Khảo sát sự lưu hành virus gumboro trên gà thả vườn ở xã thông hòa huyện cầu kè tỉnh trà vinh

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN N THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP NGHI VÀ SINH HỌC C ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y ---- MAI VĂN HOÀNG ĐỆ KHẢO O SÁT SỰ S LƯU HÀNH VIRUS GUMBORO TRÊN GÀ THẢ VƯỜ ỜN Ở XÃ THÔNG HÒA, HUYỆN HUY CẦU U KÈ, TỈNH TRÀ VINH LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y Cần Thơ, 12/2013 TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN N THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP NGHI VÀ SINH HỌC C ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y ---- LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP NGÀNH THÚ Y Đề tài: KHẢO O SÁT SỰ S LƯU HÀNH VIRUS GUMBORO TRÊN GÀ THẢ VƯỜ ỜN Ở XÃ THÔNG HÒA, HUYỆN HUY CẦU U KÈ, TỈNH TRÀ VINH Giáo viên hướng dẫẫn: Sinh viên th thực hiện: HUỲNH NGỌC C TRANG MAI VĂN HOÀNG Đ ĐỆ MSSV: LT11649 Cần Thơ, 12/2013 ii TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN THÚ Y ---- Đề tài: “Khảo sát sự lưu hành virus Gumboro trên gà thả vườn ở xã Thông Hòa, huyện Cầu Kè, tỉnh Trà Vinh” Do sinh viên thực hiện: Mai Văn Hoàng Đệ tiến hành tại các hộ chăn nuôi gà thả vườn trên địa bàn xã Thông Hòa, huyện Cầu Kè, tỉnh Trà Vinh từ tháng 8/2013 đến tháng 12/2013. Cần Thơ, ngày tháng năm 2013 Cần Thơ, ngày Duyệt Bộ môn tháng năm 2013 Duyệt Giáo viên hướng dẫn Huỳnh Ngọc Trang Cần Thơ, ngày … tháng … năm 2013 Duyệt Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đề tài này là công trình nghiên cứu của bản thân tôi. Các số liệu trong đề tài hoàn toàn trung thực. Nếu có vấn đề sai sót nào tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm. Tác giả Mai Văn Hoàng Đệ ii LỜI CẢM ƠN Xin kính dâng lòng biết ơn đến Cha – Mẹ suốt đời hi sinh và nuôi dạy cho con nên người. Cám ơn những người trong gia đình quan tâm, động viên và tạo điều kiện để cho con hoàn thành luận văn này. Xin chân thành cảm ơn: Cô Huỳnh Ngọc Trang đã tận tình hướng dẫn giúp đỡ tôi hoàn thành luận văn này. Thầy Trần Ngọc Bích, cố vấn học tập đã dìu dắt, giúp đỡ và tạo điều kiện cho chúng tôi trong suốt 2 năm dưới mái trường Đại học. Quý thầy cô Bộ môn Thú y và Bộ môn Chăn nuôi, Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ đã cung cấp và truyền đạt những kiến thức cho tôi trong suốt 2 năm học. Các anh Thú y xã Thông Hòa đã tận tình giúp đỡ cho tôi trong suốt thời gian để tôi hoàn thành luận văn này. Xin chúc các quý thầy cô, các anh thú y xã, được dồi dào sức khỏe và đạt nhiều thành tích tốt trong công tác. Chúc những người bạn của tôi luôn mạnh khỏe và thành đạt. Cuối cùng, tôi xin nói lời cảm ơn đến Hội Đồng Giám Khảo đã dành thời gian đọc và xem xét đề tài tốt nghiệp này. Mai Văn Hoàng Đệ iii Mục lục Trang duyệt .................................................................................................................. i Lời cam đoan .............................................................................................................. ii Lời cảm ơn .................................................................................................................iii Danh mục bảng .......................................................................................................... vi Danh mục hình .......................................................................................................... vii Danh mục biểu đồ ....................................................................................................viii Danh mục chữ viết tắt ................................................................................................ ix Tóm lược ..................................................................................................................... x Chương 1. ĐẶT VẤN ĐỀ ......................................................................................... 1 Chương 2. CƠ SỞ LÝ LUẬN .................................................................................. 2 2.1. Tình hình nghiên cứu bệnh Gumboro trong và ngoài nước ............................. 2 2.1.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Gumboro trên thế giới ................................... 2 2.1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh Gumboro trong nước ..................................... 2 2.2 Khái niệm về bệnh Gumboro ............................................................................ 3 2.3 Căn bệnh học ..................................................................................................... 3 2.3.1 Đặc điểm hình thái ...................................................................................... 3 2.3.2 Sức đề kháng ............................................................................................... 4 2.3.3 Đặc tính nuôi cấy ........................................................................................ 5 2.3.4 Truyền nhiễm học ........................................................................................ 5 2.4 Cơ chế sinh bệnh ............................................................................................... 6 2.5 Miễn dịch học .................................................................................................... 6 2.5.1 Miễn dịch chủ động ..................................................................................... 6 2.5.2 Miễn dịch thụ động ..................................................................................... 7 2.6 Triệu chứng và bệnh tích ................................................................................... 7 2.6.1 Triệu chứng ................................................................................................. 7 2.6.2 Bệnh tích ..................................................................................................... 8 2.7 Chẩn đoán ........................................................................................................ 10 2.7.1 Chẩn đoán lâm sàng ................................................................................. 10 2.7.2 Chẩn đoán phân biệt ................................................................................. 10 2.7.3 Chẩn đoán phòng thí nghiệm .................................................................... 11 iv 2.8 Phòng và điều trị bệnh ..................................................................................... 12 2.8.1 Phòng bệnh ............................................................................................... 12 2.8.2 Điều trị ...................................................................................................... 12 Chương 3. PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM ................... 14 3.1 Nội dung .......................................................................................................... 14 3.2 Phương tiện thí nghiệm ................................................................................... 14 3.2.1 Thời gian và địa điểm ............................................................................... 14 3.2.2 Đối tượng thí nghiệm ................................................................................ 14 3.2.3 Vật liệu thí nghiệm .................................................................................... 14 3.3 Phương pháp tiến hành .................................................................................... 15 3.3.1 Điều tra tình hình vệ sinh trong chăn nuôi gà ở nông hộ ......................... 15 3.3.2 Phương pháp lấy mẫu ............................................................................... 15 3.3.3 Qui trình xét nghiệm ................................................................................. 16 3.4 Chỉ tiêu theo dõi .............................................................................................. 18 3.5 Phương pháp xử lý thống kê............................................................................ 18 Chương 4. KẾT QUẢ THẢO LUẬN .................................................................... 19 4.1 Kết quả điều tra tình hình vệ sinh trong chăn nuôi gà ở nông hộ ................... 19 4.2 Tỷ lệ nhiễm Gumboro ..................................................................................... 20 Chương 5. KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ.................................................................. 26 5.1 Kết luận ........................................................................................................... 26 5.2 Đề nghị ............................................................................................................ 26 TÀI LIỆU THAM KHẢO ...................................................................................... 27 v DANH MỤC BẢNG Bảng Tựa bảng Trang Bảng 3.1 Thành phần bộ kít ELISA 15 Bảng 4.1 Tình tình vệ sinh trong chăn nuôi gà ở nông hộ 19 Bảng 4.2 Tỷ lệ nhiễm Gumboro theo nhóm 20 Bảng 4.3 Tỷ lệ gà nhiễm Gumboro theo hình thức chăn nuôi 21 Bảng 4.4 Tỷ lệ gà nhiễm Gumboro theo giống 23 Bảng 4.5 Tỷ lệ gà nhiễm Gumboro theo quy mô đàn 23 Bảng 4.6 Hiệu giá kháng thể trên từng nhóm sau khi bị nhiễm Gumboro 24 vi DANH MỤC HÌNH Hình Tên hình Hình 2.1 Mô hình cấu trúc virus gây bệnh Gumboro 4 Hình 2.2 Gà bệnh suy nhược, lờ đờ 8 Hình 2.3 Gà tiêu chảy phân loãng và trắng 8 Hình 2.4 Xuất huyết lấm chấm ở cơ đùi 9 Hình 2.5 Xuất huyết giữa dạ dày tuyến và dạ dày cơ 9 Hình 2.6 Túi Fabricius sưng to, niêm mạc sung huyết hoặc xuất huyết 10 Sơ đồ bố trí huyết thanh xét nghiệm ELISA 16 Mẫu huyết thanh dương tính với kháng thể Gumboro 21 Hình 4.2 Gà nuôi thả lan 22 Hình 4.3 Gà nuôi bán thả lan 22 Hình 3.1 Hình 4.1 Trang vii DANH MỤC BIỂU ĐỒ Biểu đồ Biểu đồ 4.1 Tên biểu đồ Tỷ lệ nhiễm bệnh Gumboro theo nhóm Biểu đồ 4.2 Tỷ lệ gà nhiễm Gumboro theo hình thức nuôi 21 Biểu đồ 4.3 Tỷ lệ gà nhiễm Gumboro theo giống 23 Biểu đồ 4.4 Tỷ lệ gà nhiễm Gumboro theo quy mô đàn 24 viii Trang 20 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT Chữ viết tắt OIE Chữ viết nguyên Office International des Épizooties ELISA Enzyme Linked Immuno Sorbent Assay IBDV Infectious Bursal Disease Virus IBD Infectious Bursal Disease AGP Agar Gel Precipitation VP Viral Protein ARN Acid RiboNucleic S/P Sample/Positive PC Psitive Control NC Negative Control ix TÓM LƯỢC Đề tài: “Khảo sát sự lưu hành virus Gumboro trên gà thả vườn ở xã Thông Hòa, huyện Cầu Kè, tỉnh Trà Vinh” được tiến hành tại các hộ chăn nuôi gà thả vườn trên địa bàn xã Thông Hòa, huyện Cầu Kè, tỉnh Trà Vinh và phòng thí nghiệm bệnh truyền nhiễm Bộ môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ từ tháng 8/2013 đến tháng 12/2013. Đề tài thực hiện “nhằm mục tiêu điều tra tình hình vệ sinh trong chăn nuôi gà ở nông hộ bằng cách điều tra trực tiếp từ người chăn nuôi tại các hộ và khảo sát tỷ lệ nhiễm virus Gumboro bằng phương pháp kiểm tra huyết thanh học qua phản ứng ELISA”. Qua thời gian nghiên cứu chúng tôi ghi nhận kết quả như sau: Tình trạng vệ sinh chưa được người chăn nuôi quan tâm đúng mức và chưa quan tâm đến việc tiêm vaccine phòng Gumboro. Tỷ lệ nhiễm Gumboro trên gà sinh sản là 74,7% và gà thịt là 44,8% (P=0,004) còn hình thức nuôi thả lan có tỷ lệ nhiễm là 67,8% và bán thả lan là 23,5% (P=0,001). Tỷ lệ nhiễm Gumboro trên gà Tàu là 66,4%, giống gà nòi là 62,8% (P=0,726). Tỷ lệ nhiễm Gumboro ở quy mô đàn từ 30-50 con có tỷ lệ nhiễm là 69,7% và đàn từ 1-30 con là 60,6% (P=0,038) và hiệu giá kháng thể ở gà thịt là (2369±52) và gà sinh sản (4153±336), (P=0,006). x Chương 1. ĐẶT VẤN ĐỀ Hiện nay, chăn nuôi gà thả vườn là một hình thức nuôi khá phổ biến ở các tỉnh Đồng Bằng Sông Cửu Long và mô hình này đang được nhiều người chăn nuôi ở xã Thông Hòa áp dụng để phục vụ cho nhu cầu của gia đình. Bên cạnh đó gà được nuôi theo hình thức này thì chất lượng thịt sẽ ngon hơn, ít mỡ và phù hợp với thị hiếu của người dùng. Do chăn thả tự do nên người dân chưa quan tâm đến áp dụng kỹ thuật vào chăn nuôi, đặc biệt là vệ sinh chuồng trại cũng như tiêm phòng các bệnh nguy hiểm như Gumboro, vì vậy làm nguy cơ mắc bệnh trên đàn gà cao, do chưa quan tâm bảo vệ môi trường, không đầu tư xây dựng chuồng trại phù hợp dẫn đến môi trường bị ô nhiễm, vì vậy làm cho dịch bệnh dễ xảy ra, ngày càng phát triển và lây lan rộng đặc biệt là bệnh Gumboro. Bệnh Gumboro được biết là bệnh nguy hiểm trên gà đặc biệt là gà công nghiệp do tỷ lệ bệnh cao (57%) so với các bệnh khác (Lê Văn Năm, 1996) và gây suy giảm miễn dịch làm gà dễ bị nhiễm ghép với các bệnh khác gây tổn thất cho người nuôi. Tuy nhiên trong những năm gần đây bệnh cũng được ghi nhận trên các đàn gà chăn nuôi theo hình thức hộ gia đình. Theo nghiên cứu của Hồ Thị Việt Thu (2012) thì tỉ lệ nhiễm ở những đàn gà nhỏ hơn 30 ngày tuổi (62,5%), kế đến là gà từ 30-45 ngày tuổi (54%) và thấp nhất là ở những đàn gà lớn hơn 45 ngày tuổi (23%) và gây chết với tỷ lệ là 22,3%. Chính vì vậy bệnh này được tổ chức dịch tễ thế giới (OIE) xếp vào danh mục các bệnh truyền nhiễm gây nguy hiểm đối với gia cầm. Để hiểu rõ sự lưu hành của virus Gumboro trên đàn gà nuôi thả vườn và từ kết quả nghiên cứu là cơ sở để các cơ quan thú y có biện pháp kỹ thuật hỗ trợ người chăn nuôi và đồng thời giúp người chăn nuôi hiểu thêm và nhận biết về tình hình dịch bệnh và tỷ lệ nhiễm Gumboro trên gà thả vườn, vì vậy chúng tôi thực hiện đề tài “Khảo sát sự lưu hành virus Gumboro trên gà thả vườn ở xã Thông Hòa, huyện Cầu Kè, tỉnh Trà Vinh”. Mục tiêu của đề tài: Điều tra tình hình vệ sinh trong chăn nuôi gà ở nông hộ. Khảo sát tỉ lệ nhiễm bệnh Gumboro trên gà thả vườn. 1 Chương 2. CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1. Tình hình nghiên cứu bệnh Gumboro trong và ngoài nước 2.1.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Gumboro trên thế giới Lần đầu tiên bệnh Gumboro được phát hiện tại làng Gumboro thuộc bang Delaware (Mỹ) vào năm 1957. Đến năm 1962, bệnh đã được Cosgrove mô tả chi tiết. Lúc đó người ta đặt tên cho bệnh này là “avian nephrosis” (viêm thận gà) do có sự hủy hoại nghiêm trọng ở thận. Năm 1970, Hichner đề nghị chính thức gọi bệnh do Cosgrove phát hiện là bệnh viêm túi fabricius truyền nhiễm (Infectious Bursal Disease-IBD) hay còn gọi là bệnh Gumboro. Virus gây bệnh này được gọi là virus gây viêm túi fabricius truyền nhiễm (Infectious Bursal Disease Virus-IBDV). Ở Nhật Bản khi kiểm tra huyết thanh đàn gà, có 60% dương tính với kháng thể Gumboro trong đàn gà không tiêm vaccine (Hirai, 1979). Ferran et al., (1980), đã thông báo sự tồn tại của serotype 2. Những nghiên cứu của Rosenberger et al (1985).được thực hiện vào năm 1985 tại vùng chăn nuôi gà công nghiệp Delmarva cho thấy có sự xuất hiện các biến chủng của serotype 1 và làm cho việc khống chế bệnh trở nên phức tạp. Các biến chủng này đã gây bệnh cho đàn gà đã có kháng thể thụ động chống virus Gumboro chuẩn và các chủng chuẩn về đặc tính sinh học. Đến năm 1992, tổ chức dịch tễ thế giới (OIE) đã công bố chính thức tên bệnh, triệu chứng lâm sàng, bệnh tích, các phương pháp chẩn đoán và phòng chống bệnh Gumboro (trích dẫn Nguyễn Bá Thành, 2006). Ở Châu Á bệnh Gumboro ở thể nặng được tìm thấy ở một số nước như: Trung Quốc vào năm 1990, sau đó bệnh xảy ra ở các nước trong vùng như Thái Lan, Indonesia và Nhật Bản với tỉ lệ chết lên đến 70%. Bệnh cũng xảy ra ở các nước Malaysia, Philippines và Hàn Quốc nhưng có tỉ lệ chết thấp hơn từ 20-30%. 2.1.2 Tình hình nghiên cứu bệnh Gumboro trong nước Tại Việt Nam, bệnh Gumboro được các chuyên gia Hungari và các đồng nghiệp Việt Nam chính thức phát hiện vào năm 1981 dựa vào triệu chứng, bệnh tích và dịch tễ học của bệnh (trích dẫn Thái Dương Thanh Thọ, 2011). 2 Năm 1982, Viện Thú Y Quốc gia chính thức công bố bệnh Gumboro ở Việt Nam (Trần Minh Châu và ctv, 1982). Ở Việt Nam, theo Trần Minh Châu và ctv (1982) thì bệnh được phát hiện tại một trại nuôi gà Plymouth ở tỉnh Hà Tây. Gà bị chết rất nhiều vào lúc 29-30 ngày tuổi, thời gian từ lúc xuất hiện bệnh cho đến khi kết thúc là 20 ngày. Số chết là 34% đối với toàn đàn. Dựa vào kết quả nghiên cứu về triệu chứng, bệnh tích đại thể và vi thể, cùng với diễn biến của bệnh các tác giả đã xác định là bệnh Gumboro. Năm 1987, Bệnh xảy ra nghiêm trọng ở xí nghiệp gà Cầu Diễn, thuộc Liên hiệp gia cầm Hà Nội, xí nghiệp gà giống Tam Đảo và một số xí nghiệp gà giống thương phẩm khác (Nguyễn Đăng Khải, 1988). Theo điều tra của Cục thú y, từ năm 1987 cho đến nay nhiều tỉnh trong cả nước có thông báo về bệnh Gumboro như Hà Tây, Quảng Ninh, Hải Hưng, Hà Bắc và các tỉnh phía Nam như Đà Nẵng, Long An, Sông Bé. Bệnh Gumboro đã xảy ra ở các cơ sở chăn nuôi tư nhân và cơ sở quốc doanh gây thiệt hại lớn về kinh tế. Theo Thái Thanh Dương Thọ (2011) , tỷ lệ nhiễm bệnh Gumboro trên đàn gà thả vườn là 35,2%. 2.2 Khái niệm về bệnh Gumboro Bệnh Gumboro hay còn gọi là bệnh viêm túi Fabricius truyền nhiễm (IBD) hay bệnh Sida của gà. Bệnh gây thiệt hại lớn cho chăn nuôi gà, kể cả gà nuôi công nghiệp và gà thả vườn, là bệnh truyền nhiễm cấp tính do virus có khả năng lây lan rất cao ở gà con. Bệnh chỉ biểu hiện triệu chứng lâm sàng ở giai đoạn 1-12 tuần tuổi, nhưng rõ nhất là từ 3-6 tuần tuổi, gà nhỏ hơn cũng có thể mắc bệnh ở dạng tiềm ẩn. Trong giai đoạn này tỷ lệ bệnh có thể lên đến 100% và chết có thể từ 20-50%. Bệnh gây phá hủy túi Fabricius làm sưng túi sau lại teo nhỏ, làm suy giảm khả năng miễn dịch trầm trọng nên gà dễ bị nhiễm các bệnh khác. Bệnh phát ra ở hầu hết các nước trên thế giới có chăn nuôi gà công nghiệp (Nguyễn Xuân Bình và ctv, 2005). 2.3 Căn bệnh học 2.3.1 Đặc điểm hình thái Virus Gumboro thuộc loài Avibirnavirus được xếp vào giống Birnavirus họ Birnaviridae, là loại virus trần không có vỏ bọc ngoài cùng, có cấu tạo hình khối đa diện, kích thước của virus từ 50-70 nm. 3 Virus Gumboro có cấu trúc di truyền là một mạch đôi ARN cuộn tròn và được phân thành 2 đoạn riêng biệt, vì vậy có tên là Birnavirus (Bi: 2, ARN: acid ribonucleic) nghĩa là virus có 2 đoạn ARN. Phần capxit của virus được cấu tạo bởi 32 capsomere. Mỗi capsomere cấu tạo gồm 5 loại protein cấu trúc khác nhau với tên gọi là VP1 (Viral Protein-VP), VP2, VP3, VP4, VP5 trong đó VP1 là enzyme xúc tác ARN – polymerase, VP4 là enzyme phân cắt, VP5 là yếu tố điều hòa tổng hợp VP2 VP3. VP2 và VP3 là 2 loại protein chính, còn VP1 và VP4 , VP5 là những protein phụ (Nguyễn Hồng Minh, 2012, Nguyễn Như Thanh và ctv, 2006). Hình 2.1 Mô hình cấu trúc virus gây bệnh Gumboro (Nguồn http://viralzone.expasy.org/all_by_species/572.html) 2.3.2 Sức đề kháng Virus Gumboro có sức chịu đựng, khả năng đề kháng cao và tồn tại dai dẳn nhất trong tự nhiên. Virus có thể tồn tại lâu dài trong ấu trùng Alphitobus có trong thức ăn, hàng tháng trong chất độn chuồng, hàng tuần trong nước, trong phân. Virus Gumboro đề kháng hoàn toàn với ether và chloroform nhưng lại nhạy cảm với formalin, iodur và chloromin, chỉ bị vô hoạt khi pH=12 chịu được pH=2. Virus có thể sống sót sau khi xử lý ở nhiệt độ 560C trong 5 giờ, 600C chúng vẫn còn sống nhưng ở 700C có thể bị tiêu diệt nhanh chóng sau 30 phút và chloromin 0,5% giết chết virus sau 10 phút,. Virus dễ bị tiêu diệt bởi phenol 0,5% và thimerosal ở 300C sau 1 giờ và có nhiều bằng chứng cho thấy virus không gây bệnh khi tiếp xúc với formol 0,5% trong 6 giờ, virus cũng bị vô hoạt với 3 chất sát trùng với các nồng độ khác nhau (Iod, dẫn xuất của Phenolic và hợp chất Ammonium) trong 2 phút ở 230C (trích dẫn Nguyễn Thành Trung, 1997). 4 2.3.3 Đặc tính nuôi cấy Virus có thể nuôi cấy trong túi niệu mô của phôi gà ấp 10 ngày tuổi, phôi sẽ chết sau 3-5 ngày sau khi tiêm truyền. Virus gây bệnh tích trên phôi như xoang bụng sưng to, tích nước, da sung huyết, xuất huyết, gan hoại tử thành từng vệt, xuất huyết thành từng điểm, thỉnh thoảng thấy xuất huyết ở các khớp ngón chân, xuất huyết ở vùng đại não, tim nhạt màu, có những điểm hoại tử ở thận, lách nhạt màu, màng nhung niệu có những điểm xuất huyết nhỏ. Ngoài ra, còn có thể nuôi cấy virus trong môi trường tế bào, từ những tế bào nguyên bào sợi phôi gà, phôi vịt, gà tây (Hồ Thị Việt Thu, 2012). 2.3.4 Truyền nhiễm học Loài mắc bệnh: lúc đầu người ta cho rằng gà được coi là loài duy nhất cảm thụ. Tất cả mọi giống gà đều mắc bệnh, đặc biệt là gà Leghorn trắng cảm nhiễm nhiều nhất và tỉ lệ chết cao nhất. Nhưng cho đến nay virus này được phân lập từ chim trĩ, gà gô, chim cánh cụt, cút, gà sao, gà lôi, đà điểu. Tuổi gà cảm thụ cao nhất là từ 3-6 tuần tuổi, gà nhỏ hơn 3 tuẩn tuổi bị nhiễm ở thể ẩn không có biểu hiện triệu chứng nên làm ức chế miễn dịch (Hồ Thị Việt Thu, 2012, Lê Văn Hùng, 1996). Đường xâm nhập: virus xâm nhập chủ yếu qua đường tiêu hóa. Ngoài ra, chúng còn xâm nhập qua đường hô hấp, các dịch tiết của gia cầm mắc bệnh và gia cầm mang trùng (Hồ Thị Việt Thu, 2012). Sự lây lan: Vào những năm 1985-1989, tại trung tâm nghiên cứu gia cầm Thụy Phương – Viện Chăn nuôi Quốc gia, Lê Văn Năm đã quan sát nhiều gà cùng lứa tuổi nuôi tại các ô chuồng khác nhau xen kẽ với các lứa gà khác nhau trong cùng một dãy chuồng, thì bệnh Gumboro nổ ra, thông thường nổ ra ở những gà cùng lứa tuổi, rồi sau đó mới lan sang những ô gà bên cạnh có độ tuổi khác nhau. Điều đó chứng tỏ bệnh Gumboro xảy ra và lây lan có thể trực tiếp hoặc gián tiếp qua thức ăn, nước uống hoặc do tiếp xúc với môi trường nhiễm bệnh. Bệnh lây lan từ chuồng này sang chuồng khác do người chăn nuôi, dụng cụ chăn nuôi, nguồn thức ăn, nước uống bị ô nhiễm. Chuột, bọ, chó, mèo, thú hoang dã và một số côn trùng khác đều có thể đóng vai trò lan truyền bệnh. Người ta thấy rằng chuồng nuôi của những gà bị bệnh thì virus có thể tồn tại và truyền bệnh cho gà khác từ 54-122 ngày. Bệnh không lây từ mẹ sang con qua trứng nhưng lây qua vỏ trứng bị nhiễm virus Gumboro có ở trên chuồng, trứng này đem ấp khi nở sẽ gây nhiễm cho gà con (Lê Văn Hùng, 1996, Nguyễn Tuyết Hậu, 1995, Lê Văn Năm, 2004). 5 2.4 Cơ chế sinh bệnh Qua con đường tiêu hóa : thức ăn, nước uống virus xâm nhập vào hệ tiêu hóa của gà tới niêm mạc ruột rồi xuyên qua màng ruột tại đây các tế bào đại thực bào sẽ tiếp nhận đồng thời tiếp xúc với tế bào lympho B còn non của ống tiêu hóa là loại mẫn cảm với virus, chúng bắt đầu thực hiện quá trình nhân lên, quá trình này là sự nhân lên cục bộ (sự nhân lên sơ cấp) chỉ từ 6-8 giờ một số lượng lớn virus đáng kể được giải phóng và xâm nhập vào hệ tuần hoàn. Đây là lần thứ nhất virus xuất hiện trong máu, nhưng người ta không gọi là sự nhiễm trùng vì số lượng không nhiều. Hệ tuần hoàn chỉ làm nhiệm vụ vận chuyển virus đi khắp cơ thể mà trước hết là đến lách, túi Fabricius và một số cơ quan khác (Nguyễn Hồng Minh, 2012). Thông thường 9-11 giờ sau khi vào hệ tiêu hóa thì một số lượng virus đã có mặt trong túi Fabricius và bắt đầu tấn công các loại hình tế bào lympho B, các tế bào nang bào của túi Fabricius khiến cho túi sưng to lên trong 3 ngày đầu, sau đó bắt đầu teo lại và thấy rõ sự khác nhau đó vào khoảng 7-10 ngày sau khi nổ ra bệnh. Đây là quá trình nhân lên toàn phần hay tự nhân lên thứ cấp. Số lượng lớn virus giải phóng và xâm nhập vào hệ tuần hoàn lần 2 lúc này người ta coi sự có mặt virus Gumboro trong máu là sự nhiễm trùng (viremia), làm gà sốt cao phải uống nhiều nước để tỏa nhiệt. Vì sốt cao, uống nhiều nước, sinh loạn khuẩn đường ruột,… làm cơ thể mất cân bằng vi sinh, cho nên hầu như 100% các trường hợp gà bị bệnh Gumboro đều bị bệnh thứ phát, làm cho diễn biến lâm sàng của bệnh càng phong phú, đa dạng và phức tạp. Virus Gumboro tác động gây hiện tượng bệnh lý đông máu do vậy hệ tuần hoàn xuất hiện các cục huyết khối làm nghẽn mao mạch quản chủ yếu là vùng niêm mạc túi Fabricius và ở một số nơi khác dẫn đến hiện tượng sung huyết. Khi không chịu nỗi áp suất gia tăng của máu, mao mạch bị đứt gây nên sự thẩm xuất dịch nên gây hiện tượng sung huyết, xuất huyết ở từng vùng cơ đùi, cơ ngực đồng thời ở túi Fabricius, lách, gan cũng xảy ra tương tự. Cứ như vậy thì sự sung huyết, xuất huyết từ những điểm li ti đến thành những vệt và mãng có màu sẫm. 2.5 Miễn dịch học 2.5.1 Miễn dịch chủ động Gà nhiễm virus từ tự nhiên hoặc do tiêm phòng vaccine với cả 2 loại vaccine sống hay chết đều kích thích sự tạo miễn dịch chủ động . Đối với miễn dịch chống bệnh Gumboro, quá trình miễn dịch dịch thể là quan trọng nhất. Gà 6 ở lứa tuổi nhỏ hơn 3-4 tuần tuổi chỉ cần tiếp xúc với virus Gumboro qua đường tiêu hóa có thể hình thành miễn dịch, do đó có thể sử dụng vaccine Gumboro bằng đường uống. Trên gà có độ tuổi lớn hơn hoặc gà mẹ thì đưa vaccine bằng đường tiêu hóa không có hiệu quả mà nên sử dụng bằng đường tiêm bắp hay tiêm dưới da. Do đó cần lưu ý điều này trong việc thực hiện phòng chống bệnh Gumboro (trích dẫn Bùi Kim Chi, 2009). 2.5.2 Miễn dịch thụ động Kháng thể thụ động truyền từ huyết thanh của gà mẹ sang gà con qua lòng đỏ trứng nhưng hàm lượng kháng thể phải đủ để trung hòa virus thì mới có thể bảo vệ gà con chống lại virus trong giai đoạn đầu đời của gà con. Hàm lượng kháng thể thụ động trong cơ thể gà con phụ thuộc vào khoảng thời gian tiêm vaccine cho đến khi lấy trứng ấp và hiệu giá kháng thể của gà mẹ truyền cho gà con. Theo Skeeles et al, 1979 thì hàm lượng kháng thể thụ động giảm đi một nữa trong máu gà con sau 3-5 ngày và đào thải hầu như hoàn toàn ra khỏi cơ thể sau 10-21 ngày (trích dẫn Lê Văn Năm, 2004). 2.6 Triệu chứng và bệnh tích 2.6.1 Triệu chứng Thời kỳ nung bệnh rất ngắn và triệu chứng bệnh được quan sát từ 2-3 ngày sau khi nhiễm bệnh, bệnh xảy ra bất thình lình kéo dài 2-3 ngày. Tỷ lệ nhiễm có thể lên đến 100%, tỉ lệ chết 10-30%, nếu có ghép với các bệnh khác thì tỷ lệ chết lên đến 50-60%, nhưng tỉ lệ chết cao nhất vào ngày thứ 4 (Ngô Quốc Trịnh, 2006). Do có sự khác nhau về độc lực của virus gây bệnh, nên tính chất gây bệnh cũng khác nhau, có hai thể biểu hiện cơ bản. Thể lâm sàng: do các chủng virus có độc lực trung bình và cao gây nên, chủ yếu xảy ra ở gà từ 3-6 tuần tuổi. Bệnh Gumboro ở thể lâm sàng có những triệu chứng điển hình. Sau khi virus vừa mới xâm nhập vào túi Fabricius, gà có những biểu hiện: gà có phản xạ muốn đi ngoài nhưng không đi được (Võ Bá Thọ, 2004). Đây là triệu chứng đầu tiên giúp ta phát hiện sớm bệnh Gumboro về mặt lâm sàng. Sau đó gà bắt đầu sốt cao, đó là lúc virus gây bệnh đã xâm nhập vào đường máu, đường lâm ba đến tế bào lympho B hệ 2, tại thời điểm này chúng sinh sản nhanh và tăng gấp nhiều lần về số lượng. Do sốt cao gà uống nhiều nước và sinh ra rối loạn tiêu hóa, mất cân bằng sinh thái đường ruột dẫn đến gà bị viêm ruột và tiêu chảy xung quanh hậu môn gà dính bết đầy phân. Phân gà lúc này trở nên loãng có nhiều nước, lúc đầu màu trắng ngà sau chuyển sang màu trắng vàng, xanh vàng đôi khi có lẫn máu. Gà mắc bệnh Gumboro lúc đầu 7 biếng ăn, suy nhược, lông xù, run, cổ rụt lại và phân đôi khi có lẫn máu rất dễ nhầm lẫn với bệnh cầu trùng. Khi bệnh nặng dần lên gà bị tiêu chảy và mất nước dẫn đến nằm liệt một bên, chân và cánh duỗi ra thân nhiệt thấp hơn bình thường. Một đến hai ngày sau khi phát bệnh gà bắt đầu chết. Hiện tượng gà chết kéo dài 7-8 ngày, tùy vào mức độ nghiêm trọng và sức đề kháng của đàn gà (Phạm Sỹ Lăng và ctv, 2004). Hình 2.2 Gà bệnh suy nhược, lờ đờ Hình 2.3 Gà tiêu chảy phân loãng và trắng (JICA_SNIVR, 2001) Thể tiềm ẩn: đối với những gà nhiễm bệnh dưới 2-3 tuần tuổi thường không có biểu hiện triệu chứng nhưng những gà này bị suy giảm miễn dịch nặng, rất dễ bị nhiễm những bệnh truyền nhiễm khác (Hồ Thị Việt Thu, 2012). 2.6.2 Bệnh tích Bệnh tích đại thể Ở thể ẩn tính bệnh tích có thể quan sát được là teo tuyến ức và túi Fabricius. Ở thể cấp tính: quan sát thấy cơ sậm màu, cơ đùi, cơ ngực có nhiều điểm xuất huyết đôi khi tạo thành từng vệt dài. 8 Hình 2.4 Xuất huyết lấm chấm ở cơ đùi (JICA_SNIVR, 2001) Nơi tiếp giáp giữa dạ dày tuyến và dạ dày cơ xuất huyết, lách bị hoại tử lấm chấm, niêm mạc màng ruột có khi dày lên và kèm theo xuất huyết. Hình 2.5 Xuất huyết giữa dạ dày tuyến và dạ dày cơ (Hồ Thị Việt Thu, 2009) Theo Cheville (1996) kích thước túi Fabricius biến đổi như sau: ngày thứ 3 sau khi nhiễm virus do bị thủy thũng, viêm sưng nên túi bắt đầu tăng kích thước và trọng lượng, đến ngày thứ 4 kích thước tăng gấp đôi so với lúc bình thường. Đến ngày thứ 5 kích thước túi trở lại bình thường, rồi tiếp tục nhỏ dần. Từ ngày thứ 8 trở đi thì kích thước và trọng lượng chỉ còn 1/2 hoặc 1/3 so với bình thường. Bình thường túi Fabricius có màu trắng, nhưng khi gà mắc bệnh thì túi bị biến đổi chuyển từ màu trắng sang vàng chanh và được bao bọc một lớp tiết xuất nhớt cùng màu. Trong trường hợp nặng có thể bị xuất huyết, màu của túi chuyển thành màu đỏ, có khi đỏ thẩm. Các nếp gấp bên trong dày lên bề mặt phủ một lớp như bã đậu phụ. 9 Hình 2.6 Túi Fabricius sưng to, niêm mạc sung huyết hoặc xuất huyết (JICA_SNIVR, 2001) Bệnh tích vi thể Các bệnh tích vi thể của gà bệnh Gumboro xảy ra đặc trưng ở các cơ quan có cấu trúc từ tế bào lympho như túi Fabricius, lách, tuyến ức, tuyến Harder và hạch bạch huyết manh tràng. Túi Fabricius là nơi xảy ra những biến đổi vi thể nhiều nhất và đặc trưng nhất. Ngay 24 giờ sau nhiễm, phần lớn tế bào lympho trong túi đã bị thoái hóa. Từ 72-96 giờ sau khi nhiễm hầu như 100% các nang lympho của túi Fabricius đều có bệnh tích như trên. Ở giai đoạn 48-96 giờ các tế bào biểu mô bề mặt niêm mạc túi tăng sinh đồng thời các tế bào hình trụ bị kích thích do virus tiết ra nhiều chất nhầy mucin đổ vào lòng túi làm trong túi có nhiều bọt màu vàng (Lê Văn Hùng, 1996). 2.7 Chẩn đoán 2.7.1 Chẩn đoán lâm sàng Dựa vào đặc điểm dịch tễ là bệnh xảy ra thình lình, tỷ lệ chết tăng cao (ở ngày thứ 3, thứ 4 sau khi dịch bắt đầu bùng phát) và giảm nhanh, bệnh kết thúc trong khoảng một tuần, tỷ lệ mắc bệnh cao nhưng tỷ lệ chết thấp. Bệnh tích điển hình là ở túi Fabricius (sưng to, thủy thũng, xuất huyết), xuất huyết cơ đùi, cơ ngực, thận sưng. 2.7.2 Chẩn đoán phân biệt Trong chẩn đoán cần phân biệt bệnh Gumboro với các bệnh khác như: Bệnh Newcastle: triệu chứng và bệnh tích giống với Gumboro: ủ rũ, phân trắng, xuất huyết dạ dày. Nhưng bệnh Newcastle không sưng, không xuất huyết và không teo ở túi Fabricius và cũng không xuất huyết cơ ngực và cơ đùi. Diễn biến của Newcastle kéo dài còn Gumboro chỉ xảy ra trong vòng 5-10 ngày là kết thúc. 10 Bệnh tụ huyết trùng: giống Gumboro về triệu chứng chết nhanh, phân lẫn máu và liệt chân. Nhưng bệnh tụ huyết trùng không xuất huyết túi Fabricius và dạ dày. Khi dùng kháng sinh Gentamycin, Floxacin, Enrofloxacin, Tetramycin,… điều trị thì bệnh cầm ngay. Còn bệnh Gumboro lại chết tăng cao. Bệnh cầu trùng: triệu chứng giống Gumboro là phân đỏ, xù lông. Nhưng bệnh cầu trùng diễn biến và lây lan chậm. Tỷ lệ chết thấp. Bệnh tích không sưng túi Fabricius, không xuất huyết cơ. Bệnh viêm phế quản truyền nhiễm: chỉ có thận sưng nhưng không có bệnh tích ở túi Fabricius không xuất huyết cơ. 2.7.3 Chẩn đoán phòng thí nghiệm Chẩn đoán virus học Dùng huyễn dịch 10% hoặc 20% từ bệnh phẩm là túi Fabricius hoặc lách của gà mắc bệnh nhỏ vào miệng, mắt, hậu môn cho gà từ 3-6 tuần tuổi. Những gà này chưa tiêm vaccine Gumboro, không nằm trong vùng có dịch Gumboro và không có kháng thể kháng virus Gumboro. Sau khi gây nhiễm, triệu chứng lâm sàng phát hiện đầu tiêm là gà quay đầu mổ vào hậu môn của chính nó. Sau 2-3 ngày, gà tiêu chảy phân lỏng, mổ khám thấy có bệnh tích đại thể là túi Fabricius sưng to, có dịch nhày bên ngoài, cơ ngực, cơ đùi xuất huyết (trích dẫn Nguyễn Bá Thành, 2006) Chẩn đoán huyết thanh học Virus Gumboro khi xâm nhập vào cơ thể sẽ kích thích cơ thể sinh ra kháng thể dịch thể, kháng thể này có trong máu với một lượng tương đối lớn. Do đó, có thể dùng phản ứng huyết thanh học phát hiện kháng thể này khi có kháng nguyên chuẩn là virus Gumboro và ngược lại khi có huyết thanh chuẩn Gumboro thì có thể phát hiện kháng nguyên. Phản ứng ELISA là một kỹ thuật sinh hóa thường được sử dụng nhất trong việc phát hiện kháng thể hay kháng nguyên trong mẫu xét nghiệm. Hiện nay ELISA được sử dụng rộng rãi trong nhiều lĩnh vực nghiên cứu như y học, nông nghiệp và đặc biệt là trong các quy trình an toàn chất lượng các sản phảm sinh học. Đối với các ELISA phát quang, ánh sáng sẽ được phát ra từ mẫu chứa kháng nguyên – kháng thể. Sự hiện diện của phức hợp kháng nguyên – kháng thể sẽ quyết định cường độ ánh sáng phát ra. 11 Để tiến hành ELISA cần phải có ít nhất một kháng nguyên đặc hiệu cho kháng nguyên chưa biết. Thông thường kháng nguyên được cố định tại các giếng của đĩa. Giữa các bước của ELISA, các protein và các kháng thể không đặc hiệu, kháng thể không gắn với kháng nguyên sẽ được loại bỏ sau các tác dụng rữa. Sau bước rữa cuối cùng, chỉ còn kháng thể liên kết với kháng nguyên được giữ lại. Sau khi được cho vào, cơ chất sẽ chịu tác động của enzyme liên kết với kháng thể trong phức hợp kháng nguyên – kháng thể. Sự hiện diện của kháng nguyên hay kháng thể được xác định bằng giá trị OD qua máy đọc ELISA ở bước sóng phù hợp. Ngoài ra cũng có thể sử dụng phản ứng trung hòa virus hoặc phản ứng kết tủa khuếch tán trên thạch (Hồ Thị Việt Thu, 2011). 2.8 Phòng và điều trị bệnh 2.8.1 Phòng bệnh Virus Gumboro có thể tồn tại lâu trong môi trường tự nhiên, trong chuồng gà có thể lên tới 122 ngày, đây chính là nguồn bệnh tiềm tàng và nguy hiểm. Do đó phòng chống bệnh Gumboro phải tiến hành biện pháp tổng hợp: phải tăng cường vệ sinh công tác thú y, giữ đúng nguyên tắt khử trùng tiêu độc, giữ vệ sinh thức ăn nước uống, hệ thống chất thả. Thế nhưng để phòng bệnh Gumboro buộc phải sử dụng vaccine. Quy trình tiêm phòng tùy thuộc vào tình hình dịch bệnh từng nơi và tình trạng miễn dịch của đàn gà (Hồ Thị Việt Thu, 2012). 8 ngày tuổi phòng bệnh Gumboro lần 1 bằng vaccine Gumboro, nhỏ mắt. 18 ngày tuổi phòng bệnh Gumboro lần 2 bằng vaccine Gumboro, tiêm dưới da hoặc tiêm bắp. 35 ngày tuổi phòng bệnh Gumboro lần 3 bằng vaccine Gumboro, tiêm dưới da hoặc tiêm bắp. 2.8.2 Điều trị Không có thuốc điều trị đặc hiệu bệnh Gumboro, tăng cường sức đề kháng gà bằng việc nuôi dưỡng, quản lý, chăm sóc. Cho uống Anti-Gum (1g/1 lít nước uống) kết hợp với Vime-Amino (2g/1 lít nước uống 3g/kg thức ăn) nhằm để cung cấp đầy đủ chất điện giải và 12 vitamin, giúp gà khỏi bệnh nhanh chóng, làm giảm tỷ lệ chết trong đàn. Hiệu quả điều trị cao khi kết hợp với kháng thể Gumboro. Điều trị bằng kháng thể HANVET K.T.G (dưới 500g: 1ml/con, trên 500g: 2ml/con). Trong trường hợp có kế phát bệnh khác cần sử dụng thêm các thuốc đặc hiệu để điều trị các bệnh kế phát (Hồ Thị Việt Thu, 2012). 13 Chương 3. PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP THÍ NGHIỆM 3.1 Nội dung Điều tra tình hình vệ sinh thú y trong chăn nuôi gà ở nông hộ ở xã Thông Hòa, huyện Cầu Kè, tỉnh Trà Vinh. Điều tra tỉ lệ nhiễm virus Gumboro qua kiểm tra huyết thanh học. 3.2 Phương tiện thí nghiệm 3.2.1 Thời gian và địa điểm Thời gian thực hiện đề tài: từ tháng 8/2013 đến tháng 12/2013. Địa điểm thí nghiệm: Các mẫu huyết thanh gà được thu thập ở các hộ chăn nuôi gà thả vườn tại xã Thông Hòa, huyện Cầu Kè, tỉnh Trà Vinh. Các mẫu huyết thanh được xét nghiệm tại phòng thí nghiệm bệnh truyền nhiễm bộ môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ. 3.2.2 Đối tượng thí nghiệm Hai giống gà tàu và gà nòi ở mọi lứa tuổi được nuôi theo hình thức thả vườn ở từng hộ gia đình tại xã Thông Hòa, huyện Cầu Kè, tỉnh Trà Vinh. 3.2.3 Vật liệu thí nghiệm Dụng cụ Ống tiêm 1ml, 5ml, găng tay, khẩu trang, kim tiêm, ống nghiệm vô trùng, bông gòn vô trùng, thùng đựng mẫu, Eppendoft nhựa 1,5ml, micropipette, nhãn dán ống nghiệm. Hóa chất và sinh phẩm Cồn 700, nước cất, bộ kít ELISA (USA) 14 Bảng 3.1 Thành phần bộ kit ELISA Stt Thành phần 1 Đĩa 96 giếng có hấp thụ kháng nguyên IBD 2 Đối chứng dương IBD 3 Đối chứng âm IBD 4 Conjugate 5 Dung dịch pha loãng mẫu 6 Dung dịch TMB Substrate (enzyme cơ chất) 7 Dung dịch Stop Solution (dừng phản ứng) Số lượng 5 1,9 ml 1,9 ml 50 ml 235 ml 60 ml 60 ml Thiết bị máy móc: tủ lạnh, máy lắc mẫu, máy đọc ELISA, máy chụp hình kỹ thuật số. 3.3 Phương pháp tiến hành 3.3.1 Điều tra tình hình vệ sinh trong chăn nuôi gà ở nông hộ Điều tra những thông tin về giống, vệ sinh thú y như: sát trùng chuồng trại, tiêm phòng được thu thập qua phỏng vấn trực tiếp từ người chăn nuôi dựa vào phiếu điều tra thông tin (Phần phụ chương 1). 3.3.2 Phương pháp lấy mẫu Cách lấy mẫu: Lấy máu từ gà của 81 hộ chăn nuôi với 104 mẫu ở xã Thông Hòa. Vị trí lấy máu: tĩnh mạch cánh Gà sau khi được cố định tiến hành sát trùng vùng cánh bằng cồn 700 nơi tĩnh mạch. Sau đó dùng ống tiêm vô trùng lấy máu ở tĩnh mạch cánh (theo hướng song song) lấy khoảng từ 3-4 ml/con, sau đó tháo kim ra rồi bơm nhẹ vào ống nghiệm vô trùng và ghi lại ký hiệu của gà (ngày lấy mẫu, giống gà, nhóm gà). Đặt ống nghiệm nằm nghiêng có chứa mẫu khoảng 450 so với mặt đất để yên cho máu đông lại đến khi ra huyết thanh, ta chiết lấy huyết thanh cho vào eppendoft rồi trữ trong thùng trữ lạnh, chuyển về phòng thí nghiệm. Sau đó được bảo quản ở -200C trong tủ đông cho đến khi thực hiện phản ứng ELISA. 15 3.3.3 Qui trình xét nghiệm Nguyên lý Kỹ thuật ELISA là phản ứng huyết thanh học dựa vào phản ứng miễn dịch học giữa kháng nguyên và kháng thể chuẩn. Kháng nguyên hoặc kháng thể có trong huyết thanh sẽ được gắn kết với kháng thể hoặc kháng nguyên đã được hấp thụ trong đĩa 96 giếng. Thành phần không gắn kết sẽ bị rữa trôi, phần tiếp tục giữ lại tiếp tục kết hợp với Conjugate (Chất kết hợp) có enzyme peroxidase. Phản ứng chuyển màu (từ không màu sang màu xanh dương) khi có sự tham gia cơ chất Chromagen. Mức độ màu thể hiện ở mỗi giếng tương ứng với hàm lượng kháng thể ở mỗi mẫu xét nghiệm. Máy đọc ở bước sóng phù hợp sẽ xác định được lượng kháng thể hoặc kháng nguyên giữ lại trong giếng. Phương pháp thực hiện Tất cả các thuốc thử và bộ kít để ở nhiệt độ phòng, lắc đều các lọ trước khi sử dụng. Chuẩn bị mẫu Các mẫu huyết thanh cần kiểm tra được pha loãng 500 lần (1:500) với dung dịch pha mẫu trước khi xét nghiệm (pha 1 µl mẫu với 500 µl dung dịch pha mẫu). Lưu ý: không pha loãng các mẫu đối chứng (âm và dương). Sau đó dùng máy lắc trộn đều mẫu huyết thanh với dung dịch pha mẫu trước khi cho vào đĩa ELISA có gắn kháng nguyên IBD. Bắt đầu với giếng A5 và kết thúc bằng giếng H12 (di chuyển trái sang phải) như hình sau: Hình 3.1 Sơ đồ bố trí huyết thanh xét nghiệm ELISA Ghi chú: 1-92 là mẫu cần xét nghiệm, (+): Đối chứng dương, (-) : Đối chứng âm. 16 Quy trình thực hiện phản ứng 1. Cho 100 µl đối chứng dương vào giếng A1 và A2. 2. Cho 100 µl đối chứng âm vào giếng A3 và A4. 3. Cho 100 µl mẫu cần kiểm tra vào mỗi giếng theo sơ đồ 3.1 4. Ủ trong 30 phút ở nhiệt độ phòng. 5. Giũ hết các chất lỏng trong các giếng vào bồn rữa dụng cụ. 6. Cho 350 µl nước cất vào mỗi giếng, sau đó giũ hết các chất lỏng vào bồn rữa dụng cụ, thực hiện lặp lại 3-5 lần. 7. Cho 100 µl Conjugate vào tất cả các giếng. 8. Ủ trong 30 phút ở nhiệt độ phòng. 9. Lặp lại bước 5 và 6. 10. Cho 100 µl dung dịch TMB Substrate Solution vào mỗi giếng. 11. Ủ trong 15 phút ở nhiệt độ phòng. 12. Cho 100 µl dung dịch Stop Solution vào mỗi giếng để dừng phản ứng. 13. Đọc kết quả bằng máy đọc ELISA ở bước sóng 650 nm. Kết quả Kết quả có giá trị khi sự khác biệt giữa trung bình đối chứng dương và trung bình đối chứng âm (PC ̅ - NC ̅ ) lớn hơn 0,075. Giá trị OD trung bình đối chứng âm phải nhỏ hơn hoặc bằng 0,150. Sự có mặt hoặc không có mặt của kháng thể kháng Gumboro trong mẫu huyết thanh được xác định dựa vào các giá trị OD đo được ở bước sóng 650nm. Sự tương quan nồng độ kháng thể trong các mẫu xét nghiệm được xác định bằng cách tính toán tỷ lệ dương tính của mẫu (the sample to positive (S/P) ratio). Mẫu xét nghiệm được kết luận dương tính khi tỷ lệ S/P lớn hơn 0,20 (hiệu giá lớn hơn 396) và âm tính khi tỷ lệ S/P nhỏ hơn hoặc bằng 0,20. 17 Tính toán kết quả - Trung bình đối chứng dương (PC ̅ ) Giá trị OD650 giếng A1 + Giá trị OD650 giếng A2 (PC ̅ ) = 2 - Trung bình đối chứng âm (NC ̅ ) Giá trị OD650 giếng A3 + Giá trị OD650 giếng A4 (NC ̅ ) = 2 - Tỷ lệ S/P (Sample/Positive) OD mẫu - NC ̅ S/P = PC ̅ - NC ̅ - Hiệu giá (Titer) Log10 Titer = 1,09 (log10 S/P) + 3,36 Titer = 10^[1,09 (log10 S/P) + 3,36] 3.4 Chỉ tiêu theo dõi - Tỷ lệ mẫu dương tính Số mẫu dương tính Tỷ lệ mẫu dương tính (%) = x 100 Tổng số mẫu khảo sát 3.5 Phương pháp xử lý thống kê Tất cả các số liệu thô được xử lý nhóm bằng phần mềm MS – Excel 2007. So sánh tỷ lệ gà nhiễm Gumboro giữa các nhóm gà, giống, hình thức nuôi, quy mô đàn bằng phép thử Chi-Square test và so sánh hiệu giá kháng thể trung bình giữa các nhóm gà bằng phép thử t của phần mềm Minitab Version 14. 18 Chương 4. KẾT QUẢ THẢO LUẬN 4.1 Kết quả điều tra tình hình vệ sinh trong chăn nuôi gà ở nông hộ Vệ sinh sát trùng là một khâu quan trọng nhằm để giúp ngăn chặn sự phát sinh mầm bệnh cũng như làm giảm số lượng mầm bệnh đang có. Qua quá trình điều tra chúng tôi ghi nhận từ thực tế thì việc thực hiện công tác vệ sinh thú y, phòng bệnh cho đàn gà thả vườn chưa được người chăn nuôi quan tâm và kết quả khảo sát được trình bày qua bảng 4.1 Bảng 4.1 Tình tình vệ sinh trong chăn nuôi gà ở nông hộ (n=81) Tình trạng vệ sinh thú y Số hộ thực hiện Tỷ lệ (%) Sát trùng chuồng trại giữa hai đợt nuôi 19 23,5 Bỏ trống chuồng 2-3 tuần trước khi nhập gà 16 19,8 Không sát trùng lần nào 46 56,8 Tiêm phòng Gumboro 0 0 Từ kết quả của bảng 4.1 cho thấy tình trạng vệ sinh thú y chỉ một số ít hộ thực hiện trong 81 hộ điều tra thì có 19 hộ thực hiện việc sát trùng chiếm tỷ lệ 23,5% nhưng chưa thật sự mang lại hiệu quả tốt. Nguyên nhân là do người dân chưa chủ động tìm hiểu đúng qui trình kỹ thuật, khoảng cách thời gian giữa các lần phun thuốc khá xa, người nuôi không chủ động phun mà chờ cán bộ thú y xã đến phun hoặc chỉ được thực hiện vào những đợt có cấp thuốc sát trùng Bencocid. Người dân chưa chủ động mua thuốc sát trùng để vệ sinh tiêu độc khu vực chăn nuôi theo định kỳ. Việc bỏ trống chuồng thì có 16 hộ thực hiện chiếm tỷ lệ 19,8%, việc bỏ trống chuồng nuôi chỉ được thực hiện đối với những hộ nuôi theo hình thức bán thả lan. Không thực hiện sát trùng lần nào trong quá trình nuôi chiếm hơn 50% số hộ khảo sát vì hầu hết chăn nuôi gà ở xã Thông Hòa chủ yếu là thả lan nên người chăn nuôi chưa quan tâm đến việc sát trùng khu vực nuôi. Bên cạnh đó nuôi theo hình thức thả lan thì việc sát trùng sẽ tốn kém do diện tích rộng, nếu không có sự hỗ trợ của Nhà nước nên phần nào hạn chế việc thực hiện vệ sinh sát trùng chuồng trại ở các hộ chăn nuôi gà theo hình thức hộ gia đình. Bên cạnh đó người chăn nuôi chưa chủ động tìm hiểu về kỹ thuật chăn nuôi cũng như qui trình phòng bệnh cho đàn gà. Việc tiêm phòng được thực hiện từ thú y xã. Tuy nhiên chỉ được thực hiện trên cúm. Đối với việc tiêm phòng vaccine Gumboro thì người dân phải tự túc không được hỗ trợ của Nhà nước, nhưng theo điều tra thì không có hộ nào thực hiện trên đàn gà. Chính vì thế do công tác vệ sinh sát trùng kém sẽ tạo điều kiện cho sự phát triển của các bệnh truyền nhiễm đặc biệt là bệnh 19 Gumboro vì vậy người chăn nuôi cần quan tâm. Qua quá trình điều tra ở các nông hộ cho thấy các hộ nuôi gà chưa được tập huấn về phòng chống dịch bệnh. Công tác thú y xã thì chưa có chính sách hỗ trợ, cần có những lớp tập huấn để giúp người chăn nuôi có thêm kiến thức và kinh nghiệm nuôi an toàn, hiệu quả. 4.2 Tỷ lệ nhiễm Gumboro Bảng 4.2 Tỷ lệ nhiễm Gumboro theo nhóm Nhóm Số mẫu khảo sát 75 Số mẫu dương tính 56 Tỷ lệ dương tính (%) 74,7a Gà thịt 29 13 44,8b Tổng 104 69 66,3 Gà sinh sản P S/P 1,68 0,004 1,11 Tỷ lệ (%) Các giá trị trên cùng một cột với số mũ khác nhau thì khác nhau có ý nghĩa thống kê (p[...]... Bursal Disease Virus IBD Infectious Bursal Disease AGP Agar Gel Precipitation VP Viral Protein ARN Acid RiboNucleic S/P Sample/Positive PC Psitive Control NC Negative Control ix TÓM LƯỢC Đề tài: Khảo sát sự lưu hành virus Gumboro trên gà thả vườn ở xã Thông Hòa, huyện Cầu Kè, tỉnh Trà Vinh được tiến hành tại các hộ chăn nuôi gà thả vườn trên địa bàn xã Thông Hòa, huyện Cầu Kè, tỉnh Trà Vinh và phòng... rõ sự lưu hành của virus Gumboro trên đàn gà nuôi thả vườn và từ kết quả nghiên cứu là cơ sở để các cơ quan thú y có biện pháp kỹ thuật hỗ trợ người chăn nuôi và đồng thời giúp người chăn nuôi hiểu thêm và nhận biết về tình hình dịch bệnh và tỷ lệ nhiễm Gumboro trên gà thả vườn, vì vậy chúng tôi thực hiện đề tài Khảo sát sự lưu hành virus Gumboro trên gà thả vườn ở xã Thông Hòa, huyện Cầu Kè, tỉnh Trà. .. trong chăn nuôi gà ở nông hộ ở xã Thông Hòa, huyện Cầu Kè, tỉnh Trà Vinh Điều tra tỉ lệ nhiễm virus Gumboro qua kiểm tra huyết thanh học 3.2 Phương tiện thí nghiệm 3.2.1 Thời gian và địa điểm Thời gian thực hiện đề tài: từ tháng 8/2013 đến tháng 12/2013 Địa điểm thí nghiệm: Các mẫu huyết thanh gà được thu thập ở các hộ chăn nuôi gà thả vườn tại xã Thông Hòa, huyện Cầu Kè, tỉnh Trà Vinh Các mẫu huyết... Kết quả trên cho thấy tỷ lệ gà nhiễm Gumboro trong quá trình kiểm tra có tỷ lệ khá cao là do gà nhiễm tự nhiên đặc biệt là ở gà sinh sản có tỷ lệ nhiễm cao hơn gà thịt có thể do gà có độ tuổi lớn hơn nên có khả năng tiếp xúc với bệnh nhiều hơn Qua đó cho thấy là có sự lưu hành của virus Gumboro trên đàn gà ở địa phương khảo sát Theo Harai (1979) ở Nhật Bản khi kiểm tra huyết thanh học trên đàn gà không... vaccine Gumboro thì có đến 60% gà có kháng thể kháng virus Gumboro Kết quả trên nghiên cứu cho thấy gà thả vườn có tỷ lệ nhiễm Gumboro khá cao điều này chứng tỏ tình hình dịch tễ của bệnh Gumboro có thay đổi so với trước đây và bệnh Gumboro trở nên phổ biến ở gà thả vườn Theo Lê Văn Năm (2004), bệnh xảy ra chủ yếu trên đàn gà nuôi công nghiệp Hình 4.1 Mẫu huyết thanh dương tính với kháng thể Gumboro. .. hoàn toàn Với kết quả này cho ta thấy tình hình nhiễm Gumboro xảy ra ở mọi hình thức nuôi không chỉ trên những gà tập trung nuôi theo kiểu công nghiệp với quy mô lớn mà còn ở những gà thả vườn nuôi theo hình thức thả lan Hình 4.2 Gà nuôi thả lan Hình 4.3 Gà nuôi bán thả lan 22 Bảng 4.4 Tỷ lệ gà nhiễm Gumboro theo giống gà Giống gà Tàu Số mẫu khảo sát 53 Số mẫu dương tính 35 Tỷ lệ dương tính (%) 66,04... (2011) , tỷ lệ nhiễm bệnh Gumboro trên đàn gà thả vườn là 35,2% 2.2 Khái niệm về bệnh Gumboro Bệnh Gumboro hay còn gọi là bệnh viêm túi Fabricius truyền nhiễm (IBD) hay bệnh Sida của gà Bệnh gây thiệt hại lớn cho chăn nuôi gà, kể cả gà nuôi công nghiệp và gà thả vườn, là bệnh truyền nhiễm cấp tính do virus có khả năng lây lan rất cao ở gà con Bệnh chỉ biểu hiện triệu chứng lâm sàng ở giai đoạn 1-12 tuần... vườn ở xã Thông Hòa, huyện Cầu Kè, tỉnh Trà Vinh Mục tiêu của đề tài: Điều tra tình hình vệ sinh trong chăn nuôi gà ở nông hộ Khảo sát tỉ lệ nhiễm bệnh Gumboro trên gà thả vườn 1 Chương 2 CƠ SỞ LÝ LUẬN 2.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Gumboro trong và ngoài nước 2.1.1 Tình hình nghiên cứu bệnh Gumboro trên thế giới Lần đầu tiên bệnh Gumboro được phát hiện tại làng Gumboro thuộc bang Delaware (Mỹ) vào năm... trình nuôi chiếm hơn 50% số hộ khảo sát vì hầu hết chăn nuôi gà ở xã Thông Hòa chủ yếu là thả lan nên người chăn nuôi chưa quan tâm đến việc sát trùng khu vực nuôi Bên cạnh đó nuôi theo hình thức thả lan thì việc sát trùng sẽ tốn kém do diện tích rộng, nếu không có sự hỗ trợ của Nhà nước nên phần nào hạn chế việc thực hiện vệ sinh sát trùng chuồng trại ở các hộ chăn nuôi gà theo hình thức hộ gia đình... bệnh Gumboro ở hình thức nuôi thả lan là 67,8% cao hơn hình thức bán thả lan (23,5%) và sự khác này có ý nghĩa thống kê (P