giám định bệnh hại trên cây huệ trắng (polianthes tuberosa l.) tại huyện lai vung, tỉnh đồng tháp

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG BỘ MÔN SINH LÝ – SINH HÓA Chứng nhận luận văn tốt nghiệp Kỹ sư ngành Công nghệ rau hoa quả và cảnh quan với đề tài: GIÁM ĐỊ

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG

NGUYỄN THỊ THÚY AN

GIÁM ĐỊNH BỆNH HẠI TRÊN CÂY HUỆ TRẮNG

(Polianthes tuberosa L.) TẠI HUYỆN LAI VUNG,

TỈNH ĐỒNG THÁP

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành: CÔNG NGHỆ RAU HOA QUẢ VÀ CẢNH QUAN

Cần Thơ, 2013

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG

LUẬN VĂN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Ngành: CÔNG NGHỆ RAU HOA QUẢ VÀ CẢNH QUAN

Tên đề tài:

GIÁM ĐỊNH BỆNH HẠI TRÊN CÂY HUỆ TRẮNG

(Polianthes tuberosa L.) TẠI HUYỆN LAI VUNG,

TỈNH ĐỒNG THÁP

Cán bộ hướng dẫn khoa học: Sinh viên thực hiện:

PGS TS Trần Thị Thu Thủy Nguyễn Thị Thúy An

MSSV: 3103537

Lớp: TT1079A1 K36

Cần Thơ, 2013

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG

BỘ MÔN SINH LÝ – SINH HÓA

Chứng nhận luận văn tốt nghiệp Kỹ sư ngành Công nghệ rau hoa quả và

cảnh quan với đề tài:

GIÁM ĐỊNH BỆNH HẠI TRÊN CÂY HUỆ TRẮNG

(Polianthes tuberosa L.) TẠI HUYỆN LAI VUNG,

TỈNH ĐỒNG THÁP

Do sinh viên NGUYỄN THỊ THÚY AN thực hiện và đề nạp

Kính trình hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp

Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2013 Cán bộ hướng dẫn

PGS TS TRẦN THỊ THU THỦY

TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ

KHOA NÔNG NGHIỆP & SINH HỌC ỨNG DỤNG

BỘ MÔN SINH LÝ – SINH HÓA

Hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp đã chấp nhận luận văn tốt nghiệp Kỹ sư

ngành Công nghệ rau hoa quả và cảnh quan với đề tài:

GIÁM ĐỊNH BỆNH HẠI TRÊN CÂY HUỆ TRẮNG

(Polianthes tuberosa L.) TẠI HUYỆN LAI VUNG,

TỈNH ĐỒNG THÁP

Do sinh viên Nguyễn Thị Thúy An thực hiện và bảo vệ trước hội đồng

Ý kiến của Hội đồng chấm luận văn tốt nghiệp………

………

………

………

Luận văn tốt nghiệp được Hội đồng đánh giá ở mức………

DUYỆT KHOA Cần Thơ, ngày…tháng…năm 2013 Trưởng khoa Nông nghiệp & SHƯD Chủ tịch Hội đồng

LỜI CAM ĐOAN

Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của bản thân Các số liệu, kết quả trình bày trong luận văn là trung thực và chưa từng được ai công bố trong bất

kỳ luận văn nào trước đây

Tác giả luận văn

Nguyễn Thị Thúy An

TIỂU SỬ CÁ NHÂN

Họ và tên: Nguyễn Thị Thúy An

Ngày sinh: 29/03/1990

Nơi sinh: Kế Sách – Sóc Trăng

Địa chỉ: 329/4, ấp 9, Trinh Phú, Kế Sách, Sóc Trăng

Quá trình học tập:

1997 – 2001: Trường tiểu học Trinh Phú I

2001 – 2006: Trường trung học cơ sở Thới An Hội

2006 – 2009: Trường trung học phổ thông Thiều Văn Chỏi

2009 – 2013: Trường Đại học Cần Thơ, khoa Nông nghiệp & Sinh học Ứng dụng, ngành Công nghệ rau hoa quả và cảnh quan, khóa 36

LỜI CẢM TẠ

Kính dâng!

Cha mẹ đã suốt đời tận tụy nuôi con nên người

Xin tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến!

Cô Trần Thị Thu Thủy đã gợi ý đề tài, tận tình hướng dẫn, quan tâm và giúp

đỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện đề tài và hoàn thành luận văn tốt nghiệp

Cô Phạm Thị Phương Thảo, cô Lê Minh Lý, thầy cô trong Bộ môn Sinh Lý – Sinh hóa và tất cả quý thầy cô Trường Đại học Cần Thơ đã quan tâm, giảng dạy tôi trong suốt 4 năm học

Thầy Lê Thanh Toàn, chị Nguyễn Thị Hàn Ni và các anh chị trong Bộ môn Bảo vệ thực vật đã giúp đỡ và tạo mọi điều kiện giúp tôi hoàn thành luận văn

Thân gửi!

Toàn thể các bạn lớp Công nghệ rau hoa quả và cảnh quan, khóa 36 đã giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập, xin gửi lời chúc tốt đẹp nhất đến các bạn

Nguyễn Thị Thúy An

MỤC LỤC Trang

LỜI CAM ĐOAN i

TIỂU SỬ CÁ NHÂN ii

LỜI CẢM TẠ iii

MỤC LỤC iv

DANH SÁCH BẢNG vi

DANH SÁCH HÌNH vii

TÓM LƯỢC viii

MỞ ĐẦU 1

CHƯƠNG 1 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU 2

1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT CỦA CÂY HUỆ TRẮNG 2

1.1.1 Đặc điểm thực vật 2

1.1.2 Phân loại hoa Huệ 3

1.1.3 Điều kiện ngoại cảnh 3

1.1.4 Kỹ thuật trồng 3

1.2 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU VỀ BỆNH TRÊN CÂY HUỆ TRẮNG ĐÃ ĐƯỢC BÁO CÁO 5

1.2.1 Trên thế giới 5

1.2.2 Tại Đồng bằng sông Cửu Long 5

1.2.2.1 Bệnh thán thư 6

1.2.2.2 Bệnh cháy lá 6

1.2.2.3 Bệnh đốm vòng 6

1.2.2.4 Bệnh thối hạch 6

1.2.2.5 Bệnh thối vi khuẩn 7

1.2.2.6 Bệnh đốm vi khuẩn 7

1.2.2.7 Bệnh chai bông 7

1.3 PHƯƠNG PHÁP 9

1.3.1 Phương pháp thu mẫu và đánh giá bệnh 9

1.3.2 Quy trình giám định bệnh 10

CHƯƠNG 2 PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP 11

2.1 PHƯƠNG TIỆN 11

2.1.1 Thời gian và địa điểm 11

2.1.2 Vật liệu và dụng cụ 11

2.2 PHƯƠNG PHÁP 11

2.2.1 Phương pháp điều tra 11

2.2.2 Phương pháp giám định bệnh trên cây Huệ trắng 12

2.2.3 Lây bệnh nhân tạo 15

2.2.3.1 Lây bệnh nhân tạo vi khuẩn 15

2.2.3.2 Lây bệnh nhân tạo bằng hạch nấm 15

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 16

3.1 TÌNH HÌNH BỆNH HẠI 16

3.2 KẾT QUẢ GIÁM ĐỊNH BỆNH 20

3.2.1 Bệnh thán thư (Colletotrichum sp.) 20

3.2.1 Bệnh thối nhũng hoa (Choanephora sp.) 22

3.2.3 Bệnh đốm vòng (Alternaria sp.) 24

3.2.4 Bệnh thối hạch (Sclerotium rolfsii) 26

3.2.5 Bệnh đốm vi khuẩn (Pseudomonas sp.) 30

3.2.6 Bệnh sọc lá vi khuẩn (Xanthomonas sp.) 33

3.2.7 Bệnh chai bông (tuyến trùng Aphelenchoides besseyi) 36

CHƯƠNG 4 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 38

4.1 KẾT LUẬN 38

4.2 ĐỀ NGHỊ 38

TÀI LIỆU THAM KHẢO 39

PHỤ CHƯƠNG 41

DANH SÁCH BẢNG

2.1 Phân cấp mức độ bệnh (Bộ môn Bảo vệ thực vật, trường Đại học Cần Thơ) 10

3.1 Mức độ bệnh hại trên cây Huệ trắng qua các tháng điều tra trong năm 2013 18

DANH SÁCH HÌNH

3.1 Triệu chứng và đặc điểm nấm Colletotrichum sp gây bệnh thán thƣ

trên cây Huệ trắng

3.7 Triệu chứng và vi khuẩn Pseudomonas sp gây bệnh đốm vi khuẩn

trên cây Huệ trắng

31

3.8 Triệu chứng bệnh đốm vi khuẩn (Pseudomonas sp.) sau khi lây

bệnh nhân tạo

32

3.9 Triệu chứng và vi khuẩn Xanthomonas sp gây bệnh sọc lá vi khuẩn

trên cây Huệ trắng

34

3.10 Triệu chứng bệnh sọc lá vi khuẩn (Xanthomonas sp.) sau khi lây

bệnh nhân tạo

35

3.11 Triệu chứng và tuyến trùng Aphelenchoides besseyi gây bệnh chai

bông trên cây Huệ trắng

37

NGUYỄN THỊ THÚY AN 2013 Giám định bệnh hại trên cây Huệ trắng

(Polianthes tuberosa L.) tại huyện Lai Vung, tỉnh Đồng Tháp Luận văn tốt nghiệp

đại học, khoa Nông nghiệp & Sinh học Ứng dụng Trường Đại học Cần Thơ

Cán bộ hướng dẫn: PGS TS Trần Thị Thu Thủy

TÓM LƯỢC

Đề tài : “Giám định bệnh hại trên cây Huệ trắng (Polianthes tuberosa L.) tại

huyện Lai Vung, tỉnh Đồng Tháp” được thực hiện từ tháng 4 đến tháng 10 năm

2013 tại Bộ môn Bảo vệ thực vật, khoa Nông nghiệp & Sinh học Ứng dụng, trường Đại học Cần Thơ, nhằm xác định thành phần bệnh hại và mức độ bệnh trên cây Huệ trắng tại tỉnh Đồng Tháp

Kết quả điều tra, giám định bệnh cho thấy trên cây Huệ trắng có 7 bệnh, gồm

4 bệnh do nấm là bệnh thán thư (Colletotrichum sp.), thối nhũng hoa (Choanephora sp.), đốm vòng (Alternaria sp.) và thối hạch (Sclerotium rolfsii); 2 bệnh do vi khuẩn

là bệnh đốm vi khuẩn (Pseudomonas sp.) và bệnh sọc lá vi khuẩn (Xanthomonas sp.) và 1 bệnh do tuyến trùng là bệnh chai bông (Aphelenchoides besseyi) Đặc biệt,

bệnh thán thư và bệnh đốm vi khuẩn gây hại rất nặng (+++) trong tháng 10

MỞ ĐẦU

Hoa là loại cây đặc biệt không chỉ mang đến cho con người những sản phẩm mang tính nghệ thuật, thẩm mỹ cao mà còn mang lại giá trị kinh tế cao hơn gấp nhiều lần so với các loại cây trồng khác (Nguyễn Bảo Toàn, 2013)

Nghề trồng hoa ở nước ta đã có từ lâu đời nhưng trong khoảng vài thập niên gần đây, do điều kiện kinh tế xã hội có nhiều chuyển biến tích cực, nhu cầu thưởng thức hoa trong người dân tăng cao nên nghề trồng hoa có sự khởi sắc và có bước tiến đáng kể Thị trường hoa cắt cành tại Việt Nam là một thị trường có nhiều tiềm năng phát triển Hiện tại, nhu cầu hoa tập trung chủ yếu vào các dịp lễ hội, ngày rằm, ngày giỗ, tăng cao (Nguyễn Bảo Toàn, 2013) Trong số các loại hoa cắt cành thì hoa Huệ là loại chiếm ưu thế vì hoa Huệ tượng trưng cho sự thanh khiết, vẽ đẹp thanh cao và hương thơm ngát thích hợp trong nghi thức cúng, lễ Tuy nhiên, trở ngại cho hầu hết nhà ruộng trồng Huệ là sâu, bệnh hại làm giảm năng suất và phẩm chất hoa

Vì vậy, đề tài: “Giám định bệnh hại trên cây Huệ trắng (Polianthes tuberosa L.) tại huyện Lai Vung, tỉnh Đồng Tháp” được thực hiện với mục tiêu

xác định thành phần bệnh hại và mức độ bệnh trên cây Huệ trắng tại tỉnh Đồng Tháp

CHƯƠNG 1 LƯỢC KHẢO TÀI LIỆU

1.1 ĐẶC ĐIỂM THỰC VẬT CỦA CÂY HUỆ TRẮNG

Loài: Cây Huệ trắng (Polianthes tuberosa L.)

Cây Huệ trắng là cây thân cỏ có gốc rễ phù to thành củ hình quả lê, mọc thành bụi Lá hình bản dài, không cuống, gân song song, mọc thành vòng hình nhị hoa Hoa mọc thành từng cụm thường là 2 hoa ở nách lá bắc và tập hợp thành chùm trên một trục dài 15-20 cm, hoa màu trắng và thơm (Hình 1.1) Cây có nguồn gốc từ Mehico (Đặng Minh Quân, 2010)

Hình 1.1 Đặc điểm thực vật cây Huệ trắng

A: Bụi Huệ trắng

B: Thân cây Huệ trắng

C: Hoa Huệ trắng

1.1.2 Phân loại hoa Huệ

Theo Đặng Phương Trâm (2005), có hai loại hoa Huệ:

Huệ đơn hay Huệ ta, cây thấp mảnh khảnh, cành hoa nhỏ nhắn bông hoa chỉ

có một lớp cánh nhưng có mùi thơm đậm hơn so với Huệ kép

Huệ kép còn gọi Huệ tàu, Huệ trâu hay Huệ tứ diện, cây cao, hoa to và nhiều nhưng kém thơm Huệ kép phổ biến hơn Huệ đơn vì cây mọc khỏe hơn lại cho bông lớn lâu tàn và bán có giá hơn Huệ đơn

1.1.3 Điều kiện ngoại cảnh

củ giống đồng loạt sẽ có lứa hoa tập trung vào dịp Tết nguyên đán (Đặng Phương Trâm, 2005)

là phải đổi chỗ trồng (Đặng Phương Trâm, 2005)

Chuẩn bị ruộng trồng: Đào liếp sâu xuống 0,5 m, lấy lớp đất mặt bỏ phía dưới, lớp đất sét để lên trên Liếp rộng khoảng 1,5 m, rãnh 0,5 m Rãnh thường đào sâu để giữ nước lấp xấp chân liếp trồng (Đặng Phương Trâm, 2005)

Bón phân lót: Theo tập quán, nông dân thường bón phân cho Huệ bằng phân hóa học Theo thời gian canh tác, đất sẽ bị thoái hóa và làm giảm phẩm chất năng suất của hoa Bón phân chuồng có tác dụng nhiều mặt trên kỹ thuật canh tác Huệ do

có thể cung cấp chất vi lượng giúp điều hòa môi trường đất cho cây sinh trưởng tốt Dùng phân hữu cơ (phân chuồng hoai, phân rác mục) bón lót theo định mức 3

m3/1000 m2 kết hợp với 10 kg phân lân, 80-100 kg vôi rải đều Cần bố trí rải phân trước khi trồng 10 ngày, trộn đều khi đặt củ (Đặng Phương Trâm, 2005)

Luống trồng tốt nhất nên bố trí dọc theo hướng mặt trời để cây nhận được nắng tốt hơn, đặt củ thành từng bụi 2-3 củ theo khoảng cách 30 cm x 30 cm, mỗi bụi có đủ ba kích thước củ như đã phân loại, lấp đất vừa đủ không quá sâu ngập ngọn củ Tưới nước ngay sau khi trồng để củ sớm có sự phục hồi sinh trưởng, mọc đều (Đặng Phương Trâm, 2005)

 Chăm sóc

Sau khi trồng, cứ vài ngày tưới để cây bén rễ Khi cây đã bắt đầu phát triển lá

có dấu hiệu sinh trưởng tốt sẽ tưới đẫm, hàng tháng phải xới đất làm cỏ cho cây Trong canh tác hoa Huệ, nước rất quan trọng, đủ nước thì cây Huệ mới phát triển mạnh và cho bông đủ dài, bông nở trọn vẹn Thiếu nước hoa nhỏ, cánh không phát triển hoàn hảo, bông ngắn Sau một đợt mưa dầm nếu trời nắng to kéo dài mà không tưới đủ nước thì hoa sẽ bị cong làm giảm giá trị hoa Cành hoa Huệ bị cong thường khó bán, nhất là hoa xuất khẩu (Đặng Phương Trâm, 2005)

Bón phân bổ sung cho cây thường dùng hỗn hợp urea, lân và kali hòa nước tưới cho cây định kỳ 20 ngày/lần cho đến lúc cây có hoa Chú ý, khi tưới phân không để đọng lại nơi kẽ lá, cây dễ bị bệnh (Đặng Phương Trâm, 2005)

Nếu trồng lại trên đất cũ cần bón lót nhiều phân chuồng, tro trấu, phân vi sinh hữu cơ và bón phân NPK cân đối, đất cần được phơi kỹ và rãi vôi 80-100 kg/1000

m2 để giảm bớt ảnh hưởng từ mầm bệnh trước khi làm liếp trồng (Đặng Phương Trâm, 2005)

 Sâu bệnh và cách xử lý

Trên cây Huệ, phổ biến bị bệnh thối củ do nấm gây ra, các loại côn trùng chính gồm rệp sáp, nhện đỏ Biện pháp xử lý: Nên chủ động phòng bằng cách phun thuốc định kỳ hai tuần một lần (Nguyễn Bảo Toàn, 2013)

Bệnh do tuyến trùng là nguyên nhân làm cho hoa và cả phát hoa cây Huệ bị thoái hóa Tuyến trùng cũng rất khó kiểm soát, các biện pháp canh tác hợp lý giúp giảm thiểu tác hại của bệnh (Đặng Phương Trâm, 2005)

 Thu hoạch

Từ khi trồng cho đến khi Huệ cho lứa hoa đầu tiên khoảng 100 ngày Thời điểm thu hoạch tốt nhất khi trên giò hoa có chừng một vài chùm hoa hé nở, chuyển màu trắng Không nên thu hoạch hoa quá sớm khi các nụ vẫn còn búp xanh sẫm, nhất là với Huệ kép, bông sẽ không nở tiếp được Nếu dùng dao chặt gốc bông có thể để lại một ống rỗng ngay nơi cuống bông còn lại trên cây, đây sẽ là nơi nấm bệnh xâm nhập gây bệnh thối củ Nên tiến hành thu hoạch vào buổi chiều mát, bằng cách nắm cành hoa giật mạnh ngang mặt đất trong khi dẫm chân để giữ cho gốc không bị bật lên theo, bó bông thành từng bó, bao bên ngoài bằng lá chuối hay giấy báo cho thẳng Hoa được giao cho nơi tiêu thụ ngay trong đêm hoặc sáng sớm hôm sau (Đặng Phương Trâm, 2005)

1.2 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU VỀ BỆNH TRÊN CÂY HUỆ TRẮNG ĐÃ ĐƯỢC BÁO CÁO

1.2.1 Trên thế giới

Bệnh khảm TuMMV (Pearson and Horner, 1986) trên cây Huệ trắng được báo cáo ở New Zealand, Đài Loan (Chen and Chang, 1998; Chen et al 2002), Trung Quốc (Lin et al 2004) và Ấn Độ (Kulshrestha et al 2005; Krishnareddy et al 2007)

Bệnh thối củ (Fusarium oxysporum) (Mahinpoo et al 2013)

Bệnh thối nhờn trên lá (tuyến trùng Aphelenchoides besseyi), bệnh nốt sần ở rễ (Meloidogyne sp.) và bệnh thối thân (Sclerotium rolfsii) là ba bệnh gây hại quan trọng ở Hawaii Ngoài ra, còn bệnh thối nụ hoa (Erwinia sp.) và bệnh rỉ hoa do bọ

trĩ gây ra (Trujillo, 1968)

1.2.2 Tại Đồng bằng sông Cửu Long

Trên cây Huệ trắng ghi nhận có 7 bệnh, gồm 4 bệnh do nấm là bệnh thán thư

(Colletotrichum sp.) (Hà Thị Kim Duyên, 2007), đốm vòng (Alternaria sp.) (Trần

Bá Sơn và Nhan Thị Mỹ Hằng, 2005, Hà Thị Kim Duyên, 2007), bệnh cháy lá

(Choanephora sp.) (Hà Thị Kim Duyên, 2007) và thối hạch (Sclerotium sp.) (Trần

Bá Sơn và Nhan Thị Mỹ Hằng, 2005); 2 bệnh do vi khuẩn là đốm vi khuẩn

(Pseudomonas sp.) và thối vi khuẩn (Xanthomonas sp.) (Hà Thị Kim Duyên, 2007)

và bệnh chai bông (tuyến trùng Aphelenchoides besseyi) (Nguyễn Minh Chương và

Võ Xuân Tân, 2005)

1.2.2.1 Bệnh thán thư

Bệnh thường gây hại ở hai bên mép lá, chót lá hoặc giữa phiến lá Lúc đầu, vết bệnh là những chấm tròn nhỏ màu nâu xám hoặc nâu vàng có hình đồng tâm, hơi lõm xuống, có viền màu nâu nhạt Sau đó, vết bệnh lan rộng ra và liên kết làm lá cháy khô thành từng mảng, bề mặt vết bệnh có những chấm nhỏ li ti màu đen gọi là đĩa đài (Hà Thị Kim Duyên, 2007)

Tác nhân gây bệnh: Nấm Colletotrichum sp gây ra Sợi nấm đa bào có vách

ngăn, không màu, bào tử có dạng hình trụ, kích thước từ 13,25 – 16,5 x 3,72 – 4,15

µm (Hà Thị Kim Duyên, 2007)

1.2.2.2 Bệnh cháy lá

Bệnh thường gây hại trên lá và hoa Phần mô lá hay hoa bị nhiễm bệnh có màu xám đen hay đen, bệnh nặng làm lá bị cháy khô Trong điều kiện ẩm độ cao, quan sát trên cây của phần mô bị chết có những tơ nấm màu trắng, trên cùng của sợi nấm

có đính túi bào tử màu đen (Hà Thị Kim Duyên, 2007)

Tác nhân gây bệnh: Nấm Choanephora sp gây ra Bào tử có dạng thể bầu dục

hay hình trứng được chứa trong túi bào tử và túi bào tử được đính kèm trên cuống túi bào tử (Hà Thị Kim Duyên, 2007)

1.2.2.3 Bệnh đốm vòng

Bệnh thường gây hại trên lá, hoa Lúc đầu, vết bệnh có hình bầu dục, tròn hoặc bất dạng Vết bệnh có màu nâu vàng hoặc nâu đen, xung quanh vết bệnh có quầng màu vàng, kích thước vết bệnh từ 2 – 6 mm Sau đó, vết bệnh liên kết làm cháy cả

lá thành từng mảng, trên hoa làm hoa bị cháy khô, biến dạng và bề mặt mô bệnh có những chấm nhỏ li ti màu đen (Trần Bá Sơn và Nhan Thị Mỹ Hằng, 2005)

Tác nhân gây bệnh: Nấm Alternaria sp gây ra Bào tử có vách ngăn ngang ở

giữa, kích thước bào tử 30,58 x 13,9 µm (Trần Bá Sơn và Nhan Thị Mỹ Hằng, 2005)

1.2.2.4 Bệnh thối hạch

Bệnh thường gây hại ở thân, gốc và củ Lúc đầu, dưới mô cây bị thối có màu nâu đen, quan sát dưới gốc cây có những sợi nấm màu trắng và có nhiều hạch nấm tròn, láng màu trắng hoặc màu vàng nâu (Trần Bá Sơn và Nhan Thị Mỹ Hằng, 2005)

Tác nhân gây bệnh: Nấm Sclerotium sp gây ra Kích thước hạch nấm 0,6 – 1,5

mm (Trần Bá Sơn và Nhan Thị Mỹ Hằng, 2005)

1.2.2.5 Bệnh thối vi khuẩn

Bệnh thường gây hại trên lá, vết bệnh là những chấm màu nâu sậm, nhũng nước Sau đó, vết bệnh lan rộng ra liên kết tạo thành những sọc màu nâu đen chạy dọc các gân lá làm lá bị nhũng nước, bệnh nặng làm thối cả lá (Trần Bá Sơn và Nhan Thị Mỹ Hằng, 2005)

Tác nhân gây bệnh: Vi khuẩn Xanthomonas sp gây ra Khuẩn lạc màu vàng

Vi khuẩn hình que, Gram âm, có 1 roi ở đỉnh, kích thước 2,0 x 1,0 µm (Trần Bá Sơn và Nhan Thị Mỹ Hằng, 2005)

1.2.2.6 Bệnh đốm vi khuẩn

Bệnh thường gây hại trên thân, lá và bông Lúc đầu, vết bệnh chỉ là những chấm tròn nhỏ, nhũng nước, màu vàng nhạt, không có viền rõ rệt Sau đó, vết bệnh lan rộng ra liên kết nhau tạo thành những đốm màu vàng nâu hay nâu sậm, bệnh làm nhũng lá Bệnh nặng làm lá bị cháy khô, khi gặp thời tiết ẩm ướt cây bị héo và nhũng nước (Hà Thị Kim Duyên, 2007)

Tác nhân gây bệnh: Vi khuẩn Pseudomonas sp gây ra Khuẩn lạc màu trắng

sữa, nhẵn trơn Vi khuẩn hình que, Gram âm và có nhiều roi ở đỉnh (Hà Thị Kim Duyên, 2007)

1.2.2.7 Bệnh chai bông

Bệnh chai bông có thể gây hại trong suốt các giai đoạn của cây, từ giai đoạn cây con đến khi cây trổ bông và thể hiện rõ trên thân, lá và hoa (Nguyễn Minh Chương và Võ Xuân Tân, 2005) Triệu chứng được ghi nhận như sau:

 Giai đoạn trước khi ra bông

Bệnh có thể bắt đầu xuất hiện khi củ Huệ đã trồng ra những lá đầu tiên và gây hại nặng dần Nếu bệnh nhẹ có thể để lại trên một số lá những đường gân sọc màu nâu đỏ kéo dài từ bẹ lá đến chót lá Nếu bệnh nặng có thể làm cho tất cả các lá quăn queo và đọt xoăn lại, trên lá phủ đầy những đường gân sọc màu nâu đỏ ở dạng nứt

đủ hướng Nếu tách phần đọt xoăn ra quan sát bên trong, ta sẽ thấy phần lá non và đặc biệt là đỉnh sinh trưởng hầu như bị hư hại, có màu nâu đỏ hoặc đen Những cây

bị xoăn nếu để lâu, trên phần lá và đọt xoăn sẽ xuất hiện những đường nứt theo chiều ngang làm cho lá và đọt rất giòn, khi chạm đến rất dễ gãy

Trong điều kiện ẩm ướt liên tục, bệnh có thể làm cho phần mô bẹ lá bị hư có màu nâu đen, những lá ở phần gốc có thể bị chết ở dạng nông nước màu vàng nâu Trong một bụi Huệ, có thể có cây có triệu chứng và có cây không có triệu chứng và

có cây bệnh nặng có cây bệnh nhẹ

Triệu chứng bệnh chỉ biểu hiện trên thân lá, nhưng khi nhổ phần rễ lên quan sát thì rễ vẫn trắng như bình thường Tuy nhiên, trên những cây bị xoăn đọt, số lượng rễ ít hơn cây bình thường và cây có thể chết đi do cây có sức đề kháng yếu với những tác nhân gây hại khác (Nguyễn Minh Chương và Võ Xuân Tân, 2005)

 Giai đoạn cây ra bông

Khi cây bị bệnh nặng làm cho bông không trổ lên được giống như lúa ngẹn đồng Phát bông thấp hơn lá, trên bông bị thui đen và khô đi, làm cho phát bông ở dạng búp màu vàng nâu, bông không thể tách ra để nở và khô đen dần Trên bẹ lá hầu như bị thâm màu nâu đỏ, phần bẹ lá sát thân bị hư có màu nâu đen, thân bị lùn

đi và trên vỏ thân bị biến dạng với những nốt gai sần dầy đặc có màu nâu hoặc xanh

Khi bệnh nhẹ hơn, bông trổ cao hơn chiều cao của lá và triệu chứng trên thân

và bẹ lá có thể ít hơn, trên phát bông mặc dù các bông tách ra được và không còn dạng búp nhưng vẫn không nở được do các cánh hoa bên trong bị chai với những vết sọc vàng nâu từ những cánh hoa bên trong ra cánh hoa bên ngoài, nhụy bên trong bị khô đen và dần dần bông sẽ bị khô đi Những bông bị bệnh thường bị teo hoặc không phát triển nên bông không thon dài như bông bình thường

Tác nhân gây bệnh: Tuyến trùng Aphelenchoides besseyi (Nguyễn Minh

Chương và Võ Xuân Tân, 2005), Nguyễn Thị Thu Cúc (2011) (Hình 1.2)

Hình 1.2 Đặc điểm tuyến trùng Aphelenchoides besseyi (Nguyễn Thị Thu Cúc, 2011)

A: Con đực

B: Phần đầu

C: Con cái

1.3 PHƯƠNG PHÁP

1.3.1 Phương pháp thu mẫu và đánh giá bệnh

Sau khi quan sát, ghi nhận mức độ nhiễm bệnh, tiến hành lấy mẫu đem về phân tích Mẫu bệnh thu thập phải tươi có vết bệnh còn mới và phần tiếp giáp giữa

mô bệnh và mô không bệnh phải rõ ràng Mỗi loại triệu chứng bệnh thu thập ở nhiều mức độ Mẫu thu cho vào bọc nylon với bông gòn tẩm nước, ghi lại các chi tiết về tên mẫu, ruộng thu mẫu, ngày thu mẫu, mức độ bệnh và mô tả triệu chứng bệnh

Bệnh ở lá: Thu lá bệnh ở nhiều mức độ khác nhau, mỗi mức độ 5 lá

Bệnh ở thân: Thu cả thân hoặc vạt lấy vết bệnh

Ngoài ra, chụp hình cây bệnh: Toàn cây bị bệnh, bệnh ở thân, lá và hoa ở các mức độ bệnh nhẹ, trung bình và nặng

Đánh giá mức độ bệnh: Đối với mỗi bệnh, phải quan sát tổng quát diện tích cây Huệ nhiễm bệnh để đánh giá mức độ nhiễm bệnh theo 5 cấp từ không có bệnh đến rất nặng theo thang đánh giá của Bộ môn Bảo vệ Thực vật, trường Đại học Cần Thơ (Bảng 2.1)

Thành trùng con đực

Bảng 2.1 Phân cấp mức độ bệnh (Bộ môn Bảo vệ Thực vật, trường Đại học Cần Thơ)

CHƯƠNG 2 PHƯƠNG TIỆN VÀ PHƯƠNG PHÁP

2.1 PHƯƠNG TIỆN

2.1.1 Thời gian và địa điểm

- Thời gian: Bắt đầu từ tháng 04 đến tháng 10 năm 2013

- Địa điểm điều tra: Xã Phong Hòa, huyện Lai Vung, tỉnh Đồng Tháp

- Địa điểm thí nghiệm: Phòng thí nghiệm và nhà lưới bộ môn Bảo vệ Thực vật, khoa Nông nghiệp và Sinh học Ứng dụng, trường Đại học Cần Thơ

2.1.2 Vật liệu và dụng cụ

- Vật liệu, dụng cụ và thiết bị:

 Mẫu bệnh trên hoa Huệ trắng

 Đĩa petri, kéo, kẹp, kim mũi giáo, giấy thấm,

 Kính hiển vi, kính lúp, tủ cấy, tủ thanh trùng khô, tủ thanh trùng ướt,

- Các loại môi trường sử dụng trong nuôi cấy và phân lập gồm: môi trường PDA, môi trường thạch agar và môi trường King’s B

Công thức các loại môi trường sử dụng để phân lập và nuôi cấy:

Môi trường nước trích khoai tây - PDA (Shurfleff & Averre, 1997)

2.2.1 Phương pháp điều tra

Địa điểm: Điều tra tại 8 ruộng trong huyện Lai Vung, tỉnh Đồng Tháp

Thời gian: Từ tháng 4/2013 đến tháng 10/2013

Định kỳ: 1 tháng/1 lần

Phương pháp thu mẫu bệnh và đánh giá bệnh áp dụng theo phương pháp chung của Bộ môn Bảo vệ Thực vật, trường Đại học Cần Thơ

2.2.2 Phương pháp giám định

 Qui trình giám định

Áp dụng theo quy tắc Koch (Burgess et al 2009)

Đối với bệnh thán thư (Colletotrichum sp.), thối nhũng hoa (Choanephora sp.), đốm vòng (Alternaria sp.), và chai bông (Aphelenchoides besseyi) chỉ áp dụng bước 1 và 2 Bệnh đốm vi khuẩn (Pseudomonas sp.), sọc lá vi khuẩn (Xanthomonas sp.) và thối hạch (Sclerotium rolfsii) thì áp dụng cả 4 bước của quy tắc Koch

 Phương pháp áp dụng khi giám định

 Đối với tác nhân gây bệnh là nấm

 Bệnh thán thư

Quan sát vết bệnh dưới kính lúp để tìm các bộ phận của nấm ở mặt dưới hoặc mặt trên Cạo và quan sát dưới kính hiển vi để tìm bào tử và ổ nấm Phương pháp ủ bệnh được thực hiện trong đĩa Petri có lót giấy ẩm, cắt mẫu bệnh thành từng đoạn nhỏ (0,5 cm) thanh trùng mặt ngoài với cồn 700 (30 giây), rửa lại bằng nước cất vô trùng (3 lần), ủ mẫu ở nhiệt độ phòng và quan sát khi nấm xuất hiện Nấm cần quan sát đặc điểm tản nấm và gai cứng nên nuôi cấy trên môi trường PDA, tách ròng và quan sát dưới kính hiển vi khi bào tử xuất hiện

 Bệnh thối nhũng hoa

Mẫu bệnh thu về chưa xuất hiện những tơ nấm màu trắng và mang nhiều túi bào tử màu đen thì để mẫu bệnh khô tự nhiên ở nhiệt độ phòng, khi nào thấy xuất hiện túi bào tử thì quan sát dưới kính lúp và kính hiển vi Nếu thu mẫu có sẵn những

tơ nấm màu trắng và mang nhiều túi bào tử màu đen thì đem về quan sát dưới kính lúp và kính hiển vi Nấm cần quan sát đặc điểm tản nấm và thời gian xuất hiện túi bào tử nên nuôi cấy trên môi trường PDA, tách ròng và quan sát dưới kính hiển vi khi túi bào tử xuất hiện

Các đặc điểm quan sát của những nấm trên được so sánh với khóa phân loại của Barnett và Hunter (1998)

 Đối với tác nhân gây bệnh là vi khuẩn

Bệnh đốm vi khuẩn (Pseudomonas sp.) và sọc lá vi khuẩn (Xanthomonas

sp.) được giám định bằng cách:

 Cắt mẫu bệnh thành từng đoạn nhỏ (3-10 mm), nơi có tiếp giáp giữa mô bệnh

và mô khỏe Sau đó, dùng dao cắt thành từng lát mỏng (1 mm) cho vào lame có chứa giọt nước cất, dùng lamelle đậy lại và quan sát nhanh dưới kính hiển vi Nếu bệnh do

vi khuẩn gây ra sẽ tìm thấy dịch vi khuẩn tuôn ra từ lát cắt

 Phân lập vi khuẩn: Cắt mẫu bệnh thành những đoạn nhỏ (5 mm), thanh trùng mặt ngoài bằng cồn 700 rửa lại nhiều lần bằng nước cất vô trùng Sau đó, nuôi cấy trong môi trường King’s B Vi khuẩn sẽ phát triển xung quanh mô bệnh, tiến hành phân lập vi khuẩn Dùng đũa cấy vi khuẩn để phân lập vi khuẩn và vạch theo đường zíc-zắc lên đĩa Petri có chứa môi trường King’s B

Quan sát đặc điểm của khuẩn lạc như hình dạng (tròn, dẹt…), màu sắc (vàng, trắng kem sữa…), đặc điểm bề mặt khuẩn lạc (trơn, nhẵn, bóng…), đường rìa xung quanh (gợn sóng, thẳng…), độ nổi của khuẩn lạc (phẳng, nhô…)

Quan sát hình dạng vi khuẩn bằng phương pháp nhuộm đơn Mẫu vi khuẩn được nuôi cấy 1-2 ngày, nhuộm với Crystal violet (1-5 phút), rửa nước, để khô và quan sát dưới kính hiển vi có độ phóng đại X100

Khảo sát đặc tính Gram của vi khuẩn bằng phương pháp nhuộm Gram Vi khuẩn được nuôi cấy trong thời gian từ 18-24 giờ Các bước thực hiện như sau: pha loãng vi khuẩn với nước cất vô trùng Dùng lame sạch, nhỏ một giọt huyền phù vi khuẩn và trải đều trên lame, cố định vi khuẩn bằng cách hơ khô trên ngọn lửa đèn cồn Sau đó, vi khuẩn được nhuộm với dung dịch A (1-2 phút), nhuộm tiếp với lugol (1 phút), tẩy màu với alcol 950 ( cho đến khi màu tím tan hết), rửa nước và để khô tự nhiên trong không khí, nhuộm với Carbon fuchsine (15 giây), rửa nước, để khô và quan sát ở độ phóng đại X100 Vi khuẩn Gram âm có màu đỏ, vi khuẩn Gram dương có màu tím xanh

Công thức thuốc nhuộm Gram:

Khảo sát chiên mao của vi khuẩn bằng cách nhuộm chiên mao Chọn mẻ vi khuẩn nuôi cấy trong thời gian từ 18-24 giờ, các bước thực hiện như sau: pha loãng huyền phù vi khuẩn chú ý không được lắc Dùng ống hút nhỏ một giọt vi khuẩn lên lame sạch trải nhẹ và để khô tự nhiên (không được hơ lửa) Sau đó, nhuộm với dung dịch Leifson (10 phút), rửa nước, để khô Sau đó, nhuộm với Methylene blue (5 phút), rửa nước, để khô và quan sát dưới vật kính X100

Công thức thuốc nhuộm chiên mao:

 Đối với tuyến trùng

 Phương pháp ly trích: Thu mẫu bệnh về và rửa sạch Cắt mẫu bệnh thành từng đoạn nhỏ (2 mm) cho vào rây có lót giấy thấm, để rây này vào đĩa Petri, thêm nước vào từ từ đến khoảng 2/3 đĩa, đậy nắp lại và để nơi thoáng mát Sau 24 giờ lấy rây ra, đem mẫu nước đi quan sát dưới kính lúp

 Phương pháp quan sát tuyến trùng: Sau khi ly trích và thu được phần dung dịch có chứa tuyến trùng trong đĩa Petri, dùng kim vớt tất cả các dạng tuyến trùng khác nhau trong mẫu lên lame trong một giọt nước, đậy lamelle lại, hơ nhanh qua ngọn lửa đèn cồn để làm tuyến trùng bất động Đem quan sát dưới kính hiển vi để xác định giống tuyến trùng dựa theo tài liệu của Nguyễn Thị Thu Cúc (2011)