s giỳp tn tỡnh ca thy giỏo PGS.TS Phan Vn Kim v ton th Ban Lónh o Vin Hoỏ Sinh BinVin Khoa hc v Cụng ngh Vit Nam, ó to iu kin cho em c hc v s dng cỏc thit b tiờn tin ca Vin hon thnh tt cỏc mc tiờu ca khoỏ lun tt nghip Qua õy em cng xin gi li cm n ti cỏc cỏn b cụng nhõn viờn, phũng Dc liu bin - Vin Hoỏ Sinh Bin - Vin Khoa hc v Cụng ngh Vit Nam ó tn tỡnh ch bo, to mi iu kin thun li giỳp em thi gian lm khoỏ lun tt nghip Em xin c by t lũng bit n chõn thnh ti thy giỏo Trng khoa TS Nguyn Vn Bng cựng ton th cỏc thy cụ giỏo khoa Húa hc, cỏc thy cụ giỏo Trng i hc S phm H Ni ó truyn t nhng kin thc quý bỏu cho em sut quỏ trỡnh hc ti trng H Ni, ngy 10 thỏng 05 nm 2011 Sinh viờn Hong Th Anh Th K33C Khoa Húa hc ii Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th LI CAM OAN Tụi xin cam oan kt qu nghiờn cu khoỏ lun l ca bn thõn tụi Cỏc s liu, kt qu khúa lun ny l trung thc, khụng trựng vi kt qu ca tỏc gi khỏc Nu cú bt c gỡ khụng ỳng tụi xin hon ton chu trỏch nhim H Ni, ngy 10 thỏng 05 nm 2011 Sinh viờn Hong Th Anh Th K33C Khoa Húa hc iii Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th MC LC LI CM N LI CAM OAN MC LC DANH MC HèNH V V BNG BIU DANH MC CH VIT TT M U CHNG 1: TNG QUAN 1.1 Tng quan v cõy Chit cỏnh 1.1.1 Thc vt hc 1.1.2 Phõn b v sinh thỏi 1.1.3 Cụng dng 1.1.4.Thnh phn húa hc 1.2 Lp cht Flavonoid, thnh phn húa hc cú cõy Chit cỏnh 1.2.1 Gii thiu chung [6, 7, 8, 9] 1.2.2 Cỏc nhúm flavonoid 1.3 Cỏc phng phỏp chit mu thc vt 13 1.3.1 Chn dung mụi chit 13 1.3.2 Quỏ trỡnh chit 15 1.4 Cỏc phng phỏp sc ký phõn lp cỏc cht hu c 17 1.4.1 c im chung ca phng phỏp sc ký 17 1.4.2 C s ca phng phỏp sc ký 18 1.4.3 Phõn loi cỏc phng phỏp sc ký 18 1.5 Mt s phng phỏp hoỏ lý xỏc nh cu trỳc ca cỏc hp cht hu c 20 1.5.1 Ph hng ngoi 21 1.5.2 Ph lng 21 1.5.3 Ph cng hng t ht nhõn 22 K33C Khoa Húa hc iv Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th CHNG I TNG V PHNG PHP NGHIấN CU 25 2.1 Mu thc vt 25 2.2 Phng phỏp phõn lp cỏc hp cht 25 2.2.1 Sc ký lp mng (TLC) 25 2.2.2 Sc ký lp mng iu ch 25 2.2.3 Sc ký ct (CC) 25 2.3 Phng phỏp xỏc nh cu trỳc hoỏ hc cỏc hp cht 26 2.3.1 im núng chy (Mp) 26 2.3.2 Ph lng (ESI-MS) 26 2.3.3 Ph cng hng t nhõn (NMR) 26 2.3.4 quay cc []D 26 2.4 Dng c v thit b 26 2.4.1 Dng c v thit b tỏch chit 26 2.4.2.Dng c v thit b tỏch chit 27 2.5 Hoỏ cht 27 2.6 Chit phõn on v phõn lp cỏc hp cht 27 2.6.1 Thu mu thc vt v x lý mu 27 2.6.2 Phõn lp cỏc hp cht 27 CHNG 3: KT QU THO LUN 30 3.1 Hng s vt lý v cỏc d kin ph ca cỏc hp cht 30 3.1.1 Hp cht Astilbin 30 3.1.2 Hp cht Myricitrin 30 3.2 Tho lun 31 3.2.1 Xỏc nh cu trỳc húa hc ca hp cht Astilbin 31 3.2.2 Xỏc nh cu trỳc húa hc ca hp cht Myricitrin 35 KT LUN 40 TI LIU THAM KHO 42 K33C Khoa Húa hc v Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th Danh mc hỡnh v v bng biu Hỡnh 1.1 Lỏ Chit cỏnh Hỡnh 1.2 Flavan Hỡnh 1.3 Flavon Hỡnh 1.4 Flavonol Hỡnh 1.5 Flavanon Hỡnh 1.6 Flavanon v Chalcon Hỡnh 1.7 Flavanonol-3 Hỡnh 1.8 Taxifolin Hỡnh 1.9 Chalcon Hỡnh 1.10 Auron Hỡnh 1.11 Coreopsin 10 Hỡnh 1.12 Sunphurein 10 Hỡnh 1.13 Autoxianidin 10 Hỡnh 1.14 Cỏc dng chuyn hoỏ ca antoxianidin 10 Hỡnh 1.15 Leucoantoxianidin 11 Hỡnh 1.16 Cp catechin v epicatechin 11 Hỡnh 1.17 3-phenyl chromen 12 Hỡnh 1.18 Isoflavon 12 Hỡnh 1.19 Isoflavanon 12 Hỡnh 1.20 Rotenoid 13 Hỡnh 2.1 S phõn lp hp cht t dch chit nc ca 29 lỏ cõy Chit cỏnh Hình 3.1.a Phổ 1H-NMR hợp chất 31 Hình 3.1.b Phổ 13C-NMR hợp chất 32 Hình 3.1.c Phổ ESI-MS positive 33 K33C Khoa Húa hc vi Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th Hình 3.1.d Phổ ESI-MS negative 33 Hình 3.1.e Cấu trúc hợp chất 33 Hỡnh 3.2.a Ph 1H-NMR ca hp cht 35 Hỡnh 3.2.b Ph 13C-NMR ca hp cht 36 Hỡnh 3.2.c Ph DEPT ca hp cht 36 Hỡnh 3.2.d Ph HMBC ca hp cht 37 Hỡnh 3.2.e Ph ESI-MS negative ca 38 Hỡnh 3.2.f Cu trỳc hoỏ hc ca hp cht 38 Bng 3.2.1 S liu ph cng hng t ht nhõn 1H- v 13C-NMR 34 ca hp cht Bng 3.2.2 S liu ph cng hng t ht nhõn 1H- v 13C- 39 NMR, HMBC ca hp cht Bng Bng tng hp hai hp cht flavonoid ó phõn 41 lp c t dch chit nc K33C Khoa Húa hc vii Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th Danh mc ch vit tt 13 C NMR Ph cng hng t ht nhõn cacbon 13 Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy H NMR Ph cng hng t ht nhõn proton Proton Magnetic Resonance Spectroscopy H-1H COSY 2D-NMR H-1H Chemical Shift Correlation Spectroscopy Ph cng hng t ht nhõn hai chiu Two-Dimensional NMR CC Sc ký ct Column Chromatography DEPT Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer EI-MS Ph lng va chm electron Electron Impact Mass Spectrometry HMBC Heteronuclear Multiple Bond Connectivity HSQC Heteronuclear Single Quantum Coherence IR Ph hng ngoi Infrared Spectroscopy Me Nhúm metyl MS Ph lng Mass Spectroscopy TLC Sc ký lp mng Thin Layer Chromatography K33C Khoa Húa hc viiiTrng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th M U Lónh th Vit Nam nm vựng khớ hu nhit i giú Cú ti 3/4 din tớch ca c nc l rng nỳi trựng ip, a hỡnh chia ct nờn iu kin khớ hu cng rt a dng, cú nhiu tiu vựng khớ hu rt c trng t ca c nc u th hin tớnh cht nhit i m in hỡnh, rt phc tp, rt a dng v loi hỡnh, v phõn b v v cht lng Nhng yu t ú to nờn nhng iu kin sinh thỏi, nhng thm thc vt mang tớnh cn nhit i cỏc khu vc cao Theo c tớnh, Vit Nam cú khong 13000 loi thc vt cao cú mch ú cú hn 4000 loi c s dng lm thuc Ngoi s phong phỳ v thnh phn chng loi, ngun dc liu Vit Nam cũn cú giỏ tr to ln ch chỳng c s dng rng rói cng ng cha nhiu chng bnh khỏc Cỏc cõy thuc c s dng di hỡnh thc c v hay phi hp vi to nờn cỏc bi thuc c truyn, cũn tn ti v thnh hnh n ngy Ngoi ra, hng trm cõy thuc ó c khoa hc y - dc hin i chng minh v giỏ tr cha bnh ca chỳng Nhiu loi thuc c chit xut t dc liu Vit Nam nh rutin, D.strophantin, berberin, palmatin, L-tetrahydropalmatin, artermisinin, cỏc sn phm t tinh du ó c s dng rng rói nc v xut khu Xu hng i sõu nghiờn cu xỏc minh Y hc c truyn v tỡm kim cỏc hp cht t nhiờn cú hot tớnh sinh hc cao lm thuc t dc liu ngy cng c th gii quan tõm S dng cõy c lm thuc luụn gn lin vi lch s tn ti v phỏt trin ca xó hi loi ngi Cha ụng ta, t xa xa ó bit dựng thc vt va t nuụi sng mỡnh, va t cha bnh v chm súc sc kho cho chớnh mỡnh Hu ht cỏc loi cõy thuc u cú cha cỏc hot cht sinh hc, vỡ tỏc dng cha bnh ca cỏc cõy thuc ch yu l cỏc hp cht t nhiờn c bit l cỏc hp cht trao i th cp Vic s dng cỏc hp cht thiờn nhiờn v cỏc K33C Khoa Húa hc Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th sn phm cú ngun gc thiờn nhiờn dc phm cha bnh ang ngy cng thu hỳt c s quan tõm ca cỏc nh khoa hc cng nh cng ng bi u im ca chỳng l c tớnh thp, d hp thu v chuyn hoỏ c th hn so vi cỏc dc phm tng hp Chi ba bột ( Mallotus) l mt chi khỏ ln, gm khong 150 loi phõn b ti cỏc khu vc t n , Sri Lanka n Thỏi Lan, Lo, Campuchia, Vit Nam v khp vựng Malesian V phớa Nam, chỳng phõn b ti ụng Fiji, Bc v ụng Australia Lờn phớa Bc, cú th bt gp khỏ nhiu loi phõn b ti Trung Quc, Triu Tiờn v Nht Bn Rt nhiu loi Mallotus ó c s dng lm thuc cha nhiu loi bnh khỏc nh : bc nỳi cao M.japonicus c s dng y hc dõn tc Trung Quc cha bnh viờm loột d dy, tỏ trng v iu ho cỏc chc phn ca b mỏy tiờu hoỏ núi chung, nc ta loi bai bỏi M.contubrnalis lm thuc cha cỏc bnh thp khp, u phong, mn nht, nga, loi bc trn M.repandus c s dng ti Thỏi Lan cha bnh viờm d dy, viờm au gan, viờm au khp v cha rn c cn Cõy Chit Cỏnh (Mallotus Glabriusculus), thuc h Thu du (Euphobiaceae) l mt loi cõy ph bin, ó c s dng t lõu dõn gian lm thuc cha bnh, nh r cõy c dựng lm thuc b phi v cha ho, viờm au hng, kit l v mt s bnh ngoi da Tuy nhiờn cho ti cha cú mt sn phm dc phm K33C Khoa Húa hc Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th ln lt vi Hexan v EtOAc thu c cỏc dch cụ Hexan (18,5 g) v EtOAc (4,6 g) Cn chit EtOAc (4,6 g) c tin hnh sc ký trờn ct silica gel vi h dung mụi gradient CHCl3-MeOH (t 50:1 n 1:1) thu c cỏc phõn on MSpE1 (1,5 g), MSpE2 (1,0 g), MSpE3 (1,8 g), MSpE4 (1,1 g) Phõn on MSpE3 c sc ký trờn ct pha o YMC RP-18 s dng h dung mụi MeOH-H2O-axeton 2:3:0,5 thu c hp cht (11,5 mg) di dng bt mu trng Phn dch nc sau chit tin hnh chy trờn ct nha trao i ion Dianion HP-20, thu c cỏc phõn on MSpW1 (1,8 g), MSpW2 (2,5 g), MSpW3 (5,9 g), MSpW4 (1,6 g) v MSpW5 (2,1g) T phõn on MSpW5, tinh ch bng ct sc ký silica gel h dung mụi CHCl3-MeOH-H2O (3:1:0,15), sau ú chy tip sc ký trờn ct pha o YMC RP-18 s dng h dung mụi MeOH-H2O 1:2 thu c hp cht (11,0 mg) di dng bt mu vng K33C Khoa Húa hc 28 Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th Mu lỏ khụ (1,8 kg) - Chit vi MeOH (3 ln) bng siờu õm - Ct loi dung mụi bng ỏp sut gim MSp - Cn chit MeOH (31 g) B sung nc B sung hexan Lớp nước n-Hexan: nước 1/1 Bổ sung EtOAc EtOAc: nước MSpH - Cn hexan Lớp nước (18,5 g) MSpE - Cn EtOAc (4,6 g) Silica gel CC CHCl3:MeOH (50:1 1:1) MSpE1 MSpE2 Dch nc sau chit (MSpW) MSpE3 MSpE4 RP-18 CC MeOH:H2O:axeton (2:3:0,5) Ct Dianion MeOH : H2O (0:100 100:0) Hp cht (11,5 mg) RP-18 CC MeOH:H2O (1:2) MSpW1 MSpW2 MSpW3 MSpW4 MSpW5 (1,8 g) (2,5 g) (5,9 g) (1,6 g) (2,1 g) Silica gel CC CHCl3:MeOH:H2O (3:1:0,15) Hp cht (11,0 mg) Hỡnh 2.1: S phõn lp hp cht (1) v (2) t dch chit nc ca lỏ cõy Chit cỏnh K33C Khoa Húa hc 29 Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th CHNG 3: KT QU THO LUN 3.1 Hng s vt lý v d kin ph ca cỏc hp cht 3.1.1 Hp cht Astilbin Bt mu trng, C21H22O11, M = 450, ESI MS: m/z 473 [M+Na]+, 449 [M-H]-, im núng chy: 179 180 0C, [] D25 + (50% Me2CO aq); H-NMR (500 MHz, CD3OD) : 4,58 (d, J = 10,5 Hz, H-2), 5,09 (d, J = 10,5 Hz, H-3), 5,94 (d, J = 2,0 Hz, H-6), 5,92 (d, J = 2,0 Hz, H-8), 6,87 (d, J = 2,0 Hz, H-2), 6,85 (d, J = 2,0 Hz, H-5), 6,97 (d, J = 3,0 Hz, H-6), 4,08 (br s, H1), 3,69 - 3,31 (m, H-2, H-3, H-4, H-5), 1,21 (d, J = 10,5 Hz, H-6); 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD) : 83,97 (C-2), 78,58 (C-3), 195,98 (C-3), 165,52 (C-4), 165,52 (C-5), 97,38 (C-6), 168,62 (C-7), 96,27 (C-8), 164,11 (C-9), 102,51 (C-10), 129,20 (C-1), 115,50 (C-2), 146,55 (C-3), 147,39 (C4), 116,38 (C-5), 120,49 (C-6), 102,16 (C-1), 72,19 (C-2), 71,79 (C-3), 73,82 (C-4), 70,52 (C-5), 17,84 (C-6) 3.1.2 Hp cht Myricitrin Bt mu vng vụ nh hỡnh, C21H20O12, M = 464, ESI MS: m/z 487 [M+Na]+, 463 [M-H]-, im núng chy: 194-197 oC, [] D 138,6 (c, 0,5 in MeOH), UV max: 257, 354 (MeOH); H-NMR (500MHz, CD3OD) : 6,23 (d, J = 2,0 Hz, H-6), 6,39 (d, J = 2,0 Hz, H-8), 6,97 (br s, H-2), 6,97 (br s, H-6), 5,34 (d, J = 1,5 Hz, H-1), 4,25 (dd, J = 3,0, 5,0 Hz, H-2), 3,82 (dd, J = 3,0, 12,5 Hz, H-3), 3,55 (dd, J = 6,0, 8,5 Hz, H-4), 3,38 (m, H-5), 0,99 (d, J = 6,0 Hz, H-6); 13 C-NMR (125 MHz, CD3OD) : 159,45 (C-2), 136,31 (C-3), 179,67 (C-4), 163,18 (C-5), 99,80 (C-6), 165,85 (C-7), 94,70 (C-8), 158,51 (C-9), 105,89 (C-10), 121,95 (C-1), 109,62 (C-2), 146,85 (C-3), 137,89 (C-4), 146,85 (C-5), 109,60 (C-6), 103,62 (C-1), 72,03 (C-2), 72,14 (C-3), 73,36 (C4), 71,88 (C-5), 17,65 (C-6) K33C Khoa Húa hc 30 Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th 3.2 Tho lun 3.2.1 Xỏc nh cu trỳc húa hc ca hp cht Astilbin Hp cht thu c di dng tinh th hỡnh kim mu trng Cỏc ph NMR ca hp cht ny cho thy õy l mt flavon-glycozit vi nhỏnh ng l Rhamnopyranosyl Hình 3.1.a Phổ 1H-NMR hợp chất Hỡnh 3.1.a Ph 1H-NMR ca hp cht Ph 1H-NMR ca xut hin cỏc tớn hiu ca proton vũng thm ú hai proton vũng thm A c xỏc nh v trớ meta vi H 5,92 (1H, d, J = 2,0 Hz) v 5,94 (1H, d, J = 2,0 Hz), hai proton vũng thm C cú dch chuyn H 4,58 (1H, d, J = 10,5 Hz) v 5,09 (1H, d, J = 10,5 Hz), ba proton cũn li c xỏc nh thuc vo mt vũng thm cú h tng tỏc ABX H 6,97 (1H, d, J = 3,0 Hz), 6,87 (1H, d, J = 2,0 Hz), 6,85 (1H, d, J = 2,0 Hz) S tn ti ca mt phõn t ng cng c xỏc nh bi s xut hin ca proton ca cacbon anome ti H 4,08 (1H, J = 1,5 Hz) v cỏc tớn hiu nm vựng H 3,69 - 3,31 (m) Nhỏnh phõn t ng c xỏc nh l O--LRhamnopyranoside bi hng s tng tỏc ca proton ca cacbon anome cng nh s xut hin ca ba proton ca nhúm CH3 (H 1,21, d, J = 6,5 Hz) (Hỡnh 3.1.a) K33C Khoa Húa hc 31 Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th Hình 3.1.b Phổ 13C-NMR hợp chất Trờn ph 13 C-NMR ca xut hin tớn hiu 21 cacbon Trong ú 15 cacbon thuc vo khung flavon v cacbon thuc vo khung ng Vic xỏc nh nhỏnh ng c ni vo C-3 c tin hnh bi s so sỏnh trc tip cỏc giỏ tr ph NMR ca vi ti liu tham kho [10] trờn Bng 3.2.1 Khụng cú s thay i mnh v dch chuyn hoỏ hc ca C, ton b cỏc giỏ tr cũn li hu nh khụng cú thay i gỡ ó chng t v trớ ca C l tng i tng t vi cu trỳc ti liu ó c cụng b [10] Cú th nhn dng c l Astilbin hay l (2R,3R)-taxifolin-3rhamnoside, hp cht ny khỏ ph bin thiờn nhiờn nhng li ln u tiờn phõn lp c t loi Mallotus glabriusculus Nh vy cụng thc phõn t ca phi l C21H22O11, vi s M = 450 Kt qu ny mt ln na c khng nh bi s xut hin pic m/z 473 [M+Na]+, m/z 449 [M-H]-, trờn ph ESI-MS ca (Hỡnh 3.1.c, 3.1.d) K33C Khoa Húa hc 32 Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th Hình 3.1.c Phổ ESI-MS positive Hình 3.1.d Phổ ESI-MS negative OH OH 3' HO 2' 1' O 6' 4' 5' 10 OH O O O 1" 5" CH3 2" OH OH 4" 3" OH Hình 3.1.e Cấu trúc hợp chất K33C Khoa Húa hc 33 Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th Bng 3.2.1 S liu ph cng hng t ht nhõn 1H- v 13C-NMR ca hp cht * Ca, b [10] C (ppm) Aglycone: 83,5 77,3 195,16 165,4 97,7 169,2 96,4 163,6 10 102,4 128,6 116,0 147,6 148,3 116,6 120,0 C b, d (ppm) * DEPT 83,97 78,58 195,98 165,52 97,38 168,62 96,27 164,11 102,51 129,20 115,50 146,55 147,39 116,38 120,49 CH CH C C CH CH CH C C C CH C C CH CH 3-O--L-rhamnopyranosyl: 102,3 102,16 CH 72,8 72,19 CH 72,0 71,79 CH 74,1 73,82 CH 70,8 70,52 CH 18,8 17,84 CH3 Ha, c (ppm, J, Hz) 5,41 (d, 10,5) 5,09 (d, 10,5) 4,58 (d, 10,5) 5,09 (d, 10,5) 6,42 (d, 2,1) 5,94 (d, 2,0) 6,30 (d, 2,1) 5,92 (d, 2,0) 7,11 (d, 2,1) 6,87 (d, 2,0) 7,58 (d, 82) 7,18 (dd, 8,2, 2,1) 6,85 (d, 2,0) 6,97 (d, 3,0) 4,97 (br s) 4,41 (m) 4,58 (m) 5,02 (m) 4,25 (m) 1,66 (d, 5,9) 4,08 (br s) 3,69 - 3,31 (m) 3,69 - 3,31 (m) 3,69 - 3,31 (m) 3,69 - 3,31 (m) 1,21 (d, 6,5) a đo Pyridin-d5, b125 MHz, c500 MHz, dđo CD3OD * Số liệu phổ theo tài liệu số [10] K33C Khoa Húa hc H c, d (ppm, J, Hz) 34 Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th 3.2.2 Xỏc nh cu trỳc húa hc ca hp cht Myricitrin Hp cht thu c di dng bt mu vng Ph 1H-NMR ca xut hin pic tớn hiu ca hai proton vũng thm b th bn v trớ ti H 6,23 (1H, d, J = 2,0 Hz) v 6,39 (1H, d, J = 2,5 Hz), mt vch tớn hiu chp ca hai proton i xng vũng thm b th bn v trớ ti H 6,97 (br s) Ngoi cũn xut hin tớn hiu ca mt cacbon anomer ti H 5,34 (d, J = 1,5 Hz) v cỏc tớn hiu c trng cho mt phn t ng ti H 4,25 (dd, J = 2,0, 5,0 Hz), 3,82 (dd, J = 3,0, 12,5 Hz), 3,55 (dd, J = 6,0, 8,5 Hz), 3,38 (m), 0,99 (d, J = 6,1 Hz) (Hỡnh 3.2.a) Hỡnh 3.2.a Ph 1H-NMR ca hp cht Ph 13C-NMR v DEPT ca xut hin tớn hiu ca 21 cacbon ú cú bn cacbon bc bn, mt nhúm xeton, tỏm nhúm metin gn vi nguyờn t ụxy, bn nhúm metin vũng thm, mt metin anomeric, mt nhúm metin gn vi mt nhúm metyl Phõn tớch cỏc tớn hiu trờn ph 13C-NMR cho thy cng mang khung cu trỳc flavon-glycozit vi s cú mt ca nhúm th hydroxyl K33C Khoa Húa hc 35 Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th Hỡnh 3.2.b Ph 13C-NMR ca hp cht Hỡnh 3.2.c Ph DEPT ca hp cht Xỏc nh v trớ ca cỏc nhúm th hydroxyl trờn khung flavon ó tin hnh o ph HSQC, HMBC K33C Khoa Húa hc 36 Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th Hỡnh 3.2.d Ph HMBC ca hp cht Cỏc tng tỏc xa thu nhn c trờn ph HMBC gia H-6 (H 6,23, d, J = 2,0 Hz) vi C-7 (C 165,84), C-8 (C 94,70), C-9 (C 158,51), C-10 (C 105,89); gia H-8 (H 6,39, d, J = 2,0 Hz) vi C-6 (C 99,80); H-2 v H-6 (cp tớn hiu chp ti H 6,97, br s) vi C-2 (C 159,45), C-1 (C 121,95), C3/C5 (C 146,85), C-4 (C 137,89) chng minh ba nhúm th trờn vũng C nm cỏc v trớ para v octo ca vũng benzen Trong ú, gc ng c gn vi v trớ C-3 ca khung flavon thụng qua phõn tớch tng tỏc quan sỏt c gia proton anomer H-1 (H 5,34, d, J = 1,5 Hz) v C-3 (C 136,31) Ph lng phun mự in t ESI-MS ca xut hin pớc cú cng cao ti m/z 463 [M-H]- ch negative Ph ESI-MS by v bn mnh m/z 463 negative cho phõn mnh cú cng cao m/z 316 [M-H-146]- gi ý cho s mt mt phõn t ng rhamnose tng ng vi cụng thc d oỏn l C21H20O12 (M = 464) K33C Khoa Húa hc 37 Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th Hỡnh 3.2.e Ph ESI-MS negative ca Cựng vi cỏc phõn tớch trờn ph cng hng t ht nhõn NMR, ph lng ESI-MS v so sỏnh vi cỏc ti liu thu thp c [11], hp cht c xỏc nh l myricitrin mt flavonoid ó c phõn lp t mt s loi thc vt khỏc (Hỡnh 3.2.f ) OH 3' HO 1' O 10 OH 5' OH 6' O O O OH 4' 2' 5" 6" CH3 1" 2" OH OH 4" 3" OH Hỡnh 3.2.f Cu trỳc hoỏ hc ca hp cht K33C Khoa Húa hc 38 Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th Bng 3.2.2 S liu ph cng hng t ht nhõn 1H- v 13C-NMR, HMBC ca hp cht * Ca, b C [11] (ppm) Aglycone: Ca, c (ppm) DEPT Ha, d (ppm) HMBC 159,5 136,4 159,45 136,31 C C 179,7 179,67 C 163,3 99,8 163,18 99,80 C CH 6,23 (d, 2,0) C-7, 8, 9, 10 165,9 94,7 165,84 94,70 C CH 6,39 (d, 2,0) C-6, 10 10 158,6 105,9 158,51 105,89 C C 122,0 109,6 121,95 109,62 C CH 146,9 137,9 146,85 137,89 C C 146,9 146,85 C 109,6 109,60 3-O--L-rhamnopyranosyl: 103,7 103,62 6,97 (br s) C-2, 3, CH 6,97 (br s) C-1, 4, CH 5,34 (d, 1,5) 72,1 72,2 72,03 72,14 CH CH 4,25 (dd, 3,0, 5,0) 3,82 (dd, 3,0, 12,5) 73,2 71,9 73,36 71,88 CH CH 3,55 (dd, 6,0, 8,5) 3,38 (m) 17,8 17,65 CH3 0,99 (d, 6,0) C-3 C-5 a o CD3OD, b100 MHz, c125 MHz, d500 MHz, * S liu ph theo ti liu s [11] K33C Khoa Húa hc 39 Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th KT LUN Thc hin khúa lun tt nghip vi ti: Nghiờn cu hoỏ hc dch chit nc cõy Chit cỏnh Mallotus glabriusculus bng cỏc phng phỏp chit v sc ký kt hp nh sc kớ ct nhi silica gel pha thng, sc kớ ct nhi silica gel pha o, sc kớ lp mng iu ch, em ó phõn lp c hp cht flavonoid t dch chit nc ca cõy Mallotus glabriusculus Cỏc hp cht ú l: Hp cht (1): 3,3',4',5,7-Pentahydroxyflavanone 3-O--LRhamnopyranoside (Astilbin) Hp cht (2): 3,3',4',5,5',7-Hexahydroxyflavone 3-O--Lrhamnopyranoside (Myricitrin) Cu trỳc ca cỏc hp cht ny c xỏc nh nh vo cỏc phng phỏp ph hin i nh ph cng hng t ht nhõn mt chiu (1H-NMR, 13C-NMR, DEPT 135 v DEPT 90), hai chiu (HSQC, HMBC), Ph lng phun mự in t (ESI) K33C Khoa Húa hc 40 Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th Bng 1: Bng tng hp hai hp cht flavonoid ó phõn lp c t dch chit nc Hp cht (1): Astilbin C21H22O11(M = 450) ESI MS: m/z 473 [M+Na]+; 449 [M-H]OH OH 3' 4' 2' HO 1' O 6' 5' 10 O OH O OH 5" O CH3 1" 2" 4" 3" OH OH Hp cht (2): Myricitrin C21H20O12 (M = 464) ESI MS: m/z 487 [M+Na]+; 463 [M-H]OH 3' HO 1' O 10 OH 5' O 5" 6" CH3 1" 2" OH K33C Khoa Húa hc OH 6' O O OH 4' 2' OH 4" 3" OH 41 Trng i hc S phm H Ni Khúa lun tt nghip Hong Th Anh Th TI LIU THAM KHO Ti liu Ting Vit Phm Hong H, (2003), Cõy c Vit Nam, Nh xut bn Tr, II, trang 251 Vừ Vn Chi, (1999), T in Cõy thuc Vit Nam, Nh xut bn Y hc H Ni, trang 186-231 Chõu Vn Minh, Phan Vn Kim, Ló ỡnh Mi, Phm Quc Long, Nguyn Th Kim Thanh, Nguyn Xuõn Cng, Nguyn Hoi Nam, Chi MallotusHoỏ hc, hot tớnh sinh hc v sc ký Fingerprint ,Nh xut bn Khoa hc t nhiờn v Cụng ngh, trang 141- 155, (2009) Ti liu Ting Anh Agrawal P K., (1989), Carbon - 13 NMR of flavonoids Harborn J B., (1994), The flavonoids advance in research since 1986, Chapman & Hall Mabry F.J., Markman R.B., Thomas M.B., (1970), The sysrematic identification of flavonoids, Springer Verlag Berlin Heidelberg NewYork Ternai B., Markham K R., (1976), C13 - NMR of flavonoids -I- Flavones and flavonols, Tetrehedron, Vol 32, 565 Sachiko Tsukamoto, Kyoko Tomise, Maki Aburatani, Hiroyuki Onuki, Hiroshi Hirorta, Eiji Ishiarajima and Tomihisa Ohta, Isolation of Cytochrome P450 Inhibitors form Strawberry Fruit, Fragaria ananassa, J Nat Prod, 2004, 67, 1839-1841 Hy e Young Kim, Byung Ho Moon, Hak Ju Lee, Don Ha Choi, Flavonol glycosides from the leaves of Eucommia ulmoides, with glycation inhibitory activity, Phytochemistry, 2004, 93, 227230 10 Kim, H J., Woo, E R., Park, H., A novel lignan and flavoids from Polygonum aviculare, JNP, Vol 57 (5), 581-586, (1994) 11 Xi-Ning, Z., Hideaki, O., Toshinori, I., Eiji, H., Anki, T.,Yoshio, T., Three flavonol glycosides from leaves of Myrsine seguinii., Phytochemistry, Vol 46 (5), 943-946, (1997) K33C Khoa Húa hc 42 Trng i hc S phm H Ni [...]...Khóa luận tốt nghiệp Hoàng Thị Anh Thư Xuất phát từ ý nghĩa thực tiễn trên nên tôi đã chọn đề tài cho khoá luận tốt nghiệp là : Nghiên cứu hoá học dịch chiết nước cây Chiết cánh Mallotus glabriusculus” Luận văn này tập trung nghiên cứu thành phần hoá học từ lá cây Chiết cánh bao gồm những nội dung chính là: 1 Thu mẫu lá cây Chiết cánh (Mallotus glabriusculus), xử lý mẫu và tạo dịch chiết nước. .. lập một số hợp chất Flavonoid từ cây Chiết cánh 3 Xác định cấu trúc hóa học của các hợp chất đã phân lập được K33C – Khoa Hóa học 3 Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2 Khóa luận tốt nghiệp Hoàng Thị Anh Thư CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan về cây Chiết cánh 1.1.1 Thực vật học Tên khoa học: Mallotus glabriusculus Tên tiếng việt : Chiết cánh Tên khác : ba bét nhẵn, kiết cánh, ruối không lông, nhung diện... Sau khi chiết dung môi được cất ra bằng máy cất quay ở nhiệt độ không quá 30-400C, với một vài hoá chất chịu nhiệt có thể thực hiện ở nhiệt độ cao hơn 1.3.2 Quá trình chiết Hầu hết quá trình chiết đơn giản được phân loại như sau: - Chiết ngâm - Chiết sử dụng một loại thiết bị là bình chiết Xoclet - Chiết sắc với dung môi nước - Chiết lôi cuốn theo hơi nước K33C – Khoa Hóa học 15 Trường Đại học Sư phạm... kiến K33C – Khoa Hóa học 24 Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2 Khóa luận tốt nghiệp Hoàng Thị Anh Thư CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Mẫu thực vật Cây Chiết cánh (Mallotus glabriusculus (Kurz) Pax et Hoffm thuộc họ Thầu dầu - Euphorbiaceae) được thu hái vào tháng 01 năm 2011 tại Tam Đảo, Vĩnh Phúc Mẫu cây được giám định tại Viện Sinh thái và Tài nguyên sinh vật, Viện Khoa học và Công nghệ... 2010 ở nhiệt độ 40-50oC trong vòng 30 phút Dịch chiết sau đó được cô đặc bằng máy cất quay với áp suất giảm để thu được 31 g cặn chiết MeOH Cặn MeOH được hòa vào nước và phân lớp K33C – Khoa Hóa học 27 Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2 Khóa luận tốt nghiệp Hoàng Thị Anh Thư lần lượt với Hexan và EtOAc để thu được các dịch cô Hexan (18,5 g) và EtOAc (4,6 g) Cặn chiết EtOAc (4,6 g) được tiến hành sắc ký... đây, máy chiết ngâm đòi hỏi phải làm bằng kim loại nhưng hiện nay có thể dùng bình thuỷ tinh Thông thường quá trình chiết ngâm không được sử dụng như phương pháp chiết liên tục bởi mẫu được ngâm với dung môi trong máy chiết khoảng 24 giờ rồi chất chiết được lấy ra Thông thường quá trình chiết một mẫu chỉ thực hiện qua 3 lần dung môi vì khi đó cặn chiết sẽ không còn chứa những K33C – Khoa Hóa học 16 Trường... K33C – Khoa Hóa học 11 Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2 Khóa luận tốt nghiệp Hoàng Thị Anh Thư 1.2.2.9 Isoflavonoid Isoflavonoid bao gồm các dẫn xuất của 3- phenyl chroman, được chia thành các nhóm nhỏ như sau: O O Hình 3- 1.17: phenyl3-phenyl chroman chroman O RO O OR O Iso flavon Hình 1.18: Isoflavon K33C – Khoa Hóa học O Iso flavanon Hình 1.19: Isoflavanon 12 Trường Đại học Sư phạm Hà Nội 2 Khóa luận... hoặc bis-2-etylhexyl-phtalat] Chất này sẽ làm sai lệch kết quả phân lập trong các quá trình nghiên cứu hoá thực vật, thể hiện hoạt tính trong thử nghiệm sinh học và có thể làm bẩn dịch chiết của cây Chlorofrom, metyl clorit và methanol là những dung môi thường được lựa chọn trong quá trình chiết sơ bộ một phần của cây như: Rễ, thân, lá, hoa, củ, quả… Những tạp chất của chlorofom như CH2ClBr, CH2Cl2 có... 1.1.4 Thành phần hoá học Thành phần hoá học của loài Mallotus glabriusculus đang được các nhà khoa học tập trung nghiên cứu và đã tìm thấy một số hợp chất flavonoid trong loài này Tuy nhiên hiện nay chưa có công trình chính thức nào được công bố 1.2 Lớp chất Flavonoid, thành phần hóa học có trong cây Chiết cánh 1.2.1 Giới thiệu chung [6, 7, 8, 9] Flavonoid là một trong những nhóm hợp chất phân bố rộng... hiệu quả cao hơn Trước đây, máy chiết ngâm đòi hỏi phải làm bằng kim loại nhưng hiện nay có thể dùng bình thuỷ tinh Thông thường quá trình chiết ngâm không được sử dụng như phương pháp chiết liên tục bởi mẫu được ngâm với dung môi trong máy chiết khoảng 24 giờ rồi chất chiết được lấy ra Thông thường quá trình chiết một mẫu chỉ thực hiện qua 3 lần dung môi vì khi đó cặn chiết sẽ không còn chứa những chất ... Chiết cánh Mallotus glabriusculus” Luận văn tập trung nghiên cứu thành phần hoá học từ Chiết cánh bao gồm nội dung là: Thu mẫu Chiết cánh (Mallotus glabriusculus), xử lý mẫu tạo dịch chiết nước. .. K33C – Khoa Hóa học 39 Trường Đại học Sư phạm Hà Nội Khóa luận tốt nghiệp Hoàng Thị Anh Thư KẾT LUẬN Thực khóa luận tốt nghiệp với Đề tài: Nghiên cứu hoá học dịch chiết nước Chiết cánh Mallotus... hết trình chiết đơn giản phân loại sau: - Chiết ngâm - Chiết sử dụng loại thiết bị bình chiết Xoclet - Chiết sắc với dung môi nước - Chiết lôi theo nước K33C – Khoa Hóa học 15 Trường Đại học Sư