Góp phần kiểm định một số mẫu nấm men giầu selen

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC Dược HÀ NỘI BỘ MÔN Vố Cơ HOÁ LÝ GÒ? PHẤN KlẩM i)ỊHH MỘT số; MẦU NẤM MEN GlXu SE LEM í (K H O Á LUẬN T Ố T N G H IỆ P Dược SỶ ĐẠI * ! HỌC KHOÁ 1995 - 2000 ) Người thực hiện: Lè Kim Huệ Người hướng dẩn: PTS Nguyễn Quang Thường PGS TS Lè T hành Phước Nơi thực hiện: Bộ Môn Vô Cơ Hóa Lý Thời gian thực hiện: 3/2000 - 5/2000 Hà nội - 2000 _ ! , \2 V p j.ỈU » 0,0 ' LỜI CẢM ƠN Tòi xin bÀv tỏ lòng kính trọng biết ơn sAu sắc tiên: P I'S N g u y ẽ n Q u a n g ll ii r n g PGS TS Lê T h n h Phước Nliững ncười (tã trực tiếp hư ng clĂn ho n nh c ổ n g trình tốt n g h iệ p l o i c ũn g chAn thành cảtĩi ƠI1 lỉiÀy cô, cán kỹ thuật viên bo m ò n Vô Cơ ỉ l o Lý (lã tận tình gi úp d ỡ thời gian 111ực khoá liKln tôt n g hi ệ p Hà nội, /2 0 Sinh viên: Lc Kim 1luệ MỤC LỤC ■ ■ ĩ ) ă l v n n ( l ề Tổng (Ịtian 2.1 Sclcn sinh h ọ c 2.2 'ĩlnli liìnli sử (lụng hợp cliíít củaSeien Y-Dược 2.3 Sự chuyển hoá Sclcn vàcác hợp chất Seientrongthực vẠt .5 2.4 Sclcn níím men .fl 2.4.1 Vài nét (lại cương nấm i n e n 2.1.2 Nuôi cấv níím men giổu S e ie n 2.4.3 Một sô tiêu chuẩn nấm men theo Dưực Điển Plutp 2.5 Một số cácli xác định liêu CỔI1 kiểm định 2.5.1 Xác (lịnh độ ẩm 2.5.2 Xác (lịnh tro Sulfat X 2.5.3 Tliir kim loại n ặ n g K 2.5.4 Phương pháp vổ hoá lĩiÃu tliực vạt tìm Seien 2.5.5 Plnrơng pháp loại tạp cliất 2.5.6 Định tính Selen 10 2.5.7 Mộ! số phương pháp định lượng Selen 11 Thực nghiệm kết q u ả 12 Nguyên liệu, hoá chất phương tiện 12 3.2 Nội đung phương pháp kiểm định .13 3.2.1 Cảm (Ịiiati I 3.2.2 Xác (lịnli (lộ Ảm 13 3.2 V Xác (lịnh tro Sulfat 11 3.2.4 n u r kim loại n ặ n g 16 3.2.5 Định lính Seien nấtn m e n .17 3.2.6 Định lượng Sclcn nấm men 18 3.3 Kết (Ịiiíi thực nghiệm nhận xét ! R 3.3.1 Cảm (|UHĨ1 18 3.3.2 Kết quà (lộ Ảm 19 3.3 A Kci Iro sulíat ỉ 3.3.1 KOI (ỊIKI tliir kim loại 3.3.5 Kết (Ịiià định lính Seien nấm m en 22 3.3.6 Kết (ỊU;\ tlịnli lượng Selen nấmm en .24 Kết viì (lồ xu íìt .27 Tài liỌu tham k h ả o .28 ĐẶT VẤN ĐỂ Seien nguyên tố vi lượng cẩn thiết cho thể Trong Illume nãm q u a (ỉn c ó TÍÌ! nhiều công trình khoa h ọ c n g h i ê n c ứ u VC v a i t r ò c ủ a s e i e n t r o n g V hoe Người la nhạn lliÁy rằng, seien hợp ciiÁt ciìa I1Ó có lính ( hong ỏxy hoá tối Chúng có tác dụng góp phẩn loại bỏ gốc tự hay dạng õxv lioạt dộng sinli thể Sự gia tăng mức gốc tự neiiyên nhíìn đẵn tiến nhiều trình bệnh lý Iihư: bệnh tim mạcli ling Ihư trình vìCmii trình lão lioá Từ (ló người ta (ập trung theo hướng nghiên cứu tìm dạng liựp chAl cliứa sclcĩi dộc có hoạt tính sinh học cao Nấm men loại có klià nâng đổnc lioá sclcn vô tạo liợp chất seien hữu dộc Những nAiii men có chứa nhiều vitamin nhóm B acid ainin không tluiv tliê ilirợc Người la (lã tic'll liàiili nuôi cấy nấm men môi trường có chứa selcn vô Iihữne oliổu kiện thích hợp, tạo chế phẩm bioselen có tác dựng sinh học Những nấm men giàu seien dã trở thành nguồn nguvcn liệu (lể sân xuAI tnột sò' thuốc Nhiều chê phẩm thuốc hãng nước có chứa I1ÁĨ11 men Ịiimi seien nlur: Rclaf.Cigelton, Youngton, Celium, Binaclc, Snvloni, hoteclon clmiỉĩ có bán thị trường Việt Nam, vấn dề nuôi cấy nấm men giàu seien dã (lược bọ mồn ( Yuiíi Neliiệp Dược môn Vô Cơ lỉoá Lý - Trường Đại Học Dược Hà Nội quan tíìm Đíh lurớne nghiên cứu mong tạo nguồn nguvên liệu làm thuốc Vì việc kiểm dịiìli số tiêu như: độ ẩm, độ tro, kim loại nặng, định tính, (lịnh lirựng sclcn số rnẵii nấm nem VÍÍĨ1 c!c CÀU clưực khảo sái ỉ)ó IÌ1 nội dung khoá luận Chúng hy vọng với kết C|im kiỏĩii (lịnli liêu này, có lliẽm thông tin cho trình ngỉiiôn cứu Díìm men n:\v (’t bò môn Vô Cơ Hoá Lý cìược lốt I TỔNG QUAN 2.1 Seien sinh học [1] Seien hợp chất nổ có tâm quan trọng lớn sinh học IiìCmi (lại Nguyên tố seien dược phát từ năm 1817 Trong bảng tuôn hoàn c;íc nguvẽn tố, sclcn nhóm 6A với oxy, lưu huỳnh telu Sclcn chất có dộc tính cao, tương dương với As20 , Nguyên nhfm cúi! bệnh kiềm động vạt ăn cỏ ngộ dộc trường dien seien (bônh kiềm yếu (lirợc phát súc vật sống vùng đất giàu seien, (lAt kiềm Ino (liều kiỌn cho sclcn dỗ hấp thụ vào Ccìy cỏ) Một số trường, hợp ngộ (lộc trườn í! (liễn seien neười dã xảy Nliirnsz seien nguyên lố cẩn thiết cho sức khoe người đông vạt Ne;\v nay, tác dụng seien dược phát hiộn ngliiOn cứu Việc thiêu neuyên tố seien gfly cho người (lộng vật nhicu tííc hai Có tới 40 bệnh người động vật ctưực cho thiếu seien Troĩiiỉ lỉiể người, hợp chất seien có tính chất antioxydant (là cliíít có tác (lụng pliân huỷ peoxyt, trung hoà gốc tự (1(1 sinh bệnh) Hợp clìẩt cua sclcn cổ tác dụng phAĩi huỷ peoxyl nít IỚĨ1 Như (linietyl diselenua có tác dụng ngăn chặn oxy hoá acid oleic mạnh aíc (lialkyl (Jisiilfua Các hợp chất seien có khả chống oxy lioá cùa li pill màng tê' hào nên đảm bảo toàn vẹn làm châm trình lão lioá cùa lế bìio 'l ác dụng plifln liuỷ CÍÍC lypopeoxyt seien ngăn cliặn trình vữa xơ (ỉộng mạch Theo Sokolop(1977) ngăn chặn liiện tượng vói lioá (lọng mạch thừa vitamin D Seien Seien có vai trò lất quan trọng hình lluình phan Imý aíc goc lự ilo thể Gốc tự tiểu phan có điện tử cô dộc Tiểu phíln (.!() có lliể mành pliíìn tử, phAti tử ion Trong thể có gốc tự bền kliông bén Các gổ'c tự clo không bền có tác đụng phá liuỷ mạnh Gổc tự bén trung hoà gốc lự gAy bệnli Trong thổ gốc tự bền chủ yếu coenzymQ, mà seien nguyên tố quan trọng sinh tổng hợp coenzyniQ Do dó tính chất antioxydant seien không chill hợp chất mà quan trọng xúc tác cho tổng hợp coenzymQ Nílm 1911 Wasserman chữa khỏi ca ung lliir vú thực nghiệm chuột hợp chất seleneosin Vào năm 70 người ta phát sử dụng seien nồng tlộ lliÁp có tác ílụng ngăn chặn phát sinh ung thư điều trị ung thư Ngoài sclcn có tác dụng bảo vệ thể khỏi tác dụng huỷ hoại bời tia phóng xạ, xạ có lượng cao Tác dụng dược giải thích hoạt tính anlioxydant hợp dl AI Clin seien coenzymQ tạo thành CƯ thể dùng seien Selen tham gia vào hệ thống miễn dịch Ngày người ta dã chứng minh seien có vai trò sinh tổng hợp protein có thành phán nhiều loại protein Selen tham gia vào hình thành globulin miễn dịch cíiĩig nliir piotein khác Selen tliam gia vào phán ứng quang hoá xảy võng mạc, đàm báo loàn vẹn tliuỷ tinh thể Khi cho chuột ăn phẩn thiếu seien tlifl'y xuất (lục íliuỷ (inh thể Khi điều trị hồi phục vitaminE, vitamin c , n o m d llk lo rk l cliñl ,11ào thay đirơc sclcn Iroiitỉ việc ngăn chặn tượng dục thuỷ tinli thể Bênh loạn ckrỡng hay bệnh trắng súc vât có nguyên nlifln clìíĩili !à thiếu sclcn dinh dưỡng Bệnh gây tổn thương lim v;ì kèm llico loạn (lưỡng gan thận Khi dùng vitamin R kế( hợp với seien diều trị ÁI có hiệu Ngoài tác dụng seien dối với bệnh tim mạch tlirực thổ hiỌn trốn tác đụng hạ huyết áp Tác dụng seien cocnzymQ ức chế men collagenasc nêti (lảm bảo toàn vẹn collagen, mà thìy điều kiện Iráuh bệnh tim mạch Scỉcĩi còti có lác dụng giảm dộc tính nhiều ion kim loại nhiều chai (lộc khác Seien có tác dụng chống viêm khớp Một số tác giả giải thích lác ilụim nàv (lo seien kết hợp với vitamin E làm ổn ciịnh thể liêu bào, cld ức chế hoạt lính men collagenase chế chống viêm 2.2 Tình hình sỉr dụng hợp chất seien Y - Dược Các dạng seien vô dược sử dụng Irong mội số chc' phẩm thuốc nlur: Selen Sulfid dã (lược dùng clưới dạng dịch treo 2,5% clổ bôi (la vói mục dich chống nấm có hoạt phổ hẹp (với loài men ưa lipid), chữa viOm bì (la (lẩu (iết bã nlùín Biệt tiirực cỏ clura Selen Sulfid như: Selsun Anh, Pháp Nal l i selenit có chứa chế phẩm Plenyl hãng UPS A với claim ilìnig viên nén nhai viên nén sủi bọt Thuốc tlùtm ngăn ngừa (liều chỉnh rối loạn liên quan đến chế độ ăn thiếu dinh dưỡng míìt cíln cỉối người lớn thiếu niên Natri sclenit CÒI1 chứa Sélénium injectable Pháp, dược (lịnh dối với người suy dinh dưỡng nặng, xơ gan bệnh đường ruột Clic pỉiẢm Lycored Ấn Độ với dạng dùng viên nang tnềni có cliứa Sdcnilioxkl với hàm lượng 70f.rg/Ị nang, dược dùng với mục dich CỈ1ÍÚ antioxydant hảo vệ lế bào Ngoài có chế phẩm thuốc tiêm, chira Sclenometliionin ( 7\se) Ngày ìiay xu hướng dùng chế phẩm chứa seien níím men Iigìiy CỈH1ỈI nhiều Trên lliị trường thuốc Việt Nam, chúng lôi thấy có so clìê pliẢm nlìir: Bclaf, Youngton, Binacle, Saylom, Cigelton Thành phíìn cliế phẩm Iiliư sau: + Chế pliẩni Youngton: nang mềm có Vitamin E Vitamin 400 IU c 500 mg Vitamin A 5000 1Ư Sclenium nấm men: 92,6 mg(^ 50 Hg Seien) + Chế phẩm Belaf: mõi nang mềm có p - caroten 15 mg Vitamin E 400 lư c 500 mg Vitamin Selen nấm men 92,6 nig(« 50 Hg seien) Cík' chế pliỉim khác tiều có lliànli phán tirơĩig tự trôn, (lều cliứa 50 Ịig sclcn Các chế phẩm dược dung dể dự phòng (liều trị bộnli viOm lim mạch, une thư lão lioá 2.3 Sự chuyển hoá Selen hợp chốt Selen thực VỘI Ị11 Trong tlụrc vạt Selen thường tổn dạng hợp cliíTt seien nguyôn tố, sclcnat selenit, acid am in chứa seien, sclciìtìỊX* p lit Đối với cíly tâp trung seien, tili lượng seien hấp tliụ tịtia rỗ dimíi (!ể tổng hơp acid aniin dó lưu huỳnh dược thay thố seien: selcnomclliionin sclenocystein Đ ố i v i ĩ i h ữ n g Cíìy g i u s e i e n , tliì n g u y ê n l ố n y c ó t h ể lồ!) t r o n g c í ì v (lirứi (lạng vò lnru Tronu pliÀM sclcn vô selenat chiếm phẩn chủ yếu Ngoài seien tồn aciíl amiii không gắn dược vào cỉiAt (lạm cùa cíly Iilnr: sclcno-cystathianin, nietylselenocyslein, sclenoliomoeystcin Quá Irìnli chuyển hoá Iilnr sau: I „ f Ị/ịn'r Sclena! — ► Selenit —► mctylsclcnol n —— , t SCI'n ► se-homocystein UẼHĩỉ^ sclcnocystatlìionÌM —► Ị httỳ plhìn, mctỵl hoá Chuyển vị seien ; ► selenovitaminU - - Se-rnctylsclenocystcin 2.4 Khử, nietxl li ► Dimetyl-cliselcnua — ► Scleti nấm men 2.4.1 Vài nét dại cương nấm men [4] Nấm tncn lên gọi chung nhóm vi sinh vật thể dctii hào có crtu lạo hoàn chỉnh Những vi sinh vạt có nhân thực Loại lUrợc sử dụng nhiều để đồng hoá seien vô thành dạng seien lifru có teil khoa học Saccharomyces cerevisiae, họ SơccharonnreỉíH (’(!(’ Nam gồm các-tế bào hìmh trứng, đứng riêng hiệt hay dính với thành chuỗi ngắn Sinh sản cách nảy chổi Một tế bào nấm men sau 24 trờ thành ! 0.000.000 tế bào Thành pliổn lioá học nấm men gồm: + Nước 7% + Muối vô 7% + Cilucid 36,5% + Chất béo 2% + Protein 47,5% + Vitamin enzyiTi 2.4.2 Nuôi cAy Iiấm men giàu seien [6] Khi (lưa sclcn nlnr nguyên tố vi lượng vào môi trường nuôi cấy 11 Ám men cỏ khả đồng hoá chuyển seien vi lượng vào thành phíỉn aminoacki vì\ protkl Dựa sở dó, người ta dã dưa natri sclcnit vào tnỏi trirờng nuôi cóy nấm men Saccharomyces cerevisiae Sau nuôi cày, người la thu hoạch nấm men Phá vữ tế bào, ly tAm tách Hổng thu lấy dịch nấm men giàu Selen dem phân tícli thấy: 58% Seien dạng liựp chất với protein acid nucleic, 15% thànhtế bào, 9% ty lạp thể, acid amin tự peptid nhỏ Người la liến liànli nuôi cấy nấm men (tiều kiện khác nlum nliẠn thấy nồng độ seien 10 f.ig/inl môi trường diều kiện liic'U khí, tích luỹ seien lế bào nấm men tốt Bộ môn Vô Cơ í ỉoá Lý Trường Đại Học Dược có phối hợp với Viện Công Nghệ Sinh Hục dang nghiên cứu, nuôi cấy nấm men 1110! trường chứa natri selenit Một số mâu nấm men Ihu lioạch dược, dang cẩn kiểm ilịnlì, (lánh giá số tiêu: độ ẩm, độ tro, kim loại nặng, (lịnh tính, định lượng sclcn 2.4.3 Một sỏ tiêu chuẩn nấm men theo dược điển Pháp [8] Nấm men sau sấy khô 40° c dược kiểm (ra số tiốu chuẩn sau: - Sie roi CAn 0.10 g nấm men lắc với ml cloroform Lọc thôm vào địch lọc 2ml alliyđiil sulfuric giợl H2S 4, sinh 111ÀU xanh bén troim 10 phút -Lipic! Trong bình nón có nắp tliuỷ tinh, lắc 5g mÃu nấm men với 20ml cloroíorm tioníỉ ui(\ lọc phỗu dóng Bay lOml dịcli lục clcìi khò, cận lim (lược phải lớn ĨKtn 0,02g - Ti till hột Cho vào bình I1ÓI1 lOOiĩil : lg nííin men 20ml nước Đun sôi I phút, lọc líVv linl clịcli lọc, để nguội không mang màu xanh với nước lod - Đường Với I0ml clịch lọc trên, thốin 2mỉ dimg dịch chì acctat kiểm, lọc, loại hò chì dư bời natri Sulfat, dể yên, lọc Thêm vào dịch lọc lm! acid liCI loãng 3.2.3 Xííc định tro Sulfat (theo Dược Điển Việt Nam I) Để xác (lịnh phần trăm cắn vô không bị oxy lioá acid sulfuric Cácil tiến hàiili: - Nung chcn sứ tiến khối lượng không tlổi 8()()'’c - Dể nguội clicn hình liút ẩm - Cílti chcn nung - Cíìn Xííc khoảng Ig nấm men clio vào chén - Giò vào chcn 0,5 clếĩi ml acid sulfuric dâm dặc - Đun nóng không acid - Cho chén vào lò nung 800°c tới khối lượng không dổi - Nếu màu thử vãn đen thêm giọt acid sulfuric vào chén ĐỐI cho hay hết acid lại tiốp tục cho vào nung tới khối lượng kliôniỉ ilổi 3.2.4 Thử kim loại nặng * Tlúr chì • Nguyên tắc: Những dung địch ion cliì cho với dung dịch Iiatri sulfila tủa den hay nâu, tuỳ Iheo nồng (lộ: Pb2+ + s 2' = P h s ị • Pha dung dịch chì chuẩn: + Hoà tan 0,0915g chì acetat nước + Thêtn 0,1 ml dung (lịch acetic 30% + Them nước tới (lủ lOOmK (limg dich A) + Lấy 1ml dung dịch A pha loãng với nước (lủ lOOml thành thing dịch B Dung (lịch B có chứa 5|.ig/nil • Cíícli tiến hành: - Dung dịch thử: Sau klii mmg nấm men nới acid sulfuric (U nónII cắn lại với Ị nil dung dịch bão lioà anioni acctat fĩT ) (lã (lược trung IlOíi llalli liyđioxit 30% Ilìcin 4iĩil nước lọc vào ống nghiệm qua 14 giấy lọc không tro (đã dược rửa trước acid acelic \% sau (lt) \ì\ nước nóng) Rửa clién nung giấy lục với 5ml nước, hứng nước lứa vào cimg I11Ộ! nghiệm Cho vào ống nghiệm 1ml acid acetic 30% vil 1-2 giọt Na2S 2% , lắc kỹ, dể yên phút - Dung (lịch tiiâu dược tiến liành dồng thời sau: Old vào chén nung lượng acid siilfuric(TT) dã lấy dể nung cluít lum cơ, liên hành trôn, khác chế phẩm thử lửa clicn nung vti giày lọc tiìmg 4ml nước, sau thêm vào dịch lọc Iml dung dịch chì 111 All B (5|.ig/ml) Cho vào ống mẫu lml acid acetic 30% 1-2 giọt Na2S 2%, lắc kỹ (lể I phút - So máu: Đặt tờ giấy trắng phía ống nghiệm, nhìn từ tiên xtiống màu dung dịch thử pliải kliông đậm dung dịch niñu * Thứ sát (theo Dưực Điển Mỹ XXIII) • Nguyên tắc: iuyển hết sắt(II) mâu lliàĩih sắt(III) amoni pcrsulíat vSắt(III), dung dịch tạo thành phức có mmi hổnc với anioni tliiocyanat Các phương trình phản ứng: (NIỈ4)2S20 + 2Fe2+ + 2H+ = 2(NH4)IIS04 4- 2Fcu F e u + 6SCN = l F e ( S C N ) 6|- • Pha dung dịch sắt chuẩn: + ỉloà tan 0,8634g (NH4)Fe(S04)2 121 ỉ20 nước + Hiềm lOinl acid sulfuric 2N + Pha loãng với nước tluìnli lOOml dung clịcli( dung clịch A) + Lấy 1nil dung dịch A clio vào bình địnli mức lOOml + Thêm 1ml dung dịch acid sulfuric 2N + Them nước (lủ 100ml ta dược dung clịcli B cổ lO^ig Fe^/m! 15 • Cách tiến hành: - Dung dịch thử: chế phẩm tro hoá hoàn toàn, hoà cắn tro 2ml dung dịch HC1 10%, đun nhẹ, lọc, lấy dịch lọc Thêm vào dịch lọc 45ml nước, 50mg amoni persulfat 3ml amoni thioxyanat Lắc kỹ, để yên phút - Dung dịch mẫu: Tiến hành song song với dung dịch thử Cho vào ống mẫu lm l dung dịch sắt chuẩn( 10|Lig Fe3+/ml) Thêm vào nước vừa đủ 45ml Thêm 2ml dung dịch HC1 10%, 50mg amoni persulfat 3ml amoni thioxyanat Lắc kỹ để yên phút - So màu hai dung dịch thử dung dịch mẫu Màu dung dịch thử không đậm dung dịch mẫu 3.2.5 Định tính Selen nấm men [7] • Nguyên tắc: Selen mẫu thử hoà tan acid HN thành acid selenơ, acid selenơ khử I' tạo thành kết tủa seien nguyên tố có màu đỏ Phản ứng xảy sau: H2S e + 21 +4H+ = S e ị + I2 + 3H20 • Cách tiến hành: - Cân lượng nấm men chứa khoảng 0,1 mg Selen cho bình nón 100ml - Thêm 10ml acid nitric 25% - Đun nóng °c lOphút - Thêm 10mg Urê đun sôi để nguội - Thêm 20ml dung dịch KI( 1:10) - Dung dịch phản ứng có màu từ vàng - vàng cam- đỏ tối tuỳ nồng độ seien 16 3.2.6 Định lượng selen nấm men (theo dược điển Mỹ XXIII) • Nguyên tắc: Dựa phản ứng tạo phức selen(IV) với O-diamino thơm, tạo thành phức piazoselenol có màu vàng Dùng dung môi hữu chiết toàn phức đem xác định selen bước sóng thích hợp Phản ứng ,ocí/;n với 2,3 diaminonaphtalen có ưu điểm sau: độ nhậy cao, dễ chiết dung môi hữu cơ, độ xác cao Phản ứng tạo phức Selen( IV) 2,3 diaminonaphtalen biểu diễn: NHo Se4+ + H2NOH.HCl 0 PH: ± 0,2 0 Se Phức piazoselenol Selen( IV) 2,3 diaminonaphtalen chiết cyclohexan, đem đo mật độ quang bước sóng 378nm • Pha dung dịch thuốc thử 2,3 diaminonaphtalen: Hoà tan lOOmg 2,3 diaminonaphtalen 500mg hydroxylamin hydroclorid lOOml dung dịch HC1 0,1N, lắc mạnh cho tan hết, pha dung dịch trước dùng • Cách tiến hành: -Vô hoá mẫu nấm men theo phương pháp đốt bình kín oxy: + Cân xác khoảng lOOmg mẫu nấm men gói vào màng celophan Loại giấy có nhiều ưu điểm như: dễ gói mẫu, cháy hoàn toàn, không để lại muội + Đặt mẫu gói màng celophan vào que đốt(là dây điện trở chịu nhiệt cao có dạng lò so khoảng -ỉ- 5cm, đầu gắn vào giá, nối với nút cao su thích hợp với bình đốt) 17 I Mỏi niAii sail (lốt xon'g,clio vào bìnli 25iiìl HNO,( l:.W) cU' luìp lliụ lổi chuyển sang bìtih (lịnli núrc 5()ml 'Ilicni nước vào dù 50ml Iliil \ác finil cho vào hình !UÍt mài dung lích lOOml Hicm vào bình 25ml 1IN().( 1:30) 25 nil nước Sail (ló (lim sổi trôn bình cách tliuý 10 pluit Xừ lý (tỏng llitíi đung (lịch thử IIIÀII Ining có chứa 25 ml acid IIN(),( I :M)) 25 11 ì nước cất Iilnr sau: I Diều chỉnh plỉ: Thêm dung dịch amoniiiniliyđroxyđl 1:2) vào dimg (lịch tỉiír ÍÌIÃII trắng (lể (liều chinh plỉ ± 0,2 + Tliêm vào bình 200mg Iiydioxylainin IỈCI lắc cho tan t- Them ligciy 5m l clung dịcli 2,3 clianìiiHinaplilíỉlcĩi vào lác clio (lềl! -\- ĩ)c tất bìiili buồng lối 100 plnít I I.Ay bình ra, chuyển vào hình chiết licMig hiệt, tníníỉ kìn, hìn khoảng lOml nước cất I Dùng pipet hút xác 5ml cyclolicxan clio vào bìnli cliiC‘1 Sau (ló lắc mạnh plìiíl dể yen khoảng pluít cho tách lớp + Loai bỏ ĩiirớc, (lem ly lí\m lấy phẩn cycloliexan máy ly IAm với lòV (1(1 2()0()\ òng/pliiit 10 phút đổ loại nước Đo quang tiling dịch bước sóng 378nm 3.3 Kêl qu:i Ihục nghiệm nhộn xél 3.3.1 ( ’Am (ịunn R ò l c ó 111 À11 vàng nhạt trắng x m , c c t ố b o h ìt il i t r ứ n g 3.3.2 Đô ấ m : Xác (Hull (!ô ;iin lức In hàm ám 111 An dược bảo (|U;ÌI1 (liều kiên nliíit (lịnh (ló MÀU 11Am men sau thu hoạch, (lã lửa sạch, sấy ỡ l()5nc 30 pliúl (liKíc (IÓMÜ ũói lúi nilón Ngày (lóng gói !à 17/.V2000 (lặt empilone ¿Clic í v U a n ¿ ■fc iíe ju d M ■kuíẨLuự c &IM í- 18 M ịk ấ ộ Iỉảng 1: Kết xác định ciộ ẩm niÃu dược bảo quản túi Iiilon k ín sau tháng Màu Khối lượng bì (g) 42,8117 18,7705 42,8049 47,2748 20,2275 46,031 Kliối lưựng inãu (g) 4,4631 1.4570 3,2264 Khối lượng sau sấy (g) 47,1968 20,2019 45,9702 Kliối lượng sau sấy thêm (g) 47,1965 20,2019 45,9702 Độ Ảm (%klg/k!g) 1,75% 1,75% Khối lượng bì chứa ITIÃU ( g ) Độ Ảm ttune bìnli mẫu nấm men: 1.75°ó \ 1,75%11.89% | OT: Nlicììỉ \éí: Dụng cụ dùng để khảo sát phải có kích tỉiước pliìi hợp tlể ITIÂII thứ hợp thành Irtp tlàv khổng 5mm Tlico kêì qua ta nliận thấy, với mÃu IIÁIM filen sAy khô (lóng ỉionu lúi nilon sau (háng hàm ẩm 1,80% 3.3.3 Xác (lịnh tro Sulfat Đê liến liànli xác định tro Sulfat ba mâu nấm men M|, Ml, M,, dùng Tìhững clién sứ dung tích 20 4- 30 cnr\ tiếnhành phương pháp (In tiêu Kết độ tro dược Irình bày Báng 19 tlico Bíìng 2: Kê! tro sulfat ba mẫu nấm men M, Khối lượng Khối lượng Khối lượng Khối lưựim chén chén + mâu màu sau nung 23,9919 25,9928 2,0009 24,1659 8,68fĩ 24,6118 25,6370 1,0252 24,7006 8.67 % 23,2649 24,2653 1,0004 23,3514 28,0100 29,3278 1,3178 28,1157 £ ir ! vc oc 100 MÀU s !T 23,2651 24,6926 1,4275 23,3813 J rT 22,0525 23,2212 1,1687 22,1497 8.3 1rr i 26,1927 27,1969 1,0042 26,2741 8, ị ĩ 7Í 31,8337 32,8341 1,0003 31,9168 fu r; 21.5080 22,5175 1,0095 21,5917 8.29r; m2 m3 Độ tro Nhân xét: Trong trình tiến hành xác clịnh tro su!fat mâu nấm men liên, đuíniỉ lòi lluíy cí\n phải ý: - Klii (lốl nấm men với acid sulfuric dặc, cán tăng nhiệt dọ từ từ (lé tránh than Into ra, phải dốt tủ hốl - Lượng lift'll] men dem xác định tro không lớn, (.lổ tm lioá cluợc hoàn loàn, thời gian ngắn - Quá trình tiến hành dược diễn sau: + Níím men dược dốt với acid l i2S đặc lồi dược miTig ờX()()"(' 15 phút Cílti !ro vãn clcĩi -> Clnra cháy hét + lliêni giọt acid IỈ2S dặc vào chén, (lòìcho bay hốihơi acid, nung tiếp 30 phút, cặn clcn + lliêm giọt acid I ỉ2S dặc vào chén, dốt Iilnr trốn lồi lai che nung ờK(Ì()V 20 phút, cắn trắng hoàn toàn Đưa cOn tỉm lỉirợc két quà UCMI 20 Dó tro stilíal IriHig hìnli cùa mâu: 8,68% + 8,67% I 8,65% MÃII M,: MÀU M2: 8,02%+ 8,14%+ 8,31% = 8,67°//0 - 8,16°//0 8,11%+ 8,31%+ 8,29% MÀU M,: 8,24% T;ìt củ màu nấm men tiều dạt liêu chuắn (lộ (ni siilíat, theo quy định cùa Dược Điển Pháp dọ tro sulĩat 9% 3.3.4 Tỉnr kim loại Thứ chì: Tiến hành khảo sát mẫu nốm men Mị, M2 M, \('ri phương pháp (lã I1CU Kết dược trình bày Bảng Bảng 3: Kết thử chì mẫu nấm men MÀU Khối lượng Mẫu ống thử so với niÃu kết ĩ 11ạ11 Ig Không mâu Đạt 2g Nhạt Đạt lg Không màu Đạt 2g Nliạl lìơn Đạt H Đậm hctn Không dạt 2g Nhạt Đạt 3g Nhạt Đạt M, M? M, Nhân xét: Dirợc Điên Việt Nain khôĩig có chuyên mục riêng glii cụ the bao nliiêu gam Cíin 1Áy đổ thử chì, cfln từ -f g, thấy rằng: IÁV 2g MÁm I11CIÌ (tè llúrdiì Iliì lất ca IHÃU dền đạt llico tiêu chuẩn Diiực Điển Việt Nam I Nhưng niÃu M2 tăng lcn 3g có lần tliấy không dạt 21 X ' Thứ sắt Trên bí! niÃu nấm men, cluing dã tiến liàiili thír sắt theo phương pliáp clã ĩiêii Kết nêu Bảng Bảng 4: Kết thử sắt mâu nấm men Mail Kliổi lượng Mâu dung dịch thử Kct iuận 2g Không màu ĩ)ạỉ H Không màu Đại 2g Không màu Ĩ3ại 3g Không màu Đạt 2g Không màu Đạt 4g Không màu Đạt Ml M, M, NliẠn xét: Kết thử ba màu tliấv kliông có cliứa sắt Nhu víiv mau Mị M,, M, tiều dạt tiêu cluiẢn (heo Dược Đièn Mỹ 3.3.5 Kê! (ỊUíì (lịnli tính selen nấm men -Ảnh hướng tliòi gian cliiêt nấm men UNO, 25n/( : Vc'ti cùtie diều kiện nhiệt [...]... NliẠn xct: Kết quả định lượng ba mãu nấm men M|, M2, M} cho tliííy: plurơnu pháp đinh lượng theo Dược Điển Mỹ XXIII mà chúng tôi (lã tic'll liniili c ó Síù sô' t r i m g b ì n h là: 5,03% 4- 7,6% + 3,9% _ — — — = 5, i 1/0 26 4 KẾT LUẬN Trong klioá luận này, chúng tôi dã kiểm định một số chỉ tiêu: độ Ảm, đô tro, kim loại nặng, định tính và định lượng seien trong mọt số nAm men giriti SCỈCI1 cua... dịch mẫu: Tiến hành song song với dung dịch thử Cho vào ống mẫu lm l dung dịch sắt chuẩn( 10|Lig Fe3+/ml) Thêm vào nước vừa đủ 45ml Thêm 2ml dung dịch HC1 10%, 50mg amoni persulfat và 3ml amoni thioxyanat Lắc kỹ để yên 5 phút - So màu giữa hai dung dịch thử và dung dịch mẫu Màu của dung dịch thử không được đậm hơn dung dịch mẫu 3.2.5 Định tính Selen trong nấm men [7] • Nguyên tắc: Selen trong mẫu thử... 8,31%+ 8,29% MÀU M,: 8,24% 3 T;ìt củ các màu nấm men trên tiều dạt liêu chuắn về (lộ (ni siilíat, vì theo quy định cùa Dược Điển Pháp dọ tro sulĩat dưới 9% 3.3.4 Tỉnr kim loại năng Thứ chì: Tiến hành khảo sát trên ha mẫu nốm men Mị, M2 M, \('ri phương pháp (lã I1CU Kết quả dược trình bày ở Bảng 3 Bảng 3: Kết quả thử chì ở các mẫu nấm men MÀU Khối lượng Mẫu của ống thử so với niÃu kết ĩ 11ạ11 Ig Không... dịch trước khi dùng • Cách tiến hành: -Vô cơ hoá mẫu nấm men theo phương pháp đốt trong bình kín bằng oxy: + Cân chính xác khoảng lOOmg mẫu nấm men gói vào màng celophan Loại giấy này có nhiều ưu điểm như: dễ gói mẫu, cháy hoàn toàn, không để lại muội + Đặt mẫu gói màng celophan vào que đốt(là dây điện trở chịu nhiệt cao có dạng lò so khoảng 4 -ỉ- 5cm, một đầu được gắn vào giá, nối với 1 nút cao su thích... Dung dịch phản ứng sẽ có màu từ vàng - vàng cam- đỏ tối tuỳ nồng độ seien 16 3.2.6 Định lượng selen trong nấm men (theo dược điển Mỹ XXIII) • Nguyên tắc: Dựa trên phản ứng tạo phức giữa selen( IV) với các O-diamino thơm, tạo thành phức piazoselenol có màu vàng Dùng dung môi hữu cơ chiết toàn bộ phức này và đem xác định selen ở bước sóng thích hợp Phản ứng của ,ocí/;n với 2,3 diaminonaphtalen có những... khô Xííc (lịnh den khối lượng không đổi với một Ĩ11ÃU dã eíln chính xác khoáng lg sự hao hụt khối lượng ở 100° -í- I50"c của nấm men không dược quá 8% - Trosulfnt Xác (.lịnh pliấìn khô còn dư của tĩiãu sau khi nung với acitl I Ỉ2S 0 4 TỶ lệ tro su!Tat cùa Iiíìm men klìộỉlg dược vượt quá 9% 2.5 Mộl sô CỈÍCỈI xác định các chỉ liêu cần kiểm định 2.5.1 Xỉíc định (lộ ẩm Dirực Điển Việt Nam I-Tập 1 có 3... khi dược oxy lioá, cho phản ứng với thuốc thử O-diamino tliơm ờ Pl ĩ = 2 ± 0,2 dể lạo phức pia7Ấ)selenol Chiết phức chất này bằng (lung mòi ỉliíclì hợp và tien lùuili do quang dể xác định selen Phán ihig giữa selen( IV) với O-diainino thơm là pliảti ứiig I\hạy nlìAl và chọn lọc nhai dể định lượng selen Trong số các O-tliamino thơm thì thuốc thử phổ hiên 3 3 (Jiamino benzidin Tuy nliiôti phức tạo ra dỗ... lirựng mẫu dcni phản ứng lí\ (),3g Từ kết quả Bảng 5 và Bảng 6 la nhận thấy: Để phản ứng xảy ra rõ ràng, dặc tnrng liên hìy (),3g nấm men dể (.tịnh tính, chiết bằng acid UNO, 25r/< ỡ 6()'tvà thời gian chiết là 30 phút -Tìm Na2S c03 lừ môi trường nuôi cấy còn bám vào nấm men Na2SeOj là muối dễ tan trong nước, cluing tôi SƯ bộ muốn tìm XCH1 Na,ScO, ờ môi tuning nuôi cấy có bám nhiều vào bề mặt nấm men hay... Nhan xét: Như vậy dựa vao phan ứng định tính chúng loi kiiótií! piiíi! liiỌn tliAy Na,ScO, bám vào các mâu nấm men 3.3.6 Ki't íỊiin (lịnỉi ỉirợng seien Irong nấm men ỉ làm lượng seien (lược línli theo phương trình hồi quy của plnrơng pháp lliOni clmẢii: I) = 0,08317 X + 0,000724 Trong (ló: D: Mạt (lộ quang X: Heim lưựĩig sclcn (ppm) ! làm lirợne seien trong lg nấm men khô dược tính llico công thúc:... trình tiến hành xác clịnh tro su!fat của 3 mâu nấm men liên, đuíniỉ lòi lluíy cí\n phải chú ý: - Klii (lốl nấm men với acid sulfuric dặc, cán tăng nhiệt dọ từ từ (lé tránh than Into ra, và phải dốt trong tủ hốl - Lượng lift'll] men dem xác định tro không quá lớn, (.lổ tm lioá cluợc hoàn loàn, thời gian ngắn - Quá trình tiến hành dược diễn ra như sau: + Níím men dược dốt với acid l i2S 0 4 đặc lồi dược ... cấy nấm men 1110! trường chứa natri selenit Một số mâu nấm men Ihu lioạch dược, dang cẩn kiểm ilịnlì, (lánh giá số tiêu: độ ẩm, độ tro, kim loại nặng, (lịnh tính, định lượng sclcn 2.4.3 Một sỏ... dung dịch thử dung dịch mẫu Màu dung dịch thử không đậm dung dịch mẫu 3.2.5 Định tính Selen nấm men [7] • Nguyên tắc: Selen mẫu thử hoà tan acid HN thành acid selen , acid selen khử I' tạo thành... níím men .fl 2.4.1 Vài nét (lại cương nấm i n e n 2.1.2 Nuôi cấv níím men giổu S e ie n 2.4.3 Một sô tiêu chuẩn nấm men theo Dưực Điển Plutp 2.5 Một số cácli xác định