phân lập và tuyển chọn vi khuẩn acid acetic chịu nhiệt từ ca cao

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ VIỆN NGHIÊN CỨU VÀ PHÁT TRIỂN CÔNG NGHỆ SINH HỌC LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP CHUYÊN NGÀNH VI SINH VẬT HỌC PHÂN LẬP VÀ TUYỂN CHỌN VI KHUẨN ACID ACETIC CHỊU NHIỆT TỪ CA CAO CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN ThS HUỲNH XUÂN PHONG HUỲNH THỊ HOÀNG ANH MSSV: 3113697 LỚP: VI SINH VẬT HỌC K37 Cần Thơ, Tháng 12/2014 PHẦN KÝ DUYỆT CÁN BỘ HƯỚNG DẪN SINH VIÊN THỰC HIỆN ThS HUỲNH XUÂN PHONG HUỲNH THỊ HOÀNG ANH XÉT DUYỆT CỦA HỘI ĐỒNG BẢO VỆ LUẬN VĂN Cần Thơ, ngày tháng 12 năm 2014 CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 37- 2014 Trường Đại Học Cần Thơ LỜI CẢM TẠ Để hoàn thành luận văn tốt nghiệp đại học này, cố gắng thân tôi, có đóng góp quan trọng nhiều người Tôi xin gửi lời biết ơn sâu sắc đến: Cô Ngô Thị Phương Dung thầy Huỳnh Xuân Phong tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện tốt để hoàn thành luận văn Xin gửi lời cảm ơn chân thành đến thầy Phạm Hồng Quang – cố vấn học tập, người bảo giúp đỡ suốt thời gian học đại học Tôi xin chân thành cảm ơn anh Nguyễn Ngọc Thạnh anh Bùi Hoàng Đăng Long - cán bộ phòng thí nghiệm CNSH Thực phẩm, quý Thầy Cô anh chị cán bộ phòng thí nghiệm Viện NC&PT CNSH hỗ trợ, đóng góp ý kiến tạo điều kiện thuận lợi để thực tốt đề tài luận văn Xin được gửi lời cám ơn chân thành đến tất quý Thầy Cô tận tình truyền dạy cho kiến thức hữu ích để phục vụ đề tài Xin chân thành cảm ơn anh chị học viên cao học, bạn sinh viên phòng thí nghiệm CNSH Thực phẩm nhiệt tình giúp đỡ trình thực đề tài Cuối xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến gia đình người thân động viên, khích lệ ủng hộ mặt vật chất cũng tinh thần suốt thời gian qua để vững tin thực đề tài Tôi xin kính chúc đến quý Thầy Cô bạn sinh viên dồi sức khỏe, công tác tốt Huỳnh Thị Hoàng Anh Chuyên ngành Vi Sinh vật học i Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 37- 2014 Trường Đại Học Cần Thơ TÓM TẮT Acid acetic ứng dụng rộng rãi nhiều ngành công nghiệp, acid acetic acid hữu sử dụng phổ biến điều vị chế biến thực phẩm Vi khuẩn acid acetic có ý nghĩa quan trọng trình lên men, lên men giấm sử dụng rộng rãi Đề tài phân lập 30 chủng vi khuẩn acid acetic (AAB) từ 14 mẫu thành phần khác ca cao thu thập Cần Thơ Bến Tre Phân loại thông qua khả oxy hóa acetate cho thấy có 17 chủng thuộc giống Acetobacter 13 chủng thuộc giống Gluconobacter Thử nghiệm khả sinh acid môi trường có 0,01% bromocresol green sơ tuyển 17 chủng AAB (CL1, CL2, CF1, CF2, CV1, C3-1, C3-3, C4-2, C6-1, C6-2, CK2, B2-2, B2-3, B3-2, B4-1, BK1 BK3) có đường kính vòng sáng từ 20 mm trở lên 48 ủ 30 oC Kết thử khả phát triển nồng độ acid khác cho thấy hai chủng B23 B3-2 phát triển 3% acid aceric; B2-2 phát triển 1,5% acid acetic; chủng CL1, CF2, C4-2, C6-1 BK1 phát triển 1% acid acetic; chủng lại phát triển 0,5% acid acetic Kết thử nghiệm khả chịu nhiệt môi trường YPGD chứa 4% ethanol cho thấy đa số (10 chủng) chủng phát triển 45oC; số chủng (CL2, CF2 CK2) phát triển 43oC; chủng B2-3, B3-2 B4-1 phát triển 41oC; chủng B2-2 phát triển 39oC Tuyển chọn chủng AAB chịu nhiệt có khả lên men acid acetic B2-3 B3-2 với nồng độ acid acetic đạt ngày lên men thứ 4,44% 5,08% 39oC chủng lại lên men 30oC Từ khóa: acid acetic, chịu acid, chịu nhiệt, lên men acid acetic, vi khuẩn acetic Chuyên ngành Vi Sinh vật học ii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 37- 2014 Trường Đại Học Cần Thơ MỤC LỤC PHẦN KÝ DUYỆT LỜI CẢM TẠ i TÓM TẮT ii MỤC LỤC .iii DANH SÁCH BẢNG v DANH SÁCH HÌNH vi DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT vii CHƯƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu đề tài CHƯƠNG LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2.1 Sơ lược ca cao 2.1.1 Cây ca cao 2.1.2 Các giống ca cao giới 2.1.3 Công dụng ca cao 2.1.4 Sơ lược quy trình lên men ca cao 2.1.5 Một số vi sinh vật có hạt ca cao lên men 2.2 Giới thiệu acid acetic 11 2.2.1 Giới thiệu chung 11 2.2.2 Phương pháp sản xuất 11 2.2.3 Ứng dụng 12 2.3 Tổng quan trình lên men vi sinh vật 14 2.3.1 Bản chất trình lên men 14 2.3.2 Quá trình lên men acid acetic 15 2.3.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến trình lên men 15 2.4 Vi khuẩn acid acetic 16 2.4.1 Giới thiệu vi khuẩn acid acetic 16 2.4.2 Phân loại 17 2.4.3 Vai trò quan trọng vi khuẩn acid acetic 19 CHƯƠNG 3: PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP 21 3.1 Phương tiện nghiên cứu 21 Chuyên ngành Vi Sinh vật học iii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 37- 2014 Trường Đại Học Cần Thơ 3.1.1 Thời gian địa điểm 21 3.1.2 Nguyên liệu 21 3.1.3 Thiết bị - dụng cụ hóa chất 21 3.2 Phương pháp nghiên cứu 22 3.2.1 Phân lập chủng vi khuẩn acid acetic 22 3.2.2 Xác định hình thái, sinh lý, sinh hóa chủng vi khuẩn acid acetic 22 3.2.3 Sơ tuyển chủng vi khuẩn có khả sinh acid acetic 23 3.2.4 Khảo sát khả phát triển nồng độ acid acetic khác 23 3.2.5 Khảo sát khả chịu nhiệt vi khuẩn acid acetic 23 3.2.6 Tuyển chọn chủng vi khuẩn acid acetic chịu nhiệt có khả sinh acid mạnh .24 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 4.1 Kết phân lập chủng vi khuẩn acid acetic 25 4.2 Xác định hình thái, sinh lý, sinh hóa chủng vi khuẩn acid acetic 26 4.3 Thử nghiệm khả sinh acid acetic 30 4.4 Khảo sát khả phát triển nồng độ acid acetic khác 33 4.5 Khảo sát khả chịu nhiệt vi khuẩn acid acetic 35 4.6 Tuyển chọn chủng vi khuẩn acid acetic chịu nhiệt có khả sinh acid mạnh 37 CHƯƠNG 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 44 5.1 Kết luận 44 5.2 Đề nghị 44 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 PHỤ LỤC PL1 Chuyên ngành Vi Sinh vật học iv Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 37- 2014 Trường Đại Học Cần Thơ DANH SÁCH BẢNG Bảng Sản lượng hạt ca cao giới (nghìn tấn) Bảng Những đặc tính khác giữa giống Criollo, Forastero Trinitario Bảng Sự thay đổi thành phần hạt Forastero sau trình ủ phơi Bảng Nguồn nguyên liệu địa điểm thu mẫu 21 Bảng Số lượng chủng vi khuẩn acid acetic phân lập từ ca cao 26 Bảng Kết định danh sơ bộ chủng AAB 29 Bảng Đường kính vòng sáng chủng AAB 31 Bảng Đặc điểm 17 chủng AAB được tuyển chọn 32 Bảng Kết thử nghiệm khả phát triển nồng độ acid acetic khác 17 chủng AAB 34 Bảng 10 Kết thử nghiệm khả chịu nhiệt 17 chủng AAB .36 Bảng PL1 Kết thống kê hàm lượng acid acetic (% w/v) lên men 30oC PL5 Bảng PL2 Kết thống kê hàm lượng acid acetic (% w/v) lên men 37oC PL9 Bảng PL3 Kết thống kê hàm lượng acid acetic (% w/v) lên men 38oC PL14 Bảng PL4 Kết thống kê hàm lượng acid acetic (% w/v) lên men 39oC PL18 Bảng PL5 Mô tả khuẩn lạc hình dạng vi khuẩn chủng AAB PL22 Bảng PL6 Bảng thống kê số liệu hàm lượng acid chủng AAB ngày 30oC, 37oC, 38oC, 39oC PL23 Bảng PL7 Bảng thống kê số liệu phát triển (OD 550nm)của chủng AAB ngày 30oC, 37oC, 38oC, 39oC PL24 Chuyên ngành Vi Sinh vật học v Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 37- 2014 Trường Đại Học Cần Thơ DANH SÁCH HÌNH Hình Cây ca cao .3 Hình Cấu trúc hóa học acid acetic 11 Hình Vi khuẩn Acetobacter pasteurianus 18 Hình Vi khuẩn Acetobacter aceti 18 Hình Vi khuẩn Acetobacter xylinum 19 Hình Khuẩn lạc tạo vòng halo môi trường (a), môi trường đối chứng có CaCO3 (b) CaCO3 (c) 25 Hình Một số chủng AAB tạo vòng sáng halo môi trường 25 Hình Hình dạng vi khuẩn hình nhuộm Gram kính hiển vi 27 độ phóng đại 100X một số chủng AAB 27 Hình 9: Sự biến đổi màu môi trường thị sau 48 Màu vàng (a) Gluconobacter, màu xanh lục (b) Acetobacter, màu xanh lam (c) môi trường đối chứng .27 Hình 10 Sự biến đổi màu thị một số vòng AAB 24 (a) 30 môi tường đối chứng (b) 30 Hình 11 Thử khả phát triển chủng AAB nồng độ acid acetic khác nhau: 0,5%; 1,0%; 1,5%; 2,0%; 2,5% 3,0% .33 Hình 12 Thử khả chịu nhiệt chủng AAB 30oC, 37oC, 39oC, 41oC, 43oC 45oC 35 Hình 13 Hàm lượng acid chủng AAB 30oC 37 Hình 14 Sự phát triển chủng AAB 30oC 37 Hình 15 Hàm lượng acid chủng AAB 37oC 38 Hình 16 Sự phát triển chủng AAB 37oC 39 Hình 17 Hàm lượng acid chủng AAB 38oC 40 Hình 18 Sự phát triển chủng AAB 38oC 41 Hình 19 Hàm lượng acid chủng AAB 39oC 41 Hình 20 Sự phát triển chủng AAB 39oC 42 Chuyên ngành Vi Sinh vật học vi Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 37- 2014 Trường Đại Học Cần Thơ DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT AAB Vi khuẩn acid acetic v/v Thể tích/Thể tích w/v Khối lượng/Thể tích EEA Etylen glycol monoetyl eter acetate EBA Etylen glycol mono-butyl eter acetate PMA Propylen glycol mono-metyl eter acetate TPA Acid terephthalic PET Polyetylen terephthalate ADH Alcohol dehydrogenase ALDH Aldehyde-dehydrogenase NADP Nicotinamide adenine dinucleotide phosphate YPGD môi trường gồm Yeast extract, Pepton, Glycerol, D-glucose PL Phụ lục Chuyên ngành Vi Sinh vật học vii Viện NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 37- 2014 Trường Đại Học Cần Thơ CHƯƠNG GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề Hiện nay, acid hữu không ứng dụng công nghệ thực phẩm mà ứng dụng nhiều công nghiệp như: công nghiệp tổng hợp hữu cơ, công nghiệp thực phẩm, công nghiệp chế biến mủ cao su,… nên nhu cầu sử dụng ngày tăng, đặc biệt acid acetic Acid acetic được dùng nhiều sản xuất sản phẩm như: giấm, L-sorbose, dihydroxyacetone, D-gluconate, keto-D-gluconate (Matsushita, 2009),… Ở nước ta việc sản xuất acid acetic chủ yếu phương pháp truyền thống với quy mô nhỏ phục vụ cho công nghiệp thực phẩm Với quy mô đáp ứng được nhu cầu sử dụng acid acetic ngày tăng nước ta ngành công nghiệp, công nghiệp chế biến mủ cao su Lên men giấm (vinegar) hay lên men acid acetic được biết đến từ nhiều kỷ trước trình lên men tự nhiên từ dung dịch có chứa ethanol Các vi khuẩn lên men giấm được phát Acetobacter aceti (Beijerinck năm 1898) Gluconobacter suboxydans (Kluyver de Leeuw năm 1924) (Saeki et al., 1997) Acid acetic dùng trực tiếp bữa ăn gọi giấm ăn Do thành phần chủ yếu giấm acid acetic nên có khả diệt khuẩn cao, chứa một số acid hữu khác acid lactic, acid malic, acid citric,… nên phòng trị hiệu một số bệnh viêm gan, xơ gan, bệnh đường hô hấp, đường ruột, giúp tiêu hóa tốt,… Giấm không giúp làm ăn thêm ngon mà giữ thành phần dinh dưỡng thực phẩm được giữ nguyên vẹn, ra, giấm có tác dụng tăng tính đàn hồi, làm chậm trình lão hóa, Mới đây, nhà khoa học Venezuela phát thấy acid acetic có khả chống lại vi trùng lao vi khẩn kháng thuốc khác (baomoi.com, 02/03/2014) Giấm được dùng để sản xuất chất màu, chất thơm, dung môi hữu cơ, tổng hợp chất dẻo,… (Lương Đức Phẩm, 1998) Có nhiều loại giấm được sản xuất giới tùy thuộc vào loại nguyên liệu, công nghệ mục đích sử dụng Acid acetic được sản xuất theo hai phương pháp: phương pháp sinh học (chiếm khoảng 10% sản lượng giới) phương pháp tổng hợp (chiếm khoảng 75%) Ngày nay, việc sản xuất acid acetic phương pháp sinh học được trọng Chủ yếu phương pháp lên men Các sản phẩm lên men acid acetic Chuyên ngành Vi Sinh vật học Viện NC&PT Công nghệ Sinh học ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0,3546 0,0506571 4,97 0,0038 Within groups 0,1632 16 0,0102 Total (Corr.) 0,5178 23 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups C4-2 0,28 X CF2 0,28 X BK1 0,4 XX B2-2 0,44 XX C6-1 0,52 XX B2-3 0,52 XX B3-2 0,56 XX CL1 0,64 X SD= 0,150043 CV= 32,9766% PL10 Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0,4986 0,0712286 14,84 0,0000 Within groups 0,0768 16 0,0048 Total (Corr.) 0,5754 23 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups CF2 0,44 X BK1 0,48 XX C6-1 0,56 XX C4-2 0,64 XX CL1 0,68 XX B2-2 0,76 XX B3-2 0,84 X B2-3 0,84 X SD= 0,158169 CV= 24, 1479% Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 9,3864 1,34091 74,50 0,0000 Within groups 0,288 16 0,018 Total (Corr.) 9,6744 23 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups CF2 0,52 X BK1 0,56 X C4-2 0,68 XX CL1 0,8 X C6-1 1,68 X B2-2 1,8 X B2-3 1,84 X B3-2 2,12 X SD= 0,648557 CV= 51,8846% Ngày PL11 ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 44,2074 6,31534 219,28 0,0000 Within groups 0,4608 16 0,0288 Total (Corr.) 44,6682 23 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups BK1 0,48 X CF2 0,6 XX C4-2 0,8 X CL1 0,88 X C6-1 2,92 X B2-2 3,04 X B2-3 3,52 X B3-2 3,88 X SD= 1,39369 CV= 69, 1608% PL12 Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 80,4168 11,4881 19,17 0,0000 Within groups 9,5904 16 0,5994 Total (Corr.) 90,0072 23 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups BK1 0,48 X CF2 0,68 X CL1 0,84 X C4-2 0,92 X C6-1 4,08 X B2-3 4,28 X B3-2 4,44 X B2-2 4,68 X SD= 1,97822 CV= 77,5773% Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 82,2954 11,7565 60,29 0,0000 Within groups 3,12 16 0,195 Total (Corr.) 85,4154 23 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups BK1 0,4 X CF2 0,6 X CL1 0,84 X C4-2 0,96 X C6-1 3,4 X B2-2 3,68 X B2-3 4,08 X B3-2 5,6 X SD= 1,9271 CV= 78,818% PL13 Bảng PL3 Kết thống kê hàm lượng acid acetic (% w/v) lên men 38oC Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square Between groups 0,0432 0,0144 Within groups 0,0 0,0 Total (Corr.) 0,0432 11 F-Ratio P-Value Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups B2-3 0,0 X C6-1 0,0 X B3-2 0,12 X B2-2 0,12 X SD= 0,062668 CV= 97,447% Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0,2688 0,0896 1,08 0,4102 Within groups 0,6624 0,0828 Total (Corr.) 0,9312 11 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups C6-1 0,64 X B2-2 0,72 X B2-3 0,8 X B3-2 1,04 X SD= 0,290955 CV= 36, 3693% PL14 Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1,8288 0,6096 23,09 0,0003 Within groups 0,2112 0,0264 Total (Corr.) 2,04 11 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups B2-2 0,88 X C6-1 0,96 X B3-2 1,56 X B2-3 1,8 X SD= 0,430644 CV= 33,1265% Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 5,3604 1,7868 78,37 0,0000 Within groups 0,1824 0,0228 Total (Corr.) 5,5428 11 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups C6-1 1,32 X B2-2 1,72 X B2-3 2,04 X B3-2 3,12 X SD= 0,709843 CV= 34,627% PL15 Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 23,9904 7,9968 78,40 0,0000 Within groups 0,816 0,102 Total (Corr.) 24,8064 11 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups C6-1 1,56 X B2-2 1,76 X B2-3 3,48 X B3-2 5,04 X SD= 1,50171 CV= 50,7334% Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 21,7764 7,2588 10,88 0,0034 Within groups 5,3376 0,6672 Total (Corr.) 27,114 11 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups C6-1 2,24 X B2-2 2,32 X B2-3 4,64 X B3-2 5,24 X SD= 1,57 CV= 43,4904% PL16 Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio Between groups 25,296 8,432 13,62 Within groups 4,9536 0,6192 Total (Corr.) 30,2496 11 P-Value 0,0016 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups C6-1 3,24 X B2-2 3,92 X B3-2 6,16 X B2-3 6,68 X SD= 1,6583 CV= 33,166% Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 7,7412 2,5804 13,96 0,0015 Within groups 1,4784 0,1848 Total (Corr.) 9,2196 11 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups C6-1 3,16 X B2-2 3,92 XX B2-3 4,48 X B3-2 5,36 X SD= 0,915503 CV= 21,6431% PL17 Bảng PL4 Kết thống kê hàm lượng acid acetic (% w/v) lên men 39oC Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0,0288 0,0096 8,00 0,0086 Within groups 0,0096 0,0012 Total (Corr.) 0,0384 11 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups C6-1 0,0 X B2-3 0,08 X B3-2 0,12 X B2-2 0,12 X SD= 0,0590839 CV= 73,8549% Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 0,936 0,312 9,29 0,0055 Within groups 0,2688 0,0336 Total (Corr.) 1,2048 11 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups C6-1 0,12 X B2-2 0,6 X B2-3 0,76 X B3-2 0,84 X SD= 0,330949 CV= 57,0602% PL18 Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 4,2 1,4 106,06 0,0000 Within groups 0,1056 0,0132 Total (Corr.) 4,3056 11 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups C6-1 0,16 X B2-2 0,8 X B3-2 1,44 X B2-3 1,68 X SD= 0,625634 CV= 61, 3367% Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 9,3792 3,1264 372,19 0,0000 Within groups 0,0672 0,0084 Total (Corr.) 9,4464 11 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups C6-1 ,56 X B2-2 1,64 X B2-3 1,96 X B3-2 3,04 X SD= 0,926695 CV= 51,4831% PL19 Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 30,2064 10,0688 88,32 0,0000 Within groups 0,912 0,114 Total (Corr.) 31,1184 11 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups C6-1 0,8 X B2-2 1,68 X B2-3 3,4 X B3-2 4,92 X SD= 1,68195 CV= 62,2943% Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 33,0288 11,0096 12,10 0,0024 Within groups 7,2768 0,9096 Total (Corr.) 40,3056 11 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups C6-1 0,96 X B2-2 2,24 X B2-3 4,44 X B3-2 5,08 X SD= 1,9142và CV= 60,1948% PL20 Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 55,2708 18,4236 51,52 0,0000 Within groups 2,8608 0,3576 Total (Corr.) 58,1316 11 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups C6-1 0,96 X B2-2 3,84 X B3-2 5,76 X B2-3 6,52 X SD= 2,29885 CV= 53,8371% Ngày ANOVA Table for Ham luong acid by Dong VK Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 33,3552 11,1184 115,82 0,0000 Within groups 0,768 0,096 Total (Corr.) 34,1232 11 Multiple Range Tests for Ham luong acid by Dong VK Method: 95,0 percent LSD Dong VK Count Mean Homogeneous Groups C6-1 0,84 X B2-2 3,8 X B2-3 4,4 X B3-2 5,28 X SD= 1,76128 CV= 49,1978% PL21 PHỤ LỤC KẾT QUẢ CÁC THÍ NGHIỆM Bảng PL5 Mô tả khuẩn lạc hình dạng vi khuẩn chủng AAB STT Chủng AAB Hình dạng vi khuẩn Mô tả khuẩn lạc CV2 Cầu Tròn, gò, nguyên, trắng đục (1,2-1,7mm) C3-2 Que ngắn, kết đôi Không đều, gò, cưa, vàng nhạt (0,6-0,8mm) C4-1 Que Tròn, gò, nguyên, trắng đục (1,3-1,4mm) CK1 Que ngắn Tròn, mô, nguyên, trắng đục (1-1,2mm) CK3 Que ngắn, kết chuỗi Tròn, gò, gợn sóng, trắng đục (1,2-1,4mm) BL1 Cầu, kết chuỗi Tròn, gò, nguyên, trắng đục (1,1-1,4mm) BF1 Que ngắn Tròn, gò, chia thùy, trắng đục(1,6-1,8mm) B1 Que Tròn, mô, cưa, vàng nhạt (1,1-1,4mm) B2-1 Que ngắn Tròn, mô, nguyên, trắng đục (0,2-0,5mm) 10 B3-1 Que ngắn, kết đôi Tròn, mô, nguyên, vàng sậm (0,3-0,6mm) 11 B4-2 Cầu Tròn, mô, nguyên, vàng sậm (0,8-1mm) 12 B4-3 Que Tròn, gò, cưa, vàng sậm (1,5-1,8mm) 13 BK2 Cầu Tròn, mô, nguyên, trắng đục (0,3-0,4 mm) PL22 Bảng PL6 Bảng thống kê số liệu hàm lượng acid (% w/v) chủng AAB ngày 30oC, 37oC, 38oC, 39oC Nhiệt độ 30oC 37oC 38oC 39oC Chủng Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày CL1 0,72 0,96 1,72 1,56 3,48 3,88 3,72 CF2 0,12 0,88 1,32 1,92 2,28 2,92 3,44 3,36 C4-2 0,12 0,76 1,6 2,04 2,4 2,92 3,16 3,8 C6-1 0,44 1,08 1,4 1,64 2,32 3,32 3,24 B2-2 0,12 0,72 0,92 1,8 1,76 2,44 4,04 B2-3 0,72 1,88 2,12 3,56 4,72 6,8 4,52 B3-2 0,12 1,04 1,6 3,2 5,16 5,36 6,28 5,4 BK1 0,72 1,32 1,64 1,88 2,24 3,36 3,48 CL1 0,3 0,64 0,68 0,80 0,88 0,84 0,84 CF2 0,12 0,28 0,44 0,52 0,60 0,68 0,60 C4-2 0,54 0,28 0,64 0,68 0,80 0,92 0,96 C6-1 0,24 0,52 0,56 1,68 2,92 4,08 3,4 B2-2 0,3 0,44 0,76 1,8 3,04 4,68 3,68 B2-3 0,12 0,52 0,84 1,84 3,52 4,28 4,08 B3-2 0,12 0,18 0,56 0,84 2,12 3,88 4,44 5,60 BK1 0,18 0,40 0,48 0,56 0,48 0,48 0,40 C6-1 0,64 0,96 1,32 1,56 2,24 3,24 3,16 B2-2 0,12 0,72 0,88 1,72 1,76 2,32 3,92 3,92 B2-3 0,8 1,8 2,04 3,48 4,64 6,68 4,48 B3-2 0,12 1,04 1,56 3,12 5,04 5,24 6,16 5,36 C6-1 0,12 0,16 0,16 0,2 0,16 0,12 0,12 B2-2 0,08 0,6 0,8 1,64 1,68 2,24 3,84 3,8 B2-3 0,04 0,76 1,68 1,96 3,4 4,44 6,52 4,4 B3-2 0,08 0,84 1,44 3,04 4,92 5,08 5,76 5,28 Ghi chú: Giá trị bảng giá trị trung bình lặp lại PL23 Bảng PL7 Bảng thống kê số liệu phát triển (OD 550nm)của chủng AAB ngày 30oC, 37oC, 38oC, 39oC Nhiệt độ 30oC 37oC 38oC 39oC Chủng Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày Ngày CL1 0,030 0,061 0,089 1,067 1,152 1,266 1,456 1,563 CF2 0,021 0,079 1,089 1,108 1,289 1,489 1,545 1,778 C4-2 0,028 0,056 0,750 1,067 1,209 1,286 1,530 1,670 C6-1 0,027 0,348 1,072 1,230 1,450 1,599 1,810 1,988 B2-2 0,024 0,743 1,023 1,133 1,249 1,354 1,488 1,704 B2-3 0,025 0,743 1,585 1,365 1,474 1,477 1,641 1,652 B3-2 0,020 0,880 0,964 1,001 1,021 1,032 1,076 1,087 BK1 0,030 1,045 1,452 1,475 1,543 1,532 1,600 1,644 CL1 0,020 0,402 1,007 1,042 1,167 1,278 1,463 1,521 CF2 0,024 0,356 0,785 1,067 1,050 1,368 1,523 1,634 C4-2 0,030 1,000 1,004 1,048 1,055 1,296 1,369 1,580 C6-1 0,025 0,884 0,978 1,194 1,489 1,509 1,718 1,889 B2-2 0,024 0,673 0,851 1,003 1,056 1,189 1,388 1,656 B2-3 0,027 0,606 1,414 1,511 1,663 1,296 1,393 1,950 B3-2 0,023 0,490 0,540 0,987 1,009 1,165 1,467 1,694 BK1 0,030 0,050 0,643 0,880 1,004 1,245 1,674 1,860 C6-1 0,115 0,261 0,386 0,414 0,680 1,104 1,396 1,567 B2-2 0,088 0,634 0,731 1,003 1,038 1,294 1,349 1,534 B2-3 0,098 0,787 0,823 0,750 0,931 1,009 1,023 1,453 B3-2 0,105 0,164 0,224 0,278 0,421 0,542 0,650 0,845 C6-1 0,082 0,450 0,878 1,023 1,034 1,143 1,250 1,462 B2-2 0,102 0,479 0,722 1,002 1,051 1,087 1,280 1,451 B2-3 0,027 0,105 0,151 0,167 0,272 0,439 0,650 0,968 B3-2 0,032 0,093 0,198 0,248 0,492 0,620 0,748 0,865 Ghi chú: Giá trị bảng giá trị trung bình lặp lại PL24 [...]... lượng các chủng vi khuẩn acid acetic phân lập từ ca cao Mẫu Số chủng phân lập 1 Hoa ca cao 2 2 Lá ca cao 2 3 Vỏ ca cao 2 4 Hạt ca cao lên men 3 ngày 3 5 Hạt ca cao lên men 4 ngày 2 6 Hạt ca cao lên men 6 ngày 2 7 Hạt ca cao khô 3 8 Hoa ca cao 1 9 Lá ca cao 1 10 Hạt ca cao lên men 1 ngày 1 11 Hạt ca cao lên men 2 ngày 3 12 Hạt ca cao lên men 3 ngày 2 13 Hạt ca cao lên men 4 ngày 3 14 Hạt ca cao khô 3 STT... nhằm phân lập và tuyển chọn được vi khuẩn acid acetic chịu nhiệt từ ca cao có khả năng lên men acetic Nội dung thực hiện: - Phân lập vi khuẩn acid acetic từ ca cao - Xác định hình thái, sinh lý, sinh hóa của vi khuẩn acid acetic - Thử khả năng chịu nhiệt và chịu acid của các chủng vi khuẩn acid acetic - Thử hoạt tính lên men của acid acetic ở nhiệt độ cao Chuyên ngành Vi Sinh vật học 2 Vi n NC&PT... Ở Vi t Nam, do điều kiện khí hậu phù hợp cho vi c trồng ca cao xen canh với các loại cây khác, nên diện tích ca cao ngày mở rộng Quá trình lên men ca cao có nhiệt độ lên men lên đến 45-50oC, là nguồn nguyên liệu có thể phân lập các chủng AAB có khả năng chịu nhiệt cao Do đó, đề tài Phân lập và tuyển chọn vi khuẩn acid acetic chịu nhiệt từ ca cao được thực hiện 1.2 Mục tiêu đề tài Đề tài nhằm phân. .. Sum, 1996; Hà Thanh Toàn et al., 2008) 2.1.3 Công dụng của ca cao a Hạt ca cao Bộ phận chính được sử dụng của cây ca cao là hạt (bean) Hạt ca cao sau khi rang được xay thành bột nhão ca cao Khi ép bột nhão ta tách được bơ và bánh dầu ca cao Xay nhuyễn bánh dầu ca cao cho ra bột ca cao (Phạm Hồng Đức Phước, 2006) Bột nhão, bơ và bột ca cao là nguyên liệu chính cho công nghiệp bánh kẹo thực phẩm... Sơ lược về ca cao 2.1.1 Cây ca cao Hình 1 Cây và quả ca cao (*Nguồn: Hermann A Juren Pohlan và Valentin Díaz Pérez,2011) Cây ca cao (Theobroma cacao) có nguồn gốc từ rừng rậm ở vùng Amazon (Nam Mỹ), chúng thường phát triển ở nơi có bóng râm và độ ẩm cao nhưng các giống ca cao hoang dại cũng thấy xuất hiện từ Mexico đến Peru Ca cao được trồng trong một thời gian dài bởi người Mayas và người Aztec,... bằng NaOH 0,8N So sánh và tuyển chọn được các chủng AAB có khả năng lên men acid acetic tốt nhất Chuyên ngành Vi Sinh vật học 24 Vi n NC&PT Công nghệ Sinh học Luận văn tốt nghệp Đại học Khóa 37- 2014 Trường Đại Học Cần Thơ CHƯƠNG 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Kết quả phân lập các chủng vi khuẩn acid acetic Với mục đích có thể phân lập các chủng vi khuẩn acid acetic chịu nhiệt từ ca cao, tổng cộng có 14... nhờ vào một nhóm vi khuẩn gọi chung là vi khuẩn acid acetic (Acetic Acid Bacteria, AAB) Trong những năm gần đây, vi c gia tăng nhiệt độ toàn cầu làm xã hội có một số thách thức nghiêm trọng trong vi c lên men với quy mô công nghiệp vì những hệ thống làm lạnh lớn tiêu tốn nhiều năng lượng để giữ ở nhiệt độ tối ưu Vì vậy, vi c phân lập và tuyển chọn chủng vi khuẩn chịu nhiệt lên men acid acetic. .. được phân lập và tuyển chọn lên đĩa chứa môi trường YPGD (2% agar) bổ sung acid acetic ở các nồng độ ban đầu khác nhau: 0,5%; 1,0%; 1,5%; 2,0%; 2,5% và 3,0% Ủ ở 30oC Theo dõi và đánh giá khả năng phát triển trên đĩa sau 48-72 giờ 3.2.5 Khảo sát khả năng chịu nhiệt của vi khuẩn acid acetic Mục đích: Tuyển chọn các chủng AAB có khả năng phát triển tốt ở nhiệt độ cao Chuyên ngành Vi Sinh vật học 23 Vi n... lại hiệu quả kinh tế cao nên diện tích trồng ca cao phát triển rất nhanh Theo báo cáo của Ban Điều phối Phát triển ca cao Vi t Nam (VCC), tính đến tháng 6/2011 tổng diện tích ca cao cả nước đạt khoảng 20.589 ha, tăng 4.404 ha so với năm 2010 Hiện tại, Bộ Nông nghiệp và Phát triển Nông thôn Vi t Nam đã đề ra mục tiêu đến năm 2015 diện tích ca cao cả nước sẽ đạt 60.000 ha ca cao và đến năm 2020 sẽ đạt... chung Acid acetic (còn gọi là acid ethanoic) là một acid hữu cơ (acid carboxylic), công thức hóa học là CH3COOH, khối lượng phân tử 60 g/mol Acid acetic là một acid yếu, thuộc nhóm acid monoprotic, có tính acid mạnh hơn acid carbonic Acid acetic tan tốt trong nước, ethanol, eter, benzene, acetone và chloroform; không tan trong CS2 Acid acetic rất bền với các chất oxy hóa như acid chromic và permanganate