Nghiên cứu điều chế glucose từ tinh bột và tổng hợp một số dẫn chất của glucosed dự đoán có tác dụng sinh học

Trong đề tài này, với hy vọng là có thể góp một phần nhỏ bé vào công việc điều chế Glucose dược dụng cũng như tổng hợp một số dẫn chất có tác dụng sinh học, chúng tôi đã tiến hành nghiên

BỘ YTẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC • • Dược • HÀ NỘI•

TS Giang Thị Sơn

Bộ môn Hóa hữu cơ Trường Đại học Dược Hà Nội 3/2003 - 5/2003

LỜI CẢM ƠN

Em xin bầy tỏ lòng biết ơn sâu sắc đối với TS Giang Thị Sơn, người

đã tận tình hướng dẫn em trong quá trình thực hiện khoá luận này.

Em xỉn chân thành cảm ơn tới các thầy cô giáo, kỹ thuật viên bộ môn Hóa hữu cơ Trường Đại học Dược Hà Nội đã giúp đỡ, động viên em trong quá trình thực hiện khoá luận tại bộ môn.

Em xin chân thành cảm ơn TS Đỗ Ngọc Thanh và cán bộ Phồng thí nghiệm trung tâm trường Đại học Dược Hà Nội; GVC Nguyễn Lệ Phi cùng cán bộ bộ môn vỉ sinh trường Đại học Dược Hà Nội; TS Lê Ngọc Vân, KS Lê Thị Tập Khoa Vi sinh, Viện lao và bệnh phổi TW.

Cuối cùng em xin bầy tỏ lòng biết ơn tới toàn thể các thầy cô giáo, các cán bộ trong trường vê những giúp đỡ trong suốt 5 năm học qua.

Hà Nội, ngày 15 tháng 5 năm 2003

Sinh viên

Nguyễn Xuân Bách

MỤC LỤC

Đặt vấn đ ề 1

Phần 1 : Tổng quan 2

1.1 Glucose và các phương pháp điều chế 2

1.1.1 Sơ lược về Glucose 2

1.1.2 Phương pháp điều chế Glucose 3

1.1.3 Chất lượng Glucose 6

1.2 Dẫn chất hydrazon 10

.1.2.1.Tác dụng sinh học của hydrazon 10

1.2.2 Các phương pháp tổng hợp dẫn chất hydrazon 13

Phần 2 : Thực nghiệm và Kết quả 15

2.1 Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu 15

2.2 Điều chế Glucose 15

2.2.1 Thủy phân tinh bột 16

2.2.2 Tinh chế dịch thủy phân 16

2.2.3 Kết tinh, phân ly, tạo sản phẩm cuối c ù n g 17

2.3 Tổng hợp dẫn chất hydrazon của Glucose 19

2.3.1 Tổng hợp isonicotinoyl hydrazon 19

2.3.2 Tổng hợp Thiosemicarbazon 20

2.3.3 Tổng hợp semicarbazon 21

2.3.4 Tổng hợp 2,4-dinitro phenylhydrazon .23

2.3.5 Tổng hợp oxazon 24

2.4 Tóm tắt kết quả tổng hợp hóa học 25

2.5 Thử tác dụng sinh học của các chất tổng hợp được 29

2.5.1 Thử tác dụng kháng khuẩn, kháng n ấ m 29

2.5.2 Thử test nhậy cảm với vi khuẩn la o 31

2.6 Bàn luận và nhận xét kết q u ả 35

Kết luận và đề x u ấ t 36

Tài liệu tham khảo

: Ethanol : Dimethylformamid : Khối lượng phân tử : Gluco Amyĩase : a ( p,y )-amylase

ĐẶT VẤN ĐỂ

Từ trước đến nay, Glucose đã và đang được sử dụng trong nhiều lĩnh vực như công nghiệp thực phẩm, kỹ nghệ rượu bia, kỹ nghệ đồ hộp và một ngành mà ta không thể không nhắc tới đó là : Công Nghiệp Dược Phẩm

Trong ngành Dược, Glucose được dùng để pha huyết thanh nhân tạo, dùng làm tá dược trong công nghệ bào chế thuốc viên Ngoài ra Glucose còn được dùng làm nguyên liệu để tổng hợp một số dẫn chất có tác dụng sinh học đang lưu hành trên thị trường như [9,18]:

1 - Glucametacin với các biệt dược Teoremac ( Sanfer - Italia ), Euminex (

Lacer-Tây Ban N h a ) có tác dụng giảm đau, hạ sốt, chống viêm

2 - Glucosamin, có biệt dược: Dona của Ofermann - Đức và Rottapharm -

cả hệ thống Y-Dược của chúng ta

Trong đề tài này, với hy vọng là có thể góp một phần nhỏ bé vào công việc điều chế Glucose dược dụng cũng như tổng hợp một số dẫn chất có tác dụng sinh học, chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu với những mục tiêu sau :

- Điều chế Glucose từ tinh bột

- Tổng hợp một số dẫn chất của Glucose

- Thăm dò tác dụng sinh học của các chất tổng hợp được

PHẢN 1: TONG QUAN

1.1 Glucose và các phương pháp điều chế

1.1.1 Sơ lược về Glucose

Glucose (hay Dextrose) tồn tại dưới dạng tự do trong quả mật của một số

loài thực vật (nho) và cả trong cơ thể động vật: Trong máu người luôn có từ

0.08%- 0.1% Glucose Ngoài ra người ta còn thấy Glucose dưới dạng kết hợp

như trong Glucosid, trong oligosaccarid, polysacarid, cellulose, tinh bột và

trong Glycogen ở tổ chức gan [1,17]

Glucose tồn tại dưới dạng bột kết tinh mầu trắng, không mùi, vị ngọt, dễ

tan trong nước, hơi tan trong ethanol 96% Trong môi trường nước, D-

Glucose kết tinh ở dạng a bền vững, ở dung dịch acid loãng D-Glucose sẽ kết

tinh dưới dạng ị3, tuy nhiên dạng này không bền vững nên khi gặp vết nước sẽ

chuyển ngay sang dạng a [1,17]

Về cấu trúc hoá học, Glucose có mạch gồm 6 nguyên tử carbon không

phân nhánh, chứa 5 chức alcol, 1 chức aldehyd :

OH OH OH OH OH

Tuy nhiên khi nghiên cứu sâu hơn, ngưòi ta thấy Glucose còn có một số

cấu trúc dạng vòng, khi đó nhóm aldehyd kết hợp với hidro của nhóm OH l /alcol để tạo thành bán acetal:

Công thức vòng của Glucose do Colley (1870) và Tollens (1884) đề nghị, đến năm 1912 được Fisher công nhận và đến năm 1926, W.N Haworth xác định bản chất của vòng :

Sau này bằng phương pháp phân tích tinh thể học vói tia X, người ta nhận ra Glucose còn có cấu dạng không gian như sau :

Với một số quan niệm như trên về công thức cấu tạo, Glucose có những tính chất hóa học sau [1]:

+ Phản ứng của nhóm aldehyd (oxi hóa, tạo osazon, tạo cyanhydrin).+ Phản ứng của dạng vòng bán acetal (tạo Glucosid với một alcolthấp)

+ Phản ứng của toàn phân tử monosacarid (tác dụng với kiềm, phản ứng lên men)

Về tác dụng dược lý, Glucose được làm thức ăn dinh dưỡng và trợ lực, còn dùng làm thuốc lợi tiểu Được chỉ định trong phòng và chữa mất nước trong và ngoài tế bào, mất nước do ỉa chảy cấp tính, bệnh nhân bị kiệt sức, giảm đường huyết Phòng và chữa chứng tích ceton khi thiếu dinh dưỡng Làm

giảm áp ở tuỷ sống-não, phù não do mê sảng rượu cấp hay ngộ độc rượu cấp

tính [11]

1.1.2 Phương pháp điều chế Glucose

Để thu được Glucose, ta có thể đi từ nhiều nguồn nguyên liệu khác nhau như tinh bột, cellulose; tuy nhiên trong thực tế nguyên liệu hay được sử dụng hơn cả là tinh bột, đây là một nguồn nguyên liệu tự nhiên phong phú có trong gạo, ngô, khoai, sắn

Tinh bột cấu tạo bởi hai mạch polysacarid: Amylose và Amylopectin.+ Phân tử Amylose là một mạch gồm hàng nghìn đơn vị Ot-D- Glucose nối với nhau theo dây nối a-l,4-glucosid, đa số mạch thẳng, ít phân nhánh :

Công thức cấu tạo của Amylose + Amylopectin có phân tử lượng lớn hơn, phân nhánh nhiều hơn,cũng cấu tạo bởi những đơn vị a-D- Glucose Các đơn vị a-D- Glucose cũngnối với nhau theo dây nối a-l,4-glucosid, chỗ phân nhánh nối với nhau theodây nối a - l ,6-glucosid

Trong tinh bột trung bình tỉ lệ Amylose là 25%, còn Amylopectin là

75% Tất cả tinh bột đều được tạo nên bởi hai dạng này, nhưng tỉ lệ giữa

chúng tuy thuộc vào nguồn gốc thưc v â t

Để thu được Glucose từ tinh bột, sử dụng phản ứng thủy phân tinh bột

với các tác nhân hóa học (H2S04, H ơ , H2C204 ) hay vi sinh (enzym ) Dựa vào

tác nhân xúc tác trong quá trình thủy phân tinh bột mà có hai phương pháp

chính để sản xuất Gluose :

♦ Phương pháp acid : Dùng acid thủy phân tinh bột Đây là phương pháp được áp dụng từ những năm 1920 Dưới tác dụng của acid, tinh bột thủy

phân thành D- Glucose kết tinh dưới dạng ngậm nước với điều kiện nhiệt độ

dưới 50°c Còn trong điều kiện nhiệt độ 50°c - 60°c Glucose kết tinh dưới

dạng không ngậm nước [7]

+ Phương pháp enzym : Đây là một phương pháp tiên tiến được

quan tâm từ những năm 1970 Các enzym có khả năng thủy phân tinh bột

gồm : a-a, Ị3-a, enzym trong nấm mốc aspegillus niger, Rhizopus delemar như

GA, Ỵ- a Enzym phosphorylase có trong đậu, khoai tây, trong lá và bộ phận

dự trữ của thực vật bậc cao Isoamylase có trong men bia và R-enzym [10]

Trong số những enzym trên, a-a và GA là hay được sử dụng hơn cả, chúng

được sử dụng trong quy trình gồm hai giai đoạn :

2^ Giai đoạn hồ hóa và dịch hóa bằng a-a Đây là enzym có khả năng phá vỡ các liên kết cx-l,4-Glucosid tạo thành các dextrin có trọng

lượng phân tử nhỏ làm cho độ nhớt tinh bột giảm nhanh, về sau dextrin mới

phân hủy dần để chuyển thành maltose, isomaltose, dextrose

>- Giai đoạn đường hóa bằng GA, enzym này có khả năng phân cắt cả liên kết a-1,4 và a-1,6- Glucosid để tạo Glucose

+ Ngoài hai phương pháp kể trên, người ta còn kết hợp hai phương pháp acid và enzym gọi là phương pháp acid - enzym: Giai đoạn đầu dùng acid, giai đoạn sau dùng enzym.

Sau đây là quy trình tiêu chuẩn sản xuất Glucose ở quy mô công nghiệp của Nhà máy Đường 19-5 được chúng tôi đưa ra để minh hoạ :

Trong quy trình 1 theo phương pháp acid, tinh bột được hòa loãng 35%, acid hóa bằng acid HC1, trung hòa bằng NaHC03 hay Na2C 0 3, tẩy mầu bằng than hoạt tính (Sơ đồ 1 trang 7)

Trong quy trình 2 theo phương pháp enzym, hai enzym được sử dụng là a-a và GA, trước khi dịch hóa cần điều chỉnh pH tạo điều kiện cho oc-a hoạt động tốt nhất Sau khi đường hóa xong diệt men bằng cách nâng nhiệt độ (Sơ

đồ 2 trang 8)

1.1.3 Chất lượng Glucose

Glucose được sử dụng rộng rãi trên thế giới, vì vậy hầu hết dược điển các nước đều có chuyên luận riêng về Glucose Chúng tôi xin nêu ra một số chỉ tiêu về Glucose cho ngành Dược theo ba dược điển: Dược điển Việt Nam III(DĐVN III), Dược điển Anh 98(BP 98), Dược điển Mỹ 24(USP XXIV) Các tiêu chuẩn về chất lượng Glucose được tổng kết trong bảng 1.1 trang 9

Nhận xét: qua bảng trên chúng ta thấy DĐVN III, BP 98, USP XXIV đều quy định một số tiêu chuẩn thử giống nhau nhưng mỗi dược điển cũng có quy định khác nhau cho từng nước Nhìn chung các tiêu chuẩn trong USP XXIV có phần cao hơn trong DĐVN III, còn trong BP 98 gần tương tự như trong DĐVNIII

6

Sơ đồl:(Lưij/trình công nghệ sản xuất Glucose tinh thể theo phương pháp

acid

Sơ đồ 2: Quy trình sản xuất Glucose theo phương pháp enzym

Bảng 1.1 : Tiêu chuẩn của Glucose trong dược điển của một số nước

2 Đô trong và mầu sắc

dd

Không đậm hơn mẫu NV7 Không đậm hơn mẫu XV7

Không đậm hơn mẫu gồm 3ml dd T pha loãng thành 50ml.DD T gồm: lml CoCl2 , 3ml FeCl,, 2ml CuCl„ H2Ố vđ 10ml.

3 Giới hạn acid ^NaOH 0,02N íí Chuẩn độ acid-base 0 , 3 ml V Chuẩn độ acid-base nhoh O j IM ^ 0,15ml Chuẩn độ acid-base VNaOH 0 , 0 2 N < 0,3ml

4 Đường ít tan Chế phẩm phải tan hoàn toàn trong EtOH Chế phẩm phải tan hoàn toàn trong EtOH Chế phẩm phải tan hoàn toàn trong EtOH

5 Tinh bột tan Không cho mầu xanh với dd iod. Không cho mầu xanh với dd iod. Cho mầu vàng với dd iod.

Mầu của hỗn hợp gồm 2g chế phẩm+lml HNO 3 +lm l A gN 03+ H20 vđ 50ml không đậm hơn mẫu chứa 0,5ml HC1 0,020N

Mầu của hỗn hợp gồm 2g chế phẩm+lml

H ơ + 3ml B a ơ 2 + H20 vđ 50ml không đậm hơn mẫu chứa 0,5ml H ,S0 4 0,020N

DD chế phẩm trong nước ,thêm

dd iod, hồ tinh bột, dd phải có mầu xanh.

< 0,0015% Sulfit. Cho mầu vàng với dd iod.

DD s :50,0g chế phẩm/ vđ 100ml H 2 O.Yêu cầu 10ml dd s + lml dd H 2 S 0 4 không đậm mầu hơn 10ml dd s + lml H ,0.

DD s :50,0g chế phẩm/ vđ 100ml H 2 O.Yêu cầu 10ml dd s + lm l dd H 2 S0 4 không đậm mầu hơn 10ml dd s + lml H ,0

1.2 Dẫn chất hydrazon

1.2.1 Tác dụng sinh học của dẫn chất hydrazon

+ Tác dụng kháng khuẩn

Đây là tác dụng quan trọng nhất của dẫn chất hydrazon, đáng chú ý nhất

là dẫn chất hydrazon của 5- nitrofurfural có công thức chung [3]:

I I

0 2 n / xc h = n —n h - r

Vi khuẩn gây bệnh lao (Mycobacterium tuberculosis) là loại vi khuẩn rất

khó tiêu diệt nên tác dụng kháng lao của các hydrazon là một đặc tính quý

Năm 1948 G DẤnayk đã tổng hợp được Tibion (Thiosemicarbazon của aldehyd para- acetylaminobenzoic) có tác dụng chống lao và đã áp dụng vào thực tế lâm sàng có kết quả tốt với các tên biệt dược như TBI, Corteben,

Năm 2000, các tác giả Trần Viết Hùng, Nguyễn Quang Đạt, Lê Ngọc Vân, Lê Thị Tập đã nghiên cứu và thử tác dụng chống lao của một số dẫn chất Thiosemicarbazon và isonicotinoyl hydrazon của isatin và 5-halogen isatin Kết quả cho thấy tất cả các chất tổng hợp được đều có tác dụng mạnh

trên chủng Mycobacterium tuberculosis H37RV Ngoài ra có 6 dẫn chất của 3-

isonicotinoyl hydrazon của isatin và 5- halogen isatin có tác dụng cả trên chủng vi khuẩn lao đã kháng isoniazid [4]

Bảng 1.2: Một số hydrazon, thiosemicarbazon và semicarbazon được sử

acetyl- aminobenzoic Tibion

Chốnglao

Xúc tác cho phản ứng có thể là acid vô cơ hoặc hữu cơ, lượng acid dùng làm xúc tác ảnh hưởng đến tốc độ phản ứng Mỗi cặp hydrazin-carbonyl có một trị số pH đặc trưng, ở pH đó nồng độ [Rr COR2].[H2N-NH-Z] đạt được cực đại và hiệu suất phản ứng là cao nhất Tùy theo hợp chất ban đầu và hydrazon tạo thành mà chọn dung môi, xúc tác, nhiệt độ, thời gian phản ứng thích hợp.

+ Phản ứng kết hợp muối diazoni với hợp chất cố chứa nhóm methylen hoạt

động ị Công thức z - CH 2 - Z )

> Phương trình phản ứng tổng q u á t:

z -C H ,-z ! ArN, AcONa

* z - c I = N -N H A r V

z, z có thể là P-keto este, P-keto amid, este malonic, nitro alkal

+ Phản ứng phân cắt liên kết đôi bằng ion hydranium hoặc muối diazoni

PHẦN 2 : THỰC NGHIỆM VÀ KẾT QUẢ

2.1 Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu

2.1.1 Nguyên liệu, hoá chất, dụng cụ

Na2C 0 3, NaCH3COO, HC1, CH3COOH đặc, Than hoạt, Ethanol 99%, Tinh

bột

Các hydrazin (fh£? Isoniazid, Thiosemicarbazid, Semicarbazid, 2,4-Dinitro ĩ Y

phenyl hydrazin, Phenyl hydrazin

Máy khuấy từ Heidolf, Máy đo độ chảy Gallenkamp, Bản sắc ký Silicagen

Kieselgel 60 F254

2.1.2 Phương pháp nghiên cứu

Sử dụng các phương pháp thực nghiệm trong hóa hữu cơ để điều chế các

chất như dự kiến:

>- Điều chế Glucose từ tinh bột bằng phương pháp thủy phân acid

>- Tổng hợp các dẫn chất hydrazon của Glucose bằng phương pháp

ngưng tu giữa nhóm carbonyl và các hydrazin thế

- Theo dõi quá trình/bằng SKLM

- Xác định độ tinh khiết của sản phẩm bằng SKLM, đo nhiệt độ nóng chảy

- Xác nhận cấu trúc các chất tổng hợp được dựa trên phân tích phổ IR, u v

- Thử tác dụng kháng khuẩn, kháng nấm của các chất tổng hợp được bằng

phương pháp đục lỗ thạch theo quy định trong DĐVNIII

Thử tác dụng trên vi khuẩn lao của các chất tổng hợp dựa trên phương pháp

thử độ nhậy cảm của vi khuẩn lao với chất thử theo phương pháp tỉ lệ Cannetti-

Grosset

2.2 Điều chế Glucose

Trong các phương pháp điều chế Glucose, căn cứ vào điều kiện phòng thí

nghiệm chúng tôi chọn phương pháp thủy phân tinh bột bằng acid

>*Phương trình phản ứng tổng q u á t:

15

Khi phản ứng xảy ra hoàn toàn thì sản phẩm cuối cùng là Glucose Trên

thực tế phản ứng xảy ra qua các giai đoạn :

( C6H10O5 ^ H2O ( CgHịQƠs ^ C^H^Oịi - ^ 2^ C5H12O5

Quá trình thực nghiệm được tiến hành qua các bước sau :

2.2.1 Thuỷ phân tinh bột

Hoà 20g tinh bột đã tinh chế vào 100ml nước cất trong cốc thuỷ tinh,

khuấy kỹ tạo hỗn dịch Rót hỗn dịch vào trong bình cầu dung tích 250ml, tăng

nhiệt độ lên 100°c, điều chỉnh tốc độ khuấy 100 vòng/ phút để tránh tinh bột bị

vón cục và bị hồ hóa đồng thời để hiệu suất đạt cao nhất [7] Rót từ từ 5ml acid

chlohydric đặc làm xúc tác Giữ nhiệt độ ổn định trong 3 giờ 30 phút Trong

quá trình đun kiểm tra dịch thủy phân bằng thuốc thử iod và SKLM

+ Định tính dịch thủy phân bằng thuốc thử iod :

Cho vào ống nghiệm 5ml nước cất và 2-3 giọt thuốc thử iod, lắc đều

Thêm vào ống nghiệm 2-3 giọt dịch thủy phân, mẫu dịch chỉ đạt khi không cho

mầu xanh với thuốc thử iod

+ Định tính dịch thủy phân bằng SKLM :

Trên bản mỏng sắc ký chấm một vết Glucose chuẩn và một vết dịch

thủy phân Thời điểm kết thúc giai đoạn thủy phân khi dịch lọc cho một vết sắc

ký trùng với vết Glucose chuẩn Dung môi hoà tan là Methanol- Nước ( 3 : 2 ) ,

dung môi khai triển là hệ Nước- Methanol- Acid acetic khan-(Ếthyỉẽnckmáx 10 ? ? v '

: 15 : 25 : 50 ) Hiện mầu bằng đèn tử ngoại

2.2.2 Tinh chế dịch thủy phân

Khi đã xác định được thời điểm kết thúc phản ứng, để nguội, chuyển dịch

thủy phân sang cốc thủy tinh sạch, tiến hành trung hòa bằng Natri carbonat đã

nghiền mịn đến khi không còn bọt khí nổi lên và pH dung dịch đạt từ 6,5 - 7,0

thì kết thúc phản ứng trung hòa và đem lọc

Tẩy mầu dịch lọc bằng than hoạt : Dùng than với tỉ lệ 3% - 4%[7], giữ

nhiệt độ ở 100°C/30 phút, sau đó lọc nóng lấy dịch lọc Tiến hành tẩy mầu bằng

than hoạt hai lần, dịch lọc trong suốt có ánh vàng

Dịch lọc sau khi tẩy mầu được cho đi qua lần lượt cột trao đổi cation loạiị acid mạnh và anion loại base yếu để loại các ion lạ

2.2.3 Kết tinh, phân ly, tạo sản phẩm cuối cùng

Tiền hành cô dịch lọc đến thể tích 50ml Sau đó để dịch lọc trong 24 giờ ở

nhiệt độ phòng sẽ có kết tủa Lọc hút lấy tủa, đem sấy khô trong tủ sấy chân không ở 60°c trong 6 giờ Phần dịch lọc được tái thu hồi sản phẩm

+ Thu hồi sản phẩm : Trong cốc thủy tinh có chứa dịch lọc, thêm đồng lượng ethanol, khuấy cho hai lớp đồng nhất rồi để kết tinh trong ít phút, tiến hành lọc hút lấy tủa, sấy khô trong tủ sấy chân không ở 60°c trong 6 giờ

Kết quả thu được 11,1 lg Glucose Hiệu suất thu hồi là 55,6%

Quy trình điều chế Glucose được mô tả trong sơ đồ 3 trang 18

Sản phẩm chính và sản phẩm thu hồi được định tính và thử tinh khiết theo tiêu chuẩn DĐVNIII trình bày trong bảng 2.1 trang 17

Bảng 2.1: Kết quả kiểm nghiệm Glucose theo DĐVNIII

2 Độ trong và mầu sắc dung dịch +

Sơ đồ 3: Quy trình điều chế Glucose trong phòng thí nghiệm

Tinh bột

h 2° - r ^ ẢHòa loãng 20%

HC1 - —►!

Thủy phânNa2C 0 3

2.3 Điều chế dẫn chất hydrazon của Glucose

Trong các phương pháp tổng hợp dẫn chất hydrazon, căn cứ vào các chất

dự kiến tổng hợp và căn cứ vào điều kiện phòng thí nghiệm, chúng tôi đã chọn phương pháp ngưng tụ Glucose với dẫn chất hydrazin thế

Phương trình phản ứng tổng q u á t:

5>Tiến hành :

Trong bình cầu dung tích 100ml có lắp sinh hàn hồi lưu, cho vào hỗn hợp gồm l , 8g Glucose (0,01mol), l ,37g isoniazid (0,01mol), 20ml alcol ethylic 99%, 2ml acid acetic đặc Đun hồi lưu cách thủy trong 90 phút Khi phản ứng kết thúc, chuyển hỗn hợp phản ứng sang cốc thủy tinh 100ml, để lạnh cho kết tinh hoàn toàn Lọc hút chân không lấy tủa, rửa tủa bằng alcol ethylic ba lần, mỗi lần 5ml Kết tinh lại trong hỗn hợp dung môi nước- ethanol

( 1 : 1 ) Sấy khô ở 60°c trong tủ sấy chân không thu được 1,16g tinh thể mầu trắng

hydrazonGlucose hydrazin thế

sản phẩm tan trong nước, ít tan trong EtOH, aceton.

Theo dõi phản ứng và kiểm tra độ tinh khiết bằng SKLM với dung môi

hòa tan là nước-ethanol (1 : 1) Dung môi khai triển là hệ methanol- cloroform

và 2ml acid acetic đặc Đun hồi lưu cách thủy trong 2 giờ Khi phản ứng kết thúc, chuyển hỗn hợp phản ứng sang cốc thủy tinh 100ml, để lạnh cho sản

phẩm kết tinh hoàn toàn Lọc hút chân không thu được tủa, rửa tủa bằng ethanol 99% ba lần, mỗi lần 5ml Kết tinh lại bằng hỗn hợp nước-ethanol (1:

1 ) Để lạnh cho kết tinh hoàn toàn Lọc tủa, sấy khô ở 60°c trong tủ sấy chân không thu được 0,39g tinh thể mầu trắng

Nhiệt độ nóng chảy : 203°c - 205°c

Sản phẩm tan trong nước, ít tan trong EtOH, aceton

Theo dõi phản ứng và kiểm tra độ tinh khiết bằng SKLM với dung môi hòa tan là nước-ethanol (1 : 1) Dung môi khai triển là hệ methanol- cloroform

Phổ tử ngoại X nm = 265, 556

Phổ hồng ngoại có các đỉnh đặc trưng sau :

3345.4 cm' 1 1619,7 cm' 11467.4 cm' 11288,0 cm'1 1080,9 cm'1 795,5 c m 1

V V

Trong bình cầu dung tích 100ml có lắp sinh hàn hồi lưu, hoà tan 0,56g (0,005 mol ) semicarbazid hydroclorid, 0,4lg Natri acetat trong một lượng nước tối thiểu Thêm 0,9g ( 0,005 m o l) Glucose, 1,5ml acid acetic đặc Cho thêm alcol ethylic đến khi trong Đun hồi lưu cách thủy trong 1 giờ Khi phản

ứng kết thúc, chuyển hỗn hợp phản ứng sang cốc thủy tinh 100ml, để lạnh cho

sản phẩm kết tinh hoàn toàn Lọc hút chân không thu được tủa, rửa tủa bằng ethanol 99% ba lần , mỗi lần 5ml Kết tinh lại bằng hỗn hợp nước-ethanol (1 :

1 ) Để lạnh cho kết tinh hoàn toàn Lọc tủa, sấy khô ở 60°c trong tủ sấy chân không thu được 0,56g tinh thể mầu trắng ngà

Sản phẩm tan trong nước, không tan trong EtOH, aceton

Theo dõi phản ứng và kiểm tra độ tinh khiết bằng SKLM với dung môi hòa tan là nước-ethanol (1:1) Dung môi khai triển là hệ methanol- cloroform (