LUẬN văn sư PHẠM SINH THỰC HIỆN TIÊU bản HIỂN VI cố ĐỊNH mô PHÂN SINH và mô CHUYÊN hóa ở THỰC vật có HOA

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA SƯ PHẠM BỘ MÔN SƯ PHẠM SINH HỌC THỰC HIỆN TIÊU BẢN HIỂN VI CỐ ĐỊNH MƠ PHÂN SINH VÀ MƠ CHUN HĨA Ở THỰC VẬT CÓ HOA Luận văn tốt nghiệp Chuyên ngành SƯ PHẠM SINH HỌC Cán hướng dẫn: Sinh viên thực hiện: ThS PHẠM THỊ BÍCH THỦY PHAN THỊ KIM HƯỜNG Lớp: SƯ PHẠM SINH K33 MSSV: 3072257 NGUYỄN THỊ TUYẾT VÂN Lớp: SƯ PHẠM SINH K33 MSSV: 3072308 NĂM 2011 Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ CẢM TẠ - o0o Trong suốt trình thực đề tài, với kiến thức hạn hẹp kinh nghiệm ỏi, chúng em khơng tránh khỏi khó khăn thiếu sót Tuy nhiên, động viên, giúp đỡ tận tình Thầy Cơ bạn bè Bộ môn Sư phạm Sinh học – Khoa Sư phạm giúp chúng em vượt qua khó khăn để hoàn thành đề tài Chúng em xin gửi lời biết ơn chân thành đến: Thạc sĩ Phạm Thị Bích Thủy tận tình hướng dẫn, bảo cung cấp tài liệu để chúng em làm tốt đề tài này, Cô không ngừng động viên để chúng em vượt qua khó khăn Thạc sĩ Phùng Thị Hằng, Thạc sĩ Nguyễn Thanh Tùng, Cô Lưu Thị Cúc cho nhiều ý kiến quý báu để chúng em hoàn thành tốt đề tài Quý Thầy Cô Bộ môn Sư phạm Sinh quý Thầy Cô trường Đại học Cần Thơ cung cấp kiến thức cho chúng em bốn năm đại học Qua đây, xin chân thành cảm ơn bạn nhóm làm luận văn, đề tài nghiên cứu khoa học phịng thí nghiệm thực vật động viên, góp ý q trình thực đề tài Cuối cùng, chúng em xin chúc quý Thầy Cô bạn dồi sức khỏe, thành công công việc Trân trọng ! Sinh viên thực Phan Thị Kim Hường Nguyễn Thị Tuyết Vân Chuyên ngành Sư phạm Sinh học i Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ TÓM LƯỢC - o0o Trong thời gian từ tháng 10 năm 2010 đến tháng 04 năm 2011 tiến hành thử nghiệm nghiệm thức hoàn thành quy trình “Thực tiêu hiển vi cố định mơ phân sinh mơ chun hóa Thực vật có hoa” Từ đối tượng thí nghiệm ban đầu thân giấp cá, thử nghiệm với nhiều nghiệm thức để tìm quy trình nhuộm màu, khử nước… mà giữ nguyên màu sắc, trạng thái mẫu Trên sở quy trình này, chúng tơi áp dụng thực 14 mẫu vật khác với thay đổi thời gian khử nước cho phù hợp với độ cứng mềm, dày mỏng mẫu Chúng thực 225 tiêu hiển vi cố định vượt qua mục tiêu đề ban đầu 150 tiêu bản, gồm loại mô: mô phân sinh mơ chun hóa tổng số 14 lồi thực vật Đa số tiêu đạt yêu cầu: mẫu thẳng, mỏng, co giữ màu sắc, hầu hết quan sát rõ cấu trúc mô như: mô phân sinh sơ cấp (mô phân sinh mơ phân sinh lóng), mơ phân sinh thứ cấp; mô che chở; nhu mô; mô nâng đỡ; mô dẫn truyền mô tiết Chuyên ngành Sư phạm Sinh học ii Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ MỤC LỤC CẢM TẠ i TÓM LƯỢC ii MỤC LỤC iii DANH SÁCH BẢNG v DANH SÁCH HÌNH vi CHƯƠNG I GIỚI THIỆU 1 Đặt vấn đề Mục tiêu đề tài CHƯƠNG II LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU Sơ lược thực vật có hoa Mô thực vật 2.1 Mô phân sinh 2.2 Mơ chun hóa Phương pháp thực tiêu cố định 14 Tình hình nghiên cứu 15 CHƯƠNG III PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 Địa điểm thời gian thực đề tài 16 1.1 Địa điểm 16 1.2 Thời gian 16 Phương tiện 16 2.1 Mẫu vật 16 2.2 Thiết bị dụng cụ 17 2.3 Hóa chất 17 Phương pháp thực tiêu hiển vi cố định 18 3.1 Thu mẫu xử lí mẫu 18 3.2 Cắt mẫu loại nội dung tế bào 18 3.3 Nhuộm màu 19 3.4 Khử nước 19 3.4.1 Tìm quy trình khử nước 19 3.4.2 Thay đổi thời gian thích hợp cho mẫu 20 Chuyên ngành Sư phạm Sinh học iii Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ 3.5 Dán mẫu 20 3.6 Dán nhãn 20 CHƯƠNG IV KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 21 Kết 21 1.1 Quy trình thực tiêu hiển vi cố định 21 1.2 Quy trình tổng quát thực tiêu hiển vi cố định 26 1.3 Thời gian thực tiêu hiển vi cố định cụ thể cho loại mẫu 27 1.4 Một số hình ảnh minh họa cụ thể 29 1.5.1 Mô phân sinh 29 1.5.2 Mơ chun hóa 31 1.5 Tổng số tiêu hiển vi cố định thực 39 Thảo luận 41 CHƯƠNG V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 43 Kết luận 43 Đề nghị 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 44 PHẦN PHỤ LỤC Chuyên ngành Sư phạm Sinh học iv Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH BẢNG - o0o Bảng 1: Danh sách mẫu vật 16 Bảng 2: Hóa chất thời gian khử nước nghiệm thức 18 Bảng 3: Hóa chất thời gian khử nước nghiệm thức 19 Bảng 4: Hóa chất thời gian khử nước nghiệm thức 20 Bảng 5: Kết thử nghiệm bắt màu mẫu nhuộm kép đồng thời 21 Bảng 6: Kết thử nghiệm bắt màu mẫu nhuộm kép 21 Bảng 7: Kết trình khử nước nghiệm thức 1, 24 Bảng 8: Quy trình tổng quát thực tiêu hiển vi cố định mô thực vật 27 Bảng 9: Thời gian ngâm javel khử nước thích hợp cho loại mẫu 28 Bảng 10: Số lượng tiêu thực tương ứng với mẫu 40 Chuyên ngành Sư phạm Sinh học v Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ DANH SÁCH HÌNH - o0o Hình 1: Mơ phân sinh Hình 2: Vài loại nhu mô: nhu mô đặc, nhu mô đạo, nhu mơ khuyết Hình 3: Các loại lục mô Hình 4: Các kiểu giao mơ: giao mơ phiến, giao mơ góc, giao mơ trịn Hình 5: Bó mạch bí ngơ 13 Hình 6: Ống tiết thân lốt cắt ngang 14 Hình 7: Cách đậy lamelle 20 Hình 8: Mẫu giấp cá nhuộm kép đồng thời với vert d'iode – carmine 22 Hình 9: Mẫu giấp cá nhuộm kép đồng thời với methylen blue – carmine 22 Hình 10: Mẫu giấp cá nhuộm kép đồng thời với methyl green – carmine 22 Hình 11: Mẫu giấp cá nhuộm kép với methylen blue – carmine 23 Hình 12: Mẫu giấp cá nhuộm kép với methyl green – carmine 23 Hình 13: Mẫu giấp cá nhuộm kép đồng thời với vert d'iode – carmine sau nửa tháng (NT1) 25 Hình 14: Mẫu giấp cá nhuộm kép với methyl green – carmine sau tháng (NT1) 25 Hình 15: Mẫu giấp cá nhuộm kép với methyl green – carmine sau tháng (NT2) 25 Hình 16: Mẫu giấp cá nhuộm kép với methyl green – carmine sau tháng (NT3) 25 Hình 17: Lát cắt dọc chóp rễ rau muống 30 Hình 18: Mơ phân sinh thân rau cần dày 30 Hình 19: Mơ phân sinh lóng cỏ lơng tây cắt dọc 30 Hình 20: Tượng tầng libe – gỗ thân bí rợ 31 Hình 21: Tượng tầng sube – nhu bì thân bụp già 31 Hình 22: Biểu bì khí huệ ta 32 Hình 23: Biểu bì nhiều lớp trúc đào 32 Hình 24: Huyệt trúc đào 32 Chuyên ngành Sư phạm Sinh học vi Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ Hình 25: Mơ sube thân bụp già 33 Hình 26: Nhu mô đặc thông thiên 33 Hình 27: Nhu mơ đạo ác ó 34 Hình 28: Nhu mô khuyết thân giấp cá 34 Hình 29: Lục mơ hàng rào nữ trinh 34 Hình 30: Giao mơ góc ác ó 35 Hình 31: Giao mô phiến thân cỏ cứt heo 35 Hình 32: Giao mơ trịn thơng thiên 35 Hình 33: Tế bào cương mơ thân bí rợ 36 Hình 34: Tế bào cương mô thân giấp cá 36 Hình 35: Sợi cương mơ thân măng tây 37 Hình 36: Mơ dẫn truyền sơ cấp thân măng tây 37 Hình 37: Mơ dẫn truyền sơ cấp thân bí rợ 37 Hình 38: Mơ libe thân bí rợ 38 Hình 39: Mơ gỗ thứ cấp thân bụp già 38 Hình 40: Lát cắt ngang thân lốt 38 Hình 41: Mơ tiết thân lốt 39 Hình 42: Khung caspary thân lốt 39 Chuyên ngành Sư phạm Sinh học vii Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ CHƯƠNG I GIỚI THIỆU Đặt vấn đề Giới thực vật vô đa dạng phong phú, có vai trị to lớn tự nhiên, nói khơng có sống Trái đất khơng có tồn chúng Với vai trị to lớn đó, từ lâu người tiến hành nghiên cứu hình thái bên ngồi cấu tạo bên thực vật mơn học hình thái giải phẫu học thực vật đời Theo R L Gordon (1974), giới thực vật gồm hai phân giới phân giới thực vật bậc thấp gồm ngành tảo phân giới thực vật bậc cao gồm ngành thực vật có phơi Dù thể thực vật từ dạng đơn bào đến dạng đa bào có chung đặc điểm chúng cấu tạo tế bào Cơ thể thực vật đa bào phức tạp có hạt kết q trình tiến hóa thời gian dài Q trình chuyển hóa dẫn tới việc hình thành đặc điểm khác hình thái sinh lý phần khác mà ta gọi quan Trong thể thực vật có hột, quan cấu tạo nhiều loại mô để thực chức khác Từng loại mơ giữ vai trị định thể thực vật, loại mô có khác hình dạng, kích thước, cấu trúc tế bào, Đặc biệt, thực vật hột kín, loại mơ có chun hóa cao nên thực chức cách hữu hiệu, kết thể thực vật có khả thích nghi cao với điều kiện mơi trường Trong q trình nghiên cứu, nhà thực vật học tiến hành phân loại mô dựa tiêu chuẩn khác Nhưng mô thực vật chia thành hai nhóm mơ phân sinh mơ chun hóa Để nhận biết, ta vào thành phần cấu tạo, vị trí chúng quan Có nhiều tài liệu tác giả nước nước nghiên cứu kĩ cấu trúc bên thể thực vật, cách tiến hành giải phẫu quan quan sát kính hiển vi, nhà thực vật học tiến hành phân loại đưa đặc điểm cấu tạo chức loại mô thực vật Chuyên ngành Sư phạm Sinh học Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ Dựa sở đó, học thực hành mơn thực vật học, hình thái giải phẫu học thực vật, xuất phát từ nhu cầu quan sát nhận diện loại mô thực vật sinh viên phải thực mẫu tiêu tạm thời Công việc giúp rèn luyện kĩ thực hành cho sinh viên Tuy nhiên, phịng thí nghiệm cần có thêm tiêu hiển vi cố định, chúng lưu giữ thời gian dài thuận lợi cho ta sử dụng lúc Với ý nghĩ nên chọn đề tài: “Thực tiêu hiển vi cố định loại mơ phân sinh mơ chun hóa thực vật có hoa” Mục tiêu đề tài: Tìm quy trình thực tiêu hiển vi cố định mô thực vật Thực 150 tiêu hiển vi cố định có chất lượng quan thực vật có hoa nhằm quan sát rõ loại mơ phân sinh mơ chun hóa, tiêu bảo quản khoảng thời gian dài, thuận lợi cho việc nghiên cứu học tập Chuyên ngành Sư phạm Sinh học Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ - Nhu mơ đạo Hình 27: Nhu mơ đạo thân lốt (Piper lolot DC) - Nhu mơ khuyết Hình 28: Nhu mô khuyết thân giấp cá (Houttuynia Cordata Thunb) * Theo nhiệm vụ Lục mô hàng rào Lục mô xốp Hình 29: Lục mơ nữ trinh (Ligustrum indicum (Lour.) Merr.) Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 34 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ 1.4.2.3 Mô nâng đỡ * Giao mô: loại mô sống, bắt màu hồng đậm với phẩm nhuộm carmine - Giao mơ góc Giao mơ góc Hình 30: Giao mơ góc ác ó (Acanthus integrifolius T Anders.) - Giao mơ phiến Giao mơ phiến Hình 31: Giao mơ phiến thân cỏ cứt heo (Ageratum conyzoides L.) - Giao mơ trịn Hình 32: Giao mơ trịn thơng thiên (Thevetia peruviana (Pers.) Schumann) Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 35 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ * Cương mô: tập hợp tế bào có vách hậu lập dày thường tẩm mộc, bắt màu xanh với phẩm nhuộm Methyl green - Tế bào cương mơ: Cương mơ Hình 33: Tế bào cương mơ thân bí rợ (Cucurbita maxima Duch & Lamk) Cương mơ Hình 34: Tế bào cương mơ thân giấp cá (Houttuynia Cordata Thunb) Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 36 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ - Sợi cương mơ: Sợi cương mơ Hình 35: Sợi cương mô thân măng tây (Asparagus officinalis L.) 1.4.2.4 Mô dẫn truyền - Mô dẫn truyền sơ cấp: Mô gỗ sơ cấp Mơ libe sơ cấp Hình 36: Mơ dẫn truyền sơ cấp thân măng tây (Asparagus officinalis L.) Mơ libe sơ cấp Mơ gỗ sơ cấp Hình 37: Mơ gỗ sơ cấp thân bí rợ (Cucurbita maxima Duch & Lamk) Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 37 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ Tấm sàng Ống sàng Nhu mơ libe Hình 38: Mơ libe thân bí rợ (Cucurbita maxima Duch & Lamk) - Mô dẫn truyền thứ cấp: Mô gỗ thứ cấp Hình 39: Mơ dẫn truyền thứ cấp thân bụp già (Hibiscus rosa-sinensis L.) 1.4.2.5 Mô tiết Mô tiết gồm tế bào sống có vách mỏng, bắt màu hồng với phẩm nhuộm carmine Nhiệm vụ chúng tiết sản phẩm q trình trao đổi chất Mơ tiết Hình 40: Lát cắt ngang thân lốt (Piper lolot DC) Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 38 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ Nhu mơ tủy Xoang ống tiết Tế bào tiết Hình 41: Mơ tiết thân lốt (Piper lolot DC) Ở thân lốt cắt ngang ta quan sát rõ khung caspary, khung bắt màu xanh với thuốc nhuộm methyl green Khung Caspary Hình 42: Khung caspary thân lốt (Piper lolot DC) 1.5 Tổng số tiêu hiển vi cố định thực Trong thời gian thực đề tài, thực 225 tiêu hiển vi cố định gồm mô phân sinh mơ chun hóa tổng số 14 lồi thực vật Đa số tiêu đạt yêu cầu: mẫu tương đối thẳng, mỏng, co giữ màu sắc Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 39 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ Bảng 10: Số lượng tiêu thực tương ứng với mẫu STT Tên mẫu Số Thân giấp cá (Houttuynia cordata Thumb) Nhu mô, giao mô, cương mô, tầng sinh 15 Thân măng tây (Asparagus officinalis L.) (Cucurbita maxima Duch & Lamk) 10 11 12 Thân lốt (Piper lolot DC) 20 15 25 Lá nữ trinh (Ligustrum indicum (Lour.) Merr.) Lá Huệ ta (Polianthes tuberosa L.) 15 Đỉnh rễ rau muống (Ipomoea aquatica Forsk) Lá trúc đào (Nerium oleander L.) khung caspary gỗ hậu lập 15 mô hàng rào, nhu mô khuyết 20 Lục mơ 15 Biểu bì khí 15 Chồi ác ó (Acanthus integrifolius T Anders.) Ống tiết, cương mơ, nhu mơ đạo, Giao mơ góc, nhu mơ đạo, gỗ, libe, lục Chồi rau cần dày (Coleus amboinicus Lour.) libe gỗ, nhu mơ đạo, giao mơ góc Sube, tượng tầng sube nhu bì, nhu mơ, Lá ác ó (Acanthus integrifolius T Anders.) libe, mô gỗ Cương mô, mô libe, mô gỗ, tượng tầng Thân bụp già (Hibiscus rosa-sinensis L.) bột có khung caspary, gỗ, libe Biểu bì, nhu mơ, sợi cương mơ, mơ Thân bí rợ Mơ quan sát rõ tiêu 22 10 Mô phân sinh thân Mô phân sinh thân Mô phân sinh rễ Huyệt, lục mơ hàng rào, biểu bì nhiều lớp Lá thông thiên 13 (Thevetia peruviana (Pers.) Schumann) 14 15 Thân cỏ cứt heo (Ageratum conyzoides L.) Cỏ lông tây 10 15 (Brachiaria mutica Forsk) Tổng số tiêu Chuyên ngành Sư phạm Sinh học Giao mô trịn, libe, gỗ, nhu mơ đặc Giao mơ phiến, libe, gỗ, nhu mơ đạo Mơ phân sinh lóng 225 40 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ Thảo luận 2.1 Giai đoạn thu mẫu Đa số mẫu vật sử dụng đề tài loại cỏ phổ biến địa phương nên việc thu mẫu công việc tương đối dễ dàng Ta nên tiến hành thu mẫu vào lúc sáng sớm Các mẫu tươi sau thu tự nhiên tiến hành cắt Nếu số lượng nhiều trữ lại cách cho vào túi nilong trữ ngăn mát tủ lạnh ngâm dung dịch formol 10% Trong trình thực đề tài chúng tơi nhận thấy tiến hành cắt lát phần lớn mẫu tươi Riêng mẫu thân bí rợ thân măng tây sử dụng mẫu tươi, lát cắt dễ bị rách phần nhu mô, nhuộm mẫu dễ bị lem màu Vậy ta nên sử dụng mẫu ngâm formol 10% hai loại thân ngày tiêu có chất lượng cao so với việc sử dụng mẫu tươi 2.2 Giai đoạn cắt mẫu Với phương pháp cắt lát mỏng tay dễ thực đơn giản, nhiên, mẫu không mỏng thẳng cắt máy microstome (phương pháp phức tạp tốn nhiều) 2.3 Giai đoạn nhuộm màu Trong trình nhuộm ta phải tạo độ tương phản mô quan Trong kĩ thuật làm tiêu tạm thời người ta thường nhuộm kép với phẩm nhuộm carmine – vert d'iode Nếu sử dụng phương pháp nhuộm để thực tiêu hiển vi cố định tác giả trước tiêu bị màu nhanh chóng Khi thực đề tài thử nghiệm lại phương pháp nhuộm kết tiêu bị màu xanh sau nửa tháng thực Nguyên nhân phẩm nhuộm xanh vert d'iode có chứa phân tử iod chất dễ bay làm hợp chất bền (công thức phân tử vert d'iode: C27H35I2N3, ZnCl2) Đối với phẩm nhuộm methyl green (công thức phân tử: C26H33N3Cl2 ZnCl2), chất bền, hòa tan nước khơng tan cồn (Nguyễn Nghĩa Thìn, 2008), giữ màu lâu thực tiêu hiển vi cố định 2.4 Giai đoạn khử nước Trong thời gian thực đề tài thử nghiệm nghiệm thức khác nhằm tìm quy trình khử nước thích hợp Chun ngành Sư phạm Sinh học 41 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ Đối với tiêu cố định việc loại bỏ khỏi tế bào quan trọng, định độ bền tiêu Với nghiệm thức khử nước mà chúng tơi sử dụng cồn butanol đóng vai trị hóa chất loại nước khỏi tế bào Để loại hết nước, vi phẩu ngâm dung dịch cồn có nồng độ từ thấp đến cao Vì cồn tan nước rút nước ngồi tế bào (Nguyễn Nghĩa Thìn, 2008) Tuy cồn loại hóa chất khử nước tốt dễ làm cho tế bào bị co nên ta phải ý đến thời gian ngâm mẫu dung dịch Tùy vào độ cứng mềm dày mỏng loại vi phẫu mà ta đưa thời gian khử nước thích hợp Sau khử nước, ta tiến hành cho vào xylen để làm mẫu 2.5 Giai đoạn dán mẫu Kĩ thuật dán mẫu ảnh hưởng đến thời gian tồn tiêu Sử dụng Baume Canada pha lỗng xylen với tỉ lệ thích hợp (do Baume Canada tan xylen) Nếu dung dịch q đặc ta khơng thể đậy lamelle lại, cịn dung dịch q lỗng sau xylen bay lượng Baume Canada cịn lại ít, vi phẫu tiếp xúc với khơng khí nên chúng dễ bị hư Do tỉ lệ pha Baume Canada với xylen 1: Đối với mẫu nữ trinh, phần lục mơ có vách tế bào mỏng nên dán mẫu ta dùng Baume Canada pha với xylen theo tỉ lệ 1: để tránh làm mẫu bị co Khi so sánh kết thực với tiêu trước phịng thí nghiệm thực vật thực năm 2000, chúng tơi nhận thấy có điểm bật màu sắc tiêu giữ tốt (sau tháng màu rõ, đẹp) Tuy nhiên, cần kiểm tra lại độ bền màu thời gian dài Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 42 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ CHƯƠNG V KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận - Trong trình thực đề tài, chúng tơi tìm quy trình thực tiêu hiển vi cố định mô phân sinh mơ chun hóa thực vật bậc cao - Tổng số tiêu hiển vi cố định thực 225, mẫu tương đối mỏng với màu sắc tương phản, rõ đẹp - Phẩm nhuộm methyl green phẩm nhuộm xanh bền màu sau khử nước - Do thủ thuật cắt lát mỏng tay nên không tránh khỏi thiếu sót mẫu khơng dày, số mẫu cắt dọc chưa đạt yêu cầu (ví dụ lát cắt dọc thân bí rợ) - Số lượng tiêu hiển vi cố định mô tiết hạn chế - Khi quan sát lát cắt dọc thân cỏ lơng tây, cấu trúc mơ phân sinh lóng chưa rõ Đề nghị - Tiếp tục thử nghiệm quy trình lồi thực vật khác nhằm quan sát cấu trúc loại mô khác mơ phân sinh lóng, loại mơ tiết (ngoại trừ ống tiết thân lốt) - Sử dụng máy microstome để cắt dọc mẫu thân bí nhằm quan sát rõ mô dẫn truyền Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 43 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ TÀI LIỆU THAM KHẢO - o0o Đặng Minh Quân 2008 Bài giảng phân loại học thực vật A Thực vật bậc cao Tập II Hà Thị Lệ Ánh 2005a Giáo trình hình thái giải phẫu học thực vật Hà Thị Lệ Ánh 2005b Giáo trình Thực tập hình thái giải phẫu học thực vật Hồng Thị Sản 1999 Phân loại học thực vật Nxb giáo dục Nguyễn Bá 1977 Hình thái học thực vật Nxb đại học trung học chuyên nghiệp Hà Nội Tập I Nguyễn Bá 2006 Hình thái học thực vật Nxb Giáo dục Nguyễn Bá 2007 Giáo trình thực vật học Nxb giáo dục Nguyễn Nghĩa Thìn 2008 Các phương pháp nghiên cứu thực vật Nxb Đại học quốc gia Hà Nội Nguyễn Thị Cẩm Lý 2010 Thực tiêu hiển vi cố định lát cắt ngang số loài giun đất thuộc giống Pheretima Kinberg Đề tài nghiên cứu khoa học Trường Đại học Cần Thơ Nguyễn Xuân Linh 2008 Một số phương pháp thực tiêu hiển vi nấm mốc dung dịch giữ màu thực vật bậc cao Luận văn tốt nghiệp Đại học Cần Thơ Katherine Esau 1980 Giải phẫu thực vật Nxb khoa học kĩ thuật Hà Nội Tập I (Phạm Hải dịch) N.X Kixeleva 1977 Giải phẫu hình thái thực vật Nxb giáo dục (Nguyễn Tề Chỉnh – Hương Ngọc Toản dịch) Trần Cơng Khánh 1981 Thực tập hình thái giải phẫu thực vật Nxb ĐH & THCN Hà Nội Trần Thị Phương Đài 2009 Thực tiêu hiển vi cố định q trình ngun phân chóp rễ đậu hà lan Luận văn tốt nghiệp Đại học Cần Thơ Katherine Esau 1966 Anatomy of seed plants Professor of Botany University of California Chuyên ngành Sư phạm Sinh học 44 Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ PHẦN PHỤ LỤC - o0o Phụ lục bảng Bảng Trở ngại biện pháp khắc phục cắt mẫu tẩy mẫu Biến cố Nguyên nhân Khắc phục Điều chỉnh hướng cắt sau Mẫu cắt bị xéo, Mặt phẳng cắt khơng vng cắt bỏ phần bị xéo khơng góc với mặt thớt bắt đầu tiến hành cắt lát Mẫu cắt bị xướt Do lưỡi lam khơng cịn bén Thay lưỡi lam Mẫu bị dơ Chưa tẩy nội chất Tăng thời gian ngâm tế bào mẫu nước javel Bản chất mô mềm xốp Tăng số lần rửa với nước Mẫu có nhiều bọt khí dính tế bào cất Bảng Trở ngại biện pháp khắc phục nhuộm mẫu Biến cố Nguyên nhân Khắc phục Màu methyl green, màu Thời gian nhuộm màu Giảm thời gian hồng carmine đậm lâu nhuộm màu Mẫu bị lem màu Mẫu rửa không Tăng số lần rửa mẫu với nước cất Mẫu không bắt màu hồng - Mẫu lẫn axit - Tăng số lần rửa mẫu carmine, bắt màu axetic với nước cất nhạt, hay có màu khác - Hóa chất nhuộm bị hư - Thay hóa chất Mẫu có cương mơ sợi Mẫu q non cương mơ có màu tím Chun ngành Sư phạm Sinh học Chọn mẫu có độ già thích hợp I Bộ mơn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ Bảng Trở ngại biện pháp khắc phục khử nước dán mẫu Biến cố Mẫu bị co dúm Nguyên nhân Thời gian khử nước Khắc phục Giảm thời gian khử nước lâu Tiêu có nhiều Thao tác đậy lamelle Cho cạnh lamelle tiếp xúc bọt khí chưa tốt với giọt Baume Canada hạ xuống từ từ Baume Canada bị Baume Canada tràn khỏi lamelle nhiều Baume Canada - Lượng Baume Canada khơng tràn q Giảm lượng Baume Canada - Tăng lượng Baume Canada - Baume Canada đặc - Pha thêm xylen Cách pha hóa chất 2.1 Phẩm nhuộm kép - Carmine Pha 1g carmine alum lake vào 100 ml nước cất, thêm g phèn chua, khuấy đều, đun sôi nhẹ 30 phút Sau đó, để nguội lọc, ta dung dịch carmine 1% - Methylen blue Pha 1g methylen blue vào 100 ml nước cất, khuấy tan lọc ta dung dịch methylen blue 1% Khi sử dụng pha theo tỉ lệ 0,1% cách: pha 1ml dung dịch gốc methylen blue 1% với ml nước cất - Methyl green Cách pha tương tự pha methylen blue - Vert d'iode Cách pha tương tự pha methylen blue Chuyên ngành Sư phạm Sinh học II Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ 2.2 Phẩm nhuộm kép đồng thời Sử dụng phẩm nhuộm gốc có nồng độ 1%, để pha thành phẩm nhuộm xanh có nồng độ 0,1 % Bảng 4: Cách pha phẩm nhuộm kép đồng thời Phẩm xanh Phẩm hồng (ml) carmine 1% (ml) Vert d'iode - Carmine Methylen blue – Carmine Methyl green – Carmine TÊN PHẨM NHUỘM 2.3 Hóa chất khử nước - Cồn Lưu ý: lượng dung dịch cồn pha bảng 30 ml Bảng 5: Cách pha dung dịch cồn theo nồng độ khác 10% 20% 30% 40% 50% 60% 70% 80% 90% 100% Cồn (ml) Nước (ml) 12 15 18 21 24 27 30 27 24 21 18 15 12 - Butanol/cồn Lưu ý: lượng dung dịch butanol/cồn pha bảng 30 ml Bảng 6: Cách pha dung dịch butanol/cồn theo nồng độ khác 20% 40% 60% 80% 100% Butanol (ml) 12 18 24 30 Cồn (ml) 24 18 12 Chuyên ngành Sư phạm Sinh học III Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa 33- 2011 Trường Đại học Cần Thơ - Xylen/butanol Lưu ý: lượng dung dịch xylen/butanol pha bảng 30 ml Bảng 7: Cách pha dung dịch xylen/butanol theo nồng độ khác 20% 40% 60% 80% 100% Xylen (ml) 12 18 24 30 Butanol (ml) 24 18 12 - Xylen/cồn Lưu ý: lượng dung dịch xylen/cồn pha bảng 30 ml Bảng : Cách pha dung dịch xylen/cồn theo nồng độ khác 20% 40% 60% 80% 100% Xylen (ml) 12 18 24 30 Cồn (ml) 24 18 12 2.4 Hóa chất dán mẫu Pha Baume Canada với xylen theo tỉ lệ 1:2 (1 phần Baume Canada : phần xylen) Sau để lọ hóa chất vừa pha vào tủ sấy (hoặc đun nhẹ) cho Baume Canada tan hết (có thể dùng phễu thủy tinh có giấy lọc để lọc lại thấy cần) Baume Canada pha với xylen theo tỉ lệ 1:4 cách pha phần Baume Canada (đã pha với tỉ lệ 1:2) với phần xylen Chuyên ngành Sư phạm Sinh học IV Bộ môn Sư phạm Sinh học ... đề tài: ? ?Thực tiêu hiển vi cố định loại mơ phân sinh mơ chun hóa thực vật có hoa? ?? Mục tiêu đề tài: Tìm quy trình thực tiêu hiển vi cố định mô thực vật Thực 150 tiêu hiển vi cố định có chất lượng... (1979) có đưa quy trình chung cho vi? ??c thực tiêu hiển vi cố định nhóm thực vật Hiện nay, Bộ mơn Sư phạm Sinh - Khoa Sư phạm - Trường Đại học Cần Thơ vi? ??c thực tiêu hiển vi cố định loại mô hay... phân sinh mơ phân sinh lóng), mơ phân sinh thứ cấp; mô che chở; nhu mô; mô nâng đỡ; mô dẫn truyền mô tiết Chuyên ngành Sư phạm Sinh học ii Bộ môn Sư phạm Sinh học Luận văn tốt nghiệp Đại học Khóa