đánh giá độ không đảm bảo đo của một số xét nghiệm hóa sinh

Các biến thiên này phản ánh ảnh hưởng của các dao động về hiệu năng của hệ thống xét nghiệm, thuốc thử, chất chuẩn, môi trường phòng xét nghiệm…Sự phân tán của các giá trị thu được từ ph

ĐỖ VĂN SƠN

ĐÁNH GIÁ ĐỘ KHÔNG ĐẢM BẢO ĐO CỦA

MỘT SỐ XÉT NGHIỆM HÓA SINH

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP CỬ NHÂN Y KHOA

KHÓA 2011 – 2015

Hướng dẫn khoa học:

TS TRẦN THỊ CHI MAI

HÀ NỘI – 2015

Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn tới Ban Giám hiệu, Phòng Quản lý đào tạo đại học trường Đại học Y Hà Nội đã giúp đỡ, tạo mọi điều kiện thuận lợi cho tôi trong suốt thời gian học tập tại trường.

Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Trần Thị Chi Mai – Trưởng

khoa xét nghiệm Sinh Hóa – Bệnh viện Nhi Trung Ương, người cô đã nhiệt tình giúp đỡ tôi trong quá trình học tập cũng như nghiên cứu khoa học

Tôi xin gửi lời cảm ơn đến các thầy cô, anh chị trong khoa xét nghiệm Sinh Hóa – Bệnh viện Nhi Trung Ương đã giúp đỡ tôi nhiệt tình, tạo mọi thuận lợi cho tôi trong quá trình thực hiện và hoàn thành khóa luận này.

Cuối cùng tôi xin bày tỏ lòng biết ơn tới cha mẹ, những người đã sinh thành và nuôi dạy tôi, cùng với những người thân trong gia đình, anh em bè bạn đã chia sẻ động viên giúp đỡ tôi trong suốt thời gian học tập.

Hà Nội, tháng 5 năm 2015

Sinh viên

Đỗ Văn Sơn

Tôi là Đỗ Văn Sơn, học viên Trường Đại học Y Hà Nội, chuyên ngành

Cử Nhân Kỹ Thuật Y Học, xin cam đoan:

1 Đây là khoá luận do bản thân tôi trực tiếp thực hiện dưới sự hướng dẫn của TS Trần Thị Chi Mai.

2 Các số liệu và thông tin trong nghiên cứu là hoàn toàn trung thực và khách quan.

Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm về những cam kết này.

Hà Nội, tháng 5 năm 2015

Sinh viên

Đỗ Văn Sơn

ALT Alanine Aminotransferase

T V N

ĐẶ Ấ ĐỀ 1

CHƯƠNG 1 3

T NG QUAN TÀI LI UỔ Ệ 3

1.1 ĐỘ KHÔNG ĐẢM B O OẢ Đ 3

1.1.1 Khái ni m ệ độ không đảm b o o (Measurement Uncertainty)ả đ 3 1.1.2 T i sao ph i tính toán ạ ả độ không đảm b o?ả 4

1.2 N I DUNG C A VI C ÁNH GIÁ Ộ Ủ Ệ Đ ĐỘ KHÔNG ĐẢM B O OẢ Đ 4

1.3 NGUYÊN NHÂN GÂY RA ĐỘ KHÔNG ĐẢM B O TRONG PHÒNG Ả XÉT NGHI M Y KHOAỆ 5

1.4 ƯỚC T NH Í ĐỘ KHÔNG ĐẢM B O OẢ Đ 6

1.4.1 Tiêu chu n ẩ độ không đảm b o oả đ 6

1.4.2 Xác nh đị đạ ượi l ng o (measurand)đ 9

1.4.3 L m tròn k t quà ế ả 10

1.4.4 ánh giá l i Đ ạ độ không đảm b o oả đ 10

1.5 CÁC PHƯƠNG PHÁP T NH Í ĐỘ KHÔNG ĐẢM B O OẢ Đ 11

1.5.1 Phương pháp bottom-up: 12

1.5.2 Phương pháp top-down: 15

1.6 Ý NGH A Ĩ ĐỘ KHÔNG ĐẢM B O O Ả Đ ĐƯỢ ỨC NG D NG TRÊN Ụ LÂM SÀNG 19

1.7 CÁC PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHI M HÓA SINH C B N Ệ Ơ Ả 21

1.7.1 Phương pháp o quang:đ 21

1.7.2 Phương phap miên dich o ô uć ̃ ̣ đ đ ̣ đ ̣ 21

1.7.3 Phương phap iên c c chon loc ion ( Ion Selective Electrode)́ đ ̣ ự ̣ ̣ 22 1.8 GI I THIÊU MAY PHÂN TICH HOA SINH T ÔNG BECKMAN Ớ ̣ ́ ́ ́ Ự Đ ̣ COULTER AU2700 24

CHƯƠNG 2 26

I T NG VÀ PH NG PHÁP NGHIÊN C U ĐỐ ƯỢ ƯƠ Ứ 26

2.1 ĐỐ ƯỢI T NG NGHIÊN C UỨ 26

2.1.1 V t li u nghiên c uậ ệ ứ 26

2.1.2 Máy móc v trang thi t bà ế ị 26

2.2.1 Nguyên lý nh lđị ượng glucose b ng phằ ương pháp hexokinase26 2.2.2 Nguyên lí nh lđị ượng creatinin b ng phằ ương pháp Jaffé động

h cọ 27

2.2.3 Nguyên lý o ho t đ ạ độ AST (GOT) 27

2.2.4 Nguyên lý o ho t đ ạ độ ALT (GPT) 27

2.2.5 Nguyên lý nh lđị ượng i n gi i (Na+, K+, Cl-) b ng phđ ệ ả ằ ương pháp i n c c ch n l c ionđ ệ ự ọ ọ 28

2.2.6 Nguyên lý nh lđị ượng CRP 28

2.3 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C UỨ 28

CHƯƠNG 3 33

K T QU NGHIÊN C UẾ Ả Ứ 33

3.1 ƯỚC T NH Í ĐỘ KHÔNG ĐẢM B O O C A CÁC XÉT NGHI MẢ Đ Ủ Ệ 33 3.2 PHÂN T CH THÔNG TIN CUNG C P T Í Ấ Ừ ĐỘ KHÔNG ĐẢ ĐM O CHO NG D NG LÂM SÀNGỨ Ụ 39

CHƯƠNG 4 42

BÀN LU NẬ 42

KÊT LUÂŃ ̣ 49

B ng 3.1 Giá tr trung bình, ả ị độ ệ l ch chu n v ẩ à độ ế bi n thiên d i h n c a à ạ ủ

các xét nghi mệ 33

B ng 3.2 So sánh ả độ ế bi n thiên c a các xét nghi m v i tiêu chu n ch p ủ ệ ớ ẩ ấ nh nậ 33

B ng 3.3 ả Độ không chính xác trung gian c a phép oủ đ 36

B ng 3.4 So sánh ả độ ệ l ch c a phép o v i tiêu chu n ch p nh nủ đ ớ ẩ ấ ậ 36

B ng 3.5 ả Độ không đảm b o o c a các xét nghi mả đ ủ ệ 38

B ng 3.6 K t qu hai l n xét nghi m trên cùng m t b nh nhân khác nhau ả ế ả ầ ệ ộ ệ có ý ngh a v m t xét nghi m v v m t sinh h c v i ĩ ề ặ ệ à ề ặ ọ ớ độ tin c y 95%.ậ 39

ĐẶT VẤN ĐỀ

Sai số và phân tích sai số từ lâu đã là một phần không thể thiếu trong thực hành tại các phòng xét nghiệm y khoa Khi thông báo kết quả của một phép đo, bắt buộc phải đưa ra chỉ điểmvề chất lượng của kết quả đo để người

sử dụng có thể đánh giá được độ tin cậy của phép đo [1] Độ không đảm bảo

đo (measurement uncertainty) là một thông số đặc trưng cho sự phân tán của các giá trị đo lường được của một chất phân tích [2] Mặc dù khái niệm độ không đảm bảo đo được đưa ra từ những năm 1960, nhưng việc đánh giá và diễn giải độ không đảm bảo đo chỉ được chấp nhận rộng rãi vào những năm

1990 Lĩnh vực y tế chưa thực sự quen thuộc với khái niệm mới này Khi phải đối mặt trước yêu cầu của việc công nhận, các nhân viên phòng xét nghiệm y khoa chưa biết nên làm thế nào để tính toán độ không đảm bảo của phép đo Trong khi đó, nhiều nghiên cứu còn đang tranh cãi về áp dụng thực tiễn của

độ không đảm bảo đo Do vậy, việc đưa ra các hướng dẫn về phương pháp và giải thích về ý nghĩa của độ không đảm bảo đo là cần thiết để đưa khái niệm này vào thực hành thường quy [3]

Đo lường là một quá trình thực nghiệm để thu được một giá trị về lượng bằng cách sử dụng quy trình đo lường bao gồm nhiều bước [2] Nếu hệ thống

đo lường đủ nhạy, các phép đo lặp lại trên cùng một mẫu nhìn chung cũng cho các giá trị khác nhau ngay cả khi điều kiện đo lường được giữ hằng định nhất có thể Như vậy, việc đo lặp lại không cho một giá trị duy nhất và do đó

có độ không đảm bảo về giá trị thực của mẫu được đo Các biến thiên này phản ánh ảnh hưởng của các dao động về hiệu năng của hệ thống xét nghiệm, thuốc thử, chất chuẩn, môi trường phòng xét nghiệm…Sự phân tán của các giá trị thu được từ phép đo lặp lại trên cùng một mẫu có thể được mô tả bằng thống kê bằng tính toán độ lệch chuẩn của các giá trị thu được so với giá trị trung bình Do vậy, độ không đảm bảo đo là một đặc tính của kết quả đo lường và cung cấp ước tính định lượng về độ tin cậy của kết quả phép đo [4]

Không có nhiều hiểu biết về độ không đảm bảo đo, chúng ta không thể xác định liệu hai giá trị đo lường khác nhau của cùng một chất phân tích khác biệt có ý nghĩa thống kê hay không; và vì vậy kết quả một phép đo không có

độ không đảm bảo của nó không thể so sánh với giá trị tham chiếu hoặc kết quả trước đó của cùng một bệnh nhân Sự hiểu biết về độ lớn của độ không đảm bảo đo là then chốt để đánh giá liệu các kết quả của phép đo có phù hợp với ứng dụng lâm sàng hay không Cũng vì vậy việc ước tính độ không đảm bảo đo và đảm bảo rằng độ không đảm bảo đo là phù hợp với mục đích lâm sàng là trách nhiệm của mỗi phòng xét nghiệm y khoa hiện nay [4]

ISO 15189 là tiêu chuẩn quốc tế dựa trên ISO/IEC 17025 và ISO 9001 cung cấp các yêu cầu về năng lực và chất lượng dành cho các phòng xét nghiệm y khoa Tiêu chuẩn ISO 15189:2007 hiện tại tương đồng với tiêu chuẩn quốc gia của Việt Nam TCVN 7782:2008 về phòng thí nghiệm y khoa [5], [6] Trong thời gian tới đây phiên bản ISO 15189:2012 sẽ được áp dụng

để đánh giá năng lực các phòng xét nghiệm y khoa Tính toán độ không đảm bảo đo là một đòi hỏi bắt buộc cho hệ thống các phòng xét nghiệm để có thể được công nhận ISO 15189, đặc biệt là các phòng xét nghiệm hoá sinh lâm sàng, nơi mà rất nhiều các xét nghiệm định lượng được triển khai Chuẩn hoá phòng xét nghiệm, nâng cao chất lượng xét nghiệm là một nhu cầu cấp thiết

và cũng là một thách thức với hệ thống y tế Việt Nam Việc nghiên cứu đưa ra các hướng dẫn, các phương pháp tính toán độ không đảm bảo đo có thể thực hiện tại phòng xét nghiệm y khoa, ý nghĩa của độ không đảm bảo đo và việc sử dụng độ không đảm bảo đo trong việc phân tích diễn giải kết quả xét nghiệm là việc làm cần thiết, góp phần đáp ứng nhu cầu thực tiễn và nâng cao chất lượng dịch vụ xét nghiệm y học Do vậy, đề tài này được tiến hành nhằm mục tiêu:

1 Ước tính độ không đảm bảo đo của một số xét nghiệm hóa sinh.

2 Phân tích thông tin cung cấp từ độ không đảm bảo đo cho ứng dụng lâm sàng.

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU

1.1 ĐỘ KHÔNG ĐẢM BẢO ĐO

1.1.1 Khái niệm độ không đảm bảo đo (Measurement Uncertainty)

Độ không đảm bảo đo (MU): Thông số gắn với kết quả của phép đo, đặc

trưng cho sự phân tán của các giá trị có thể quy cho đại lượng đo một cách hợp lý [4], [7], [8]

Ngoài ra chúng ta cũng cần quan tâm một số khái niệm đi kèm:

 Độ không đảm bảo chuẩn (U std): Một thành phần không đảm bảo khi được diễn tả như là độ lệch chuẩn (SD) Độ đảm bảo đo chuẩn tương đối được biểu diễn dưới dạng CV (%)

 Độ không đảm bảo chuẩn phối hợp ( U c): Đối với một kết quả đo “y”

độ không đảm bảo toàn phần Uc(y) được ước tính tương đương với căn bình phương của sự thay đổi toàn phần thu được bằng sự phối hợp tất cả thành phần không đảm bảo đo

 Độ không đảm bảo mở rộng ( U e): cung cấp một khoảng giá trị mà ở

đó nồng độ đo được nằm ở một mức tin cậy cao

 Đại lượng đo (measurand) : Chất phân tích.

 Hệ số biến thiên phân tích (CVa- analytical coefficient variance),

được tính toán từ các dữ liệu QC (nội kiểm) thu được, chính là độ lệch chuẩn tương đối (RSD)

 Liên kết chuẩn ( Traceability ) : Tính chất của kết quả đo hoặc giá trị

của một chuẩn mà nhờ đó có thể liên hệ đến các chuẩn đã định,

thường là chuẩn quốc gia hay chuẩn quốc tế thông qua một chuỗi các

so sánh không gián đoạn với những độ không đảm bảo đã định

 Hệ số bao phủ : hệ số được sử dụng như bội số cho độ không đảm

bảo đo chuẩn phối hợp để thu được độ không đảm bảo đo mở rộng

1.1.2 Tại sao phải tính toán độ không đảm bảo?

Công việc định lượng là một quá trình thực nghiệm để thu được một giá trị về lượng bằng cách sử dụng quy trình đo lường bao gồm nhiều bước Nếu

hệ thống đo lường đủ nhạy, các phép đo lặp lại trên cùng một mẫu thì cũng luôn cho các giá trị khác nhau ngay cả khi điều kiện thực hiện đều giống nhau Như vậy, việc đo lặp lại không cho một giá trị duy nhất, do đó tồn tại một độ không đảm bảo về giá trị thực của mẫu được đo Tính toán độ không đảm bảo đo là rất cần thiết đối với các xét nghiệm định lượng, ngay cả với các xét nghiệm đã đạt tiêu chuẩn trong lâm sàng, ngoài ra cũng có thể dựa vào thông số này để so sánh với một phương pháp khác Việc đánh giá toàn diện các thành phần để tính độ không đảm bảo có thể phát hiện ra phương pháp khác tương tự để cải thiện quy trình cũng như có độ tin cậy cao hơn [4]

1.2 NỘI DUNG CỦA VIỆC ĐÁNH GIÁ ĐỘ KHÔNG ĐẢM BẢO ĐO

Phương pháp GUM (guide to the expression of uncertainty in measurement) được thiết lập cho phép đo lường trong vật lý nhưng các nguyên tắc của nó có thể áp dụng trong các phép đo lường lĩnh vưc hoá học

và sinh học [4] Dựa trên phương pháp GUM, nguyên tắc ước tính độ không đảm đo để đảm bảo kết quả xét nghiệm là phù hợp với mục đích lâm sàng gồm các bước sau [2]:

a Xác định chất cần đo lường là gì?

b Xác định các nguyên nhân làm kết quả xét nghiệm thay đổi

c Xác định các thành phần của độ không đảm bảo đo, các loại độ không đảm bảo đo:

 Loại A: Các thành phần của độ không đảm bảo đo có thể ước tính từ phân tích thống kê các giá trị đo lường thu được dưới các điều kiện

đo lường xác định

 Loại B: Các thành phần của độ không đảm bảo đo thu được nhờ cách đánh giá khác loại A, ví dụ từ chứng chỉ của chất chuẩn

d Chuyển đổi sang các độ không đảm bảo đo chuẩn

e Tính độ không đảm bảo đo phối hợp

f Tính độ không đảm bảo đo mở rộng

1.3 NGUYÊN NHÂN GÂY RA ĐỘ KHÔNG ĐẢM BẢO TRONG PHÒNG XÉT NGHIỆM Y KHOA

Trong các xét nghiệm y khoa có nhiều nguồn có khả năng gây ra độ không đảm bảo làm ảnh hưởng nghiêm trọng đến kết quả xét nghiệm bao gồm trước, trong và sau quá trình xét nghiệm (quá trình phân tích)

 Giai đoạn trước xét nghiệm:

• Chuẩn bị bệnh nhân

• Kỹ thuật lấy mẫu bệnh phẩm: thời gian, vị trí lấy, phương pháp lấy mẫu

• Vận chuyển mẫu

• Thời gian và nhiệt độ bảo quản mẫu

• Các biến thiên trong một cá thể/ giữa các cá thể

 Giai đoạn sau xét nghiệm:

• Tính toán kết quả

• Báo cáo kết quả

• Khoảng tham chiếu

• Phân tích diễn giải kết quả

 Giai đoạn xét nghiệm:

• Nhiệt độ, độ ẩm, bụi…PXN

• Nhân viên xét nghiệm

• Hệ thống thiết bị đo lường: cân, hiệu chuẩn dụng cụ thuỷ tinh, pipet, nhiệt kế

• Thuốc thử, chất chuẩn

• Độ không đảm bảo của giá trị chất chuẩn, thể tích hút

• Biến thiên ngẫu nhiên khi lặp lại phép đo trong các điều kiện tương tự

• Độ thu hồi của phương pháp và hiệu chuẩn máy về 0

Tuy nhiên, các ảnh hưởng của trước và sau phân tích không làm ảnh hưởng đến độ không đảm bảo sẵn có của quy trình xét nghiệm vì thế những yếu tố này được loại trừ khi tính toán độ không đảm bảo đo

1.4 ƯỚC TÍNH ĐỘ KHÔNG ĐẢM BẢO ĐO

1.4.1 Tiêu chuẩn độ không đảm bảo đo

“Tiêu chuẩn độ không đảm bảo đo” được coi là một thước đo sử dụng để đánh giá chất lượng của các xét nghiệm trong phòng xét nghiệm Đôi khi chúng được coi như là “tiêu chuẩn chất lượng xét nghiệm” (analytical goal), dựa trên tiêu chuẩn phù hợp với mục đích Thuật ngữ này không nên nhầm lẫn với “giá trị đích” (target value) thường được sử dụng trong phòng xét nghiệm y học để mô tả các “giá trị thực” (true value) [4]

Có ba mức độ chấp nhận của tiêu chuẩn chất lượng cho độ không chính xác của một phương pháp xét nghiệm dựa vào biến thiên sinh học trong một

cá thể [4]:

Tối ưu: CV imp ≤0.25 CV intra

Mong muốn: CV imp ≤ 0.50 CV intra

Tối thiểu: CV imp ≤ 0.75 CV intra

Trong đó:

CVimp = Hệ số biến thiên có nguồn gốc từ việc đo lường không chính xác

CVintra = Hệ số biến thiên sinh học trong một cá thể của một chất phân tích nhất định

Một phòng xét nghiệm ban đầu nên đặt một hoặc nhiều tiêu chuẩn trước khi tính toán độ không đảm bảo đo Các tiêu chuẩn này có thể dựa trên biến thiên sinh học, khuyến nghị của chuyên gia quốc tế; các hướng dẫn hay quy định của quốc gia về tiêu chuẩn của các xét nghiệm lâm sàng Các tiêu chuẩn chính để so sánh nên có liên quan đến ứng dụng lâm sàng của các kết quả xét nghiệm Một cách tiếp cận được sử dụng rộng rãi để thiết lập tiêu chuẩn độ không đảm bảo đo là xác định giới hạn trên chấp nhận được cho độ không chính xác tỷ lệ với sự biến đổi sinh học trong một cá thể của chất được đo lường [4]

Cách tiếp cận này phù hợp với sinh lí của một số chất phân tích (Ví dụ: calci huyết thanh, albumin huyết thanh,…) nhưng không đúng với một số chất khác (ví dụ: Natri nước tiểu bị ảnh hưởng đáng kể bởi chế độ ăn uống, hCG trong thời kỳ mang thai) Nguyên tắc đưa ra là độ không đảm bảo của một xét nghiệm không nên cộng thêm đáng kể vào sự biến đổi không thể tránh khỏi của các chất phân tích trong cơ thể bệnh nhân do biến thiên sinh học [4] Ví

dụ, nếu CVimp = CVintra, thì sự biến đổi khoảng 40% thêm vào biến thiên sinh học trong một cá thể, trong khi nếu CVimp ≤ 0,50 CVintra thì chỉ khoảng 12% thêm vào với biến thiên sinh học

Do vậy một nguyên tắc chung đã được khuyến cáo rộng rãi rằng các tiêu chuẩn cho độ chính xác của phương pháp xét nghiệm phải thấp hơn một nửa biến thiên sinh học trong một cá thể (CVimp < 0,50 CVintra) [4] Ví dụ: với CVintra của cholesterol là 5,4 %, tiêu chuẩn kỹ thuật mong muốn của độ chính xác sẽ là 2,7 % Mục đích là để chứng minh tính chính xác trong phương pháp này mặc

dù biến thiên sinh học có thể tồn tại Điều này cho phép so sánh ý nghĩa các kết quả xét nghiệm bởi bất kỳ phòng thí nghiệm nào tại bất cứ đâu [4]

Các dữ liệu thu được trong quá trình tính toán độ không đảm bảo đo sẽ được so sánh với tiêu chuẩn của độ không đảm bảo Kiểm tra phải được thực hiện thường xuyên trong quá trình thực hành thường quy Nếu tiêu chuẩn đạt được và biến thiên phân tích nhỏ hơn biến thiên sinh học một cách hợp lý, các xét nghiệm nghiệm có thể được sử dụng trong chẩn đoán và theo dõi trên lâm sàng Nếu tiêu chuẩn độ không đảm bảo đo không đạt được, cần tìm nguyên nhân và khắc phục Nếu việc làm CVimp giảm là không thành công hoặc không khả thi, thì chúng ta cần xem xét sự thay đổi một phương pháp mới [4]

Có ba mức độ chấp nhận của tiêu chuẩn chất lượng cho độ lệch dựa vào

sự biến đổi sinh học [4]:

Tối ưu: Blab ≤ 0.125 2 2

inter intra CV

CV +

Mong muốn: Blab ≤ 0.250 2 2

inter intra CV

CV +

Tối thiểu: Blab ≤ 0.375 2 2

inter intra CV

CV +

Trong đó :

• Blab : Độ lệch phòng xét nghiệm

• CVintra : Hệ số biến thiên sinh học trong một cá thể của một chất phân tích cụ thể

• CVinter : Hệ số biến thiên sinh học giữa các cá thể

1.4.2 Xác định đại lượng đo (measurand)

Đại lượng đo là số lượng cần được đo hoặc đặc tính có thể định lượng được của chất phân tích sử dụng trong hệ thống đo lường (ví dụ: hoạt độ enzym, nồng độ khối lượng,…) Độ không đảm bảo đo và độ lớn các thành phần của độ không đảm bảo đo phụ thuộc chủ yếu vào định nghĩa đại lượng

đo Đại lượng đo yêu cầu mô tả về cả số lượng dự định sẽ đo và nếu định nghĩa về đại lượng đo sẽ phụ thuộc vào quy trình đo lường (ví dụ như hoạt độ xúc tác của các enzym; đặc hiệu kháng thể ) [4]

Cần lưu ý rằng hầu hết các phương pháp đo lường không trực tiếp định lượng chất cần phân tích [4] Ví dụ, đếm số lượng các loại tế bào bạch cầu trong nước tiểu là trực tiếp đo được số lượng Ngược lại, đối với nồng độ canxi trong huyết thanh, số lượng dự định sẽ được đo là số nguyên tử canxi trong một thể tích nhất định của huyết thanh, nhưng sẽ không thể đo được trực tiếp, mà sẽ đo nhờ vào đặc tính khác của canxi, ví dụ như lượng ánh sáng hấp thụ tại bước sóng cụ thể khi canxi tạo phức với chất nhuộm màu Qua tín hiệu của dung dịch chuẩn đã biết nồng độ của canxi, chúng ta có thể tính nồng

độ canxi trong huyết thanh dựa vào tín hiệu của mẫu huyết thanh nhờ công thức tính Nếu canxi huyết thanh được đo bằng phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử, lượng được đo sẽ khác nhưng đại lượng đo không thay đổi.Định nghĩa về bất cứ đại lượng đo (measurand), yêu cầu mô tả :

+ Hệ thống sẽ được đánh giá (ví dụ: huyết tương, nước tiểu, máu toàn phần…)

+ Thành phần của hệ thống (chất phân tích: glucose, bạch cầu…)

+ Đơn vị đo (ví dụ: nồng độ lượng chất, hoạt độ…)

Ví dụ: đo ALP huyết thanh đơn vị đo là hoạt độ (U/L), thành phần (chất phân tích) là ALP, hoạt độ ALP huyết thanh là đại lượng đo Tuy nhiên, cần định nghĩa cả điều kiện đo lường (pH, lực ion, chất xúc tác…)

1.4.3 Làm tròn kết quả

Phòng xét nghiệm nên báo cáo kết quả xét nghiệm với các con số có ý nghĩa, phù hợp với kết quả độ không đảm bảo đo Phòng xét nghiệm cần phải nhận thức được rằng kết quả xét nghiệm của bệnh nhân cần được báo cáo với

số chữ số có ý nghĩa thích hợp vì việc sử dụng số không thích hợp có thể ảnh hưởng đến diễn giải kết quả xét nghiệm trên lâm sàng [4]

Theo GUM, độ không đảm bảo đo kết hợp và mở rộng cần có tối đa 2 con số có ý nghĩa Giá trị đo lường được sẽ có cùng số thập phân như độ không đảm bảo Ví dụ, nếu x = 21.272 mg với U = 1.1 mg, x nên được làm tròn đến 21.3 mg Trong phòng xét nghiệm y khoa, thường làm tròn độ không đảm bảo với số chữ số tương tự như kết quả xét nghiệm báo cáo

Làm tròn có thể ảnh hưởng đến việc thống kê các kết quả (ví dụ như dữ liệu kiểm soát chất lượng, so sánh các kết quả, thử nghiệm lâm sàng) và nên được thực hiện ở bước cuối cùng của việc tính toán kết quả [4]

1.4.4 Đánh giá lại độ không đảm bảo đo

Trong tài liệu về không đảm bảo, độ không đảm bảo đo bao gồm các thành phần gây nên độ không đảm bảo, cần biết cách tính toán và kết hợp các thành phần này

Độ không đảm bảo phải được đánh giá lại nếu bất kỳ nguồn gốc của độ không đảm bảo (được liệt kê trong nguyên nhân gây ra độ không đảm bảo) thay đổi đáng kể Ví dụ, trong giai đoạn xét nghiệm, các thay đổi quan trọng như hệ thống đo lường, chất chuẩn, thuốc thử hoặc quy trình xét nghiệm thường phản ánh trong hệ thống nội kiểm tra chất lượng Nếu các thay đổi này

là có ý nghĩa, việc đánh giá lại độ không đảm bảo đo là cần thiết

Độ không đảm bảo đo của thuốc thử cung cấp bởi nhà sản xuất chỉ được tiếp tục sử dụng cho lô mới nếu nhà sản xuất đã thẩm định đặc tính kỹ thuật

và độ ổn định của lô mới phù hợp với đặc tính của lô cũ Nếu độ không đảm bảo của lô chuẩn mới thay đổi trong giấy chứng nhận của nhà sản xuất, độ không đảm bảo đo cần được tính lại [4]

1.5 CÁC PHƯƠNG PHÁP TÍNH ĐỘ KHÔNG ĐẢM BẢO ĐO

Với các phòng xét nghiệm lâm sàng, điểm cuối cùng trong ước tính độ không đảm bảo đo là xác định khoảng giá trị mà giá trị thật của phép đo nằm trong đó ở một độ tin cậy nhất định [4] Độ không đảm đo có thể được ước tính bởi hai phương pháp tiếp cận khác nhau:

- Phương pháp “bottom-up” theo nguyên tắc GUM được dựa trên một phân loại toàn diện của phép đo, trong đó mỗi nguồn gốc có thể của sự không đảm bảo sẽ được xác định và định lượng Các ước tính của độ không đảm bảo, được biểu diễn như các độ lệch chuẩn, được gán cho từng thành phần riêng biệt của quy trình sẽ được kết hợp sử dụng các quy tắc để xác định “ độ không đảm bảo phối hợp” của kết quả

- Phương pháp “top-down” sử dụng các thông tin có sẵn trong phòng xét nghiệm về hiệu năng của xét nghiệm như xác nhận phương pháp trong phòng xét nghiệm, các dữ liệu nội kiểm trong phòng xét nghiệm và so sánh liên

phòng xét nghiệm, để tính toán ước tính độ không đảm bảo tổng thể liên quan đến kết quả xét nghiệm của một hệ thống đo lường cụ thể.

Các phương pháp khác: kết hợp hoặc thay đổi hai phương pháp trên Trong cả hai trường hợp, độ lệch cần được xem xét riêng rẽ và việc ước tính

độ không đảm bảo của độ lệch sẽ được bao hàm trong độ không đảm bảo đo kết hợp hay không phụ thuộc vào độ lớn của nó so với các nguồn khác gây ra

độ không đảm bảo đo [4].

1.5.1 Phương pháp bottom-up:

Bước 1 Xác định đại lượng đo:

Bước đầu tiên là xác định đại lượng đo, đây là một tuyên bố rõ ràng về cái gì được đo Ngoài ra cũng có yêu cầu việc diễn giải định lượng (phương trình định lượng) liên quan giá trị của đại lượng đo đến các tham số mà nó phụ thuộc Tất cả các thông tin cần được có trong “Quy trình thực hành chuẩn” (Standard Operating Procedure -SOP) hoặc mô tả thiết bị và mô tả phương pháp của nhà sản xuất

Bước 2 Xác định nguồn gốc gây ra độ không đảm bảo

Tất cả các nguồn gây ra độ không đảm bảo cần được tập hợp lại trong một danh sách Nói chung là cần thiết để xây dựng và ghi lại một danh sách các nguồn gốc của độ không đảm bảo liên quan đến một phương pháp phân tích Trong xét nghiệm y tế, nguồn gốc của độ không đảm bảo thường được nhóm lại thành giai đoạn trước phân tích, phân tích và sau phân tích

Trong lĩnh vực xét nghiệm y khoa, khi có thể sẽ áp dụng biện pháp để giảm thiểu độ không đảm bảo ở giai đoạn trước và sau xét nghiệm bằng cách

áp dụng các quy trình chuẩn cho việc chuẩn bị bệnh nhân, đào tạo nhân viên, thu thập mẫu bệnh phẩm, vận chuyển, lưu trữ và giới hạn thời gian cho đến

khi tiến hành đo lường Lưu ý rằng sai lầm, sai sót hoặc bất kỳ việc không tuân thủ kỹ thuật đều không được coi là một phần trong yếu tố gây độ không đảm bảo.

Để thuận lợi ta bắt đầu với phương trình đo được sử dụng để tính toán giá trị đo Các mối quan hệ của các đại lượng đầu vào trong phương trình sẽ xác định độ không đảm bảo của chúng (như SD hoặc CV) sẽ được kết hợp khi tính độ không đảm bảo phối hợp Tất cả số liệu đầu vào trong các phương trình có thể có độ không đảm bảo liên quan đến các giá trị của chúng và do vậy sẽ góp phần vào độ không đảm bảo tổng hợp Sử dụng sơ đồ nguyên nhân

và kết quả là rất hữu ích trong việc liệt kê các nguồn gốc của độ không đảm bảo.Nó giúp kết hợp các tác động tương tự, tránh tính hai lần các nguồn gốc gây ra độ không đảm bảo, loại bỏ các nguồn gốc có thể bỏ qua hoặc chỉ có tác động không đáng kể

Bước 3 Định lượng thành phần không đảm bảo

Một khi các nguyên nhân gây ra độ không đảm bảo và mối liên hệ giữa chúng đã được xác định, bước tiếp theo chúng ta cần định lượng độ không đảm bảo phát sinh từ những nguồn đó Các thông tin có thể được thu thập được ở phòng xét nghiệm (xác nhận phương pháp, nội kiểm tra chất lượng),

từ các nhà sản xuất trang thiết bị (thông số kỹ thuật và báo cáo thử nghiệm),

từ chứng chỉ (ví dụ như của chất chuẩn và thuốc thử), và từ các tài liệu khoa học (ví dụ như biến thiên sinh học)

Tất cả các thành phần không đảm bảo nên được biểu diễn dưới dạng như

độ lệch chuẩn (SD) hoặc là độ lệch chuẩn tương đối (CV) Độ không đảm bảo loại A thường được ước tính là SD của các phép đo lặp đi lặp lại Độ không đảm bảo loại B được dựa vàotài liệu, giấy chứng nhận hiệu chuẩn, kinh nghiệm chuyên môn…

Ví dụ, nếu kết quả xi là một kết quả báo cáo trong giấy chứng nhận, kết quả thường trình bày dưới dạng xi ± U, nơi mà xi là ước lượng tốt nhất và U

là độ không đảm bảo mở rộng tính bằng cách nhân u(xi) độ không đảm bảo tiêu chuẩn với hệ số bao phủ k ở mức độ tin cậy nào đó Độ không đảm bảo chuẩn do đó sẽ được tính dưới dạng:

u(xi) = U / kThông thường, kết quả của một giá trị cụ thể về số lượng đo có thể bị ảnh hưởng bởi các yếu tố không có trong phương trình đo lường, chẳng hạn như ảnh hưởng của chất nền,độ nhạy thiết bị Đến mức mà những yếu tố này

có thể được xác định, độ không đảm bảo đóng góp vào của mỗi yếu tố được định lượng, một hàm số mở rộng có thểđược xác định

Bước 4 Tính độ không đảm bảo đo chuẩn

Theo ước tính của từng thành phần hoặc của nhóm các thành phần độ không đảm bảo và biểu diễn chúng như là độ không đảm bảo chuẩn, giai đoạn tiếp theo là tính toán độ không đảm bảo phối hợp bằng cách sử dụng “luật đơn giản của các quy tắc” Mối quan hệ chung giữa Uc độ không đảm bảo kết hợp của một giá trị và độ không đảm bảo của các tham số độc lập x1, x2, xn mà

nó phụ thuộc là:

Phương trình : uc2(y) = ∑ = (∂∂ ) 2 2 ( )

1 i i

N

x f

Trong đó:

• Uc(y) = độ không đảm bảo chuẩn kết hợp

• f = hàm số mô tả các ước tính của đại lượng đo y theo xi

• u(xi) = độ không đảm bảo chuẩn cho mỗi thành phần gây ra

Bước 5 Tính độ không đảm bảo mở rộng

Nhân độ không đảm bảo chuẩn phối hợp (Uc) với hệ số k (hệ số bao phủ, thông thường k=2 với độ tin cậy 95%) :

U= k*uc(y)

Độ không đảm bảo mở rộng là cần thiết để cung cấp cho một khoảng giá trị mà ở đó kết quả sẽ có độ tin cậy cao Khi phân phối xác suất được đặc trưng bởi y và Uc(y) là khoảng phân phối bình thường, k = 2 tạo ra một khoảng giá trị có mức độ của sự tin cậy khoảng 95% và việc k = 3 tạo ra một khoảng giá trị có mức độ của sự tin cậy khoảng 99%

Bước 6 Thông báo độ không đảm bảo đo

Khi báo cáo kết quả của một giá trị đo, tối thiểu nên:

(a) Cung cấp một mô tả đầy đủ về cách xác định Y

(b) Đưa ra kết quả đo lường là Y = y ± U và cung cấp các đơn vị của y

và U

(c) Cho giá trị của yếu tố k được sử dụng để có được U

(d) Cung cấp gần đúng mức độ tin cậy liên quan đến khoảng giá trị y ± U

Để sử dụng trong phòng xét nghiệm y khoa, độ không đảm bảo mở rộng

U nên được làm tròn để có cùng chữ số thập phân với kết quả đo [4]

1.5.2 Phương pháp top-down:

Trong phương pháp này, độ không đảm bảo đo phối hợp của phép đo được ước tính trực tiếp từ các kết quả đo lặp lại của các mẫu được lựa chọn

Phương pháp này được ưa dùng trong phòng xét nghiệm y khoa thường quy một phần vì sự có sẵn của các vật liệu kiểm tra chất lượng, và vấn đề thực tế

là nhiều quy trình đo lường giống như hệ thống “hộp đen” (black box) trong

đó các thành phần không thể tiếp cận được để đánh giá độ không đảm bảo Phương pháp được ưa dùng là sử dụng dữ liệu từ kết quả nội kiểm và ngoại kiểm, giả định rằng vật liệu QC tương tự như mẫu bệnh phẩm của bệnh nhân

Dữ liệu đo lường nên được thu thập tối thiểu là trong 6 tháng nhưng còn phụ thuộc vào tần suất thực hiện xét nghiệm Điều này giúp đảm bảo các biến thiên do kỹ thuật viên khác nhau, các lô chất chuẩn và thuốc thử, chuẩn lại, bảo dưỡng thường quy trang thiết bị có thể được thâu tóm trong số liệu Với các phương pháp mới, đòi hỏi tối thiểu 30 lần phân tích lặp lại trên mẫu QC thích hợp hoặc vật liệu tham chiếu để tính toán độ lệch chuẩn tạm thời Nếu

độ lệch có ý nghĩa hoặc biết được, cần loại trừ hoặc giảm thiểu bằng hiệu chuẩn lại Độ không đảm bảo của giá trị sử dụng cho bất kỳ hiệu chuẩn độ lệch nào nên được tính và nếu tương đối lớn so với độ không chính xác, sẽ được bao gồm trong tính toán độ không đảm bảo đo chuẩn phối hợp Các dữ liệu về độ chính xác và xác thực từ các thực nghiệm thẩm định phương pháp

có thể sử dụng chừng nào không có các thay đổi có ý nghĩa trong quá trình sau khi thẩm định

Phương pháp top-down thường hay được sử dụng hơn phương pháp bottom-up để ước tính độ không đảm bảo đo Tuy nhiên, phòng xét nghiệm sẽ quyết định lựa chọn phương pháp thích hợp nhất với hoàn cảnh của mình và các dữ liệu có sẵn

Bước 1: Xác định chất phân tích:

Xác định đại lượng đo bao gồm cả hệ thống chứa chất phân tích quan tâm, ví dụ máu toàn phần, huyết tương

Bước 2: Ước tính độ không chính xác của phép đo

Độ không chính xác được viết tắt Uprec là độ không đảm bảo do sai số ngẫu nhiên của quá trình xét nghiệm

Uprec được ước tính từ độ lệch chuẩn tương đối (RSD-relative standard deviation) hay CV của các mức vật liệu nội kiểm theo phương trình sau:

2

)]

1(

)1([

2 1

2

2 2 1

2 1

−+

−+

−

=

L L

L L L

L prec

n n

n x RSD n

x RSD U

Trong đó:

• RSDL1 là độ lệch chuẩn tương đối của vật liệu kiểm tra mức 1

• RSDL2 là độ lệch chuẩn tương đối của vật liệu kiểm tra mức 2

Nếu có nhiều mức vật liệu kiểm tra được sử dụng, công thức ước tính

Uprec như sau:

)1 (

)1(

)1(

)]

1(

)1(

)1(

[

2 1

2 2

2 2 1

2 1

−+

−+

−

−+

+

−+

−

=

k L

L

k k L

L L

L prec

n n

n

n x RSD n

x RSD n

x RSD U

Bước 3: Ước tính độ lệch của phép đo:

Nếu độ lệch là đáng kể, và thường được ước tính bởi một tài liệu tham khảo, sửa chữa một giá trị đo cho xu hướng này sẽ làm tăng độ không đảm bảo kết hợp Độ không đảm bảo của độ lệch bao gồm :

(a) Độ không đảm bảo trong giá trị tham khảo được gán cho các tài liệu tham khảo được sử dụng để đánh giá độ lệch U(Cref ) có sẵn kèm với chứng chỉ.(b) Tiêu chuẩn lỗi có ý nghĩa của phân tích (Urep) (Urep = SDM = SD/√n)

Do đó, độ lệch của một nghiên cứu đánh giá bằng giá trị độ lệch ± ubias

Độ không đảm bảo độ lệch được tính bằng cách kết hợp hai độ không đảm bảo :

Phương trình :

2 2

)( ref rep

Nghiên cứu hoặc tài liệu tham khảo phù hợp không có sẵn, phương pháp tiếp cận thay thế có thể sử dụng, ví dụ như những đánh giá kết quả ngoại kiểm Nếu tách ra hoặc kết hợp thực hiện, độ không đảm bảo thích hợp nên được bao gồm độ không đảm bảo kết hợp

Bước 4: Tính độ không đảm bảo đo phối hợp:

Trường hợp 1: Nếu Ubias< 10% Uprec, độ lệch sẽ được loại bỏ và độ không đảm bảo đo ước tính chỉ dựa trên Uprec, nghĩa là:

Uc= UprecTrường hợp 2: Nếu Ubias ≥ 10% Uprec, độ không đảm bảo đo phối hợp sẽ được tính theo công thức sau:

2 2

bias prec

Bước 5: Tính độ không đảm bảo đo mở rộng:

Độ không đảm bảo đo mở rộng Ue được tính bằng nhân độ không đảm bảo đo phối hợp Uc với hệ số bao phủ k Nghiên cứu lựa chọn hệ số bao phủ

là 2 cho độ tin cậy là 95%

Ue = Uc x 2

Bước 6: Thông báo độ không đảm bảo đo:

Báo cáo độ không đảm bảo đo mở rộng cho các xét nghiệm theo cấu trúc:

Kết quả xét nghiệm (ghi tên chất phân tích) có độ không đảm bảo đo là

± (Ue) % Độ không đảm bảo đo công bố là độ không đảm bảo đo mở rộng với hệ số bao phủ 2, độ tin cậy 95% [4]

1.6 Ý NGHĨA ĐỘ KHÔNG ĐẢM BẢO ĐO ĐƯỢC ỨNG DỤNG TRÊN LÂM SÀNG

Cần có một bảng tóm tắt các thông tin độ không đảm bảo đo cho tất cả các xét nghiệm định lượng ở trong phòng xét nghiệm và sẵn sàng cung cấp cho bác sĩ lâm sàng khi cần thiết Việc sử dụng độ không đảm bảo đo như số liệu đã kiểm chứng đánh giá có ý nghĩa so sánh với kết quả trước đó

Theo thống kê, hai kết quả cần phải có độ khác nhau lớn hơn 2.77 x CVimp (có nghĩa là 1.96 x √2 x CVimp) với độ tin cậy 95% mới được xem là khác nhau

có ý nghĩa CV hoặc SD cũng có thể được sử dụng cho các tính toán này

Ví dụ: Nồng độ Na+ trong huyết tương đo được là 150mmol/L, với độ không đảm bảo đo chuẩn (U) là 1 mmol/L Một mẫu mới được đo vài giờ sau

đó Sự khác biệt tối thiểu (minimal difference) mà có thể được coi là đáng kể là:

2.77 x 1 = 2.77 mmol/L = 3 mmol/Lnghĩa là phòng xét nghiệm có thể khẳng định với độ tin cậy 95% rằng kết quả

147 và 153mmol là kết quả đo lường khác nhau từ kết quả 150mmol/L sử dụng quy trình kỹ thuật trên

Vì thế, nếu hai kết quả khác nhau 3,7% trở lên (tương đương với 5,5 mmol/L) thì hai kết quả khác nhau, với độ tin cậy 95%

Khi chúng ta muốn tìm hiểu xem 2 kết quả xét nghiệm của cùng một bệnh nhân là khác nhau đáng kể, theo quan điểm sinh học thì cả biến đổi sinh học cũng như độ không đảm bảo đo cần được xem xét Hai kết quả cần phải khác nhau lớn hơn 2.77 CVimp và CVintra (nghĩa là > 2,77 2 2

intra

CV

CV imp+ ) thì chúng mới khác nhau về đo lường và biến đổi sinh học với độ tin cậy 95% Đây là

sự khác biệt giữa hai kết quả có thể được giải thích là do ảnh hưởng của sự kết hợp giữa độ không đảm bảo đo và biến đổi sinh học trong nội bộ cá thể

Cần lưu ý rằng các tính toán được dựa trên giả định phép đo dưới sự thay đổi sinh học của người khỏe mạnh giống như người bị bệnh

Ví dụ: CVimp của Creatinin được xác đinh bởi các giá trị QC là 1,2% Biến thiên sinh học Creatinin trong một cá nhân (CVw từ Westgard website)

Nếu chúng ta muốn nhận định một kết quả bệnh nhân là khác nhau đáng

kể đối với giá trị trên của khoảng tham chiếu, ví dụ PSA có giới hạn trên là 4,0 ng/L; ở đây chúng ta chỉ quan tâm đến một phía của phân phối chuẩn, vì vậy trong trường hợp này 95% độ tin cậy là 1 , 65x2x SD = 2,3 x SD Nên nếu

SD = 0,1 thì kết quả cần phải đạt ≥ 4,2ng/L thì mới xem như là khác biệt với

4 ng/Lvới độ tin cậy 95% Trong ví dụ này, nếu biến thiên sinh học trong một

cá thể rất lớn so với độ không đảm bảo đo, biến thiên sinh học cần được bao gồm như ví dụ trên [4]

1.7 CÁC PHƯƠNG PHÁP XÉT NGHIỆM HÓA SINH CƠ BẢN

Hiện nay, các xét nghiệm hóa sinh được tiến hành trên các máy xét nghiệm hoá sinh tự động chủ yếu sử dụng 3 phương pháp: đo quang, điện cực chọn lọc ion và miễn dịch đo độ đục

1.7.1 Phương pháp đo quang:

Nguyên tắc cơ bản: Khi ánh sáng đi qua dung dịch chất phân tích, các

photon trong tia sáng sẽ bị hấp thụ bởi các phân tử trong dung dịch Sự giảm cường độ chùm tia sáng tỉ lệ với nồng độ của dung dịch chất phân tích Đo sự giảm cường độ ánh sáng, từ đó xác định nồng độ của mẫu thử [9]

1.7.2 Phương pháp miễn dịch đo độ đục

1.7.2.1 Phương pháp đo độ đục ( Turbidimetry và nephelometry)

Một số phương pháp xét nghiệm dựa trên sự tạo thành các phần tử không tan tương tác với ánh sáng chiếu qua dung dịch Chất phân tích phản ứng với thuốc thử tạo các phần tử không tan treo lơ lửng trong dung dịch Ánh sáng được truyền qua một bộ lọc để tạo ra ánh sáng có bước sóng biết trước, sau đó được truyền qua một cuvette có chứa dung dịch Khi ánh sáng tác động vào các phần tử này, một lượng sẽ bị phản xạ theo các hướng khác nhau Khi nồng độ chất phân tích tăng lên, lượng các phần tử tạo thành tăng, kết quả là lượng ánh sáng phản xạ bởi các phần tử này tăng lên và lượng ánh sáng truyền qua dung dịch giảm [10]

Có thể đo lượng ánh sáng mất đi khi đi thẳng qua dung dịch (turbidimetry) hoặc lượng ánh sáng phản xạ tăng lên ở hướng khác (nephelometry) Trong phương pháp đo độ đục (turbidimetry), đầu dò (detector) được đặt trên đường thẳng của ánh sáng tới và lượng ánh sáng tới đầu dò sẽ giảm khi số lượng phần tử tăng lên Trong phương pháp đo độ đục tán xạ (nephelometry), đầu

dò được đặt ở một góc để tránh thu nhận ánh sáng qua dung dịch, lượng ánh sáng tán xạ tới đầu dò tăng khi số lượng phần tử trong dung dịch tăng lên [10].

1.7.2.2 Miễn dịch đo độ đục

Miễn dịch đo độ đục là phương pháp đo độ đục để xác định nồng độ của chất phân tích Sau khi thêm thuốc thử, kháng nguyên và kháng thể sẽ kết hợp với nhau tạo thành phức hợp miễn dịch dạng hạt, làm tăng độ đục của mẫu Khi ánh sáng đi qua mẫu thử, một phần bị tán xạ bởi mẫu, một phần được hấp thụ bởi mẫu và một phần còn lại đi qua mẫu Đo sự hấp thụ ánh sáng bởi mẫu, nồng độ của chất phân tích sẽ được xác định bằng cách so sánh với dung dịch chuẩn có nồng độ đã xác định [11]

1.7.3 Phương pháp điện cực chọn lọc ion ( Ion Selective Electrode)

* Nguyên lý:

Phương pháp đo điện thế (potentiometry) dựa trên việc đo lường hiệu điện thế giữa hai điện cực Một điện cực đo lường tiếp xúc với ion trong dung dịch Điện thế giữa điện cực này và điện cực chuẩn (stable reference electrode) sẽ thay đổi khi nồng độ ion trong dung dịch thay đổi Phương pháp

đo điện thế thích hợp nhất cho việc đo lường các ion (chất điện giải) như Na+,

K+ và Cl- Sự thay đổi điện thế là một hàm phức của nồng độ các ion và có mối liên hệ logarit được thể hiện bằng phương trình Nernst [10]

Phương pháp điện cực chọn lọc ion dựa trên nguyên lí của kỹ thuật đo điện thế (potentiometry), sự chênh lệch điện thế giữa điện cực chuẩn và điện cực chỉ thị (điện cực đo lường) tỷ lệ thuận với nồng độ của ion được đo lường Một điện cực chọn lọc ion lý tưởng bao gồm một màng mỏng có khả năng thẩm thấu một loại ion đặc hiệu.Với sự có mặt của ion đặc hiệu, màng sẽ