Kiểm nghiệm listeria monocytogenes

Kiểm nghiệm listeria monocytogenes

TỔNG LIÊN ĐOÀN LAO ĐỘNG VIỆT NAM

ĐẠI HỌC TÔN ĐỨC THẮNG

KHOA: KHOA HỌC ỨNG DỤNG

KIỂM NGHIỆM LISTERIA MONOCYTOGENES

1 Giới thiệu về Listeria Monocytogenes

1 Giới thiệu về Listeria monocytogenes

Nguồn chứa vi khuẩn L monocytogenes

1 Giới thiệu về Listeria monocytogenes

2 Khả năng nguy hiểm của Listeria monocytogenes

2 Khả năng nguy hiểm củaListeria monocytogenes

Bệnh Listeriosis:

2 Khả năng nguy hiểm của Listeria monocytogenes

Biện pháp phòng tránh:

3 Định tính Listeria Monocytogenes

1 Phát hiện nhanh Listeria monocytogenes

trong thực phẫm thịt, sữa.

3 Định tính Listeria Monocytogenes

1.2 Quy trình phân tích:

3 Định tính Listeria Monocytogenes

1.2.1 Mồi cho phản ứng PCR

3 Định tính Listeria Monocytogenes

1.2.2 Xác định tính đặc hiệu của mồi

3 Định tính Listeria Monocytogenes

1.2.3 Tiến hành

- Phương pháp chuẩn bị mẫu

3 Định tính Listeria Monocytogenes

1.2.3 Tiến hành

- Tăng sinh

3 Định tính Listeria Monocytogenes

1.2.3 Tiến hành

- Phản ứng PCR và xử lý kết quả

- Đánh giá kết quả: các mẫu

xuất hiện các băng DNA

khuôn DNA tinh sạch được

thể hiện trong hình 1-giếng 2

cho thấy một băng DNA có

kích thước nằm trong khoảng

468 bp

400 bp

3 Định tính Listeria Monocytogenes

2 Quy trình phân tích L monocytogenes theo

truyền thống

2.1 Nguyên lý phương pháp

Sử dụng phương pháp cấy đếm Listeria

monocytogenes trên môi trường nuôi cấy chuyên biệt

sau khi ủ ấm ở nhiệt độ 370C trong 48 giờ Chọn các

khuẩn lạc nghi ngờ xác định Listeria monocytogenes

bằng các thử nghiệm sinh vật hoá học

3 Định tính Listeria Monocytogenes

2.2 Dụng cụ, môi trường và thuốc thử

2.2.1 Môi trường, thuốc thử

- Môi trường SIM

- Môi trường Clurk-Lubs

- Canh thang đường Manitol, Xylose, Rhamnose 5%, có chỉ thị màu Bromocresol và ống Durham

- Bộ thuốc nhuộm Gram

- Hydrogen Peroxide 3%

3 Định tính Listeria Monocytogenes

- Dùng que cấy kim loại hoặc que cấy thuỷ tinh ria đều để dung dịch mẫu được phân bố khắp mặt thạch sao cho các khuẩn lạc mọc phân tán đều

- Ủ ở 370C/48giờ

3 Định tính Listeria Monocytogenes

2.3.2 Bước 2:

Đọc kết quả sơ bộ sau 48 giờ

- Đếm toàn bộ các khuẩn lạc có đặc tính: Tròn đều, màu nâu đen hoặc xanh đen Đường kính: 2-3 mm

và môi trường xung quanh khuẩn lạc có màu đen với trung tâm khuẩn lạc lõm xuống Đây là đặc

điểm đặc trưng của giống Listeria

3 Định tính Listeria Monocytogenes

Tính kết quả theo công thức (tài liệu TN Vi sinh) :

- V: Thể tích mẫu cấy trên môi trường đĩa

- n1 : Số đĩa đếm được ứng với độ pha loãng ban đầu

- ni : Số đĩa đếm được ứng với độ pha loãng thứ i

- fi: Hệ số pha loãng tương ứng

3 Định tính Listeria Monocytogenes

V f

n V

f n

N A

i i

+ +

=

. 11

2.3.3 Bước 3: Tăng sinh thuần chủng và xác định

hình thể, tính chất bắt màu

2.3.3.1 Tăng sinh thuần chủng:

- Lấy khuẩn lạc điển hình từ thạch chọn lọc cấy vào môi trường TSA-YE và ủ ấm ở 370C / 24h thu được khuẩn lạc thuần nhất tròn, trong, bóng và hơi lồi

2.3.3.2 Hình thể và tính chất bắt màu:

Từ khuẩn lạc thuần nhất nhuộm Gram xem hình thể:

Nhuộm Gram sau 16 - 24h nuôi cấy thấy: Trực

khuẩn ngắn bắt màu thuốc nhuộm Gram Đường

kính 0,4 - 0,5 mm và dài 0,5 - 2 mm

3 Định tính Listeria Monocytogenes

- Soi tươi trên lam kính xem tính chất di động: + Lấy 1 khuẩn lạc mọc trên TSA-YE cấy vào

môi trường canh thang TSB-YE Để ở 25oC qua đêm

+ Canh trùng được soi tươi trên lam kính thấy : Hình que ngắn, mảnh, di động kiểu xoay tròn

nhẹ hoặc nhào lộn Di động kiểu bơi không phải

là giống Listeria

3 Định tính Listeria Monocytogenes

2.3.4 Bước 4: Tính chất sinh vật hoá học:

2.3.4.1.Tính chất di động trên thạch SIM :

- Lấy canh trùng từ TSB-YE cấy vào môi trường thạch SIM

- Ủ ấm : 2-7 ngày ở 25oC Thấy di động tạo hình cái ô

2.3.4.2.Tính chất lên men đường: Xylose, Rhamnose, Manitol

- Dùng canh thang có chỉ thị màu Bromocresol và có ống Durham để xác định tính chất lên men các loại

Tiêu chuẩn xác định Listeria monocytogenes

trong thực phẩm:

Thực phẩm làm sẵn, là nguyên

nhân liên kết với bệnh Listeriosis

(như phó-mát, pa-tê gan, xà lách

khác hỗ trợ cho sự tăng trưởng của

Listeria monocytogenestrong điều

kiện làm lạnh và hạn sử dụng >10

ngày.

cộng đồng, theo dõi tại nhà máy Loại II: Thu hồi sản phẩm.

3 Định tính Listeria Monocytogenes

<= 100 cfu/gc Không đầy đủ

hoặc không có GMP.

Xem xét thu hồi loại II

3 Tài liệ tham khảo

[1] Trần Linh Thước, Phương pháp phân tích vi sinh vật

trong nước, thực phẩm và mỹ phẩm, Nhà xuất bản giáo

dục, 2007.

[2] Nguyễn Lân Dũng, Phạm Thị Trân Châu, Nguyễn

Thanh Hiền, Một số phương pháp nghiên cứu vi sinh vật

hoc, Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật, 1978.

[3].

http://www.safefood.name.vn/index.php?option=com_con tent&view=article&id=236:nh-tinh-vibrio-cholera-tron

g-thc-phm&catid=49:moi-trng-khac&Itemid=226

.

[5] http

://my.go.vn/b/viewpost.aspx?id=77326538&pid=108796.

Cảm ơn Thầy và các bạn

đã theo dõi!!!