thực hiện tiêu bản mô động vật: tuyến giáp trạng, lách, hạch lâm ba ruột, tuyến thượng thận và buồng trứng trên thỏ, tụy tạng trên vịt, tuyến fabricius trên gà

Qua đó rút ra được những bài học về kinh nghiệm trong việc thực hiện tiêu bản vi thể và một số đặc điểm riêng trên từng mẫu so với quy trình chung.. Xuất phát từ những lý do trên và được

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG

PHẠM THÀNH KHẢI

THỰC HIỆN TIÊU BẢN MÔ ĐỘNG VẬT:

TUYẾN GIÁP TRẠNG, LÁCH, HẠCH LÂM BA RUỘT, TUYẾN THƯỢNG THẬN VÀ BUỒNG TRỨNG TRÊN THỎ, TỤY TẠNG TRÊN VỊT, TUYẾN FABRICIUS

TRÊN GÀ

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP

NGÀNH THÚ Y

Cần Thơ, 2013

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP

NGÀNH THÚ Y

Tên đề tài:

THỰC HIỆN TIÊU BẢN MÔ ĐỘNG VẬT:

TUYẾN GIÁP TRẠNG, LÁCH, HẠCH LÂM BA RUỘT, TUYẾN THƯỢNG THẬN VÀ BUỒNG TRỨNG TRÊN THỎ, TỤY TẠNG TRÊN VỊT, TUYẾN FABRICIUS

TRÊN GÀ

Giáo viên hướng dẫn: Sinh viên thực hiên:

MSSV: 3092617 Lớp: Thú Y K35

Cần Thơ, 2013

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA NÔNG NGHIỆP VÀ SINH HỌC ỨNG DỤNG

BỘ MÔN THÚ Y

Đề tài: “Thực hiện tiêu bản mô động vật: tuyến giáp trạng, lách, hạch lâm ba ruột, tuyến thượng thận và buồng trứng trên thỏ, tụy tạng trên vịt, tuyến Fabricius trên gà”

Do sinh viên Phạm Thành Khải lớp Thú Y Khóa 35 thực hiện tại phòng thí nghiệm mô học thuộc bộ môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp & Sinh Học Ứng Dụng, Trường Đại học Cần Thơ thực hiện từ tháng 09 năm 2013 đến tháng 11 năm 2013

Cần Thơ, ngày tháng năm Cần Thơ, ngày tháng năm

Lê Hoàng Sĩ

Cần Thơ, ngày tháng năm

Duyệt khoa Nông Nghiệp & SHƯD

LỜI CẢM TẠ

Đầu tiên tôi xin gởi lời cảm ơn chân thành nhất đến thầy Lê Hoàng Sĩ và thầy Trần Hiền Nhơn Nhờ sự quan tâm, động viên, giúp đỡ và sự tân tình chỉ dẫn của hai thầy đã giúp tôi thực hiện tốt đề tài này

Xin cảm ơn cha mẹ, gia đình và bạn bè đã ủng hộ, động viên, giúp đỡ tôi trong suốt thời gian tôi học tập

Xin cảm ơn toàn thể quý thầy cô của trường Đại Học Cần Thơ nói chung

và tất cả quý thầy cô thuộc bộ môn Thú y nói riêng Những người thầy, người

cô đã truyền dạy cho tôi các kiến thức vô cùng quý giá trong suốt thời gian theo học tại trường

Xin kính chúc tất cả dồi dào sức khỏe, thành đạt và gặp nhiều may mắn trong cuộc sống

Xin chân thành cảm ơn!

MỤC LỤC

Trang duyệt i

Lời cảm tạ ii

Mục lục iii

Danh mục hình v

Tóm luợc vi

Chương 1: ĐẶT VẤN ĐỀ 1

Chương 2: CƠ SỞ LÝ LUẬN 2

2.1 Một số khái niệm về mô học 2

2.1.1 Mô học 2

2.1.2 Tế bào 2

2.1.3 Mô 2

2.1.3.1 Biểu mô 2

2.1.3.2 Tổ chức liên kết 4

2.1.3.3 Tổ chức cơ 4

2.1.3.4 Tổ chức thần kinh 4

2.2 Cấu tạo vi thể của một số tuyến 4

2.2.1 Tuyến giáp trạng 4

2.2.2 Hạch lâm ba 5

2.2.3 Lách 6

2.3.3.1 Vị trí và chức năng của lách 6

2.2.3.2 Cấu tạo 6

2.2.4 Tuyến thượng thận 7

2.2.4.1 Vỏ thượng thận 8

2.2.4.2 Tủy thượng thận 8

2.2.5 Tụy tạng 8

2.2.5.1 Cấu tạo 8

2.2.5.2 Phần ngoại tiết 8

2.2.5.3 Phần nội tiết 9

2.2.6 Tuyến Fabricius 10

2.2.7 Buồng trứng (noãn sào) 11

2.3 Nguyên tắc của phuơng pháp thực hiện tiêu bản hiển vi 13

2.3.1 Lấy mẫu 13

2.3.2 Cố định 13

2.3.3 Khử nước 15

2.3.4 Tẩm dung môi trung gian của paraffin 15

2.3.5 Tẩm paraffin 15

2.3.6 Đúc khuôn 15

2.3.7 Cắt lát mỏng 16

2.3.8 Tải tiêu bản lên lame 16

2.3.9 Nhuộm kép Hematoxyline-Eosin Y 16

2.3.10 Dán lamelle: 17

Chương 3:PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH 18

3.1 Phương tiện 18

3.1.1 Địa điểm thực hiện 18

3.1.2 Dụng cụ, trang thiết bị, hóa chất 18

3.2 Phương pháp tiến hành 18

3.2.1 Lấy mẫu 18

3.2.2 Cố định mẫu 18

3.2.3 Lấy mẫu nhỏ 18

3.2.4 Rửa mẫu 19

3.2.5 Khử nước 19

3.2.6 Tẩm dung môi trung gian 19

3.2.7 Tẩm paraffin 20

3.2.7 Đúc khuôn 20

3.2.8.1 Chuẩn bị 20

3.2.8.2 Tiến hành 20

3.2.9 Cắt mẫu 20

3.2.9.1 Chuẩn bị 20

3.2.9.2 Tiến hành 21

3.2.10 Tải – hấp mẫu 21

3.2.10.1 Chuẩn bị 21

3.2.10.2 Tiến hành 21

3.2.11 Nhuộm mẫu 22

3.2.11.1 Chuẩn bị lọ hóa chất và lọ nhuộm 22

3.2.11.2 Sơ đồ tiến hành 22

3.2.12 Dán lamelle – Dán nhãn 23

3.2.12.1 Cố định mẫu bằng keo Canada balsam 23

3.2.12.2 Dán nhãn 23

3.2.13 Đánh giá chất lượng tiêu bản 24

Chương 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25

4.1 Tuyến giáp trạng 25

4.2 Lách 26

4.3 Tuyến thuợng thận 27

4.4 Tuỵ tạng 29

4.5 Hạch lâm ba 30

4.6 Buồng trứng 32

4.7 Tuyến Fabricius 33

Chương 5: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 37

Tài liệu tham khảo 38

Phụ chương 39

DANH MỤC HÌNH

Hình 1: Tuyến giáp trạng 4

Hình 2 Tiêu bản vi thể của lách 7

Hình 3 Tiêu bản vi thể của tuyến thượng thận 7

Hình 4 tiêu bản vi thể của tụy tạng 10

Hình 5: tiêu bản vi thể tuyến Fabricius 10

Hình 6 Máy cắt vi mẫu 21

Hình 7 Sơ đồ quy trình nhuộm mẫu 22

Hình 8 Tiêu bản vi thể của tuyến giáp trạng cắt ngang (X40) 25

Hình 9 Tiêu bản mao mạch quanh nang tuyến của tuyến giáp trạng (X40) 25

Hình 10 Tiêu bản vi thể của lách cắt ngang (X4) 26

Hình 11 Tiêu bản vi thể của lách cắt ngan (X10) 26

Hình 12 Tiêu bản tuyến thượng thận cắt ngang (X10) 27

Hình 13 Tiêu bản vi thể vùng cung của tuyến thượng thận cắt ngang (X40) 27

Hình 14 Tiêu bản vi thể vùng dậu của tuyến thượng thận cắt ngang (X40) 27

Hình 15 Tiêu bản vi thể vùng lưới của tuyến thượng thận cắt ngang (X40) 28

Hình 16 Tiêu bản vi thể của tủy thượng thận cắt ngang (X10) 28

Hình 17 Tiêu bản vi thể tụy tạng cắt ngang (X40) 29

Hình 18 Tiêu bản vi thể ống dẫn lớn của tụy tạng cắt ngang (X40) 29

Hình 19 Tiêu bản vi thể động mạch và tĩnh mạch của tụy tạng (X40) 29

Hình 20 Tiêu bản vi thể của tụy tạng cắt ngang (X40) 30

Hình 21 Tiêu bản vi thể của hạch lâm ba cắt ngang (X10) 30

Hình 22 Tiêu bản vi thể của hạt lâm ba của hạch lâm ba (X40) 31

Hình 23 Tiêu thể vi thể miền tủy của hạch lâm ba (X40) 31

Hình 24 Tiêu bản vi thể của buồng trứng cắt dọc (X4) 32

Hình 25 Tiêu bản vi thể nang noãn sơ cấp đang phát triển (X40) 32

Hình 26 Tiêu bản nang noãn chín của buồng trứng cắt dọc (X4) 32

Hình 27 Tiêu bản vi thể lớp vỏ nang trứng chín (X10) 33

Hình 28 Tiêu bản vi thể của tuyến Fabricius (X4) 33

Hình 29 Tiêu bản vi thể của tuyến Fabricius (X40) 33

Hình 30 Làm tan paraffin trên bếp điện và lọc paraffin trong thùng carton 35

TÓM LƯỢC

Với đề tài “Thực hiện tiêu bản mô động vật: tuyến giáp trạng, lách, hạch lâm ba ruột, tuyến thượng thận và buồng trứng trên thỏ, tụy tạng trên vịt, tuyến Fabricius trên gà” tạo ra tiêu bản vi thể Những tiêu bản này

có thể quan sát được ở mức cấu tạo tế bào Trong thời gian từ tháng 09 đến tháng 11 năm 2013, tại phòng thí nghiệm mô học thuộc bộ môn Thú Y - Khoa Nông nghiệp & SHƯD - Đại học Cần Thơ cùng các trang thiết bị và các hóa chất cần thiết, tôi đã thực hiện được 450 lame tiêu bản trong đó chọn ra 323 lame tiêu bản hoàn chỉnh Trong đó tiêu bản mô: tuyến giáp trạng là 46 tiêu bản, tuyến thượng thận là 37 tiêu bản, lách là 49 tiêu bản, hạch lâm ba ruột là

43 tiêu bản, tụy tạng là 33 tiêu bản, buồng trứng là 63 tiêu bản, tuyến Fabricius là 52 tiêu bản Qua đó rút ra được những bài học về kinh nghiệm trong việc thực hiện tiêu bản vi thể và một số đặc điểm riêng trên từng mẫu so với quy trình chung Như khi tẩm paraffin nên chon là paraffin non, lọc và tẩm paraffin trong thùng carton

Chương 1 ĐẶT VẤN ĐỀ

Cơ thể người và động vật là một thể thống nhất, toàn vẹn và hoàn chỉnh Bất kỳ cấu tạo nào cũng đảm nhận chức năng nhất định, ngược lại bất kỳ chức năng nào cũng do một hoặc một số cấu tạo thực hiện, để phù hợp với điều kiện sống

Trong thực tiễn thú y, để tìm hiểu rõ về mức độ gây thiệt hại, các tổn thương khi mắc bệnh, cơ chế sinh bệnh,… của một loại bệnh nào đó trên cơ thể vật nuôi thì việc khảo sát ở mức độ tế bào là không thể bỏ qua Nhưng ta muốn khảo sát được mức độ tế bào của mô bệnh, thì trước hết ta phải khảo sát

ở mức độ tế bào của mô bình thường

Xuất phát từ những lý do trên và được sự phân công của bộ môn Thú Y, khoa Nông Nghiệp và Sinh Học ứng Dụng, trường Đại học Cần Thơ, tôi tiến

hành thực hiện đề tài: “Thực hiện tiêu bản mô động vật: tuyến giáp trạng, lách, hạch lâm ba ruột, tuyến thượng thận và buồng trứng trên thỏ, tụy tạng trên vịt, tuyến Fabricius trên gà”

Mục tiêu của đề tài:

Đọc và mô tả về mặc tổ chức học các tiêu bản đã thực hiện bao gồm: tuyến giáp trạng, hạch lâm ba, lách, buồng trứng, tụy tạng, tuyến Fabricius Thực hiện những tiêu bản mô để phục vụ cho công tác nghiên cứu, giảng dạy và học tập

Cấu tạo chung của biểu mô

- Biểu mô gồm một hay nhiều lớp tế bào xếp khít vào nhau

- Dưới lớp biểu mô là lớp màng đáy

- Dưới lớp màng đáy là tổ chức liên kết mềm

- Biểu mô hiện diện ở hai mặt khô và ướt của cơ thể

Phân loại biểu mô: dựa vào chức năng và cấu trúc người ta chia biểu

mô làm hai loại là biểu mô phủ và biểu mô tuyến

Biểu mô phủ: là những lớp tế bào bọc mặt ngoài hay mặt thành, mặt tạng

của các xoang tự nhiên trong cơ thể, ví dụ: lá thành, lá tạng xoang phúc mạc, thành các ống tiêu hoá, tiết niệu,…

Dựa vào số hàng tế bào kể từ màng đáy và hình dạng tế bào ở lớp trên cùng mà người ta chia biểu mô phủ thành:

Biểu mô phủ đơn:

+ Biểu mô phủ đơn lát: gồm một lớp tế bào hình lát dẹt, nhân tròn nằm giữa tế bào và nổi lên bề mặt biểu mô Ví dụ: biểu mô lót trong xoang phúc mạc, lót trong các mạch quản, màng nhỉ và phổi,…

+ Biểu mô phủ đơn hộp: là biểu mô mà các tế bào có dạng hình hộp, nhân tròn, to nằm giữa tế bào Biểu mô này phân bố chủ yếu ở các ống dẫn của tuyến ngoại tiết, quai henle và ống góp trong thận

+ Biếu mô phủ đơn trụ: là biểu mô mà các tế bào có hình trụ hay hình ống Nhân tế bào hình tròn hay hình thoi nằm giữa hoặc thiên về cực đáy tế bào Biểu mô này phân bố chủ yếu ở ống tiêu hóa từ dạ dày xuống ruột già, ngoài ra còn có ở tuyến Fabricius của gia cầm

Biểu mô phủ kép: có nhiều lớp tế bào, tùy theo hình dạng chia làm:

+ Biểu mô phủ kép lát: có nhiều lớp tế bào dẹp xếp chồng chất lên nhau, lớp tế bào trên cùng có hình lát dẹp, càng sâu hơn gồm những tế bào có hình đa giác hay hình hộp Nhân tế bào nằm giữa tế bào, đôi khi lớp trên cùng hóa sừng Thường gặp như: biểu bì, niêm mạc miệng, môi, thực quản và giác mạc,…

+ Biểu mô phủ kép trụ: lớp trên cùng có hình trụ, nhân thiên về cực đáy

tế bào Ở tầng sâu hơn tế bào có hình đa giác, hình hộp, hình thoi

+ Biểu mô phủ kép trụ giả: chỉ có một lớp tế bào nhưng có một số tế bào không lên đến bề mặt biểu mô, nhân nằm ở đáy tế bào Những tế bào còn lại nhô lên trên bề mặt biểu mô, nhân nằm ở trên Do vậy khi nhìn vào tiêu bản giống như có hai hàng tế bào (xuất hiện ở ống khí quản,…)

+ Biểu mô phủ kép biến dị: có lớp tế bào trên cùng rất to, có thể dãn nở được, tế bào bên dưới hình đa giác Biểu mô này thường hiện diện ở nơi có sự dãn nở (như bàng quang)

Biểu mô tuyến: là những tập đoàn tế bào chuyên hóa cao để thích nghi

với chức năng chế tiết và bài xuất Biểu mô tuyến gồm:

- Tuyến đơn bào: chỉ có một tế bào tạo thành, mang cả 2 nhiệm vụ chế tiết và bài xuất như: tế bào hình đày của ruột

- Tuyến đa bào: do nhiều tế bào hợp lại tạo thành tuyến, có cấu trúc phức tạp, to, nhỏ khác nhau Căn cứ vào tuyến có hay không có ống dẫn, phân biệt thành hai loại:

+ Tuyến ngoại tiết: có ống dẫn chất tiết ra ngoài hay vào các xoang, ống thông với bên ngoài Tuyến ngoại tiết gồm: tuyến túi, tuyến ống, tuyến đơn, tuyến tạp

+ Tuyến nội tiết: chỉ có các tế bào chuyên làm nhiệm vụ chế tiết, không

có ống dẫn Các chất tiết tạo thành được thẩm thấu qua màng tế bào rồi ngấm qua các vi huyết quản vào máu Các mao mạch tạo thành lưới chung quanh tuyến Tuyến nội tiết gồm: tuyến tản mác, tuyến túi, tuyến lưới (Nguyễn Xuân Hoạt và Phạm Đức Lộ, 1980)

2.1.3.2 Tổ chức liên kết

Có nhiệm vụ chính là chống đỡ, bảo vệ, dinh dưỡng, tu sửa, phục hồi và

có công năng vận chuyển vật chất cho cơ thể Tác dụng chống đỡ thể hiện ở chỗ nó liên kết các tế bào lại thành tổ chức, gắn tổ chức thành các bộ máy và làm giá cho các bộ máy đó hoạt động Tổ chức này đa dạng gồm: dạng lỏng, dạng rắn, dạng mềm (Nguyễn Xuân Hoạt và Phạm Đức Lộ, 1980)

bộ và tủy sống) và thần kinh ngoại vi (dây thần kinh và hạch thần kinh)

2.2 CẤU TẠO VI THỂ CỦA MỘT SỐ TUYẾN

Bao tuyến

Chất keo

Chung quanh tuyến có hệ thống mao quản máu phong phú

Cấu tạo tuyến giáp trạng

- Màng vỏ có cấu tạo là tổ chức liên kết, chứa nhiều sợi keo và sợi chun

- Bao tuyến: có hình dạng tròn, hình trứng, hình ống hay hình tuyến Kích thước thay đổi từ 20- 200µm tùy theo loài, cá thể và tùy vùng

- Tế bào của lớp biểu mô bao quanh tuyến có hình trụ, hình hộp hay đơn lát

Mỗi loại tế bào có chức năng sinh lý khác nhau ngay trên cùng túi tuyến Các loại tế bào:

+ Tế bào chính: chiếm tỉ lệ lớn Nhân tế bào tròn, to, có ít chất nhiễm sắc Có một đến hai hạt nhân, trong bào tương có nhiều tiểu vật và lưới Golgi Cực đỉnh tế bào có nhiều giọt mỡ, khi bị kích thích giọt mỡ tăng lên

+ Tế bào keo: có số lượng ít, kích thước nhỏ dài, nhân nhỏ, bào tương ái toan, tiểu vật có ở hai cực của tế bào

+ Tế bào C: là tế bào sáng màu Có vị trí phía đáy của tuyến, kích thước

to hơn tế bào chính

Ngoài ra ở kẻ bao tuyến còn có các đám tế bào sợi

- Bên trong bao tuyến chứa đầy chất keo

2.2.2 Hạch lâm ba

Có hình cầu hay đĩa nằm dọc theo đường đi của hạch huyết mạch, mạch quản lâm ba đi vào phía chu vi và đi ra ở rốn hạch

Cấu tạo

- Bao bên ngoài là tổ chức liên kết, phát vách vào bên trong

- Động vật lớn vỏ bọc có cơ trơn Các mạch quản phía dưới vỏ đi vào trong, tiếp hợp nhau tạo thành xoang

- Bên trong chia thành hai miền:

+ Miền vỏ có nhiều hạt lâm ba xếp thành hàng to, nhỏ Tế bào sậm màu giống tế bào lâm ba máu

+ Miền tủy sáng hơn miền vỏ, có cấu tạo lỏng lẻo (còn gọi là trung tâm sinh trưởng) Có các tế bào đang phân bào, bào tương hơi kiềm, còn gọi là tế bào nguyên lâm ba, có cả tương bào

Hạt lâm ba ở riêng lẻ (nang kín lâm ba ở thành ruột), hoặc thành màng (màng payer), hoặc xếp chung quanh hạch lâm ba

Phần lâm ba tụ tập thưa, ít, nằm xen kẽ với tổ chức lưới của hạch tạo thành xoang lâm ba Ở miền vỏ gọi là xoang miền vỏ và miền tủy gọi là xoang miền tủy

Xoang miền tủy có các cột tế bào thừng nang và những tế bào hạch lâm

ba (bào tương chiếm gần hết tế bào) Một đầu dính với hạt lâm ba, một đầu

chạy vào miền tủy, chia nhánh và tiếp hợp nhau Trong xoang còn có những tế bào nhân khổng lồ (Nguyễn Xuân Hoạt và Phạm Đức Lộ, 1980)

2.2.3 Lách

2.3.3.1 Vị trí và chức năng của lách

Lách là một cơ quan nằm ngay trên vòng cong lớn của dạ dày Lách có chức năng: lọc máu, là nơi tiêu hủy hồng cầu và các tế bào khác, là nơi kiểm soát chất lượng của tế bào máu khi máu đi qua lách và là nơi tạo ra tế bào lympho B và T

2.2.3.2 Cấu tạo

Lách có cấu tạo gồm: vỏ bọc, mô chính và mạch quản

Vỏ bọc: cấu tạo bởi các tổ chức liên kết có pha sợi cơ trơn và sợi chun

Nhờ vậy lách khi bị máu vào nhiều làm căng phòng to có thể co bóp trở về thể tích cũ Mặt trong phân vách vào mô chính chia thành nhiều tiểu thùy không

rõ ràng, vách ngăn ngắn chứa mạch máu

Mô chính:

Chia làm 2 loại chất: chất tủy trắng và chất tủy đỏ

- Chất tủy trắng: gồm các hạt lâm ba tròn hay dài Mỗi hạt có vài động mạch nhỏ đi qua Có trung tâm sinh trưởng màu sáng hơn Các hạt lâm ba này chỉ gồm bạch cầu, không có hồng cầu nên nhìn mắt thường khi mới cắt lách ra thấy màu trắng, do đó gọi là tủy trắng

- Chất tủy đỏ do tổ chức lưới tạo thành xoang, chứa nhiều hồng cầu và các cột bạch cầu, giống thừng nang hạch lâm ba

Ngoài ra còn có nhóm tủy bào, tế bào lưới, sợi lưới, sợi ái bạc giữ mối liên hệ giữa lymphocyte và sản phẩm của nó

Mạch quản

Theo các vách ngăn chia vào tiểu thùy, có lâm ba cầu bao bọc Chổ phồng to lên gọi là thể tận cùng (có thành dày, nhiều sợi cơ nhỏ) và tận cùng như một ngòi bút lông gọi là động mạch chổi Mao mạch từ các thể tận cùng

đi vào các mắt lưới tổ chức chung quanh mạch quản (Nguyễn Xuân Hoạt và Phạm Đức Lộ, 1980)

- Nhu mô tuyến gồm hai phần: vỏ thượng thận chiếm phần ngoài của tuyến, tủy thượng thận chiếm phần trong

2.2.4.1 Vỏ thượng thận

Khá dày, có màu vàng, về phía trong hơi nâu khi xem bằng mắt thường

Vỏ thượng thận gồm có ba vùng (vùng dưới lớp bao vỏ có hiện tượng phân bào cảm nhiễm):

- Vùng ngoài cùng là vùng cầu (hay vùng cung), lớp này mỏng, tạo thành bởi những tế bào hình trụ, ở gần lớp vỏ xơ có những đám tế bào này chạy thành từng cột, lượn quanh thành hình vòng cung, bào tương ưa base vì chứa nhiều hạt ARN, những tế bào này nằm ngay dưới lớp vỏ

- Vùng kế tiếp là vùng dậu, gồm những cột tế bào đa diện lớn, bào tương sáng (do chứa nhiều hạt chất vùi lipid) xếp thành dãy chạy song song nhau Kẽ cột là tổ chức liên kết và có các mao mạch nhỏ

- Vùng kế tiếp là vùng lưới, những tế bào đa diện chạy không có hướng nhất định Nhân tế bào nhỏ và bắt màu đậm hơn các lớp ngoài Bào tương có chứa nhiều hạt sắc tố mỡ nhỏ (Nguyễn Xuân Hoạt và Phạm Đức Lộ, 1980)

2.2.4.2 Tủy thượng thận

Cấu tạo bởi những tế bào đa diện lớn, bào tương có những hạt tròn nhỏ gọi là hạt sinh adrenalin (ngoài ra còn gọi tế bào này là tế bào chromaffin) Những tế bào tủy thượng thận xếp thành những cột không theo một hình dạng nào và tạo thành các kẽ Bên trong kẽ có nhiều mao mạch Ngoài ra, còn có những tế bào thần kinh giao cảm riêng lẻ, hoặc tụ thành đám (Lâm Thị Thu Hương, 2005)

2.2.5 Tụy tạng

Tụy tạng là một tuyến vừa nội tiết và vừa ngoại tiết Nội tiết là tiết insulin và glucagon vào máu để điều chỉnh nồng độ glucose trong máu Ngoại tiết là tiết dịch tụy vào ống tiêu hóa Phần nội tiết của tụy được đảm nhận bởi những tế bào được tập trung thành đám gọi là đảo Langerhans, đảo này nằm xen kẻ với nang ngoại tiết của tụy Kích thước và số lượng đảo trong tụy khác nhau tùy loài gia súc, gia cầm Mỗi tuyến tụy có khoảng một triệu đảo Langerhans (Lâm Thị Thu Hương, 2005)

2.2.5.1 Cấu tạo

Tuyến được bao bọc bên ngoài bởi màng tổ chức liên kết mềm Màng phân vách vào trong nhu mô, chia mô thành nhiều tiểu thùy Bên trong tiểu thùy chứa tuyến và đảo tụy

2.2.5.2 Phần ngoại tiết

Phần ngoại tiết gồm ống dẫn và túi tuyến

Ống dẫn: là một tuyến túi phức tạp, thành ống dẫn có 3 lớp là lớp niêm

mạc, lớp cơ và lớp tương mạc Lớp niêm mạc gồm biểu mô phủ đơn trụ, lớp

cơ gồm những sợi vòng và tương mạc là tổ chức liên kết bao bọc

Ống dẫn bao gồm ống Boll, ống dẫn nhỏ và ống dẫn lớn Ống Boll nhỏ nối với túi tuyến, được cấu tạo bởi biểu mô đơn trụ hay đơn lát Tiếp theo là ống dẫn nhỏ nó góp phần vào chế tiết ra dịch tụy Ống dẫn lớn gồm 1-2 ống,

có cấu tạo bởi biểu mô đơn trụ, xen kẽ có tế bào hình đài Các ống dẫn lớn này thường có 1-2 lớp cơ bao bọc để khống chế dịch tụy tiết vào ruột

Túi tuyến: gồm nhiều túi tuyến họp thành tiểu thùy Túi tuyến to nhỏ

khác nhau, có hình tròn hay hình cầu, các tế bào chính hình tháp, hình cầu lót xung quanh túi tuyến Giữa túi tuyến đôi khi thấy tế bào giữa túi tuyến, đây là

tế bào của ống Boll đi sâu vào mà thành, nó không có hoạt động chế tiết

- Tế bào B (β): nhỏ hơn tế bào A, chiếm khoảng 75% tổng số tế bào trong đảo, thường nằm ở trung tâm đảo Tế bào có hình khối hoặc đa diện, nhân tế bào nhỏ, có đặc tính không tan trong cồn Tế bào B giữ vai trò chế tiết insulin, tham gia chuyển hóa glucid để điều hòa đường huyết Nó có tác dụng làm giảm đường huyết trong máu bằng cách hoạt hóa enzyme tổng hợp glycogen, do đó chuyển dạng glucose trong máu thành glycogen, tăng tính thắm màng đối với glucose, nó cũng ức chế sự phân giải lipid và làm tăng tổng hợp protein

- Tế bào D (δ): chiếm khoảng 5- 10% tổng số tế bào, thường nằm ở rìa đảo (Nguyễn Xuân Hoạt và Phạm Đức Lộ, 1980)

Hình 4 tiêu bản vi thể của tụy tạng

2.2.6 Tuyến Fabricius

Là một cơ quan nhỏ nằm ở trên ổ nhốp và dưới xương sống Tuyến Fabricius có lớp niêm mạc tạo thành các nếp gấp cao, quay đầu lại với nhau bao phủ lấy tuyến Niêm mạc, lớp cơ của tuyến Fabricius nối tiếp với các thành phần của đường tiêu hóa Biểu mô thuộc loại đơn trụ nhưng không có tiết nhày, dưới biểu mô có nhiều hạt lâm ba (ở gà có 40 – 50 hạt trong một tuyến Fabricius) tập trung thành hai vùng: vỏ và tủy, được ngăn cách nhau bằng màng đáy Ở vùng vỏ, nốt bạch huyết chứa nhiều tế bào lưới, các lympho trưởng thành và một số tương bào Trong khi ở vùng tủy, ngoài tế bào lưới còn

có đại thực bào, và các tế bào lympho non đang phân chia

Hình 5: tiêu bản vi thể tuyến Fabricius

(http://cal.vet.upenn.edu/projects/histo/Lab8lymphatics/Lab8gsc30bursa2x.htm)

1: Xoang tuyến 2: Biểu mô phủ 3: Túi tuyến 4: Lớp cơ

Tuyến Fabricius xuất hiện khá sớm ở gia cầm (khoảng ngày thứ năm sau khi ấp trứng), rồi phát triển mạnh ở gia cầm non, khi bắt đầu trưởng thành (tháng thứ tư) thì tuyến teo đi, hầu như mất hẳn sau một năm Tuyến Fabricius cũng kích thích sự hình thành kháng thể khi có sự kích thích của protid lạ, vi khuẩn (Lâm Thị Thu Hương, 2005)

2.2.7 Buồng trứng (noãn sào)

Ở thú cái buồng trứng có hai nhiệm vụ:

- Sản xuất ra những tế bào sinh dục cái gọi là noãn bào

- Tạo ra kích thích tố sinh dục

Cấu tạo:

- Buồng trứng được bao bọc bởi một lớp biểu mô phủ gọi là biểu mô mầm Biểu mô này liên tục với biểu mô của ống dẫn trứng và biểu mô của phúc mạc

- Dưới biểu mô mầm là màng trắng, đó là mô liên kết dày có nhiều sợi hóa keo, sợi đàn hồi, có nhiều mạch máu

- Nhu mô của buồng trứng là một sườn liên kết gồm có hai miền: miền

vỏ và tủy:

Miền vỏ: sườn liên kết có ít tế bào sợi hình thoi, những bó sợi keo mảnh,

các nang noãn ở những giai đoạn khác nhau, những tế bào sinh sợi ở đây có khả năng biệt hóa thành đại thực bào di dộng hay các tế bào nang

Nang noãn nguyên thủy

Thú càng non càng có nhiều loại nang noãn này, nhưng phần lớn sẽ không phát triển và bị tiêu hủy đi Những nang noãn này tụ thành đám như ở chó, mèo hay ở rải rác khắp nơi như ở thú nhai lại

Mỗi nang noãn là một khối hình cầu nhỏ tạo bởi một tế bào có kích thước lớn gọi là noãn bào Bên ngoài tế bào noãn có một lớp tế bào dẹp bao bọc gọi

là tế bào nang Ngoài cùng là màng đáy mỏng

Noãn là một tế bào có hình cầu, bào tương nhiều, nhân chứa hạt nhân to

và rãi rác nhiều nhiễm sắc

Tế bào nang: những tế bào có nguồn gốc từ tế bào sợi của mô liên kết Tế bào này có nhiệm vụ cung cấp cho noãn bào những chất cần thiết để phát triển,

nó cũng tiết ra dịch nang của bao noãn

Nang noãn sơ cấp

Nang noãn này có kích thước to nhỏ khác nhau tùy giai đoạn phát triển Các quá trình tổng hợp trong tế bào tiến hành rất tích cực Giữa noãn bào và các tế bào nang xuất hiện một lớp màng trong suốt gọi là màng trong suốt

Ở giai đoạn này, các tế bào nang đã phát triển thành các tế bào khối đơn hoặc đa diện Tế bào nang sinh sản tạo nên một lớp tế bào nang hay nhiều lớp

tế bào nang Đôi khi người ta gọi nang noãn sơ cấp nhiều lớp tế bào là nang noãn đặc Ngoài tế bào nang là màng đáy

Nang noãn thứ cấp

Khi nang noãn tăng trưởng lớn lên (chủ yếu do gia tăng số lượng và kích thước tế bào nang), có sự tích tụ chất dịch giữa các tế bào nang Khi dịch nang này càng nhiều thì nang được gọi là nang noãn thứ cấp hay nang noãn có hốc

Nang trưởng thành

Những nang noãn này ngày càng tăng kích thước, lớp tế bào nang phát triển mạnh tạo thành màng hạt Trong lớp hạt đó bắt đầu xuất hiện các khe chứa dịch nang Chất dịch càng nhiều thì các khe sẽ nở to và cuối cùng thành một hốc lớn duy nhất gọi là hốc nang được bao quanh bởi một lớp hạt Lớp tế bào nang áp sát tế bào trứng biến tế bào từ đơn hộp sang đơn trụ, xếp thành hình phóng xạ, có vai trò dinh dưỡng cho noãn bào Vùng có tế bào noãn, màng trong suốt, màng phóng xạ và một số tế bào hạt họp thành đĩa trứng Bao quanh màng hạt lúc này là tổ chức liên kết có chứa nhiều mao mạch gọi là màng bao noãn

Nang noãn chín

Những nang noãn có kích thước lớn nhô hẳn lên bề mặt buồng trứng Bên trong noãn bào đã phát triển rất lớn, có khả năng thụ tinh Bình thường trong chu kỳ sinh dục chỉ một hay hai nang noãn chín lồi lên mặt buồng trứng Kích thước các nang noãn chín ở các loài khác nhau

Ở giai đoạn này màng bao noãn đã hình thành hai lớp rõ rệt

- Vỏ ngoài: gồm những tế bào sợi hình thoi dài và những sợi liên kết

- Vỏ trong: những tế bào đa diện lớn gọi là tế bào kẽ, bao quanh là một lưới mao mạch rất phong phú Tế bào này tiết ra estrogen rồi khuếch tán vào dịch nang Chung quanh tế bào noãn, màng thấu quang cũng đã dày lên và màng phóng xạ thấy rõ rệt

Hoàng thể

Sau khi trứng thoát nang, tế bào nang và tế bào lớp vỏ trong của nang trứng vỡ còn lại biến đổi tạo thành hoàng thể, có cấu tạo kiểu lưới Những tế bào nang biệt hoá và lớn lên, chiếm 80% khối lượng hoàng thể, được gọi là tế bào hoàng thể hạt, những tế bào này tiết progesterone Những tế bào có nguồn gốc từ lớp vỏ có kích thước nhỏ hơn, sẫm màu hơn và nằm ở ngoại vi hoàng thể, chúng có nhiệm vụ tiết estrogen Hoàng thể hình thành và tồn tại trong một chu kỳ lên giống, rồi sau đó thoái hoá Nếu sự thụ tinh xảy ra thì hoàng thể tồn tại

Miền tủy: nằm ở trung tâm buồng trứng, là mô liên kết thưa có ít sợi lưới,

trong đó có nhiều mạch máu chạy xoắn, mạch bạch huyết, dây thần kinh, những sợi cơ trơn Ngoài ra, ở vùng rốn buồng trứng có những dấu tích phôi thai dưới dạng những dây tế bào hay một vài nang nước nhỏ Vách của nang là biểu mô đơn hộp Cấu tạo này gọi là lưới buồng trứng (Lâm Thị Thu Hương, 2005)

2.3 NGUYÊN TẮC CỦA PHƯƠNG PHÁP THỰC HIỆN TIÊU BẢN HIỂN VI

Muốn nghiên cứu về cấu trúc của tế bào và mô thì kính hiển vi là một phương tiện không thể thiếu Muốn sử dụng được kính hiển vi thì ta phải có những tiêu bản (thiết đồ hoặc phiến đồ) có độ dày thích hợp cho phép quan sát dưới kính hiển vi

Có nhiều phương pháp làm tiêu bản để nghiên cứu bao gồm: phương pháp xét nghiệm tươi; phương pháp làm tiêu bản cố định và nhuộm màu;… Trong các phương pháp trên, phương pháp làm tiêu bản hiển vi cố định

và nhuộm màu là phương pháp phổ biến dùng trong xét nghiệm mẫu bệnh so với mẫu đối chứng

Phương pháp làm tiêu bản cố định và nhuộm màu:

+ Thực hiện tiêu bản hiển vi cố định bằng phương pháp tiêu bản cắt lát

và nhuộm kép bằng Hematoxylin và Eosin Y Phương pháp này nhằm tạo được những mảnh cắt mỏng, trong suốt của mô và cơ quan, cho phép quan sát được dưới kính hiển vi Thêm vào đó tiêu bản sẽ được nhuộm bằng các thuốc nhuộm đặc hiệu, các phần của tiêu bản có màu khác nhau giúp cho việc quan sát dễ dàng

+ Tiêu bản hiển vi cố định thực hiện theo phương pháp này phải qua nhiều giai đoạn Phải thực hiện tốt tất cả các giai đoạn mới đảm bảo thu được tiêu bản có chất lượng, nếu một giai đoạn nào đó thực hiện không tốt thì tiêu bản thu được sẽ không đạt chất lượng Tóm lược quy trình như sau:

2.3.1 Lấy mẫu

Trong phương pháp này, lấy mẫu là bước đầu tiên có mục đích là lấy tế bào, mô, cơ quan ở cơ thể sống hay đã chết Bước lấy mẫu này có ý nghĩa rất

to lớn Vì vậy, khi thực hiện phải hết sức tuân thủ một số quy tắc sau:

- Mẫu được lấy phải tươi

- Động tác lấy mẫu phải nhẹ nhàng, tránh gây những biến đổi do tác nhân cơ học

- Không dùng kẹp phẩu tích kẹp vào vùng cần nghiên cứu, không bóp mạnh và không rửa mẫu

- Khi cắt phải dùng dao sắc và cắt theo một hướng (đối với những mẫu lớn)

- Khi cắt xong phải cố định ngay để tránh hiện tượng hoại tử sau khi chết của tế bào (Phạm Phan Địch và Trịnh Bình, 2002)

2.3.2 Cố định

- Mẫu sau khi lấy phải cố định ngay để tránh tình trạng bị thoái hóa, hoại

tử hay biến dạng do một số phản ứng sinh hóa của những enzyme nội bào hay điều kiện bên ngoài tự nhiên tác động như vi sinh vật Có nhiều cách cố định mẫu: tác nhân vật lý (sức nóng, làm khô, đóng băng,…), tác nhân hóa học

(formol, acid acetic, rượu,…)

- Cố định là thủ thuật làm chết tế bào nhưng vẫn giữ chúng trong tình trạng giống như khi chúng còn sống Việc cố định đạt được kết quả tốt khi tế bào giữ nguyên được hình dáng, giữ được những thành phần cấu tạo như khi còn sống, đồng thời không làm xuất hiện những chi tiết mới (Vũ Công Hòe, 1975)

- Dung dịch cố định có tác dụng ngăn cản sự hoại tử sau khi tế bào đã chết Dung dịch cố định tốt là dung dịch có tác dụng nhanh mà ít gây sự thay đổi cấu trúc Mô được gọi là cố định tốt khi tế bào cấu tạo nên mô đó vẫn giữ nguyên hình dáng, đồng thời vẫn giữ được mối liên quan tương hỗ trong tế bào và trong mô giống như khi còn sống Mọi sự thay đổi về kích thước và cấu trúc không vượt quá 0,2 mm (Phạm Phan Địch và Trịnh Bình, 2002)

- Một số loại thuốc cố định thường gặp:

+ Thuốc cố định khoáng chất: acid osmic, acid chromic (CrO3) và các thuốc cố định muối khoáng

+ Thuốc cố định hữu cơ: bao gồm các acid hữu cơ như acid acetic, acid piric và các chất khử oxy như: methylic, ethylic, formaldehyde

+ Các dung dịch cố định hỗn hợp: dung dịch Bouin, dung dịch Duboscq- Brasil, dung dịch Carnoy, dung dịch Branca

- Việc chọn thuốc cố định và phương pháp cố định phụ thuộc vào bản chất mô cần cố định, mục đích cần nghiên cứu, tính chất thuốc cố định

- Thời gian cố định phụ thuộc vào từng loại mô và từng loại thuốc cố định, trên nguyên tắc kéo dài thời gian cố định tốt hơn là rút ngắn (trừ một số thuốc cố định làm giòn mô) Trong đó formol là thông dụng nhất do formol có những đặc tính:

+ Vận tốc xuyên thấm và cố định mẫu nhanh

+ Không làm co mẫu, không làm mẫu cứng lại

+ Bảo quản tốt cấu trúc tế bào

+ Làm tăng sự kiềm tính của cấu trúc khi nhuộm

- Việc rửa mô sau khi cố định có tầm quan trọng lớn Trên nguyên tắc sau khi cố định phải làm cho mô mất chất cố định càng sớm càng tốt, vì những chất cố định có ảnh hưởng đến việc nhuộm và bảo tồn tiêu bản Các chất cố định khác nhau có cách rửa mô khác nhau Có thể rửa ngang với thời gian cố định nếu rửa bằng nước Các dung dịch cố định có chrome rửa với dung dịch cồn Iod (Phạm Phan Địch và Trịnh Bình, 2002)

Nguyên tắc cố định mẫu:

- Mẫu phải được cố định ngay sau khi lấy

- Không được làm dập, nát mẫu

- Mẫu không được cắt quá dày

- Dung dịch dùng để cố định phải đạt đúng nồng độ, thể tích dung dịch

cố định gấp 30 - 60 lần thể tích mẫu

- Thời gian cố định thích hợp 48-72 giờ

Không cố định mẫu quá lâu, vì cố định quá lâu mẫu sẽ bị cứng, giòn khi cắt và khi nhuộm tính bắt màu giảm, hình dạng tế bào bị nhăn nhúm Nếu cố định mẫu trong thời gian ngắn quá đến khi cắt sẽ dễ làm vỡ khối mẫu

có nồng độ cao dần đến cồn nguyên chất Thời gian khử nước tùy theo độ dày của mẫu

- Dung dịch cồn để khử nước là ethylic, methylic, butylic và cateton

- Muốn biết một mẫu đã khử hết nước chưa, người ta cho xylen vào lọ đựng mẫu đã rút cồn Nếu xylen vẫn trong, điều này chứng tỏ sự khử nước tốt, nếu xylen hơi có vẫn đục (màu trắng sữa) thì phải khử nước lại bằng cồn tuyệt đối (Phạm Phan Địch và Trịnh Bình, 2002)

2.3.4 Tẩm dung môi trung gian của paraffin

Mục đích là dùng một dung môi của paraffin để đẩy cồn trong mô sau khi rút hết nước ra (vì paraffin cũng không tan trong cồn) Dung dịch được sử dụng phải vừa hòa tan trong cồn vừa hòa tan được paraffin Nên chuyển mẫu dần qua 2 - 3 lọ, thời gian ngâm mẫu thay đổi tùy theo loại mô và khối lượng mẫu

Các dung môi thường dùng là benzene, toluene, xylen, chloroform

2.3.5 Tẩm paraffin

Trước hết cần chọn loại paraffin tốt và thích hợp Paraffin chỉ có thể ngắm vào mẫu và loại xylen ra khi nó ở trạng thái lỏng Người ta khử dung môi trung gian bằng cách chuyển mẫu lần lượt vào những lọ có paraffin tinh khiết

Thời gian tẩm lâu hay mau là tùy kích thước và tính chất của mẫu: nếu mẫu nhỏ và lỏng lẻo thì tẩm 2-3 giờ, nếu to và cứng thì tẩm từ 24-36 giờ Mục đích của việc tẩm paraffin là làm cho mẫu và paraffin liên kết với nhau thành một khối thống nhất Nhờ vậy có thể cắt mẫu thành những lát mỏng theo mục đích nghiên cứu (Vũ Công Hòe, 1975)

2.3.6 Đúc khuôn

Người ta đổ vào khuôn (khuôn bằng kim loại) chất paraffin lỏng đã lọc

từ trước (paraffin tinh khiết) Nhúng ngay mẫu vào paraffin đang lỏng này Dùng kẹp đã được làm nóng để định hướng mẫu theo ý muốn Sau vài phút

paraffin sẽ đông đặc lại và giữ mẫu ở nguyên vị trí Khi lớp vỏ ngoài paraffin

đã đủ cứng, làm ướt cả khuôn vào trong bát đựng đầy nước lạnh và chú ý đừng làm rạn, vỡ màng mỏng paraffin bên trên Khoảng 20 - 30 phút sau paraffin sẽ cứng lại và thuần nhất toàn bộ Tránh làm lạnh ngay khi paraffin còn lỏng Không được cắt mảnh ngay mà phải đợi đến 24 giờ sau (Vũ Công Hòe, 1975)

Đặt lưỡi dao vào máy khóa thật chặt, chỉnh độ nghiêng của lưỡi dao khoảng 15-200 so với mặt của khối paraffin

Cắt mẫu: việc cắt có thể bắt đầu ở độ dày từ 10-12 µm Sau khi dãy mẫu

đã ổn định thì chỉnh lại độ dày khoảng 6-7 µm Nếu việc tẩm paraffin tốt, lưỡi dao sắc và nhiệt độ phòng cắt thích hợp các lát cắt sẽ dính vào nhau thành dãy băng

Tốc độ của tay quay vừa phải, không quá nhanh cũng không quá chậm nhưng phải dứt khoát (Vũ Công Hòe, 1975)

2.3.8 Tải tiêu bản lên lame

Để tải tiêu bản lên lame có thể dùng nhiều loại dung dịch: nước cất, dung dịch lòng trắng trứng pha với glycerin theo tỉ lệ 1:1 Trước khi dán tiêu bản lên lame phải làm tiêu bản giãn ra bằng cách đặt dãy băng lên chậu nước nóng

ấm (400C) Sau đó, đưa lame xuống phía dưới để vớt tiêu bản được chọn lên

và mang đi hấp ở 600C trong 30 phút (Phạm Phan Địch và Trịnh Bình, 2002)

2.3.9 Nhuộm kép Hematoxyline-Eosin Y

Ở tế bào sống, các thành phần cấu tạo tế bào và mô có chỉ số chiết quang gần giống nhau nên khó phân biệt dưới kính hiển vi quang học Vì vậy việc nhuộm màu làm cho các thành phần này bắt màu khác nhau, tạo được sự tương phản giúp ta dễ quan sát

Về phương diện mô học người ta chia thuốc nhuộm ra thành hai nhóm: thuốc nhuộm tự nhiên và thuốc nhuộm nhân tạo

- Thuốc nhuộm tự nhiên là những loại được chiết xuất từ động vật hoặc thực vật như Carmine hay Hematoxyline

- Thuốc nhuộm nhân tạo được chia làm ba nhóm: Các chất base, các chất acid, các chất màu trung tính

Có nhiều phương pháp nhuộm màu:

- Sự nhuộm màu tăng, giảm dần: nhuộm màu tăng dần được tiến hành bằng cách ngâm tiêu bản trong dung dịch nhuộm màu cho đến lúc tiêu bản bắt màu vừa đủ Nhuộm màu giảm dần là nhuộm cho đến khi tế bào hoặc mô bắt màu thật thẩm rồi sau đó tẩy màu ở tiêu bản cho đến khi màu vừa ý

- Sự nhuộm màu nối tiếp, đồng thời:

+ Nhuộm màu nối tiếp là phương pháp nhuộm tiêu bản bằng cách chuyển tiêu bản qua các dung dịch thuốc nhuộm theo một trình tự

+ Nhuộm màu đồng thời được thực hiện bằng cách pha tất cả các thuốc cần nhuộm thành một dung dịch và nhuộm màu một lần (chú ý: các thuốc sử dụng phải phù hợp với nhau, không chống nhau, những thuốc tham gia vào dung dịch phải có tác dụng với bào tương và vào nhân cùng một thời gian)

- Nhuộm màu trực tiếp, gián tiếp:

+ Nhuộm màu trực tiếp là phương pháp nhuộm được tiến hành khi thuốc nhuộm có khả năng trực tiếp nhuộm vào tế bào và mô, không cần phải qua khâu làm ăn màu

+ Nhuộm màu gián tiếp được tiến hành bằng cách trước khi nhuộm phải ngâm tiêu bản vào dung dịch làm ăn màu, sau đó ngâm vào dung dịch thuốc nhuộm

- Nhuộm màu khác: một số thuốc nhuộm khi bắt vào tế bào và mô có màu khác với màu của dung dịch thuốc nhuộm Thí dụ: Toluidin có màu xanh

lơ, khi nhuộm chất này sẽ cho màu đỏ còn các cấu trúc khác có màu xanh lơ (Phạm Phan Địch và Trịnh Bình, 2002)

2.3.10 Dán lamelle:

Trước khi dán cần phải khử nước và khử cồn thật kĩ Khi dán lamelle cần thực hiện nhanh để tránh sự xâm nhập của hơi nước trong không khí vào mô Đánh số hiệu ghi rõ thông tin về tiêu bản hiển vi vừa hoàn thành (Phạm Phan Địch và Trịnh Bình, 2002)

Chương 3

PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 PHƯƠNG TIỆN

3.1.1 Địa điểm thực hiện

Đề tài được thực hiện tại phòng Mô học thuộc bộ môn Thú Y – Khoa Nông Nghiệp và Sinh Học Ứng Dụng

Thời gian: từ ngày 04/09/2013 đến ngày 30/11/2013

3.1.2 Dụng cụ, trang thiết bị, hóa chất

Dụng cụ: chai, lọ, phễu, lame, lamelle, dao lam, kéo, kẹp, máy cắt vi

mẫu, kính hiển vi, tủ hấp, lò điện, bếp tải, bản đúc và thanh đúc mẫu

Hóa chất:

Cồn 700,800,900,1000

Thuốc nhuộm: Hematoxylin Eosin Y

Xylen, Formol, Paraffin, keo Canada balsam, nước cất

3.2 PHƯƠNG PHÁP TIẾN HÀNH

3.2.1 Lấy mẫu

Đối với thỏ: chọn thỏ cái trưởng thành có trọng lượng khoảng 2kg, khỏe mạnh, sau đó giết thỏ bằng cách hủy tủy Dùng kéo giải phẩu mổ từ bụng lên miệng, lấy các phần: hạch lâm ba, lách, buồng trứng, tuyến giáp trạng

Đối với gà: chọn gà khoảng hai tuần tuổi, khỏe mạnh, giết gà bằng cách hủy tủy, dùng kéo mổ quanh hậu môn và cắt lấy tuyến Fabricius

Đối với vịt: chọn vịt có trọng lượng khoảng 2 kg, khỏe mạnh, giết bằng cách hủy tủy, dùng kéo mổ ở vùng bụng rồi tìm phần tá tràng để cắt lấy tụy tạng

3.2.2 Cố định mẫu

Giai đoạn đầu ta ngâm nguyên các phần trên trong dung dịch formol 10% trong 2 giờ để ổn định tổ chức cho dễ cắt Kế tiếp là vớt ra dùng dao lam sạch cắt các phần mỡ, màng treo

3.2.3 Lấy mẫu nhỏ

Cắt nhỏ mẫu với kích thướt khoảng 0,5cm x 0,5cm x 1cm, có thể cắt dọc hoặc cắt ngang tổ chức tùy theo mục đích muốn quan sát

Lách, tụy tạng và hạch lâm ba ruột thì cắt như trên

Còn với buồng trứng thì kích thước vừa đủ không cần cắt nhỏ, chỉ cần loại bỏ những tổ chức xung quanh không cần thiết