Đang tải... (xem toàn văn)
ĐẶT VẤN ĐỀ Ngày nay, cùng với sự phát triển của tổng hợp hóa dược, công tác nghiên cứu, phát triển thuốc và sản phẩm thiên nhiên mới có nguồn gốc từ cây cỏ đang là vấn đề thu hút sự quan tâm của nhiều quốc gia trên thế giới. Việt Nam với lợi thế địa hình và khí hậu đã tạo ra nguồn tài nguyên cây cỏ vô cùng phong phú, nguồn dược liệu dồi dào cùng với kho tàng tri thức sử dụng cây cỏ làm thuốc từ lâu đời. Trong đó, có gần 3.900 loài thực vật bậc cao cũng như bậc thấp được các cộng đồng dân tộc sử dụng trong chăm sóc sức khỏe, phòng và trị bệnh 1. Tuy nhiên, nguồn tài nguyên này được sử dụng theo kinh nghiệm của người dân mà chưa được nghiên cứu một cách khoa học và đầy đủ. Như chúng ta đã biết, cây cỏ Seo gà với tên gọi khác là cây Theo gà 12, Phượng vĩ thảo 13, cỏ Luồng 13…, là một loài rất quen thuộc và gần gũi với nhân dân ta. Theo kinh nghiệm dân gian toàn cây cỏ Seo gà được dùng để điều trị các bệnh như: lỵ mãn tính, lỵ trực khuẩn, viêm ruột, viêm đường tiết niệu, viêm họng, viêm tuyến nước bọt, sưng vú, mụn nhọt, lở ngứa, bệnh ngoài da 13. Các nhà khoa học trên thế giới đã tiến hành nghiên cứu về thực vật, hóa học cũng như thử tác dụng sinh học của cây cỏ Seo gà đã cho những kết quả hết sức khả quan trong việc điều trị các căn bệnh nan y và mang tính thời đại như: hạ mỡ máu, chống ung thư, chống phì đại tuyến tiền liệt lành tính…
BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHAN THỊ LÝ PHÂN LẬP MỘT SỐ THÀNH PHẦN TỪ PHÂN ĐOẠN ETHYLACETAT CHIẾT XUẤT TỪ CÂY CỎ SEO GÀ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2014 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI PHAN THỊ LÝ PHÂN LẬP MỘT SỐ THÀNH PHẦN TỪ PHÂN ĐOẠN ETHYLACETAT CHIẾT XUẤT TỪ CÂY CỎ SEO GÀ KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: 1. PGS.TS. Nguyễn Thái An 2. ThS.NCS. Nguyễn Duy Chí Nơi thực hiện: 1. Bộ môn Dược liệu - Đại học Dược Hà Nội 2. Trung tâm KN Dược Quân đội HÀ NỘI – 2014 LỜI CẢM ƠN Trong quá trình thực hiện và hoàn thành khóa luận này, em đã nhận được rất nhiều sự quan tâm, động viên và giúp đỡ tận tình từ các thầy cô, gia đình và bạn bè. Nhờ có sự giúp đỡ quý báu đó mà em mới có thể nghiên cứu và hoàn thành tốt khóa luận của mình. Nhân dịp này, em xin bày tỏ sự kính trọng và lòng biết ơn sâu sắc đến: PGS. TS. Nguyễn Thái An, cô đã tận tình chỉ bảo, tạo mọi điều kiện, trực tiếp hướng dẫn em hoàn thành khóa luận. Ths. NCS. Nguyễn Duy Chí đã giúp đỡ em nhiệt tình trong quá trình thực hiện khóa luận. Em xin được gửi lời cảm ơn đến các thầy cô, các anh chị kỹ thuật viên bộ môn Dược liệu trường Đại học Dược Hà Nội, Trung tâm Kiểm nghiệm Dược Quân đội đã nhiệt tình giúp đỡ, hỗ trợ và tạo điều kiện cho em làm khóa luận. Xin trân trọng cảm ơn Đảng ủy, Ban Giám hiệu nhà trường, Phòng Đào tạo cùng toàn thể các thầy cô, các cán bộ Trường Đại học Dược Hà Nội đã tạo điều kiện để em có thể lĩnh hội những kiến thức quý giá về ngành Dược trong suốt 5 năm học. Cuối cùng, em xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến gia đình, bạn bè đã luôn sát cánh, động viên em hoàn thành khóa luận này. Hà nội, ngày 14 tháng 5 năm 2014 Sinh viên Phan Thị Lý MỤC LỤC Danh mục kí hiệu, chữ viết tắt Danh mục bảng Danh mục hình ĐẶT VẤN ĐỀ 1 CHƯƠNG I: TỔNG QUAN 3 1.1. VỊ TRÍ PHÂN LOẠI, ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT VÀ PHÂN BỐ. 3 1.1.1. Vị trí phân loại của chi Pteris L. 3 1.1.2. Đặc điểm chung của họ Cỏ Luồng (Pteridaceae). 3 1.1.3. Đặc điểm thực vật chi Pteris L 3 1.1.4. Đặc điểm thực vật của cây cỏ Seo gà (Pteris multifida Poir.) 4 1.1.5. Phân bố và sinh thái 5 1.1.6. Bộ phận dùng, thu hái, chế biến 5 1.2. THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CỎ SEO GÀ (Pteris multifida Poir.) 5 1.3. TÍNH VỊ VÀ TÁC DỤNG DƯỢC LÝ. 10 1.4. CÔNG DỤNG 12 1.5. MỘT SỐ ĐƠN THUỐC 13 CHƯƠNG 2: ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 14 2.1. NGUYÊN LIỆU NGHIÊN CỨU 14 2.2. PHƯƠNG TIỆN NGHIÊN CỨU 14 2.2.1. Các trang thiết bị dùng trong nghiên cứu 14 2.2.2. Hóa chất 15 2.3. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.3.1. Định tính 15 2.3.2. Chiết xuất 15 2.3.3. Phân lập các chất 16 2.3.4. Nhận dạng chất phân lập 17 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 19 3.1. CHIẾT XUẤT 19 3.1.1. Xác định độ ẩm dược liệu 19 3.1.2. Chiết xuất 19 3.1.3. Định tính một số nhóm chất trong phân đoạn ethylacetat bằng phản ứng hóa học. 21 3.1.4. Định tính cắn phân đoạn ethylacetat bằng SKLM 22 3.2. PHÂN LẬP 24 3.2.1. Phân lập 24 3.2.2. Kiểm tra độ tinh khiết của chất PM9 25 3.3. NHẬN DẠNG HỢP CHẤT PM9 27 3.4. BÀN LUẬN 31 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 34 KẾT LUẬN 34 ĐỀ XUẤT 34 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ viết tắt Chữ viết đầy đủ 1 AST Ánh sáng thường 2 C Cắn chloroform 3 CC Column chromatography 4 3 C-NMR Carbon (13) Nuclear Magnetic Resonance 5 Dd Dung dịch 6 DEPT Distortionless Enhancement by Polarization Transfer 7 E Cắn ethylacetat 8 EtOAc Ethyl acetat 9 H Cắn n-hexan 10 HMBC Heteronuclear Multiple Bond Correlation 11 1 H-NMR Proton (1) Nuclear Magnetic Resonance 12 HSQC Heteronuclear Single Quantum Correlation 13 KHV Kính hiển vi 14 MeOH Methanol 15 MS Mass Spectroscopy 16 n-BuOH n-butanol 17 R f Hệ số di chuyển 18 SKLM Sắc kí lớp mỏng 19 TLC Thin Layer Chromatography 20 TLTK Tài liệu tham khảo 21 TT Thuốc thử 22 UV 254nm Ánh sáng tử ngoại bước sóng 254nm 23 UV 366nm Ánh sáng tử ngoại bước sóng 366nm 24 XDT Xanh da trời 25 XLM Xanh lá mạ 26 XNB Xanh nước biển 27 DMSO Dimethyl Sulfoxid DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang Bảng 1.1 Một số hợp chất phân lập được từ cây cỏ Seo gà 8 Bảng 1.2 Nồng độ Nồng độ ức chế tối thiểu của một số hợp chất phân lập từ cây cỏ Seo gà 11 Bảng 3.1 Hàm lượng cắn các phân đoạn chiết xuất từ cây cỏ Seo gà gà 19 Bảng 3.2 Kết quả định tính các nhóm chất trong cây cỏ Seo gà 21 Bảng 3.3 Màu sắc và giá trị R f của cắn ethylacetat trên SKLM với hệ dung môi khai triển V 23 Bảng 3.4 Kết quả SKLM của PM9 với 3 hệ dung môi ở UV 254nm và sau khi phun TT quan sát ở AST 27 Bảng 3.5 Dữ liệu phổ NMR của PM9 29 DANH MỤC HÌNH Hình Tên hình Trang Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất cắn các phân đoạn từ cây cỏ Seo gà 20 Hình 3.2 Sắc ký đồ của cắn ethylacetat với hệ dung môi V 23 Hình 3.3 Sơ đồ phân lập PM9 từ phân đoạn ethylacetat chiết xuất từ cây cỏ Seo gà 25 Hình 3.4 Hình ảnh SKLM của PM9 với 3 hệ dung môi ở UV 254nm 26 Hình 3.5 Hình ảnh SKLM của PM9 với 3 hệ dung môi sau khi phun TT quan sát ở AST 26 Hình 3.6 Sắc ký so sánh PM9 với cắn ethylacetat ở UV 254nm 27 Hình 3.7 Ảnh tinh thể của PM9 dưới kính hiển vi vật kính 40 28 Hình 3.8 Cấu trúc hóa học của hợp chất PM9 31 1 ĐẶT VẤN ĐỀ Ngày nay, cùng với sự phát triển của tổng hợp hóa dược, công tác nghiên cứu, phát triển thuốc và sản phẩm thiên nhiên mới có nguồn gốc từ cây cỏ đang là vấn đề thu hút sự quan tâm của nhiều quốc gia trên thế giới. Việt Nam với lợi thế địa hình và khí hậu đã tạo ra nguồn tài nguyên cây cỏ vô cùng phong phú, nguồn dược liệu dồi dào cùng với kho tàng tri thức sử dụng cây cỏ làm thuốc từ lâu đời. Trong đó, có gần 3.900 loài thực vật bậc cao cũng như bậc thấp được các cộng đồng dân tộc sử dụng trong chăm sóc sức khỏe, phòng và trị bệnh [1]. Tuy nhiên, nguồn tài nguyên này được sử dụng theo kinh nghiệm của người dân mà chưa được nghiên cứu một cách khoa học và đầy đủ. Như chúng ta đã biết, cây cỏ Seo gà với tên gọi khác là cây Theo gà [12], Phượng vĩ thảo [13], cỏ Luồng [13]…, là một loài rất quen thuộc và gần gũi với nhân dân ta. Theo kinh nghiệm dân gian toàn cây cỏ Seo gà được dùng để điều trị các bệnh như: lỵ mãn tính, lỵ trực khuẩn, viêm ruột, viêm đường tiết niệu, viêm họng, viêm tuyến nước bọt, sưng vú, mụn nhọt, lở ngứa, bệnh ngoài da [13]. Các nhà khoa học trên thế giới đã tiến hành nghiên cứu về thực vật, hóa học cũng như thử tác dụng sinh học của cây cỏ Seo gà đã cho những kết quả hết sức khả quan trong việc điều trị các căn bệnh nan y và mang tính thời đại như: hạ mỡ máu, chống ung thư, chống phì đại tuyến tiền liệt lành tính… Nhận thấy, cỏ Seo gà là một cây thuốc dân gian cần được quan tâm, tuy nhiên những nghiên cứu hiện nay về cỏ Seo gà còn ít và chưa thực sự đầy đủ, vì vậy nhằm làm sáng tỏ hơn nữa thành phần hóa học và chứng minh kinh nghiệm sử dụng trong dân gian của cỏ Seo gà, đề tài “Phân lập một số thành phần từ phân đoạn ethylacetat chiết xuất từ cây cỏ Seo gà” được tiến hành với các mục tiêu sau: 2 1. Chiết xuất, phân lập một số thành phần từ phân đoạn ethylacetat. 2. Nhận dạng chất phân lập. Để thực hiện các mục tiêu đề ra, đề tài được tiến hành với các nội dung sau: 1. Giám định tên khoa học mẫu nghiên cứu. 2. Chiết xuất và định tính cắn phân đoạn ethylacetat bằng phương pháp hóa học và SKLM. 3. Phân lập một số thành phần trong phân đoạn ethylacetat. 4. Nhận dạng chất phân lập dựa trên các dữ liệu phổ MS và NMR. [...]... Hiệu suất của cắn 3 phân đoạn so với cắn toàn phần và so với bột cây cỏ Seo gà đem đi chiết được trình bày trong bảng 3.1 Bảng 3.1 Hàm lượng cắn các phân đoạn chiết xuất từ cây cỏ Seo gà Phân đoạn Khối lượng cắn % so với cắn toàn % so với (g) STT phần nguyên liệu khô 1 n-hexan 16,67 28,55 2,09 2 Chloroform 10,00 17,13 1,25 3 Ethylacetat 8,20 14,04 1,03 20 Dược liệu Methanol Lọc Dịch chiết methanol Methanol... hồi Cắn toàn phần Nước cất 600C Dịch chiết nước n-hexan Dịch chiết nước Dịch chiết n-hexan n-hexan thu hồi Chloroform Cắn H CHCl3 thu hồi Dịch chiết chloroform chloroform Dịch chiết nước Ethylacetat Cắn C Dịch chiết ethylacetat Dịch chiết nước Ethylacetat thu hồi Cắn E Hình 3.1 Sơ đồ chiết xuất cắn các phân đoạn từ cây cỏ Seo gà 21 Phân đoạn ethylacetat được lựa chọn để tiến hành phân lập chất tinh... glucopyranosid [19] Một số nhà khoa học Trung Quốc đã phân lập và xác định được 6 hợp chất có trong phân đoạn butanol từ dịch chiết EtOH của rễ cây cỏ Seo gà Bằng cách lấy rễ cây cỏ Seo gà rửa sạch, phơi khô và xay thành bột, ngâm trong EtOH 95% (15L, 7 ngày x 3) ở nhiệt độ phòng Dịch chiết thu được 7 đem cất thu hồi dung môi, thu được 250g cắn thô, hòa tan vào trong nước ấm và lần lượt chiết với ete dầu... thích hợp + Kiểm tra các phân đoạn thu được bằng sắc ký lớp mỏng, các phân đoạn cho sắc ký đồ giống nhau thì gộp thành một phân đoạn 2.3.3.2 Tinh chế các chất phân lập Sử dụng phương pháp kết tinh lại hoặc rửa nhiểu lần bằng dung môi ít hòa tan chất phân lập 2.3.3.3 Kiểm tra độ tinh khiết của các chất phân lập Độ tinh khiết của chất phân lập được kiểm tra bằng SKLM Mỗi chất phân lập được kiểm tra bằng... tây Himalaya; trước kia người Ấn Độ đã từng nhập cây cỏ Seo gà về trồng làm cảnh Cây có vùng phân bố tự nhiên khắp khu vực Đông và Đông Bắc Á [13] 1.1.5.2 Ở Việt Nam Cây cỏ Seo gà mọc phổ biến ở miền Bắc và miền Trung nước ta, thường gặp ở trên những vách đá, vách đất, xung quanh bờ giếng, ven đường đi, những nơi thoáng ẩm và mát [12] Cây cỏ Seo gà là cây có sức sống dai, có thể tồn tại ở những nơi đất... dùng làm thuốc, thu hái quanh năm, rửa sạch, phơi khô dùng dần [8], [13] Thân rễ đào về thái mỏng, phơi hoặc sấy khô [12] 1.2 THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY CỎ SEO GÀ (Pteris multifida Poir.) Từ cây cỏ Seo gà, Okuno Masaaki và cộng sự đã phân lập được βsitosterol và β-sitosterol-β-glucosid [13] 6 Woerdenbag Herman J và cộng sự đã phân lập được 2 chất diterpen là ent-kauran-2β,16α-diol và ent-kaur-16-en-2β,15α-diol... cholesterol có sử dụng thêm bột cỏ Seo gà đông khô với nhóm dùng β-sitosterol Kết quả cho thấy bột cây cỏ Seo gà đông khô không những làm giảm triglycerid và cholesterol mà còn tăng đào thải chất béo và chuyển hóa các sản phẩm qua đường tiêu hóa [33] Tác dụng chống lại phì đại tuyến tiền liệt lành tính: Từ dịch chiết aceton và ethanol 20% của cây cỏ Seo gà người ta đã phân lập được 22 hợp chất trong đó... 3 lát, sắc uống làm 2-3 lần trong ngày, vào lúc đói Có thể dùng Seo gà 30g, vỏ sắn thuyền 12g, cám gạo rang vàng 6g hoặc đậu đen rang cháy 20g, sắc uống, chia làm 3 lần trong ngày [13] Chữa lở loét, bệnh ngoài ra: Toàn thân cây cỏ Seo gà đốt thành than, tán bột, trộn với dầu vừng rồi bôi Có thể dùng cây tươi giã đắp [13] Chữa kiết lỵ (trực trùng): Rễ và lá cỏ Seo gà sao cho thơm 24g, nước 100ml, đun... cô đến cắn từng phân đoạn ở áp suất giảm Phân đoạn n-butanol sau khi cất thu hồi dung môi ở áp suất giảm thu được 78,5g cắn, các hợp chất được phân lập trên cột silical gel với hệ dung môi rửa giải là CHCl3-MeOH (8:0→1:5) có độ phân cực tăng dần và được kết nối với hệ thống TLC cho ra 3 phân đoạn A, B, C Phân đoạn A sau khi cất thu hồi dung môi thu được 3,9g cắn, cắn này tiếp tục được phân lập trên cột... Toàn cây cỏ Seo gà có vị ngọt nhạt, hơi đắng, tính lạnh, có tác dụng thanh nhiệt, lương huyết, lợi thấp, chỉ lỵ [8], [13], tiêu viêm [8] Rễ có vị ngọt, đắng, hơi tê, mùi thơm hắc [13] Dịch chiết nước có tác dụng chống oxy hóa, loại trừ gốc tự do [35] Một nghiên cứu tiến hành nhằm đánh giá độc tính của dịch chiết nước từ cây cỏ Seo gà trên chuột Sprague-Dawley bằng cách cho uống dịch chiết nước hằng ngày . cỏ Seo gà, đề tài Phân lập một số thành phần từ phân đoạn ethylacetat chiết xuất từ cây cỏ Seo gà được tiến hành với các mục tiêu sau: 2 1. Chiết xuất, phân lập một số thành phần từ phân. 1.1 Một số hợp chất phân lập được từ cây cỏ Seo gà 8 Bảng 1.2 Nồng độ Nồng độ ức chế tối thiểu của một số hợp chất phân lập từ cây cỏ Seo gà 11 Bảng 3.1 Hàm lượng cắn các phân đoạn chiết. chiết xuất cắn các phân đoạn từ cây cỏ Seo gà 20 Hình 3.2 Sắc ký đồ của cắn ethylacetat với hệ dung môi V 23 Hình 3.3 Sơ đồ phân lập PM9 từ phân đoạn ethylacetat chiết xuất từ cây cỏ Seo